ESCUELAUNIVERSITARIADE INGENIERATCNICAAGRCOLA DepartamentodeQumicayAnlisisAgrcola Avda.Complutense,s/n.

CiudadUniversitaria 28040Madrid

Introduccin al anlisis por inyeccin de flujo (FIA: Flow injection analysis)

El anlisis por inyeccin en flujo (FIA, flow injection analysis) es un mtodo automticode anlisis,diseado para minimizar la intervencin humana en el proceso analtico con lo que se mejora la exactitud y reproducibilidad del mtodo manual convencional, en el que se van aadiendo errores con la adicin de reactivos, diluciones posteriores, etc. Adems, con este mtodo se reducen los tiempos de anlisisysucoste. El anlisis mediante FIA se basa principalmente en medir el mayor nmero de muestras en el menor tiempo posible y utilizando la menor cantidad de reactivos posibles. 1.EQUIPO Este sistema se basa en establecer una corriente continua (flujo no segmentado) de un lquido portador (carrier) en el que las muestras se inyectan de modo sucesivo a intervalos regulares de tiempo. La corriente de lquido pasa a travs de una celda de flujo que forma parte de un detector donde la seal analtica se genera,seprocesayserecogedeformacontinuaenunregistrador.

PC

Diagrama1:Principiodelanlisisporinyeccinenflujo

En la figura 1 se muestran los componentes bsicos de un sistema de anlisis porinyeccinenflujocondeteccinespectrofotomtrica:

Automuestreador

Registrador PC Detector Espectrmetro Bombasy vlvulasde inyeccin

Figura1:Componentesbsicosdeunsistemadeanlisisporinyeccinenflujo Acontinuacinsedescribencadaunadelaspartes: Depsitos para reactivos y fluido portador (reagent y carrier): Estos fluidos, que se bombean a travs del sistema, contienen los reactivos necesarios para convertir el analito en una forma medible (por ejemplo, disoluciones reguladoras de pH, reactivos de desarrollo de color, etc) o para reproducir la matriz en la que se encuentralamuestra.

Figura2:BombasPeristlticas

Unidad de bombeo (ver figura 2): parte fundamental del FIA, que proporciona un flujo constante de una o varias disoluciones. Las ms utilizadas son las bombas peristlticas que poseen un tambor con rodillos sobre los cuales se disponen unos tubos flexibles por los que circulan las disoluciones y por presin con un sistema de abrazaderasseconsigueaspirarellquido.Elflujosecontrolaconlavelocidaddelas bombasperistlticasyconeldimetrodelostubos. Sistema de inyeccin (ver figura 3): permite introducir en el fluido portador un volumen exactamente medido de la muestra con gran reproducibilidad de operacin y sin interrumpir el flujo. Para ello, se pueden utilizar vlvulas rotatorias de inyeccin. Estas poseen dos posiciones, carga e inyeccin, de manera que en la posicin de carga se llena el bucle de inyeccin con la muestra y en la posicin de inyeccinestaesarrastradaporelfluidoportadorhaciaeldetector. CARGA

INYECCIN

Figura3.Vlvuladeinyeccin.Posicindecargaeinyeccin. Despus de la inyeccin de la muestra y hasta llegar al detector, en ese camino es donde se dan las reacciones que transforman el analito en una molcula capaz de absorber radiacin procedente de la regin UVvisible. En este camino se pueden colocar,porejemplo,columnasreductoras,clulasdedifusindegas,mezcladore, donde se producen reacciones mediante las que se genera la forma medible del analito, o bien tiene lugar una extraccin, preconcentracin, reduccin, etc. del mismo. Sistema de deteccin con celda de flujo: incorporado a un instrumento de medida que tranduce la concentracin de la forma medible del analito a una seal que se
4

registra de manera continua en funcin del tiempo. Los detectores ms utilizados sonlosespectrofotomtricos,fluorimtricos,potenciomtricosyamperomtricos. Registrador: En este tipo de sistemas la seal analtica es una seal transitoria (no se ha producido ni equilibrio fsico ni qumico) denominada pico o banda del FIA, cuyaalturayreasonproporcionalesalaconcentracindeanalitopresente.As,se puede establecer una recta de calibrado relacionando la concentracin de la especieinyectadaenelsistemaconlaaltura/readelpicoobtenido,siendoposible determinar la concentracin de la especie en una muestra tomando como base dicharecta. 2.FUNDAMENTOQUMICODELADETERMINACINDENITRATOS El principio qumico para la determinacin del contenido de nitratos en cualquiertipodemuestrautilizandoelFIAsebasaendospasos: 1.ReduccindelnitratoextradoanitritoutilizandounacolumnareductoradeCd. 2. Reaccin entre el nitrito y la sulfanilamida para dar lugar a un diazocompuesto que posteriormente reacciona con una amina aromtica (dihidrocloruro de N[1 naftil]etilendiamina) para dar lugar a un compuesto coloreado que presenta un mximodeabsorcina540nm. Acontinuacinsepresentanlasreaccionesquetienenlugar:
Cd2+

NO3

Sulfanilamida

Saldediazonio

N(1naftil)etilendiamina

cromforoqueabsorbea=540nm

En la siguiente figura (figura 4) se encuentra el esquema del sistema FIA

utilizadoparaelanlisisdelosnitratosextradosdelsuelo:
Vvula de inyeccin Fluido portador Reactivo1 Reactivo2 Reactivo3 Bomba peristltica Mezcladores Columna reductora Registrador/PC
540 nm

Desechos

Detector

Fluido portador: 1 M KCl; Reactivo 1: NH4Cl pH=8,5 (85 g/L, pHo=4,5 subir con NH4OH) Reactivo 2: una disolucin de sulfanilamida; Reactivo 3: una disolucin de dihidrocloruro de N (1naftol)etilendiamina.

Figura4.SistemaFIAutilizadoparaladeterminacindenitrato. 3.FUNDAMENTOQUMICODELADETERMINACINDEAMONIO Ladeterminacindelcontenidodeamonio(NH4+)encualquiertipodemuestra utilizando el FIA se realiza por difusin gaseosa y se basa en las siguientes reacciones qumicas: 1. Reaccin cidobase para transformar el NH4+ presente en el extracto de suelo en NH3gas: NH4++NaOH'NH3(g)+H2O+Na+ 2.DifusindelNH3gaseosoatravsdeunamembranapermeablealgasyreaccincon una disolucin formada por una mezcla de indicadores cidobase (violeta de bromocresol,azuldebromotimol,rojocresol).Elresultadoesuncambiodecolorenla disolucin (la disolucin inicial de los indicadores es de color amarilloocre y al reaccionar con el NH3 gaseoso se transforma en azul. Cuanto mayor sea la concentracin de NH3 gas, ms intenso ser el color azulado) que se mide a travs de unespectrofotmetrodeabsorcinmolecularUvvisibleeligiendo=590nm.
6

En la siguiente figura (figura 5) se encuentra el esquema del sistema FIA

utilizadoparaelanlisisdeamonioextradodeunsuelo:
Vvula de inyeccin Fluido portador Reactivo1 Reactivo2 Celdadedifusin Bomba peristltica NH4++OH ' NH3+H2O NH3 (g) Detector Mezclador
590 nm

Desechos

Desechos

Registrador/PC

Fluido portador: 1 M KCl; Reactivo 1: NaOH 0,5 M; Reactivo 2: Mezcla de indicadores (Absorbancia inicial 0,450,60 a 590 nm, color ocre)

Figura5.SistemaFIAutilizadoparaladeterminacindeamonio.