ARS Pharmaceutica

ISSN: 0004-2927 http://farmacia.ugr.es/ars/

Tcnicas de microencapsulacin: una propuesta para microencapsular probiticos.

Martn Villena MJ, Morales Hernndez ME, Gallardo Lara V y Ruiz Martnez MA

Departamento de Farmacia y Tecnologa Farmacutica. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada, Espaa. E-mail: adolfina@ugr.es

RESUMEN A la hora de utilizar probiticos, el principal problema que se presenta, es la escasa resistencia de estos a diferentes condiciones ambientales y tecnolgicas. Las tcnicas de microencapsulacin son un buen mtodo para proteger a estos microorganismos, sin embargo no todas las tcnicas son apropiadas para los probiticos. En este artculo proponemos la tcnica de gelificacin interna, que por sus caractersticas permite la obtencin de un tamao de partcula adecuado y la supervivencia de los microorganismos. PALABRAS CLAVE: Alginato. Gelificacin interna. Probiticos. Tcnicas de microencapsulacin.

ABSTRACT The main problem when probiotics are used is the low resistance of these to different environmental and technological conditions. The microencapsulation techniques are a good method in order to protect the probiotics, Nevertheless not all techniques of microencapsulation are suitable for probiotics. In this paper, we propose the internal gelification which allows us to obtain a suitable particle size and the survival of the microorganisms.

KEYWORDS: Alginate, Internal gelation. Probiotics. Microencapsulation techniques

INTRODUCCION: La OMS define a los probiticos como organismos vivos que administrados en cantidades adecuadas ejercen un efecto beneficioso sobre la salud del hospedador. Para que las bacterias puedan considerarse como probiticos es necesario que cumplan las siguientes caractersticas1: Ser de origen humano ya que las cepas aisladas de seres humanos sanos presentan mayor facilidad para colonizar el intestino humano y probablemente no sean patgenas, habindose utilizado para definir esta caracterstica el acrnimo ingls GRAS (generally recognized as safe) Deben poseer tolerancia a las condiciones ambientales, ya que probiticos han de llegar viables al lugar de accin. los microorganismos

Fecha de Recepcin: 18/05/09 Fecha de Aceptacin: 18/06/09

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Si tenemos en cuenta que los probiticos son principalmente consumidos por va oral, es lgico pensar, que sus efectos beneficiosos se pondrn de manifiesto, fundamentalmente, en patologas intestinales. Sin embargo, la posibilidad de modular la respuesta inmune de tipo sistmica, hace que los probiticos tambin presenten efectos positivos en otras alteraciones extraintestinales, como alergias y vaginitis. Sin embargo, el problema que se presenta a la hora de incorporar probiticos a cualquier formulacin, es la escasa resistencia de los microorganismos a los procesos tecnolgicos y a diferentes condiciones ambientales como el pH, el oxigeno o la temperatura. Por todo esto, es necesario que los microorganismos se introduzcan protegidos por una barrera fsica que evite su exposicin a las condiciones adversas del entorno. Para ello, recurrimos a las tcnicas de microencapsulacin, que consisten en el recubrimiento de pequeas cantidades de un determinado compuesto mediante un material protector que es generalmente de naturaleza polimrica. La microencapsulacin protege a los materiales encapsulados de factores como el calor y la humedad, permitiendo mantener su estabilidad y viabilidad, tambin se ha utilizado para mejorar el sabor y la estabilidad de medicamentos y como barrera contra malos olores y sabores. Ayuda, adems, a que los materiales frgiles resistan las condiciones de procesamiento y empacado mejorando sabor, aroma, estabilidad, valor nutritivo y apariencia. En el caso de frmacos cuya liberacin se lleve a cabo en el estomago o en el intestino, permite una mxima absorcin de los compuestos con un mnimo de reacciones adversas. Adems la microencapsulacin protege a los probiticos de los bacterifagos y de los ambientes adversos, como la congelacin y las soluciones gstricas, y facilita la manufacturacin de productos fermentados, ya que, proporciona unas condiciones ms constantes. La seleccin del mtodo de encapsulacin estar en funcin del tamao medio de la partcula requerida, de las propiedades fsicas del agente encapsulante, de la sustancia a encapsular, de las aplicaciones del material encapsulado propuesto, del mecanismo de liberacin deseado y del coste.

MTODOS DE MICROENCAPSULACION: Existen diversos mtodos para la produccin de microcpsulas. En general, estos mtodos se pueden dividir en tres grupos2: Procesos fsicos: secado por aspersin. Procesos qumicos: polimerizacin interfacial e inclusin molecular. Procesos fisicoqumicos: coacervacin, liposomas y gelificacin inica.

Secado por aspersin: Es la transformacin de un fluido en material slido, atomizndolo en forma de gotas minsculas en un medio de secado en caliente3. La distribucin del tamao de las partculas obtenidas por este mtodo es, en general, menor a 100 . Se distinguen los siguientes pasos: 1. La preparacin de la emulsin o suspensin del material a encapsular en una solucin encapsuladora. 2. La atomizacin y la deshidratacin de las partculas atomizadas. Una de las grandes ventajas de este proceso, adems de su simplicidad, es que es apropiado para

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materiales sensibles al calor, ya que el tiempo de exposicin a temperaturas elevadas es muy corto. Polimerizacin interfacial: En este proceso se produce la polimerizacin de un monmero en la interfase de dos sustancias inmiscibles, formando una membrana, que dar lugar a la pared de la microcpsulas. Este proceso tiene lugar en tres pasos2: 1. Dispersin de una solucin acuosa de un reactante soluble en agua, en una fase orgnica para producir una emulsin agua en aceite 2. Formacin de una membrana polimrica en la superficie de las gotas de agua, iniciada por la adicin de un complejo soluble en aceite a la emulsin anterior. 3. Separacin de las microcpsulas de la fase orgnica y su transferencia en agua para dar una suspensin acuosa. La separacin de las microcpsulas se puede llevar a cabo por centrifugacin. Incompatibilidad polimrica: En este mtodo se utiliza el fenmeno de separacin de fases, en una mezcla de dos polmeros qumicamente diferentes e incompatibles en un mismo solvente. El material a encapsular interaccionar solo con uno de los dos polmeros, el cual se adsorbe en la superficie del material a encapsular formando una pelcula que los engloba. De manera general, este proceso se lleva a cabo en solventes orgnicos y cuando el material a encapsular es slido2. Coacervacin: Es un mtodo fsico-qumico que se basa en la separacin de fases, consiste en tres pasos2: 1. Formacin de un sistema de tres fases qumicamente inmiscibles (una fase liquida o fase continua, un material a recubrir y un material de cobertura o de pared) 2. Deposicin del material polimrico lquido que formar la cubierta sobre el material a cubrir 3. Solidificacin de la cubierta. Con esta tcnica, se pueden obtener microcpsulas esfricas muy pequeas, de hasta de 4 m y con una carga de material a encapsular de alrededor del 90%. Adems, proporcionan una buena proteccin contra las perdidas por volatizacin y contra la oxidacin. Liposomas: Los liposomas son partculas microscpicas hechas de lpidos y agua principalmente. Son estructuras compuestas de una bicapa de lpidos que engloban un volumen acuoso. Se elaboran con molculas anfiflicas que poseen sitios hidrofbicos, por ejemplo, fosfolpidos como la lecitina. En la fase acuosa, se coloca en material a encapsular cuando es hidroflico o bien se agrega en el solvente orgnico donde se disuelven los fosfolpidos, si es lipoflico2. Gelificacin inica: Existen dos tcnicas de gelificacin4: Gelificacin externa: En la gelificacin externa, la sal de calcio soluble es agregada en el seno de una emulsin A/O. El tamao de partcula no puede ser bien controlado y las partculas tienden a coagular en grandes masas antes de adquirir la consistencia apropiada. Adems, el tamao de partcula que se obtiene es grande,

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entre 400m y 1mm. 5 Gelificacin interna: La gelificacin interna se basa en la liberacin del in calcio desde un complejo insoluble en una solucin de alginato de sodio. Esto se lleva a cabo por acidificacin de un sistema aceite-cido soluble, con participacin en la fase acuosa del alginato. Esta tcnica permite obtener partculas de un tamao de aproximadamente 50 m.5 De acuerdo con esta tcnica, a la fase acuosa, generalmente formada por alginato y carbonato clcico, se le adiciona la fase oleosa (aceite vegetal, Span 80 y cido actico). Las reacciones que se producen son las siguientes6: 1. Difusin del cido actico desde la fase oleosa a la acuosa. CH3COOH(o)CH3COOH(a) 2. El hidrogenin es liberado del acido actico a la fase acuosa CH3COOHH ++ CH3COO 3. El calcio es liberado por la reaccin entre el hidrogenin y la sal insoluble de calcio. 4. El gel de alginato se forma gradualmente a travs de la reaccin entre el calcio y los residuos de los cidos glucurnicos de la cadena, formndose la estructura que se conoce como eggbox (Figura 1) en la que, metafricamente, los huevos serian los iones de calcio. 2 Alg - + Ca +2 Ca (Alg)2

Figura 1. Formacin del gel de alginato clcico.

El gel de alginato clcico formado es permeable a molculas solubles en agua, cuyos pesos moleculares sean menores a 5000 dalton. Molculas mayores tambin pueden difundir a travs del gel, pero si el peso molecular excede los 10.000 dalton, la difusin no ocurre. La excepcin a esto, la constituyen los lpidos, que permanecen en la matriz aun cuando sean de peso molecular bajo. En la gelificacin interna, una serie de parmetros han sido estudiados, tales como4: Tiempo de agitacin con el acido actico glacial:

Al aumentar el tiempo de contacto 10 veces se observa que la encapsulacin del paracetamol aumenta 3 veces, esto podra deberse a que se lleva a cabo una gelificacin ms completa debido a una mayor

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liberacin de iones calcio desde el complejo insoluble carbonato clcico. Tiempo de contacto de las micropartculas con la solucin de cloruro clcico:

Si bien es necesario un tiempo de reaccin, el mismo no debe ser excesivo, debido a que facilitara la difusin del principio activo por gradiente de concentracin. Se observo que al disminuir el tiempo de contacto, se obtuvieron mejores resultados en la encapsulacin y, consecuentemente, mayor rendimiento total de micropartculas. Concentracin de iones calcio:

Parece ser un parmetro crtico en la produccin de micropartculas. La influencia de la concentracin de in calcio fue evaluada con tres concentraciones diferentes (157; 314; 629 nM). Se observ que a medida que se increment la concentracin, aument el rendimiento total de micropartculas y la encapsulacin de principio activo.

Coberturas utilizadas en microencapsulacin: Independientemente del mtodo elegido para preparar las microcpsulas, el primer paso en la encapsulacin ser la seleccin de una matriz de encapsulacin adecuada3. (Tabla 1)

Tabla 1. Materiales empleados en la encapsulacin. Tipo de cobertura Gomas Cobertura especfica Agar, alginato de sodio, carragenina, goma arbiga Almidn, dextranos, sacarosa, jarabes de maz Etilcelulosa, metilcelulosa, Celulosas acetilcelulosa, nitrocelulosa,carboximetil-celulosa Ceras, parafinas, diglicridos, Lpidos monoglicridos, aceites, grasas, cido esterico, trisetearina Protenas Materiales inorgnicos Gluten, casena, albmina Sulfato de calcio, silicatos

Carbohidratos

Entre los agentes encapsulantes que se utilizan destacan: - Las protenas aisladas del suero de la leche, utilizadas como cobertura en el secado por aspersin. Este material posee alta capacidad emulsificante y genera microcpsulas de tamao inferior a 2 micrmetros. Pueden utilizarse solas o combinadas con carbohidratos para modificar las propiedades de la pared y el tamao de las partculas. El uso de protenas del suero de la leche tiene efectos sobre

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la morfologa de las microcpsulas hacindolas mas esfricas y de superficie tersa en comparacin con los polisacridos. - Los alginatos son uno de los polmeros ms utilizados en la microencapsulacin. Se extraen principalmente de tres especies de algas marrones (Laminaria hyperborea, Ascophyllum nodosum, Macroscystis pyrifera). Los alginatos son una familia de polisacridos lineales no ramificados, que contienen cantidades variables de acido (1,4) -D-manurnico y de acido -L-gulurnico. La composicin y extensin de las secuencias y el peso molecular determinan sus propiedades fsicas. Los alginatos han sido empleado como agentes espesantes, gelificantes y estabilizantes coloidales en la industria alimentaria y gracias a sus propiedades, tambin se han podido aplicar en el entrapamiento y liberacin de frmacos y microorganismos. Estas propiedades son: Permitir que la encapsulacin se lleve a cabo a temperatura ambiente. No requerir solventes orgnicos txicos Elevado grado de porosidad Permitir una alta velocidad de difusin para macromolculas, y la posibilidad de controlar dicha difusin. Disolverse y degradarse bajo condiciones fisiolgicas normales.

Mtodos de liberacin: La liberacin del contenido de las microcpsulas se puede llevar a cabo por disolucin en agua, esfuerzos de cizalla, temperatura, reacciones qumicas y enzimticas o por cambios en la presin osmtica. No obstante, esta liberacin puede controlarse por difusin a travs de la pared de la microcpsula o bien por medio de una membrana que recubra la pared3. La permeabilidad a travs de la matriz y la solubilidad de los componentes de la pared de la cpsula influyen en la velocidad de difusin. Por todo esto, la seleccin de una matriz o membrana es importante, tiene tambin especial relevancia, la naturaleza qumica, morfolgica, la temperatura de transicin, el grado de hinchamiento y de entrecruzamiento de los componentes de la cubierta, ya que pueden disminuir la velocidad de liberacin. Vistas todas las caractersticas de las diferentes tcnicas de microencapsulacin y conociendo las propiedades de nuestro material (los probiticos), la eleccin del mtodo de encapsulacin depende de varios factores. En el caso de la encapsulacin de probiticos son: Tamao de partcula:

El tamao deseado oscila entre 15-100m, las microcpsulas mayores a 100m son detectables en la boca, y las inferiores a 15 m no dan la suficiente proteccin frente a los agentes externos7. La tcnica no debe emplear agentes externos agresivos que pudieran limitar la supervivencia de los microorganismos. Se requerir, adems, un bajo consumo energtico, de forma que los costes de la tcnica sean rentables industrialmente.

Segn todo lo expuesto anteriormente, la gelificacin inica interna, se perfila como una de las mejores tcnicas para la microencapsulacin de probiticos ya que es una tcnica sencilla y Ars Pharm, Vol. 50 n1;43-50.

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econmica, que se puede emplear para producciones a gran escala. 8, 9Los Trabajos de diversos autores, han demostrado que los probiticos microencapsulados con alginato, el polmero mas empleado en la gelificacin inica, ven incrementada su supervivencia hasta en un 80-95%,8,9 frente a los no encapsulados10,11,12,13 . El alginato calcio, adems, no es txico, es barato y se degrada bajo condiciones fisiolgicas normales14 .Las bacterias de un tamao entre 1-3 m se retienen bien en la matriz del gel, que tiene un tamao de poro menor de 17 nm15,16 .

CONCLUSIONES: una visin de futuro Como ya se ha indicado anteriormente, el hecho de que los probiticos se administren generalmente por va oral, puede conducir a pensar errneamente que sus efectos beneficiosos se producen nicamente a nivel del tracto gastrointestinal. Sin embargo, el tracto gastrointestinal no es el nico nicho bacteriano, hay otros rganos que tienen su ecosistema bacteriano, como las invaginaciones y la piel. Algunos estudios han demostrado la eficacia de los probiticos en el tratamiento de las vaginitis17 esto podra deberse a que crean un ambiente acido que puede impedir el desarrollo de otros microorganismos. La microbiota cutnea, tiene tambin una serie de funciones claves: Es barrera fsica y qumica para evitar la entrada de microorganismos. Disminuye el dao provocado por la radiacin ultravioleta. Evita la oxidacin. Produce nutrientes que son utilizados por las clulas que forman la piel. Son responsables del olor.

En todos estos mbitos podran tener aplicacin la tcnica que proponemos, as como su empleo en alergias, prevencin de infecciones de la piel, cremas antienvejecimiento y un largo etctera.

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