COLESTEROL - PP

Kit para determinao do colesterol total por metodologia enzimtica-colorimtrica. Cat. 460 MS 80022230064

MTODO Enzimtico-Colorimtrico (Trinder). FINALIDADE Reagentes para determinao quantitativa do colesterol total no soro. Somente para uso diagnstico in vitro. FUNDAMENTO Os steres do colesterol so hidrolisados pela colesterol esterase (CHE) formando colesterol livre que aps oxidao pela colesterol oxidase (CHOD) forma perxido de hidrognio. Este, reagindo com o fenol e 4-aminoantipirina, atravs de copulao oxidativa catalisada pela peroxidase (POD), produz uma quinonimina de cor vermelha. A absorbncia do complexo formado, medida em 500 nm, diretamente proporcional concentrao de colesterol da amostra.
steres do colesterol Colesterol + O2
CHOD CHE

MATERIAIS NECESSRIOS E NO FORNECIDOS Espectrofotmetro (leitura entre 490 e 510 nm); Tubos e pipetas; Banho-maria a 37 C; Cronmetro.

Colesterol + cidos Graxos Colest-4-en-ona + H2O2

POD

PRECAUES E CUIDADOS ESPECIAIS Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste. De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes. Os reagentes contm azida sdica como conservante. Evitar contato com os olhos, pele e mucosa. No aspirar ou ingerir. No pipetar diretamente do frasco do Reagente de Cor (2) para evitar contaminao. Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio ambiente.

2H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina

4H2O + quinonimina

SIGNIFICADO CLNICO O colesterol o principal esterol do organismo, estando presente em todas as clulas como um componente estrutural das membranas e das lipoprotenas (HDL, VLDL e principalmente LDL). tambm o precursor na formao dos hormnios esterides pelas gnadas e crtex adrenal. Cerca de 70 a 75% do colesterol plasmtico encontra-se na forma de ster e 25 a 30% existe como colesterol livre. Alm do colesterol absorvido a cada dia pelo tubo gastrintestinal, que denominado colesterol exgeno, grande quantidade designada como colesterol endgeno formada no fgado e outros tecidos. A aterosclerose caracteriza-se pelo acmulo de lpides dentro e ao redor das clulas na ntima das artrias e est associada com a proliferao celular e fibrosa provocando o estreitamento do lmen do vaso. O desenvolvimento da aterosclerose est ativa em todos os indivduos e permanece sem qualquer manifestao por dcadas. Subitamente podese manifestar por dor torcica, infarto agudo do miocrdio ou morte sbita. Diversos estudos epidemiolgicos e experimentais comprovam uma correlao positiva entre os nveis do colesterol, mais precisamente do colesterol LDL e o risco de doena arterial coronariana (DAC). Ao contrrio, os nveis de colesterol HDL so inversamente proporcionais ao risco de DAC. Valores aumentados de colesterol so encontrados na nefrose, no hipotireoidismo, nas doenas colestticas do fgado e nas hiperlipoproteinemias dos tipos IIa, IIb e III. Nveis diminudos so encontrados no hipertireoidismo, doenas consuntivas e desnutrio crnica. O nvel de colesterol srico, juntamente com a hipertenso e o fumo, constituem fatores de risco de aterosclerose e doena arterial coronariana (DAC). QUALIFICAES DO PRODUTO Metodologia enzimtica colorimtrica de ponto final, rpida e direta para dosagem do colesterol total facilmente adaptvel em analisadores automticos e semi-automticos. O produto emprega reagentes lquidos, prontos para uso. O Reagente de Cor possui agente clarificador de soro que elimina interferncias positivas produzidas por valores de triglicrides at 2600 mg/dL. A metodologia permite obter resultados exatos e precisos se for executada conforme descrita nesta Instruo de Uso. IDENTIFICAO DOS REAGENTES Conservar entre 2-8 C. 1- Padro - Contm colesterol 200 mg/dL e azida sdica 15 mmol/L. O Padro rastrevel ao Standard Reference Material SRM 911 do National Institute of Standards and Technology - NIST. 2- Reagente de Cor - Contm tampo 35 mmol/L pH 7,0, colato sdico 0,5 mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterase 200 U/L, colesterol oxidase 100 U/L, peroxidase 800 U/L, 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L e azida sdica 15 mmol/L. ESTABILIDADE Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. Sinais de Deteriorao dos Reagentes 1- Presena de partculas e turbidez indicam deteriorao dos reagentes. 2- A absorbncia do Reagente de Cor lida contra a gua em 500 nm dever ser inferior a 0,300 durante toda a sua utilizao ou at a expirao da data de validade do mesmo.

AMOSTRA SORO. O analito estvel por 7 dias entre 2-8 C. Misturar bem as amostras lipmicas antes de iniciar a dosagem. No utilizar amostras fortemente hemolisadas. A amostra de sangue deve ser colhida aps um jejum de 12 horas para evitar a interferncia da lipemia ps-prandial que geralmente est presente em amostras obtidas sem jejum. Nota Recomendamos que a coleta, preparao, armazenamento e descarte das amostras biolgicas sejam realizadas seguindo as recomendaes das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos. Enfatizamos que os erros provenientes da amostra podem ser muito maiores do que os erros ocorridos durante o procedimento analtico. INFLUNCIAS PR-ANALTICAS A postura durante a coleta da amostra deve ser padronizada porque pode ter efeitos significativos nos resultados. Se as amostras so obtidas na posio sentada, deve-se padronizar para que o indivduo esteja sentado durante 15 minutos e no mais do que 30 minutos. O garroteamento no deve exceder a 1 minuto para no produzir hemoconcentrao, que pode aumentar os valores do colesterol em 5% aps 2 minutos e 10% a 15% aps 5 minutos. Portanto, muito importante que os laboratrios padronizem o procedimento da coleta da amostra. Nveis elevados de ascorbato (vitamina C) produzem interferncias negativas por competio com o cromgeno na reao da peroxidase. Se houver suspeita da presena de cido ascrbico, deixar o soro em repouso durante 90 minutos antes de iniciar a dosagem para no obter resultados falsamente diminudos. INTERFERNCIAS A bilirrubina at 5 mg/dL, lipemia (triglicrides at 2600 mg/dL), hemlise (hemoglobina at 180 mg/dL) no produzem interferncias significativas. PROCEDIMENTO DO TESTE A-Condies de Reao Leitura: Comprimento de onda 500 nm Medida: Contra o Branco Tipo de reao: Ponto final B-Tcnica de Anlise 1- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", " Teste " e "Padro" e proceder:
Tubos Soro Padro (1) Reagente de Cor (2) Branco 1000 L Teste 10 L 1000 L Padro 10 L 1000 L

2- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37 C por 10 minutos. O nvel de gua do banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos. 3- Fazer as leituras fotomtricas do Padro (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 500 nm (490 a 510 nm). A cor estvel durante 1 hora. Clculos Ver Linearidade. Como a metodologia obedece a lei de Lambert-Beer, calcular a concentrao do teste atravs do Fator de Calibrao (FC). CP = Concentrao do Padro = 200 mg/dL AP = Absorbncia do Padro

CT = Concentrao do Teste AT = Absorbncia do Teste FC = CP AP CT (mg/dL) = FC x AT Exemplo CP = 200 mg/dL AP = 0,347 AT = 0,301 FC = CP AP = 200 0,347 = 576 CT (mg/dL) = FC x AT = 576 x 0,301 = 173 mg/dL Ateno Esta tcnica de dosagem adequada para fotmetros cujo volume mnimo de soluo para a leitura igual ou menor do que 1000 L. O analista sempre deve fazer uma verificao da necessidade de ajuste do volume para o fotmetro empregado no seu laboratrio. Os volumes de amostra e de reagente podem ser modificados proporcionalmente, sem alterar o desempenho do teste e os clculos. Em caso de reduo dos volumes necessrio observar o volume mnimo de leitura fotomtrica. Volumes da amostra menores do que 10 L so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados com cautela porque aumentam a impreciso da medio. Converso de Unidades Unidades Convencionais ( mg/dL) x 0,026 = Unidades SI (mmol/L) VALORES DESEJVEIS OU RECOMENDADOS Substituem os valores de referncia e so determinadas a partir de dados epidemiolgicos, calculados estatisticamente, que relacionam os nveis do colesterol com a prevalncia de doena arterial coronariana (DAC). 1- Adultos
Colesterol Total Valor desejvel: < 200 mg/dL Valor limtrofe: 200 a 239 mg/dL Valor elevado: 240 mg/dL ________ Colesterol HDL Valor desejvel: 60 mg/dL Valor baixo: < 40 mg/dL ________ ________ Colesterol LDL Valor desejvel: < 100 mg/dL Valor limtrofe: 130 a 159 mg/dL Valor elevado: 160 a 189 mg/dL Valor muito elevado: 190 mg/dL
Colesterol LDL Valor desejvel: < 110 mg/dL Valor limtrofe: 110 a 129 mg/dL Valor elevado: 130 mg/dL

Reprodutibilidade A impreciso inter-ensaio foi calculada com 20 determinaes de colesterol em dias diferentes utilizando duas amostras de soro com concentraes diferentes. As mdias dos coeficientes de variao obtidas foram de 1,9 e 1,0%. Limite de Deteco O limite de deteco igual a 0,3 mg/dL, equivalente a trs desvios padro (DP) obtidos a partir de um ensaio com vinte medies (20) da absorbncia do branco da reao em espectrofotmetro no comprimento de onda de 500 nm. Comparao de Mtodos O produto foi comparado com outro similar disponvel no mercado atravs da anlise de 146 amostras de soro humano com valores desconhecidos. Os resultados analisados por modelos estatsticos demonstraram que no h diferena significativa em um intervalo de confiana de 95% com uma equao de regresso linear onde y = 1,013x - 2. OBSERVAES 1- A observao minuciosa da limpeza e secagem da vidraria, da estabilidade dos reagentes, da pipetagem, da temperatura e do tempo de reao de extrema importncia para se obter resultados precisos e exatos. 2- Na limpeza da vidraria pode-se empregar um detergente neutro ou uma soluo cida. A ltima lavagem deve ser feita com gua destilada ou deionizada. 3- A gua utilizada nos laboratrios clnicos deve ser purificada utilizandose mtodos adequados para as finalidades de uso. Colunas deionizadoras saturadas liberam diversos ons, aminas e agentes oxidantes que deterioram os reativos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Alain CA, Poon LS, Cahn CSG, Richmond W, Fu PC. Clin Chem 1974;20:470. 2. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Qumica Clnica, 4a Ed Guanabara Koogan SA; 1998. 3. Erichsen ES, Viana LG, Delbone de Faria RM, Santos SME. Medicina Laboratorial para o Clnico, 1 Ed COOPMED - Editora Mdica 2009;P493. 4. Fredriickson DS, Levy RJ, Lee RS. New Engl J Med 1967; 276:24, 94, 148, 215, 276. 5. Good NE, Winger GD, Winter W, Connoly TN, Izawa S, Singh RMM. Biochemistry 1966;5:467. 6. Inmetro - Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualimark Editora, Rio de Janeiro, 1997. 7. Leite PF, et al. Risco Cardiovascular: fatores metablicos e nutricionais: diagnstico e tratamento. So Paulo: Loyola, 1994.P56. 8. Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH. Handbook of lipoprotein testing. AACC Press, Washington, 1997: 75-97. 9. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin. Chem. 1981; 27: 493-501. 10. GOLD ANALISA: Informe Tcnico do Produto. APRESENTAO
Cat. 460 460E Embalagem Normal Especial Reagentes Padro Reagente de Cor Padro Reagente de Cor Volume 1 x 5 mL 2 x 100 mL 1 x 5 mL 1 x 500 mL

2- Crianas e adolescentes
Colesterol Total Valor desejvel: < 170 mg/dL Valor limtrofe: 170 a 199 mg/dL Valor elevado: 200 mg/dL Colesterol HDL Valor desejvel: > 40 mg/dL Valor baixo: < 35 mg/dL ________

AUTOMAO Este kit pode ser utilizado na maioria dos analisadores automticos. O consumidor poder solicitar mais informaes atravs do Setor de Apoio ao Cliente (SAC) ou acessando o site www.goldanalisa.com.br A calibrao com o Padro aquoso pode causar desvios em alguns analisadores. Nestes casos, recomenda-se calibrar com calibrador protico - Calibrador - Cat. 410 - Gold Analisa. CONTROLE DA QUALIDADE O laboratrio clnico deve manter um Programa de Garantia da Qualidade para assegurar que todos os procedimentos laboratoriais sejam realizados de acordo com as Boas Prticas de Laboratrios Clnicos. Para controle e verificao do desempenho do kit usar Soro Controle N e Soro Controle P da Gold Analisa. importante que cada laboratrio estabelea os seus prprios valores mdios e os respectivos limites de variao. CARACTERSTICAS DO DESEMPENHO Linearidade A reao linear at 500 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com soluo de NaCl 150 mmol/L (0,85%) e realizar uma nova determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio empregado. Repetitividade A impreciso intra-ensaio foi calculada com 20 determinaes sucessivas de colesterol utilizando duas amostras de soro com concentraes diferentes. As mdias dos coeficientes de variao obtidas foram de 1,1 e 0,9%.
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TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO Lei n 8.078 de 11-9-90 - Cdigo de Defesa do Consumidor A Gold Analisa garante a substituio, sem nus para o consumidor, de todos os produtos que comprovadamente apresentarem problemas tcnicos, desde que o usurio utilize equipamentos e materiais em boas condies tcnicas, siga rigorosamente o procedimento tcnico e as recomendaes estabelecidas nas Instrues de Uso. N do lote e data de validade: Vide Rtulos do Produto Gold Analisa Diagnstica Ltda - CNPJ: 03.142.794/0001-16 AF MS N 800222-3 - Reg. MS - N 80022230064 Farm. Resp. Ludmilla Parreiras Campos- CRF- MG -25481 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 - Carlos Prates - Fone: (31) 3272-1888 Belo Horizonte MG Brasil CEP: 30710-020 Home page: www.goldanalisa.com.br E-mail: goldanalisa@goldanalisa.com.br Setor de Apoio ao Cliente (SAC): 0800 703 1888 Analisa marca registrada da Gold Analisa Diagnstica Ltda Edio: 08/12