Instituto de Biocincias

DNA VEGETAL NA SALA DE AULA

AUTORES Cristiane Del Nero Rodrigues (babetecris@yahoo.com.br) Ana Carolina de Almeida (anacarolusp@yahoo.com.br) Cludia Maria Furlan (furlancm@yahoo.com.br) Daniel Gouveia Tanigushi (danieltanigushi@yahoo.com.br) Dborah Yara A. C. dos Santos (dyacsan@ib.usp.com) Fungyi Chow (fchow@ib.usp.br) Lucimar Barbosa Motta (lugalll@yahoo.com.br)

2008
Ficha Catalogrfica

D629

DNA vegetal na sala de aula / Cristiane Del Nero Rodrigues...[et al.] So Paulo: Departamento de Botnica IBUSP. So Paulo, 2008. 8 p.: il. (Ensino de Botnica) ISBN: 978-85-85658-22-9 1. Botnica Estudo e ensino 2. Extrao de DNA. I. Almeida, Ana Carolina de II. Furlan, Cludia Maria III. Tanigushi, Daniel Gouveia IV. Santos, Dborah Yara A.C. dos V. Chow, Fungyi VI. Motta, Lucimar Barbosa VII. Universidade de So Paulo, Instituto de Biocincias, Departamento de Botnica VII. Srie. LC: QK 51

DNA VEGETAL NA SALA DE AULA Rodrigues, C.D.N., Almeida, A.C., Furlan, C.M., Tanigushi, D.G., Santos, D.Y.A.C., Chow, F. & Motta.,L.B. (2008) ISBN:978-85-85658-22-9 Departamento de Botnica - IBUSP

DNA VEGETAL NA SALA DE AULA

Atualmente, o termo DNA ganhou tamanha abrangncia que atrai os noticirios. Portanto, a proposta de levar a extrao de DNA para a sala de aula pode ser uma experincia reveladora, despertando assim a curiosidade dos alunos. Este texto um material de apoio para aula prtica sobre extrao de DNA. Ele pode ser aplicado em sala de aula, tanto no Ensino Mdio quanto no Ensino Fundamental, e pode auxiliar o professor na abordagem de conceitos como constituio, organizao e funo celular dos seres vivos. O objetivo deste material contribuir para a identificao do DNA extrado a partir de material vegetal.

Material necessrio: - material biolgico (flor, cebola, folhas, repolho, morango, banana); - faca ou tesoura; - filme plstico; - banho-maria; - termmetro; - bacia; - algodo; - gelo; - lcool de limpeza gelado (92%). Para a extrao de cada material necessrio: - dois copos de vidro; - uma colher de sopa de detergente lquido neutro; - uma colher de ch de sal de cozinha; - um funil de plstico (garrafa PET cortada pela metade com tampa perfurada).

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PROCEDIMENTO PARA EXTRAO DE DNA:

ETAPA 1 Coloque gua at do volume do copo. Acrescente o detergente lquido e o sal de cozinha e misture vagarosamente com uma colher (soluo de lise).

A soluo de lise assim denominada devido a sua funo de rompimento da membrana plasmtica e outras membranas. O detergente permite a desestruturao das molculas de lipdios das membranas biolgicas.
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O sal proporciona o ambiente favorvel para a extrao de DNA, neutralizando a carga negativa dos grupos fosfatos dessa molcula.

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ETAPA 2 Pique o material vegetal em pequenos pedaos, coloque-o dentro do copo com a soluo de lise e misture vagarosamente com uma colher. Cubra o copo com filme plstico.

2b. Folha

2c. Repolho

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2d. Banana
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2e. Casca de banana

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2f. Cebola

2g. Morango
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Quanto mais picado estiver o material, maior ser sua superfcie de contato com a soluo de lise e melhor a ao da soluo sobre as clulas. Isto permitir a liberao de uma maior quantidade de molculas de DNA e, portanto, um bom rendimento.

2a. Flor

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ETAPA 3 Incube o copo em banho-maria a 70C por 20 min.

A temperatura elevada promove agitao das molculas, facilitando a ao do detergente em desestabilizar as membranas lipdicas. A alta temperatura tambm ajuda a inativar enzimas que podem degradar o DNA.

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Alternativamente ao banho-maria, pode ser utilizado: - caixa de isopor contendo gua fervente ou - banho-maria em fogo, com fogo brando.

Temperaturas menores que 70C requerem maior tempo de incubao.

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Alternativamente ao funil feito com garrafa PET, pode ser utilizado funil para coar caf com algodo ou com filtro de papel.

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ETAPA 4 Retire o copo do banhomaria, filtre o material utilizando o funil com algodo e recolha o filtrado em outro copo.

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ETAPA 5 Coloque o copo com o material filtrado em um banho de gelo e deixe esfriar por 5 min.

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O resfriamento do filtrado no gelo permitir a precipitao do DNA.

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ETAPA 6 Retire o copo do gelo e adicione o lcool gelado escorrendo vagarosamente pela parede do copo. O volume de lcool deve ser aproximadamente equivalente ao do material filtrado.
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O lcool gelado diminui a solubilidade do DNA com a ajuda do sal adicionado inicialmente. O DNA, menos solvel em lcool, formar um aglomerado que precipitar junto com outras molculas. Adicionar o lcool gelado em velocidade lenta auxilia na eficincia de precipitao do DNA.

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ETAPA 7 Observe o DNA precipitado como uma nuvem esbranquiada no fundo da fase alcolica. A pectina ficar no topo da fase alcolica.

7a. Flor

DNA DNA DNA

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7b. Cebola

7c. Folha

7d. Repolho

pectina pectina DNA

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pectina DNA
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DNA

7e. Morango

7f. Banana

7g. Casca de banana

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Materiais com altas quantidades de pectina (ex. morango e banana) dificultam a correta identificao do DNA. Um dos melhores materiais recomendados para esta experincia em sala de aula a cebola, uma vez que permite a obteno de um DNA mais limpo e apresenta menor quantidade de pectina.

DNA

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DIFERENCIANDO PECTINA DE DNA Pectina

Pode-se observar bolhas na camada de pectina. Alm disso, a pectina apresenta consistncia de gelia quando retirada com um basto de vidro, pipeta Pasteur ou palito de dente.
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Presena das bolhas de ar

Massa com consistncia de gelia

O DNA forma filamentos muito finos, semelhantes a fios de algodo.

DNA

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Ausncia de bolhas de ar

Filamento

Para comprovar a presena de pectinas: - colete material da regio das bolhas; - centrifugue a fim de concentr-lo no fundo do tubo; - o tubo 1 ser o controle sem pectinase; - no tubo 2 adicione pectinase (enzima que degrada pectina).
Aps 3-4 horas

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Pectina

Pectina 2 degradada

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Disponvel em http://www.ib.usp.br/materiaisdidaticos