BACTERIAS FIJADORAS DE NITRGENO

Las bacterias fijadoras de nitrgeno que se desarrollan de forma natural en el suelo, se conocen desde hace ms de un siglo. Representan un biofertilizante ecolgico y se dividen en dos grandes grupos: Las simbiticas, especificas de las leguminosas, como el Rhizobium, y las libres, que viven en el suelo y no necesitan la planta para su reproduccin, como el Azotobacter y el Azospirillum, entre los ms importantes en agricultura. El Azotobacter y el Azospirillum, en concentraciones adecuadas, pueden sustituir al nitrgeno qumico(Urea, amonaco...)sin merma de la produccin y a menor coste. Otras ventajas comprobadas del uso de estas bacterias como biofertilizante son: a) Producen fitohormonas, como el cido indolactico y las citoquininas, capaces de acelerar y potenciar el crecimiento de las plantas. b) Al permanecer vivas durante aos y reproducirse en el suelo, no slo no lo degradan sino que contribuyen a su enriquecimiento en nitrgeno y a su regeneracin de forma ecolgica y gradual, incluso en terrenos de alta concentracin salina. c) Se ha comprobado que fertilizando los cultivos con estas bacterias y con nitrgeno qumico en un porcentaje entre el 20 y 50% del utilizado normalmente, se consigue un aumento de produccin sobre las cosechas obtenidas nicamente con fertilizante qumico al 100%. Esto es debido a que, al liberarse la bacteria de su funcin fijadora de nitrgeno, produce ms factores de crecimiento vegetal, En cereales de secano, esto puede suponer el ahorro del abonado de cobertera. d) Crea una barrera protectora contra hongos y bacterias patgenas en la raz de la planta, por lo que sta crece ms sana y fortalecida. e) Producen enzimas que solubilizan los fosfatos y los hacen ms accesibles a la planta, as como factores que facilitan la absorcin de oligoelementos. f) Se ha demostrado que resisten mejor las condiciones de sequa y los climas ridos ya que se forman alginatos en las races de las plantas. g) Como consecuencia de todo lo anterior, es un mayor desarrollo de las races de las plantas, con el consiguiente beneficio general para sta, as como el peso de los frutos. h) Tambin se ha comprobado un mayor ndice de germinacin de semillas comparada con otros sistemas de abonado. i) Las nuevas estirpes de Azotobacter y Azospirillum son capaces de fijar un 72,64% ms de nitrgeno atmosfrico, que las estirpes originales. Hay pues un cmulo de ventajas para el usuario, econmicas, ecolgicas, A corto, medio y largo plazo en la progresiva sustitucin de la fertilizacin qumica por las bacterias naturales, totalmente inofensivas para el medio y el ser humano.

SIMBIOSIS DE MICROORGANISMOS FIJADORES CON PLANTAS NO LEGUMINOSAS

Podemos encontrarnos con tres tipos de simbiosis con plantas no leguminosas, tipos que designaremos segn cual sea el microorganismo simbionte que fije el nitrgeno: Frankia, cianobacterias y Rhizobium. Tipo Frankia: Los Frankia son una gnero de Streptomicetaceas que fijan nitrgeno en simbiosis con las plantas actinorrizas (plantas que pertenecen a tres rdenes cercanos filogenticamente).La capacidad colonizadora de las plantas actinorrizas (especialmente gneros Alnus y Casuarina),sobre todo en suelos pobres en nitrgeno o en condiciones de estrs ambiental (deforestaciones, incendios, volcanes, retrotraimientos de glaciares, ...), las hacen idneas para la reforestacin de los suelos. En esta simbiosis, los ndulos estn formados por agrupaciones de races cortas laterales que conforman una estructura lobular, con elementos vasculares centrales rodeados de clulas corticales infectadas de bacterias, que pasan el nitrgeno fijado a la planta en forma de amonio. Como se ver ms adelante, estos ndulos son mucho ms simples que los de las leguminosas. Los Frankia protegen a la nitrogenasa del oxgeno en el interior de unas vesculas esfricas multicelulares rodeadas de una cpsula, con lo que consiguen resistir hasta una concentracin de oxgeno del 80%. Tipo cianobacterias: Las cianobacterias (como ya hemos visto) pueden fijar nitrgeno libres, y forman simbiosis con diversos tipos de plantas, desde hongos hasta angiospermas. Por motivos obvios, la simbiosis entre una cianofcea y un hongo es un liquen. Se ha evaluado en 15 kg. por hectrea y ao la cantidad de nitrgeno incorporado por lquenes del gnero Lobaria. Las simbiosis de Nostoc con algunas hepticas (Brifitos) muestran una cierta dependencia del fotoasimilado suministrado por la planta. Entre las simbiosis con Pteridfitos, la ms importantes es la que se da entre el helecho acutico Azolla y Anabaena; que llega a fijar mas de 600 kg. de nitrgeno por hectrea y ao, siendo muy aprovechada en agricultura en los campos de arroz. Tambin hay simbiosis de Nostoc con algunas Cicadales y Macrozamia. En cuanto a las angiospermas, la nica simbiosis conocida se da entre este alga y especies del gnero Gunnera, que permite fijar hasta 70 kg. por hectrea y ao. FIJACIN SIMBITICA EN LEGUMINOSAS Unas de los puntos mas importantes dentro de la fijacin biolgica del nitrgeno es el de la simbiosis entre leguminosas y bacterias del genero Rhizobium. La manera en que se produce la infeccin y como los factores ambientales intervienen y alteran la simbiosis va a ser los dos puntos que vamos a tratar en este apartado. ESTABLECIMIENTO DE LA SIMBIOSIS Muchos de los estudios en este campo se desarrollan en la investigacin de este paso. Mayoritariamente la infeccin viene por los pelo radicales, aunque hay varias excepciones como el caso de Arachis hypogea (cacahuete ). -Antes de que la bacteria entre en la raz hay una multiplicacin de la primera a una velocidad superior a lo normal, esto es debido a la exudacin de homoserina por la

raz, que es un estimulador del crecimiento de la poblacin bacteriana. Esto es frecuente en Rhizobium leguminosarum pero no en otras especias de este genero que no afectan a leguminosas. Entre los aminocidos que exuda la planta se encuentra el triptfano que es fcilmente convertido por Rhizobium en AIA ( cido indolactico). Esto tiene una importancia crucial en la infeccin pues lleva consigo un crecimiento y engrosamiento del pelo radical. Es decir el AIA favorece la infeccin. Atadura Antes de la infeccin tiene lugar un intimo contacto entre Rhizobium y el pelo radical, este contacto tiene lugar de un modo perpendicular. Este anclaje se debe a unas protenas azucaradas segregadas por la planta que actan como haptenos determinantes de antgenos bacterianos. La especificidad de esta unin depende del tipo de bacteria en cuestin y las caractersticas de la misma en ese momento. Infeccin La deformacin de los pelos radicales es el preludio para la infeccin. La infeccin comienza con un acumulo de metabolitos en la bacteria, paso primordial en esta etapa. En este punto intervienen enzimas proteoliticas de pared, que se encargan de abrir en la planta un hueco, lo que significa la entrada de la "invasin". Normalmente la infeccin crece centrpetamente hacia la estela, atravesando las clulas, corticales. Se han hecho experimentos con Fe-EDTA - inhibidor de la nodulacin- y se observa una desorganizacin en los ndulos pues ya no siguen el esquema de la infeccin modelo dicha antes. DESARROLLO DEL NDULO Los primeros pasos que se conocen es la segregacin de fitohormonas como citoquininas y auxinas por las bacterias que inducen una proliferacin celular. Hay otros factores de crecimiento desconocidos que se difunden por el xilema. Se sabe que en los siguientes pasos tienen lugar la formacin de la enzima nitrogenasa pero el conocimiento sobre estos estadios es muy leve. Los estudios son complicados y hay que decir que la gran arma que se utiliza para desenmaraar este complejo proceso es la disponibilidad de distintos mutantes y su estudio. FACTORES AMBIENTALES LIMITANTES DE LA SIMBIOSIS Hay muchos factores limitantes de la simbiosis, pero presumiblemente las mas importantes son las clases de terreno, la luz, la temperatura, el agua, los elementos minerales, etc. Elementos minerales Deficiencias o excesos en determinados elementos minerales afectan directamente o indirectamente en la nodulacin. Por ejemplo el molibdeno es un constituyente de la nitrogenasa, as que un defecto de Mo en el medio causa un efecto directo y negativo en la fijacin del nitrgeno. Sin embargo el Fe ( que tambin es un elemento constituyente de la nitrogenasa) no tiene un efecto directo sobre la fijacin del nitrgeno cuando este escasea en el medio. Tambin son importantes otros elementos como calcio, fsforo, azufre, cobre o zinc ya que originan cambios en el pH que si que va a afectar directamente a la fijacin. Los fertilizantes qumicos utilizados tratan de influenciar un mayor crecimiento. de la planta y una mayor con fijacin del nitrgeno.

Temperatura Que la temperatura afecta a la simbiosis esta claro, pero esta interaccin es de modo indirecto aparece de un modo no especifico a travs de los procesos metablicos de la planta como respiracin, fotosntesis, transporte y transpiracin. En la leguminosas estudiadas, que tienen un ciclo de Calvin normal, su temperatura optima es de 15 a 20 C. No se han encontrado leguminosas tropicales con metabolismo C4. La respiracin se incrementa con las altas temperaturas, esto hace que haya una menor disponibilidad de carbono para la simbiosis. Con menos de 7 C la nodulacin se hace muy poco probable. En el caso extremo de altas temperaturas, se reduce el nmero de races laterales y pelos radicales, haciendo que la probabilidad de nodulacin sea menor. A temperatura extremas tiene lugar una degradacin de los ndulos. Luz La luz afecta a la simbiosis a travs de la fotosntesis, controlando la cantidad de carbohidratos para el desarrollo y funcionamiento del modulo. Existen evidencias de algunos efectos directos de la luz sobre la nodulacin, as es por ejemplo que la nodulacin es pobre bajo luz azul y mxima bajo efecto de la luz roja - esto implica una evidencia de la implicacin del fitocromo reversible en el proceso de nodulacin). Se han hecho experimento con la defoliacin gradual de las plantas y se ve claramente como hay una reduccin en la fijacin del nitrgeno. Agua Las deficiencias en la disponibilidad de agua causan un bajada en la fijacin del nitrgeno en leguminosas de todo el mundo, de todos modos hay diferentes adaptaciones de estas plantas a las diversas condiciones de sequa, como ejemplo podemos citar a M. sativa que llega a proyectar sus races hasta siete metros de profundidad. Otros factores Otros factores posibles pueden ser los gases que hay en el terreno, las enfermedades como hongos, virus o micoplasmas (se ha estimado que estas enfermedades causan una perdida de al menos el 24 % de las leguminosas del forraje). Por ultimo debemos decir que las actividades del hombre tambin han modificado las cantidades de fijacin de nitrgeno, la mayor parte de las veces es en beneficio (como puede ser la contribucin a la nodulacin con diferentes fertilizantes que ofrecen minerales al suelo que ayuda a la nodulacin).

Microorganismos Fijadores de Nitrgeno: Familia Rhizobiaceae La revolucin verde de los aos sesenta trajo un notable incremento de la produccin agrcola, gracias, sobre todo, al empleo generalizado de abonos qumicos y semillas mejoradas. Pero el fertilizante nitrogenado, el ms utilizado en agricultura, se lleva buena parte de la inversin en el campo. Para la fabricacin de fertilizantes nitrogenados se requiere en general energa derivada de petrleo. Por otro lado, su uso indiscriminado ha ocasionado graves problemas de contaminacin, ya que no todo el fertilizante que se aplica lo aprovecha la planta; en una cuanta importante acaba en lagos y lagunas. La fijacin biolgica de nitrgeno es la opcin alternativa y natural de la fertilizacin qumica. De todos los seres vivos, slo un centenar de gneros de bacterias estn capacitados para fijar nitrgeno del aire, donde este elemento constituye alrededor del 70%, y convertirlo en compuestos asimilables por todos los organismos. Entre las especies fijadoras de nitrgeno hay cianobacterias (Anabena y Nostoc, por ejemplo), arqueobacterias (Methanococcus), bacterias grampositivas (as, Frankia y Clostridium), enterobacterias (Klebsiella) y otras proteobacterias (Rhizobium, Azospirillum y Acetobacter, entre varias). En la fijacin biolgica de nitrgeno el mundo orgnico halla su fuente principal de abastecimiento en dicho elemento. Si se suspendiera el proceso de fijacin, todo el nitrgeno retenido en la biomasa regresara a la atmsfera en 100 aos. De poder fijar nitrgeno, el hombre no necesitara ingerir protenas. Pero la ambicin de los cientficos no es que el hombre fije nitrgeno, sino que los cultivos altamente extractivos de nutrientes del suelo puedan prescindir del uso de fertilizantes mediante la fijacin biolgica de nitrgeno. En la naturaleza ya existen plantas que aprovechan la fijacin de nitrgeno realizada por bacterias que se asocian con los vegetales. Ocho familias de plantas emparentadas entre s gozan de la capacidad para asociarse en simbiosis con bacterias fijadoras de nitrgeno. Las plantas en cuestin alojan a las bacterias en estructuras especiales que se forman en sus races; en los ndulos, nombre de esas estructuras, las bacterias fijan el nitrgeno. Individuos de los gneros Rhizobium. Bradyrhizobium y Azorhizobium penetran en las races y a veces en los tallos de las leguminosas, mientras que Frankia y otros actinomicetos son las responsables de la fijacin de nitrgeno en Casuarina y otras especies. Las leguminosas se cuentan entre las familias ms numerosas, con unas 19.000 especies distribuidas por ambientes

muy dispares. Se admite que deben tamao xito adaptativo a su capacidad para fijar nitrgeno, lo que les permite colonizar suelos pobres en nutrientes. Pero no todas las especies estn capacitadas para formar ndulos; tampoco se sabe cuntas establecen simbiosis. Las ms conocidas son las que tienen valor comercial y alimentario para el ser humano o para el ganado, como el frjol, la soja, el chcharo, la lenteja, el haba y la alfalfa. Todas ellas fijan nitrgeno atmosfrico al establecer simbiosis con Rhizobium y otros gneros emparentados. En comparacin con el gran nmero de leguminosas, slo se han identificado unas 15 especies de Rhizobium, tres de Bradyrhizobium y una de Azorhizobium, Por eso se sospecha que debe de haber una cifra elevada de especies de estas bacterias por describir. Los individuos de los gneros citados moran en el suelo y habitan en las zonas geogrficas donde existe la planta con la que establecen simbiosis. En China, por ejemplo, hay una gran diversidad de bacterias capaces de nodular en la soja, pues sta es originaria de Asia; mientras que en Mxico no hay simbiontes de soja y s una extensa variedad de Rhizobium simbiontes de frjol, ya que ste es nativo de la regin. El estudio de las poblaciones de bacterias fijadoras de nitrgeno de frjol de Mxico y de Sudamrica nos llev a proponer dos nuevas especies de Rhizobium. A una de ellas la llamamos R. efli, porque "etl" significa frjol en nhuatl, y a la otra la denominamos R. tropici, por la regin donde medra. R. efli tambin se encuentra en los lugares donde se ha introducido el frjol, en Espaa por ejemplo. Hemos hallado R. effl en las semillas de frjol, lo que induce a suponer la existencia de un posible mecanismo de dispersin geogrfica del Rhizobium conjuntamente con frjol en tiempos histricos. Dentro de una misma especie de Rhizobium observamos un grado de diversidad amplsimo. Proporcionalmente, la disparidad entre bacterias pudiera compararse con la distancia que separa al hombre de la gallina. La investigacin de campo realizada en Nueva Zelanda sugiere un modelo explicativo sobre cmo pudo aumentar la diversidad de especies de Rhizobium. En su trabajo experimental, los investigadores aadieron al suelo (como inoculante) bacterias de Rhizobium loti (ahora reclasificado como Mesorhizobium) para nodular en la planta Lotus, ya que en esos campos no haba bacterias simbiontes de Lotus. El resultado fue toda una sorpresa: al recuperar las bacterias de los ndulos observaron que los aislados no correspondan con la bacteria introducida. La informacin gentica para la simbiosis con Lotus se haba transferido de la bacteria inoculada a distintas bacterias existentes en ese suelo. De ese modo se reclutaron nuevos tipos de Mesorhizobium con capacidad para nodular Lotus. Por nuestra parte, hemos comprobado que, en suelos de Mxico, las R. efli que carecen de capacidad para nodular y fijar nitrgeno en frjol abundan ms que las bacterias simbiticas, Creemos que esa capacidad puede, en condiciones naturales, transferirse entre estas bacterias. Por otro lado, la diversidad gentica bacteriana tendra que ver con la manifiesta habilidad para sobrevivir y adaptarse a distintas condiciones de suelo y clima, as como para acoplarse a las variaciones que tambin existen dentro de las plantas de una misma especie. Gracias a la diversidad intraespecfica que ofrecen Rhizobium y Bradyrhizobium se ha dispuesto de un acervo valioso para seleccionar las mejores cepas. Se han logrado as linajes ptimos para la fijacin del nitrgeno, en cuanto han colonizado campos de cultivo. Buena parte del xito de la produccin de soja en Brasil (segundo productor mundial) hemos de atribuirlo al empleo de cepas de Braidyrhizobium que alcanzan mximo rendimiento en simbiosis. En Brasil no hay simbiontes naturales de soja, por eso, la inoculacin de bacterias del gnero Bradvrhizobium permiti el aprovechamiento de la fijacin de nitrgeno en los cultivos de soja cuando ste se introdujo en ese pas. En Mxico, por el contrario, los experimentos de inoculacin del frjol han sido poco exitosos debido a un problema espinoso, La poblacin nativa de Rhizobiuin efli, extensa, diversa y altamente competitiva, impide que las cepas introducidas como inoculante formen ndulos. Para resolver esta dificultad, varios grupos de distintos pases, abordaron el estudio de la competencia de Rhizobium para crear ndulos. Descripcin general de la simbiosis de Rhizobium Los Rhizobium son bacterias Gram negativas y aerobias obligadas que pertenecen a la familia Rhizobiaceae. Entre ellos se encuentran los gneros Rhizobium, Bradyrhizbium y Azorhizobium. Estos microorganismos del suelo forman una asociacin simbitica con distintas especies de plantas y durante la simbiosis son capaces de llevar a cabo la fijacin de nitrgeno molecular. En la simbiosis las bacterias se encuentran en las races de las plantas dentro de estructuras llamadas ndulos. Ni la plantas ni estas bacterias aisladamente fijan el nitrgeno diatomico (N2) para convertirlo en amonio. La simbiosis es inhibida si existe un exceso de nitrato o amiono en el suelo. Dentro de los ndulos las bacterias se convirten en bacteroides que son clulas ms grandes que los Rhizobium que se encuentran en el suelo y que llevan a cabo la fijacin de nitrgeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es reponsable de la conversin del nitrgeno molecular en amonio. Debido a esta simbiosis, la planta recibe nitrgeno que puede utilizar para si misma, mientras que las bacterias utilizan molculas que les proporciona la planta.

Existen muchos genes de rhizobium caractersticos de la simbiosis como por ejemplo los genes nod, nol, nif y fix. Los ndulos aparecen rojos por causa de una protena llamada leghemoglobina. Despus de la fase de fijacin de nitrgeno, el color del ndulo llega a ser verde debido a la conversin de leghemoglobina en biliverdina. Leghemoglobina protege a la nitrogenasa de los altos niveles de oxgeno y evitar la inactivacin de esta enzima. Cada tipo de Rhizobium tiene espectro especfico de plantas con las que es capaz de formar ndulos. Por ejemplo, Bradyrhiobium japonicum forma una simbiosis con Glycine max, Rhizobium leguminosarum bv. viciae con Pisum sativum o Vicia faba, Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti con Medicago sativa y Azorhizobium caulinodans con Sesbania rostrata. Azorhizobium caulinodas es capaz de fijar nitrgeno tambin fuera de su planta hospedadora. La simbiosis Solamente las leguminosas son capaces de utilizar el nitrgeno en forma de nitrato o amonio para la sntesis de compuestos nitrogenados como los aminocidos. En la simbiosis con los Rhizobium se forman ndulos rizoidales, en los cuales las bacterias simbiticas fijan el nitrgeno atmosfrico que proporcionan a la planta. Por eso, en presencia de estas bacterias simbiticas las leguminosas pueden crecer en suelos que no tienen suficiente nitrato o amonio para un desarrollo normal de la planta. Por esta razn los Rhizobium pueden ser utilizados como inoculantes para mejorar el crecimiento de leguminosas en lugar de abonos. Por otro lado, las bacterias utiliza molculas de la planta y de esta forma, ambos "socios" tienen una ventaja de la simbiosis. Nodulacin en leguminosas Todos los organismos vivos necesitan de una fuente nitrogenada para poder crecer, dado que muchos de los principales compuestos celulares, como las protenas y cidos nucleicos, contienen en su estructura nitrgeno. Dada la gran variedad de seres vivos que existen en la naturaleza, existen diferentes compuestos nitrogenados que los diferentes organismos son capaces de asimilar, para el caso de las plantas la fuente de nitrgeno que pueden utilizar es el amonio (NH4+) y el nitrato (NO3-), o sea compuestos nitrogenados inorgnicos. Para el caso de los animales superiores adems de requerir amonio, requieren de compuestos nitrogenados orgnicos, como aminocidos o bases nitrogenadas. Es importante decir que todos los compuestos nitrogenados provienen del nitrgeno molecular (N2), que representa el 80% de los gases que forman la atmsfera terrestre. Solo existen unos organismos capaces de asimilar el N2, estos organismos son bacterias que se conocen con el nombre de bacterias nitrificantes o fijadoras de nitrgeno. Los dems organismos de la naturaleza no pueden asimilar el N2 de la atmsfera y por lo tanto para adquirir el nitrgeno que necesitan dependen del metabolismo de las bacterias nitrificantes para tener una fuente nitrogenada. Las plantas y dems organismos son incapaces de asimilar el nitrgeno en forma molecular, excepto por las bacterias nitrificantes que por medio de su metabolismo toman el N2 de la atmsfera y lo convierten en amonio por medio de la enzima nitrogenasa y la hidrolisas del ATP. Ya estando en forma de amonio o nitrato el nitrgeno puede ser utilizado por las plantas. Las bacterias nitrificantes o fijadoras de nitrgeno se acoplan con un numero significativo de especies vegetales en una relacin que llaman simbiosis (relacin entre dos especies donde ambas reciben un beneficio, pero no es absolutamente indispensable para la sobrevivencia de alguna de las especies), o sea que algunas especies de plantas se asocian en relacin simbitica con las bacterias nitrificantes. Las plantas que se asocian con las bacterias nitrificantes son las llamadas leguminosas y las bacterias fijadoras de nitrgeno son del genero Rhizobium. Las bacterias del genero Rhizobium son habitantes naturales del suelo que infectan las races de ciertas leguminosas. Al Llevar a cabo esta infeccin, se desarrollan unas estructuras en el sistema radicular de las plantas llamadas ndulos, donde viven las bacterias y fijan nitrgeno. La especie a la que pertenece un cierto Rhizobium se define por la especie de la planta que nodula y en la que es capaz de fijar nitrgeno. El ndulo es una estructura situada en el sistema radicular de la planta, formada por tejido de la planta. Algunas de las clulas que lo constituyen contiene bacterias englobadas en membranas dentro de su citoplasma, estas bacterias atraviesan un proceso de diferenciacin y es precisamente la forma diferenciada (bacteroide) la que fija nitrgeno. El bacteroide es mayor que la bacteria, posee una forma irregular y se muestra mas sensible a cambios de presin osmtica. El ndulo viene a ser un rgano de la leguminosa encargado de fijar y asimilar nitrgeno para la planta, y la planta le proporciona al ndulo (al ndulo y a las bacterias que estn en su interior) carbohidratos producto de la fotosntesis. Se ha establecido que la informacin gentica que determina que Rhizobium sea capaz de infectar especficamente una leguminosa y fijar nitrgeno en asociacin con ella esta codificada en cierta molcula de AND extracromosmica conocidas como plasmidios. A cada especie de leguminosa le corresponde un Rhizobium especifico, Por ejemplo al trbol lo nodula el Rhizobium trifolii. La especificidad del Rhizobium que nodula una leguminosa esta determinado en el cdigo gentico y se dice que por la presencia de un plasmidio en el ADN, plasmidio que se trasmite a la bacteria o por conjugacin del Rhizobium especifico. En resumen se puede decir que el Rhizobium promueve la realizacin de la simbiosis con la planta, pegndose a su sistema radicular con el objeto de conseguir energa para metabolizar, pero se encuentra con que la planta hospedera le da la contra orden al Rhizobium de que si este me da nitrgeno en forma de amonio yo le dono su energa para metabolizar.

Reconocimiento entre planta y Rhizobium Las races de plantas forman exudados que inducen la expresin de genes rhizobiales que son caractersticos para el comienzo de la simbiosis. Uno de esos factores son flavonoides que producen una interaccin con la proteina codificada por el gen nodD. La proteina NodD y las substancias flavonoides forman parte del reconocimiento hospedador-especfico debido a que no todos los flavonoides pueden interactuar con una NodD de una especie bacteriana dada. Despus, las proteinas codificadas por los genes nod catalizan la formacin de los metabolitos nod. Esos son oligmeros de N-acetil glucosamina con algunas alteraciones qumicas. Invasin La invasin de las plantas se lleva a cabo por los pelos radiculares. Las bacterias inducen una curvacin de esos pelos mediante el contacto con la planta y la produccin de metabolitos nod. Las bacterias invaden las plantas mediante el desarrollo de canales de infeccin, por lo que se forman tneles transcelulares. Durante la penetracin, y la simbiosis, las bacterias no quedan alojadas directamente dentro del citoplasma de las clulas de la planta hospedadora, sino que permanecen alojadas en "vesculas" rodeadas por una membrana derivada de la membrana citoplasmtica de la clula de la planta. Nitrogenasa La nitrogenasa es el enzima responsable de la reduccin de nitrgeno atmosfrico a amonio en la simbiosis entre Rhiozbium y leguminosa. Se compone de las proteinas NifH, NifD y NifK. La nitrogenasa contiene dos proteinas NifD y dos proteinas NifK. Esas cuatro protenas forman la dinitrogenasa. Adems, la nitrogenasa contiene dos proteinas NifH. Esas sirven como reductasa de la dinitrogenasa. La mayora de las nitrogenasas contienen un cofactor con Fe y Mo. Sin embargo, hay tambin nitrogenasas que carecen de Mo y contienen Fe o V por ejemplo. Para la reduccin del nitrgeno, se transportan electrones de la reductasa de la dinitrogenasa a la dinitrogenasa y finalmente al nitrgeno. El amonio formado durante la fijacin del nitrgeno es proporcionado a la planta en forma de aminocidos. Hidrogenasa Esta protena no es sintetizada por todas las especies de la familia Rhizobiaceae y cataliza la reaccin de oxgeno con el hidrgeno formado durante la fijacin del nitrgeno. De esta forma reduce la concentracin del hidrgeno y del oxgeno dentro del ndulo. Existen especies de Rhizobium que tienen la posibilidad de utilizar la energa que resulta de esa reaccin para formar ATP. Leghemoglobina Leghemoglobina es una protena que contiene una porcin hemo. La subunidad hemina es formada por las bacteroides, mientras que la globina es formada por la planta. Leghemoglobina es responsable del color rojo de los ndulos activos. Sirve para limitar la concentracin de oxgeno dentro del ndulo. De esta forma los bacteroides reciben suficiente oxgeno para sobrevivir y se evita que la nitrogenasa que puede ser inactivada por el oxgeno. Genes nod Se diferencian en genes comunes de nodulacin, nodA, nodB y nodC, y en genes nod que son hospedadorespecficos. Existe una regulacin de los genes de la fijacin de nitrgeno a base al gen nodD. El producto de este gen interacta con los flavonoides caractersticos producidos por la planta hospedadora y por eso es responsable de la especificad de las simbiosis. Debido a la interaccin con los flavonoides de la planta, la protena NodD activa la transcripcin de genes, que por su parte tienen una "caja de nodulacin". Esta se encuentra en la regin donde est el promotor de los genes regulados por nodD. La expresin de estos genes es especfica para la simbiosis. Regulacin de la expresin de los genes simbiticos El sistema FixLJ, NifA y RpoN en Rhizobium meliloti (Sinorhizobium meliloti) tiene un sistema de regulacin de expresin de genes en relacin a la concentracin de oxgeno. Las protenas FixL y FixJ tienen un papel importante en esta regulacin. FixL se autofosforiliza y es capaz de transferir el fosfato a FixJ. En caso de baja concentracinde oxgeno, se aumenta la concentracin de FixJ fosforililada dentro de la clula. La protena FixJ fosforililada activa los genes nifA y otros genes. NifA es un regulador positivo de los genes necesarios para la fijacin de nitrgeno. Un factor sigma necesario para la trascripcin eficaz de muchos genes simbiticos es el RpoN. CONCLUSIONES

Se determin que el Rhizobium es una bacteria que forma ndulos con las leguminosas y fijan nitrgeno atmosfrico.

Los ndulos son estructuras que se forman en las races de las leguminosas, alojan a las bacterias en su interior. En estas estructuras las bacterias se trasforman en bacteroides, que son los encargados de fijar el nitrgeno atmosfrico. El bacteroide es mayor que la bacteria, posee una forma irregular y se muestra mas sensible a cambios de presin osmtica Adems los bacteroides llevan a cabo la fijacin de nitrgeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es responsable de la conversin del nitrgeno molecular en amonio. No todas las especies de leguminosas forman simbiosis con Rhizobium. Las ms conocidas son las que tienen valor comercial y alimentario para el ser humano o para el ganado, como el frjol, la soja, el chcharo, la lenteja, el haba y la alfalfa. La fijacin biolgica del nitrgeno es una biotecnologa agrcola respetuosa con el medio ambiente y representa una alternativa a la fertilizacin nitrogenada, evitando la contaminacin de suelos y aguas por nitratos.

El ciclo de nitrgeno es un conjunto de procesos biogeoqumicos por los cuales el nitrgeno pasa por reacciones qumicas, cambia de forma y se mueve por diferentes embalses en la tierra, incluyendo en organismos vivientes

El nitrgeno es requerido para que todos los organismos se mantengan vivos y crezcan porque es un componente esencial para ADN, ARN y protena. Sin embargo, la mayora de los organismos no pueden utilizar nitrgeno atmosfrico, el embalse mas grande.

Los cinco procesos en el ciclo de nitrgeno fijacin, asimilacin, mineralizacin (o amonificacin), nitrificacin y desnitrificacin

Los humanos influyen el sistema global de nitrgeno principalmente por medio de la utilizacin de fertilizantes basados en nitrgeno.

El Nitrgeno (N), el ladrillo que construye la vida, es un componente esencial del ADN, del ARN, y de las protenas. Todos los organismos requieren nitrgeno para vivir y crecer. A pesar que la mayora del aire que respiramos es N2, la mayora del nitrgeno en la atmsfera no est al alcance para el uso de los organismos. La razn reside en que debido al fuerte enlace triple entre los tomos N en las molculas de N2, el nitrgeno es relativamente inerte. En realidad, para que las plantas y los animales puedan usar nitrgeno, el gas N2 tiene primero que ser convertido a una forma qumica disponible como el amonio (NH4+), el nitrato (NO3-), o el nitrgeno orgnico (e.g. urea - (NH3)2CO). La naturaleza inerte del N2 significa que el nitrgeno biolgico disponible es, a menudo,

escaso en los ecosistemas naturales. Esto limita el crecimiento de las plantas y la acumulacin de biomasa. El Nitrgeno es un elemento increiblemente verstil que existe en forma inorgnica y orgnica, a la vez que en muchos y diferentes estados de oxidacin. El movimiento del nitrgeno entre la atmsfera, la bioesfera y la geoesfera en sus diferentes formas est descrito en el ciclo del nitrgeno (Figura 1). ste es uno de los ciclos biogeoqumicos ms importantes. Al igual que el ciclo carbnico, el ciclo del nitrgeno consiste en varios bancos o bolsas de almacenamiento de nitrgeno y de procesos por los cuales las bolsas intercambian nitrgeno (flechas).

Figura 1: El Ciclo del nitrgeno. Las flechas amarillas indican las fuentes humanas de nitrgeno para el ambiente. Las flechas rojas indican las transformaciones microbianas del nitrgeno. Las flechas azules indican las fuerzas fsicas que actuan sobre el nitrgeno. Y las flechas verdes indican los procesos naturales y no microbianas que afectan la forma y el destino del nitrgeno.

Los procesos principales que componen el ciclo del nitrgeno que pasa por la bioesfera, la atmsfera y la geoesfera son cinco: la fijacin del nitrgeno, la toma de nitrgeno (crecimiento de organismos), la mineralizacin del nitrgeno (desintegracion), la nitrificacin y la denitrificacin. Los microorganismos, particularmente las bacterias, juegan un importante papel en todos las principales transformaciones del nitrgeno. Como procesos de mediacin microbiales, estas transformaciones de nitrgeno ocurren generalmente ms rpido que los procesos geolgicos, tales como los movimientos de placas que es un proceso puramente fsico que hace parte del ciclo carbnico. En el caso de los procesos de mediacin microbianas, la velocidad se ve afectada por factores ambientales como la temperatura, la humedad y la disponibilidad de recursos que influyen la actividad microbiana.

The Microbial World

Figura 2: Parte del sistema de raz en forma de trbol, o triple, tiene lugar gracias a los ndulos de Rhizobium, que es la bacteria que fija el nitrgeno atmosfrico. Cada ndulo mide aprximadamente 2-3 mm. de largo. La imgen es cortesa de ttp://helios.bto.ed.ac.uk/bto/microbes/nitrogen.htm.

La Fijacin del Nitrgeno N2 NH4+ La fijacin del nitrgeno es un proceso en el cual el N2 se convierte en amonio.

ste es esencial porque es la nica manera en la que los organismos puede obtener nitrgeno directamente de la atmsfera. Algunas bacterias, por ejemplo las del gnero Rhizobium, son los nicos organismos que fijan el nitrgeno a travs de procesos metablicos. Esta simbiosis ocurre de manera bien conocida, en la familia de las legumbres (por ejemplo, frjoles, arbejas y trboles). En esta relacin, la bacteria que fija el nitrgeno habita los ndulos de las races de las legumbres (Figura 2) y reciben carbohidratos y un ambiente favorable de su planta anfitriona a cambio de parte del nitrgeno que ellas fijan. Tambin hay bacterias que fijan el nitrgeno que existe, sin plantas anfitrionas. stas son conocidas como fijadores de nitrgeno libre sin lmites. En ambientes acuticos, las algas azules verdosas (en realidad una bacteria llamada cianobacteria) es una importante fijadora de nitrgeno libre sin lmites. Adems del nitrgeno que fija la bacteria, eventos de alta energa natural, tales como los relmpagos, fuegos forestales, y hasta flujos de lava, pueden causar la fijacin de pequeas, pero significativas cantidades de nitrgeno. (Figura 3). La alta energa de estos fenmenos naturales puede romper los enlaces triples de las molculas de N2, haciendo alcanzables tomos individuales de N para la transformacin qumica. En el curso del ltimo siglo, los humanos se han convertido en fuentes fijas de nitrgeno, tan importantes como todas las fuentes naturales de nitrgeno combinadas: quemando combustible de fsiles, usando fertilizantes nitrogenados sintticos y cultivando legumbres que fijan nitrgeno . A travs de estas actvidades, los humanos han duplicado la cantidad de nitrogeno fijada que se dispersa en la bioesfera cada ao (Figura 3). En seguida se discute las consecuencias de este proceso.

Figura 3: El aumento reciente de la fijacin antropognica N en relacin a la fijacin 'natural'. Modificado de Vitousek, P. M. and P. A. Matson (1993). Agriculture, the global nitrogen cycle, and trace gas flux. The Biogeochemistry of Global Change: Radiative Trace Gases. R. S. Oremland. New York, Chapman and Hall: 193-208.

La toma del Nitrgeno NH4+ N Orgnico El amonio producido por el nitrgeno que fija la bacteria es

usualmente incorporado rpidamente en la protena y otros compuestos de nitrgeno orgnico, ya sea por la planta anfitriona, por la misma bacteria, o por otro organismo del suelo. Cuando los organismos ms cercanos a lo alto de la cadena alimenticia (como nosotros!) comen, usan el nitrgeno que ha sido inicialmente fijado por el nitrgeno que fija la bacteria. La Mineralizacin del Nitrgen El N Orgnico NH4+ Despus de que el nitrgeno se incorpora en la materia orgnica,

frecuentemente se vuelve a convertir en nitrgeno inorgnico a travs de un proceso llamado mineralizacin del nitrgeno, tambin conocido como desintegracin. Cuando los organismos mueren, las materias de descomposicin (como la bacteria y los hongos) consumen la materia orgnica y llevan al proceso de descomposicin. Durante este proceso, una cantidad significativa del nitrgeno contenido dentro del organismo muerto se convierte en amonio. Una vez que el nitrgeno est en forma de amonio, est tambin disponible para ser usado por las plantas o para transformaciones posteriores en nitrato (NO3-) a travs del proceso llamado nitrificacin. Nitrificacin NH4+ NO3- Parte del amonio producido por la descomposicin se convierte en nitrato a

travs de un proceso llamado nitrificacin. Las bacterias que llevan a cabo esta reaccin

obtienen energa de s misma. La nitrificacin requiere la presencia del oxgeno. Por consiguiente, la nitrificacin puede suceder slamente en ambientes ricos de oxgeno, como las aguas que circulan o que fluyen y las capas de la superficie de los suelos y sedimentos. El proceso de nitrificacin tiene algunas importantes consecuencias. Los iones de amonio tienen carga positiva y por consiguiente se pegan a partculas y materias orgnicas del suelo que tienen carga negativa. La carga positiva previene que el nitrgeno de amonio sea barrido (o lixiviado) del suelo por las lluvias. Por otro lado, el in de nitrato con carga negativa no se mantiene en las partculas del suelo y puede ser barrido del perfil de suelo. Esto lleva a una disminucin de la fertilidad del suelo y a un enriquecimiento de nitrato de las aguas corrientes de la superficie y del subsuelo. La Denitrificacin NO3N2+ N2O A travs de la denitrificacin, las formas oxidadas de nitrgeno como el

nitrato y el nitrito (NO2-) se convierten en dinitrgeno (N2) y, en menor medida, en gas xido nitroso. La denitrificacin es un proceso anaerbico llevado a cabo por la bacteria que denitrifica, que convierte el nitrato en dinitrgeno en la siguiente secuencia: NO3NO2NO N2O N2.

El xido ntrico y el xido nitroso son gases importantes para el ambiente. El xido ntrico (NO) contribuye a formar smog, y el xido nitroso (N2O) es un gas de invernadero importante, por lo que contribuye a los cambios globales climatolgicos. Una vez que se conviete en dinitrgeno, el nitrgeno tiene pocas posibilidades de reconvertirse en una forma biolgica disponible, ya que es un gas y se pierde rapidamente en la atmsfera. La denitrificacin es la nica trasformacin del nitrgeno que remueve el nitrgeno del ecosistema (que es esencialmente irreversible), y aproximadamente balancea la cantidad de nitrgeno fijado por los fijadores de nitrgeno descritos con anterioridad. La alteracin humana del ciclo del N y sus consecuencias ambientales A principios del siglo 20, un cientfico alemn llamado Fritz Haber descubri como acortar el ciclo del nitrgeno fijando quimicamente el nitrgeno a altas temperaturas y presiones, creando as fertilizantes que podan ser aadidos directamente al suelo. Esta tecnologa se extendi rpidamente durante el ltimo siglo. Junto al advenimiento de nuevas variedades de cultivo, el uso de fertilizantes de nitrgeno sinttico ha trado un enorme crecimiento en la productividad agricola. Esta productividad agricola nos ha ayudado a alimentar a una poblacin mundial en rpido crecimiento, pero el aumento de la fijacin del nitrgeno tambin ha trado algunas consecuencias negativas. Aunque las consecuencias no sean tan obvias como el aumento de las temperaturas globales o el agujero de la capa de ozono, son muy serias y potencialmente dainas para los humanos y otros organismos. No todos los fertilizantes de nitrgeno aplicados a los campos de la agricultura se mantienen para alimentar los cultivos. Algunos son barridos de los campos de agricultura por la lluvia o el agua de irrigacin, y son lixiviados en la superficie o en el agua del suelo

y pueden acumularse. En el agua del suelo que se usa como fuente de agua potable, el nitrgeno excesivo puede provocar cancer en los humanos y dificultades respiratorias en los nios. La U.S. Environmental Protection Agency (Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos) ha establecido un standard de nitrgeno para el agua potable que es de 10 mg por litro de nitrato-N. Desafortunadamente, muchos sistemas (particularmente en las reas de agricultura) ya exceden estos niveles. En comparacin, los niveles de nitrato en las aguas que no han sido alteradas por la actividad humana y rara vez son mayores de 1 mg/L. En las aguas de la superficie, el nitrgeno aadido puede provocar un enriquecimiento excesivo de nutrientes, particularmente en las aguas de la costa que reciben afluencia de los ros polucionados. A este enriquecimiento excesivo de nutrientes, tambin llamado eutroficacin, se lo acusa del aumento de la frecuencia de eventos que matan a los peces de la costa, del aumento de la frecuencia del florecimiento de algas dainas y de cambios en las especies dentro del ecosistema de la costa. El nitrgeno reactivo (como el NO3- and NH4+) que se encuentra en el agua y suelos de la superficie, tambin puede ingresar en la atmsfera como el componente del smog xido ntrico (NO) y el gas de invernadero xido nitroso (N2O). Eventualmente, este nitrgeno atmosfrico puede ser soplado en ambientes terrestres que son sensibles al nitrgeno causando cambios de largo plazo. Por ejemplo, los xidos de nitrgeno contienen una porcin significativa de la acidez en la lluvia cida que es la causante de la deforestacin en partes de Europa y del Noreste de Estados Unidos. El aumento de depsitos de nitrgeno atmosfrico tambin causa los cambios ms sutiles en las especies dominantes y funciones del ecosistema en algunos bosques y prados. Por ejemplo, en los suelos serpentina con poco nitrgeno de los prados del Norte de California, los conjuntos de plantas se han limitado histricamente a las especies nativas que pueden sobrevivir sin mucho nitrgeno. En este momento, hay evidencia que los niveles elevados de entrada de N atmosfrico proveniente del desarrollo industrial y agrcola, han allanado el camino para una invasin de plantas no nativas. Como se ha sealado con anterioridad, el NO es un factor esencial en la formacin del smog, que tambin causa enfermedades respiratorias como el asma en nios y adultos. Actualmente, hay muchas investigaciones dedicadas a entender los efectos del enriquecimiento del nitrgeno en el aire, en el agua del subsuelo, y en el agua en la superficie. Los cientficos tambin estn explorando prcticas agrcolas alternativas, que sostendrn una alta productividad, a la vez que disminuirn los impactos negativos causados por el uso de fertilizantes. Estos estudios no slo nos ayudan a cuantificar cmo los humanos hemos alterado el mundo natural, sino tambin a aumentar nuestro conocimiento sobre los procesos que forman el ciclo del nitrgeno.