RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE SLIDOS

Teresa Blasco Lanzuela Instituto de Tecnologa Qumica (UPV-CSIC) Avda. de los Naranjos s/n, 46022-Valencia

1. Introduccin En los primeros aos desde su descubrimiento en 1946, la RMN es utilizada por los fsicos para medir momentos magnticos, hasta que el hallazgo de los desplazamientos qumicos en los aos cincuenta la convirti en una herramienta muy poderosa para el estudio de la estructura molecular. Durante los aos sesenta, coincidiendo con la comercializacin de equipos con imanes superconductores y de transformada de Fourier al final de la dcada, la RMN se convirti en una tcnica fundamental para el estudio de muestras lquidas y disoluciones en los laboratorios de qumica orgnica. Sin embargo, su xito no fue completo, ya que las sustancias slidas tenan que disolverse o fundirse previamente para poder acceder a la informacin qumica. Un espectro de RMN convencional de un lquido o una disolucin est formado por seales muy estrechas y bien resueltas que contienen informacin molecular. Sin embargo, un experimento similar con un slido produce seales muy anchas, que pueden llegar a ser de varios kHz o incluso MHz, lo que impide la obtencin de informacin de manera fcil. Este ensanchamiento implica, adems, una prdida de sensibilidad, especialmente cuando se estudian ncleos poco abundantes como, por ejemplo, el 13C (1.1 %). La diferencia en la forma de lnea de slidos y lquidos proviene de la diferente movilidad de las molculas. En estado lquido o en disolucin, las molculas se reorientan muy rpidamente promediando las interacciones anistropas, que estn presentes en muestras slidas. De este modo, la obtencin de espectros de alta resolucin de slidos exige la aplicacin de tcnicas especiales.

288

Teresa Blasco Lanzuela

La idea de Andrew (1958) y Lowe (1959) para suplir la insuficiencia de movimiento molecular en slidos fue la rotacin macroscpica de la muestra. Estos autores mostraron que si una muestra slida se gira suficientemente rpido alrededor de un eje que forma un ngulo de 54.7 con la direccin principal del campo magntico externo, denominado ngulo mgico, el ensanchamiento dipolar se promedia y se pueden obtener espectros de alta resolucin. A lo largo de este captulo nos referiremos en ocasiones al giro al ngulo mgico como MAS, del ingls magic angle spinning. Los requerimientos tcnicos para girar la muestra a una frecuencia de varios kHz eran desalentadores para la poca, pero alrededor del ao 1970 los problemas esenciales, tanto experimentales como tericos, del MAS estaban resueltos. A pesar de ello, esta tcnica no ganaba popularidad y algunos cientficos, decepcionados, desarrollaron mtodos alternativos de estrechamiento de lneas actuando sobre la secuencia de pulsos, lo que no precisaba del giro de la muestra. Sin embargo, estos mtodos resultaron ser complicados y de difcil aplicacin para los qumicos, mostrndose posteriormente la aplicabilidad del MAS a la solucin de problemas qumicos. En 1975 Schaefer y Stejskal combinaron el MAS con un mtodo de transferencia de magnetizacin conocido como polarizacin cruzada (CP del ingls cross polarization), que daba solucin a un gran nmero de problemas, permitiendo la obtencin de espectros de 13C de alta resolucin con su abundancia natural en muestras slidas, aprovechando la polarizacin del protn. El CP/MAS pronto gan reconocimiento entre los qumicos y se convirti en un mtodo de rutina para slidos orgnicos e inorgnicos. Durante los aos ochenta, despus de 13C, el 29Si (4.7 % abundancia natural, I = 1/2) fue el siguiente ncleo estudiado extensivamente por alta resolucin en slidos. Durante estos aos se utiliz la RMN de slidos para investigar una gran variedad de ncleos. Para eliminar interacciones de segundo orden en ncleos cuadrupolares, como el 27Al, el 23Na y muchos otros ncleos, se desarrollaron procedimientos como la doble rotacin o el giro a ngulo dinmico. Desde hace unos pocos aos la alta resolucin de slidos est ganando popularidad, incorporndose a laboratorios de qumica orgnica y farmacutica. Aproximadamente el 8090 % de los medicamentos son slidos, algunos de los cuales pueden presentar ms de un polimorfo y/o pseudo polimorfo que, en ocasiones, poseen propiedades fisicoqumicas muy diferentes, haciendo imperativa su identificacin mediante el uso de tcnicas analticas de slidos. Por el mismo motivo, es muy aconsejable el estudio del medicamento con los excipientes en su forma final, ya que stos pueden modificar las propiedades de la fase activa. Recientemente, documentos relativos al control de medicamentos recomiendan especficamente la utilizacin de la RMN de slidos para el control de los mismos en el proceso de fabricacin. La disponibilidad de ordenadores ms potentes, la mejora en la electrnica de equipos y de sondas y la construccin de imanes con campos ms alto han impulsado enormemente el desarrollo de nuevos experimentos de la RMN de slidos en los ltimos diez aos. En este perodo se han desarrollado tcnicas, normalmente utilizando mtodos bidimensionales, que permiten reintroducir de manera selectiva la interaccin anistropa deseada. El objetivo es no renunciar a la informacin contenida en las interacciones anistropas que producen el ensanchamiento de las seales en slidos, manteniendo una alta resolucin espectral. Recientemente se estn aplicando nuevas metodologas de RMN de slidos a muestras de biopolmeros. Esta nueva metodologa permite el estudio estructural de protenas y otras biomolculas que son insolubles y no forman cristales de buena calidad, o que sufren procesos de agregacin o disgregacin en disolucin.

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

289

En este captulo vamos a revisar brevemente las fuentes de ensanchamiento de lnea en los espectros de RMN de slidos, y las tcnicas ms generales para eliminarla o disminuirla, que con frecuencia son suficientes para la mayora de aplicaciones. Las interacciones anistropas que producen los ensanchamientos de lnea en slidos son: acoplamiento dipolar, anisotropa de desplazamiento qumico e interacciones cuadrupolares. 2. Acoplamiento dipolar heteronuclear Los acoplamientos dipolares heteronucleares estn provocados por las interacciones directas entre los momentos magnticos asociados a dos ncleos diferentes, I y S, en el slido. Por convencin los espines nucleares I hacen referencia a los ms abundantes y los S a los de menor abundancia natural. En el caso ms general, consideraremos el 1H ncleo I=1/2, y como S =1/2 el 13C o el 15N. En presencia de un campo magntico externo B0 los spines estarn alineados paralela (mI = + ) o antiparalelamente (mI = - ) al campo externo. Los ncleos I y S poseen un momento magntico nuclear que produce un campo magntico local, pequeo comparado con B0, sobre los otros espines que se encuentran en su entorno prximo. El campo magntico producido por los espines I se aadirn o se restarn al campo B0 sentido por el spn S, dependiendo de su orientacin, modificando as su frecuencia de resonancia. El grado que el espn I modifica el campo experimentado por el spn S, va a estar determinado por la magnitud del acoplamiento dipolar heteronuclear, que viene representado por el Hamitoniano de la ecuacin [1]:
H IS = d (3 cos 2 1) I Z S S

[1]

siendo IZ y SZ la componentes en el eje z de los operadores del momento angular de spn nuclear I y S, respectivamente; y d la constante de acoplamiento dipolar (en rad s-1) que describe la ecuacin [2]:

h d = 0 I 3S 4 2rIS

[2]

donde rIS es la distancia internuclear, 0 = permeabilidad en el espacio libre, y I y S las constante giromagnticas de los spines I y S, respectivamente. El ngulo describe la orientacin del vector internuclear rIS respecto a la direccin del campo magntico externo. Puesto que la magnitud del acoplamiento dipolar entre dos spines nucleares depende de la distancia internuclear, sta es una interaccin a travs del espacio y no precisa del enlace qumico. Por ello, a diferencia del acoplamiento J que requiere la presencia de enlaces qumicos, se puede producir entre ncleos de molculas diferentes. El anlisis del Hamiltoniano que describe el acoplamiento permite deducir las siguientes propiedades: i) El acoplamiento dipolar es independiente de B0.

290

Teresa Blasco Lanzuela

ii) iii) iv)

La magnitud del acoplamiento es directamente proporcional a las constantes giromagnticas; el ncleo de mayor momento magntico induce campos magnticos ms fuertes, y por lo tanto un mayor acoplamiento dipolar. El acoplamiento dipolar es proporcional a rIS-3, y por lo tanto disminuyen rpidamente con la distancia internuclear. La magnitud del acoplamiento dipolar depende de la orientacin del vector internuclear con respecto al campo magntico externo B0: es mximo para = 0 y desaparece para = 54 44, que es el ngulo mgico

La dependencia angular del acoplamiento dipolar confiere un carcter diferente a los slidos y los lquidos. Las molculas en disolucin se reorientan rpidamente y promedian el trmino (3cos2-1) a 0. Una muestra slida, aunque contiene muchos cristales orientados al azar, el vector internuclear no vara con el tiempo, y la frecuencia de resonancia de cada uno de los cristales depende de su orientacin con respecto al campo magntico externo. Supongamos un cristal con pares de ncleos aislados, es decir distantes unos de otros. Cada uno de estos dos espines crea, a nivel de su vecino, un campo local que modifica su frecuencia de resonancia en ausencia de interacciones dipolares 0, apareciendo dos componentes a: 0 d = 0 d (3 cos2 -1) dependiendo de que la orientacin relativa de los espines sea paralela o antiparalela a B0 (el trmino IzSz da energas negativas y positivas respectivamente). En una muestra policristalina, donde estn presentes todas las orientaciones posibles con respecto a B0, se obtiene un espectro como el que se muestra en la Figura 1. Las dos componentes complementarias forman lo que se denomina el doblete de Pake, y proceden de la diferencia de energa dependiendo de que la orientacin relativa de los spines I y S sea paralela o antiparalela. La intensidad de la seal a una frecuencia especfica refleja la abundancia de los cristales que tienen una orientacin dada con respecto a B0. Por ejemplo, los picos singulares en el doblete de Pake corresponden a cristalitos para los que el vector internuclear I-S es perpendicular a B0. Los dos extremos menos intensos corresponden a los relativamente pocos cristales cuyo vector internuclear apunta hacia los polos (paralelo al campo externo). Hay tambin una orientacin a la que la frecuencia de resonancia de los cristales no se altera por el acoplamiento heteronuclear, es el ngulo mgico = 54.7, para el que (3 cos2 -1) = 0.
=90 d =54.7 =0

d/2

d/2

Figura 1: Doblete de Pake para dos spines con acoplamiento dipolar en una muestra en polvo

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

291

2.1 Desacoplamiento dipolar heteronuclear

Las fuentes de ensanchamiento dominantes en los espectros de 13C (abundancia natural del 1.1 %,) de molculas orgnicas slidas son los acoplamientos dipolares con los 1H que estn en sus proximidades, y que presentan una abundancia natural del 100 %. Una constante de acoplamiento dipolar tpica para un par 1H-13C enlazado a una distancia de aproximadamente 1 es de unos 30 kHz. El desacoplamiento de spn con onda continua se utiliza muy frecuentemente para eliminar acoplamientos heteronucleares en espectroscopia de RMN de slidos, especialmente en los espectros de 13C. El procedimiento consiste en irradiar continuamente a la frecuencia del protn durante la adquisicin de la FID del 13C. Aplicando continuamente pulsos de radio frecuencia se produce la rotacin del spn nuclear del protn entre sus estados spn up y spn down, la orientacin promedio de los momentos magnticos del protn tienden a cero, y el acoplamiento dipolar se promedia a cero (lo mismo ocurre para el acoplamiento J).
3. Acoplamiento dipolar homonuclear

El acoplamiento dipolar homonuclear es el resultado de la interaccin entre campos magnticos producidos por spines nucleares similares vecinos. A diferencia que en el acoplamiento heteronuclear, en este caso dos spines similares son capaces de experimentar transiciones flip-flop sin cambios de energa; un spn se orienta hacia arriba e induce que el acoplado se oriente hacia abajo. Para considerar estas interacciones se incluye un trmino extra en el Hamiltoniano, que adquiere la siguiente forma:
+ H IS = d (3 cos 2 1)3I1Z I 2 Z (I1 I 2 )) = 1 2 d (3 cos 2 1)(2 I1Z I 2 Z 1 2 ( I1+ I 2 + I1 I 2 ))

[3]

+ De esta manera, I1+ I 2 y I1 I 2 dan lugar a un intercambio de momento angular de spn entre dos spines acoplados cualesquiera cuyas frecuencias de resonancia solapan, conservndose la energa del sistema. Cuando dos spines semejantes tienen desplazamiento qumicos muy diferentes, de manera que no hay solapamiento entre sus frecuencias de resonancia, ya no se pueden producir transiciones con conservacin de la energa, y el Hamiltoniano adopta la forma del heteronuclear.

Tal vez, el mayor impacto de las interacciones dipolares homonucleares se produzca en la RMN de 1H, ya que la intensidad del acoplamiento dipolar homonuclear entre dos protones puede alcanzar los 100 kHz debido a su elevada relacin giromagntica. Esto unido a la alta abundancia de protones en la mayora de sistemas orgnicos, resulta en una red de protones fuertemente acoplados, muy difciles de desacoplar. Como resultado, los espectros de RMN de protn tpicos consisten en una nica seal con una anchura de lnea de 50 kHz. Aunque MAS ayuda a reducir la anchura de lnea, es difcil obtener seales con alta resolucin, incluso a las velocidades de giro actuales (30 kHz).
4. Anisotropa de desplazamiento qumico

La anisotropa de desplazamiento qumico, a la que tambin nombraremos como CSA del ingls chemical shift anisotropy, proviene de la interaccin del campo magntico externo B0 con los electrones que rodean el ncleo, que tambin poseen momento magntico.

292

Teresa Blasco Lanzuela

Los campos magnticos secundarios dbiles que se generan se suman o restan a B0, modificando el campo magntico que siente el ncleo, y por lo tanto su frecuencia de resonancia. Esto es lo que se denomina apantallamiento, que da lugar al desplazamiento qumico. La dependencia del desplazamiento qumico o anisotropa con la orientacin respecto al campo B0 puede ser muy acusada. La CSA resulta del hecho de que los tomos en las molculas raramente poseen una distribucin de electrones con simetra esfrica; en su lugar, la densidad electrnica tiene ms bien forma de elipsoide. El grado en el que la densidad de electrones afecta la frecuencia de resonancia de un ncleo depende de la orientacin de la nube de electrones (y por lo tanto de la molcula) con respecto a B0. De esta manera, el apantallamiento asociado con un ncleo ya no puede ser descrito por un nmero, sino que se precisa un tensor de segundo rango representado por una matriz 3 x 3. Es posible definir con respecto a un sistema de ejes, denominado el sistema principal de ejes, elegido de manera que el tensor sea diagonal. Los nmeros que se encuentran en la diagonal son los valores principales del tensor apantallamiento, xxP, yyP, zzP, de manera que xxP, por ejemplo, es el valor principal asociado con el eje x del sistema principal de ejes. Por ejemplo, el tensor apantallamiento de un ncleo en un sitio de simetra axial posee un sistema de ejes principales cuyo eje z coincide con el eje de simetra, y los valores principales son tales que: xxP = yyP zzP. Expresndolo en forma de desplazamiento qumico, que es el parmetro que medimos en el espectro: xxP = yyP zzP Los tres valores principales del tensor desplazamiento qumico se expresan frecuentemente en funcin del iso, la anisotropa aniso , y el parmetro de asimetra :
P P P + yy + zz ) iso = ( xx

aniso =

1 3 P = zz iso

[4]

P P xx yy P zz

El Hamiltoniano que describe la interaccin de apantallamiento es:

lab H CS = I z zz B0

[5]

Donde z es el eje z del sistema de ejes del laboratorio. Hay que destacar que slo es necesaria la componente zz del tensor de apantallamiento. La interaccin de apantallamiento no genera campos oscilatorios perpendiculares a B0, que podran afectar el sistema de espines. Por lo tanto esta interaccin es heterognea; es independiente del tiempo. La cuestin es generar el tensor de apantallamiento en el sistema de ejes de laboratorio a partir del sistema de ejes principales. Para ello hay que reescribir zzlab en funcin de los valores principales del tensor apantallamiento y la orientacin del sistema de ejes principales con respecto a los del laboratorio. como: El tensor apantallamiento se define en funcin del apantallamiento istropo, aniso y

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

293

= iso + CS {3 cos 2 1 + CS sen 2 cos 2 }

1 2

[6]

siendo y los ngulos polares que definen la orientacin del sistema de ejes principales con respecto a B0; siendo es el ngulo formado por el eje z del sistema principal de ejes y B0. Hay que hacer notar que la traza del tensor de anisotropa es invariante respecto a la rotacin del sistema de ejes principales. Suponiendo un tensor de apantallamiento con simetra axial, donde xx = yy zz, entonces =0 y la expresin se simplifica,

( ) = iso + (3 cos 2 1)

1 2

[7]

En una muestra en polvo, estn presentes todas las orientaciones moleculares. Recordemos que el sistema de ejes principales de apantallamiento est fijo en la molcula, lo que quiere decir que en una muestra el polvo todos los valores de los ngulo (y en una simetra no axial) son posibles. Cada orientacin molecular diferente implica una orientacin diferente de los ejes principales con respecto a B0, y por lo tanto segn la ecuacin [6], diferentes desplazamientos. Las lneas producidas por las diferentes orientaciones solapan y forman una lnea continua produciendo un espectro cubriendo un rango de frecuencias ancho, caracterstico de muestras en polvo (Figura 2A). La intensidad resultante a cualquier frecuencia dada en el diagrama en polvo es proporcional al nmero de orientaciones moleculares que dan ese desplazamiento qumico. Esto significa que la forma de lnea de muestras en polvo es muy distinta, dependiendo de la simetra del tensor de apantallamiento, que adems depende de la simetra del sitio donde se encuentra el ncleo. A aniso < 0 // 22 11 =0 // aniso > 0
6 KHz 3 KHz

33 0 < < 1 =1

2 KHz 1 KHz esttico

Figura 2: Efecto de la anisotropa del desplazamiento qumico en la forma de los espectros de RMN de muestras en polvo: A) en esttico, y B) girando al ngulo mgico a distintas velocidades.

Las discontinuidades en la seal dan los valores principales del tensor apantallamiento, que por lo tanto, se pueden leer directamente del espectro. La frecuencia istropa iso se encuentra en el centro de masas del espectro a 1/3 de camino entre y // en este caso

294

Teresa Blasco Lanzuela

(Figura 2A). La forma de la seal en este caso presenta una intensidad mucho mayor a que en //. Cuando una molcula se mueve rpidamente adopta todas las orientaciones posibles, lo que hace que el trmino que describe la dependencia con la orientacin se promedie a cero, dejando slo la componente istropa del desplazamiento qumico isoB0Iz, que es la que se observa para muestras lquidas. En los slidos no es posible mecnicamente simular una orientacin al azar, ya que implicara el movimiento en torno a diferentes ejes a velocidades altas. Sin embargo, tambin es posible eliminar el trmino anistropo del Hamiltoniano del desplazamiento qumico girando la muestra alrededor que un eje elegido convenientemente.
5. Giro al ngulo mgico

El giro al ngulo mgico, o MAS, se utiliza rutinariamente en la mayora de los experimentos de RMN de estado slido. El objetivo fundamental es eliminar la anisotropa del desplazamiento qumico, y ayudar en la anulacin de las interacciones dipolares heteronucleares. Adems, tambin se utiliza para estrechar las lneas de ncleos cuadrupolares y disminuir los efectos del acoplamiento dipolar homonuclear. Como hemos visto en las secciones anteriores, cuando el vector internuclear forma un ngulo =54.74, el ngulo mgico, con el campo esttico, el trmino (3cos2-1)=0 y las interacciones dipolares heteronucleares se anulan. Asimismo, tambin se anulan la anisotropa de desplazamiento qumico cuando el eje principal z de la molcula forma el ngulo mgico con el campo esttico B0. Si rotamos la muestra en torno a un eje inclinado a un ngulo R con respecto al campo aplicado, el ngulo que describe la orientacin del tensor interaccin fijo en una molcula de la muestra vara con el tiempo. En estas circunstancias el trmino (3cos2-1) promedio es:
3 cos 2 1 = 1 (3 cos 2 R 1)(3 cos 2 1) 2

[8]

donde es el ngulo formado entre el eje principal z del tensor apantallamiento y el eje de giro, R el formado entre el eje de giro y B0 y, y es el ngulo entre el eje principal z del tensor interaccin y B0. En una muestra slida en polvo es fijo para un ncleo dado, R est bajo el control del experimentador, y puede adoptar todos los posibles valores. Si R=54.74, entonces <3cos2R-1>=0, as como <3cos2-1>=0. Rotando una muestra policristalina rpidamente se hace que el eje principal del elipsoide que representa la CSA se alinee con el eje de rotacin; el efecto es eliminar la anisotropa. As pues, si la velocidad de rotacin es suficientemente rpida comparada con la anisotropa de la interaccin, sta se promedia a cero. Cuando una muestra gira, la orientacin de los cristales vara, y por lo tanto los valores del CSA de todos los cristalitos se hacen dependientes del tiempo. Para que el giro al ngulo mgico reduzca un espectro de una muestra en polvo a una nica lnea al desplazamiento qumico istropo, la velocidad de giro de la muestra debe ser rpida comparada con la interaccin anistropa; un factor de alrededor 3 o 4. Cuando la velocidad de giro es menor, el espectro contiene unas lneas finas que aparecen a nmeros

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

295

enteros de la velocidad de rotacin con respecto a la seal istropa, y que se denominan bandas de rotacin (Figura 2B). La lnea istropa no es necesariamente la ms intensa, pero se puede identificar porque es la nica que no modifica su posicin cuando se vara la velocidad de giro de la muestra. Las bandas de rotacin siempre aparecen en fase en un slido perfecto, pero pueden aparecer tambin en antifase cuando existe orientacin preferente de los cristales en la muestra. Hay que destacar que la anisotropa de desplazamiento qumico en unidades de frecuencia es proporcional a B0, y por lo tanto, al trabajar a campos mayores, se hace ms difcil eliminar esta anisotropa (se requieren mayores velocidades de giro). A partir de las ecuaciones que describen el acoplamiento dipolar homonuclear, se desprende que esta interaccin tambin depende del factor geomtrico (3cos2-1), y por los tanto se anula con la rotacin de la muestra al ngulo mgico, si la velocidad es rpida comparada con la anchura de lnea producida por el acoplamiento dipolar homonuclear. Actualmente, existen sondas comerciales que permite alcanzar velocidades de 30 kHz, y es posible girar la muestra hasta 50 kHz. Estas velocidades son suficientemente rpidas para producir espectros de alta resolucin de 1H en muchos slidos orgnicos cuyo ensanchamiento de lnea por acoplamiento dipolar homonuclear, normalmente del orden de 20-50 kHz. A velocidades de rotacin mucho menores que la anchura dipolar homonuclear, el giro al ngulo mgico tiene muy poco efecto en el espectro de RMN, y la seal ancha que se observara en ausencia de giro al ngulo mgico se altera muy poco. A velocidades de giro intermedias (entre la cuarta parte y la mitad de la anchura de lnea dipolar), aparecen lneas de rotacin, pero presentan un carcter muy diferente a las que aparecen debido a la eliminacin incompleta de la anisotropa de desplazamiento qumico o las interacciones dipolares heteronucleares; las primeras son anchas y las segundas estrechas. En el caso de acoplamiento dipolar homonuclear el estado del sistema de spines cambia en la escala de tiempo de rotacin de la muestra, lo que impide que se promedie completamente la interaccin dipolar en el sistema de spines
6. Polarizacin cruzada

La deteccin directa de ncleos diluidos como el 13C, el 29Si o el 15N conduce normalmente a una baja polarizacin de spn por su escasa abundancia isotpica y su baja , y por lo tanto, a una relacin seal/ruido baja. Adems, los tiempos de relajacin son largos debido a la ausencia de interacciones dipolares homonucleares asociados a ncleos poco abundantes. Para aumentar la intensidad de la seal de ncleos escasos como el 13C y el 15N, muchos experimentos de RMN de estado slido incluyen la transferencia de polarizacin de ncleos abundantes (normalmente 1H) utilizando una tcnica que se denomina polarizacin cruzada (PC), normalmente combinada con el MAS (CP/MAS). La tcnica CP se basa en la tendencia de la magnetizacin para fluir de ncleos muy polarizados a ncleos menos polarizados cuando los dos se ponen en contacto. En el caso de ncleos diferentes se requiere la aplicacin de dos campos de radiofrecuencia (RF), uno sintonizado para los spines I, y el otro para los spines S. El experimento de polarizacin cruzada se describe en la Figura 3. Primero, la magnetizacin del protn se sita en el eje -y mediante la aplicacin de un pulso de 90. A continuacin se aplica un pulso en el eje y, que se denomina de spn lock B1(I), para mantener la magnetizacin del protn en este eje durante lo que se denomina el tiempo de contacto. Simultneamente se aplica otro campo de

296

Teresa Blasco Lanzuela

radiofrecuencia a los spines S durante ese mismo tiempo de contacto. Las amplitudes de los dos pulsos se tienen que ajustar cuidadosamente para que se cumpla la condicin de Hartmann-Hahn.

I B1I = S B1S

[9]

siendo I y S las constantes giromagnticas, y B1I y B1S los campos de radiofrecuencia. En estas condiciones, cuando las frecuencias de nutacin de los dos ncleos en sus respectivos sistemas de ejes rotatorios se igualan, se produce el contacto dipolar y el intercambio de magnetizacin con conservacin de la energa entre los dos sistemas de spines. Finalmente, se detectan los spines S, mientras se desacoplan los I.
S (13C) d1 -y I (1H) t90 x taq
tiempo de contacto

-y

-y

Figura 3: Secuencia de pulsos de polarizacin cruzada.

El aumento de la magnetizacin de los spines S en el tiempo de contacto depende de la intensidad de las interacciones dipolares I-S; la mxima transferencia de magnetizacin se alcanzar a tiempos de contacto corto para 13C que estn ligados directamente a protones. Los tiempos de contacto tpicos varan entre 100 y 10000 s. La curva de polarizacin cruzada (variacin de la intensidad de la seal con el tiempo de contacto), comienza a disminuir a partir de un cierto tiempo de contacto debido a fenmenos de relajacin y de transporte de la magnetizacin. El mximo de transferencia de polarizacin para un tiempo de contacto determinado se produce cuando se cumple la condicin de Hartmann-Hahn En la mayora de los experimentos de RMN los tiempos de adquisicin o los tiempos de medida estn determinados por el tiempo de relajacin T1 del ncleo que se detecta. En las condiciones de polarizacin cruzada, el tiempo entre dos adquisiciones consecutivas depende del tiempo de relajacin del ncleo que transfiere la magnetizacin. Como los protones en estado slido relajan ms rpidamente que la mayora de otros ncleos con spn , en un perodo de tiempo dado se pueden adquirir muchos ms barridos, que en un experimento de un pulso que detecta el ncleo S. Como contrapartida, en este experimento ya no existe una relacin directa entre la intensidad de la seal y la abundancia de las correspondientes en la muestra debido a los diferentes parmetros involucrados en el experimento. Las intensidades de las seales no son directamente proporcionales a la poblacin de especies en la muestra. Como la polarizacin cruzada est basada en interacciones heteronucleares, es sensible a las distancias internucleares y la movilidad de las molculas o grupos funcionales involucrados. Esto quiere decir que el experimento de polarizacin cruzada se puede utilizar tambin para establecer conectividades entre ncleos acoplados, y monitorizar la dinmica

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

297

molecular en slidos. La secuencia de polarizacin cruzada se puede aplicar a una muestra para obtener informacin acerca de la proximidad relativa de los spines S e I en una muestra slido. En general, cuanto ms prximos estn los ncleos I y S, mayores sern los acoplamientos dipolares, y ms eficaz la transferencia de polarizacin entre ellos, y antes (tiempos de contacto ms cortos) se alcanzar el mximo en la CP. 7. Ncleos cuadrupolares La mayora de los ncleos activos en el sistema peridico poseen un spn nuclear semientero I>1/2, es decir I = 3/2, 5/2, 7/2 y 9/2, que como los ncleos con spn I =1/2, interaccionan con el campo magntico externo y con los campos locales generados por el apantallamiento qumico y el momento magntico de otros ncleos. Pero, adems, los ncleos con I>1/2 se caracterizan porque poseen una forma no esfrica asociada con un momento cuadrupolar nuclear, que interacciona con los gradientes de campo elctricos (EFG del ingls electric field gradient) originados por distribucin asimtrica de las cargas que los rodean. La figura 4 muestra la distribucin de niveles de energa para un spn nuclear I=3/2. Para los ncleos cuadrupolares, los valores permitidos del nmero de spn nuclear mI ya no son nicamente +1/2 y +1/2; en general tendrn (2I+1) estados de spn, correspondientes a los nmeros cunticos mI= +I....-I, y por la regla de transicin mI = 1, 2I transiciones. Cuando el ncleo se encuentra en un entorno de coordinacin muy simtrico (centro simtrico), no existe acoplamiento cuadrupolar, los niveles de energa estn equidistantes y observaramos una nica transicin.

-3/2

0
-1/2

0+1/2 Q(1)

0+1/2 Q(1) +3/4 Q(2)

0
+1/2

0 0-1/2 Q(1)
Primer orden

0+

-2/3 Q(2)

0
+3/2 Zeeman

0-1/2 Q(1) +3/4 Q(2)

Segundo orden

Figura 4: Efecto de los acoplamientos cuadrupolares de primer y segundo orden para un spn nuclear I=3/2

En la mayora de los casos, los acoplamientos cuadrupolares se pueden tratar como perturbaciones menores de la interaccin Zeeman. Debido a la magnitud del acoplamiento cuadrupolar, no son suficientes las perturbaciones de primer orden, y hay que incorporar interacciones cuadrupolares de segundo orden (ver figura 4). La frecuencia de las transiciones depende de la frecuencia de acoplamiento cuadrupolar Q (rad s-1), que se expresa en funcin de la constante de acoplamiento cuadrupolar CQ (en Hz) (o QCC del ingls quadrupole coupling constant), y del parmetro de asimetra :

298

Teresa Blasco Lanzuela

CQ =

e 2 qQ h

Vxx Vyy Vzz

[10]

Q = 2

3CQ 3e 2 qQ = 2 2 I (2 I 1) 2 I (2 I 1)h

[11]

donde Vxx, Vyy y Vzz son las componentes del gradiente de campo elctrico, eq es la componente z del gradiente eq=Vzz, y Q es el momento cuadrupolar nuclear, que es una propiedad del ncleo (como ) que describe la fuerza con la que un ncleo cuadrupolar se acopla a un gradiente de campo elctrico en el ncleo. Las correcciones cuadrupolares de primer orden a los niveles de Energa Zeeman vienen dadas por la siguiente expresin:
E
(1) m

= m 0 + E

(1) m

(1) m

(1) Q ( , )

(m

2 I

I ( I + 1) / 3

[12]

que es funcin de Q(1):

(1) Q =

[(3 cos 1) sen cos 2 ] 2

2 2

[13]

que depende de los ngulos y , que son las coordenadas polares que definen la orientacin del campo magntico externo B0 con el sistema de ejes principales de la estructura qumica que contiene el ncleo. Las interacciones cuadrupolares de primer orden desplazan mI=+1/2 y mI=1/2 en la misma cantidad y en la misma direccin, de manera que la frecuencia de resonancia de la transicin central +1/2-1/2 no se ve modificada. Por el contrario, la frecuencia de resonancia de las transiciones satlites +3/2+1/2 y -1/2-3/2 se desplazan en una cantidad proporcional a Q(1), como se puede observar en la figura 4, y se ensanchan. Las interacciones cuadrupolares de primer orden se promedian girando la muestra al ngulo mgico, y las resonancias anchas de las transiciones satlites provocan la aparicin de bandas de rotacin. En estas condiciones se puede extraer QCC y a partir de la simulacin del espectro. Normalmente, las interacciones cuadrupolares de primer orden no son suficientes para describir el espectro y hay que introducir correcciones cuadrupolares de segundo orden, Q(2) para calcular los niveles de energa. El clculo de la forma de lnea de muestras en polvo en esttico (ver Figura 5) conduce a expresiones que define la frecuencia cuadrupolar de segundo orden. Por ejemplo, para la transicin central de un ncleo I =3/2, con =0 (simetra axial) adquiere la forma:

(2) Q

2 Q = ( I ( I + 1) 3 / 4)(1 cos 2 )(9 cos 2 1) 16 0

[14]

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

299

En estas expresiones hay que destacar que Q(2) es inversamente proporcional a la frecuencia de Larmor, lo que indica que la frecuencia cuadrupolar de segundo orden disminuye al aumentar el campo magntico externo B0, lo que motiva la utilizacin de campos alto para el estudio de ncleos cuadrupolares. Otra caracterstica importante que se deriva de la expresin [14] es que tiene una dependencia con los ngulos ms complicada que las interacciones cuadrupolares de primer orden, por lo que no se pueden eliminar girando al ngulo mgico (Figura 5).
esttico MAS

=1.0

=0.5

=0.0 6 4 2 0 -2 -4 -6 3 2 1 0 -1 -2 -3

Figura 5: Forma de la transicin central de un ncleo cuadrupolar I>1/2: izquierda: en esttico, derecha: girando al ngulo mgico. (QCC=4 kHz).

La frecuencia de transicin Q(2) cuando se gira la muestra a un ngulo con respecto al campo magntico, en funcin de los polinomios de Legendre de rango 0, 2 y 4 Pn(cos ): P0(cos ) =1 P2(cos ) =(3 cos2-1) P4(cos ) =(35cos4-30 cos2+3) [15]

viene dado por la expresin general:

2 Q (1 + 2 3) l Cm , I Bl ( , ) P l (cos ) 30 0 l =0 , 2 , 4

m ,m1 = 0 +

[16]

2 4 2 i ,m 2 4 <mm-1>=0+ Qiso + Cm , I B2 ( , ) (3 cos -1)+ C m , I B4 ( , ) (35cos -30 cos +3)

[17]

que dependen de Q, 0, , y la orientacin relativa del tensor cuadrupolar y el eje del rotor (, ). El polinomio de Legendre de rango 0 es 1, y el trmino correspondiente es lo que se denomina el desplazamiento istropo, que para la transicin central est dado por:

Qiso =

2 Q (1 + 2 3) ( I ( I + 1) 3 / 4 30 0

[18]

Cuando la muestra gira al ngulo mgico, P2(cos )=0 y P4(cos )=-7/18. Por lo tanto, MAS slo reduce las anchuras de lnea de las resonancias obtenida para las muestras en polvo

300

Teresa Blasco Lanzuela

todava est presente ensanchamiento de lnea proveniente de los acoplamientos cuadrupolares de segundo orden (Figura 5). Las transiciones centrales presentan formas de lneas caractersticas de las cuales se puede extraer QCC y . Se observa adems, un desplazamiento del centro de gravedad de la seal a frecuencias menores, que es lo que se denomina desplazamiento istropo de segundo orden Qiso, que no depende de la frecuencia de rotacin de la muestra. Como Qisodepende de la frecuencia de Larmor, algunas veces es necesario adquirir el espectro a varios campos magnticos para poder separar el desplazamiento qumico istropo iso y Qiso. El ensanchamiento cuadrupolar de segundo orden llega a ser tan grande en ocasiones que la transicin central ya no se observan; a estos spines se les denomina invisibles.
7.1 Eliminacin del ensanchamiento cuadrupolar de segundo orden

El MAS puede eliminar completamente el CSA y las interacciones dipolares, pero hay muy poco de mgico en su eleccin como ngulo de giro cuando se trata de efectos cuadrupolares de segundo orden. Por ello se han desarrollado varias tcnicas para reducir o eliminar el ensanchamiento cuadrupolar de segundo orden. Dos de ellas, la rotacin a doble ngulo, DOR (del ingls double angle rotation), y el giro a ngulo mgico, DAS (del ingls dynamic angle spinning) se basan en la anulacin de los polinomios de Legendre de segundo y cuarto orden girando la muestra a dos ngulos diferentes. Aunque tanto DOR como DAS son muy buenas tcnicas para eliminar los acoplamientos cuadrupolares de segundo orden no son sencillas desde el punto de vista tcnico. Un mtodo alternativo es el conocido como multi-cuanto MAS, MQ/MAS, que manipula de manera ingeniosa coherencias de multicuanto con una sonda convencional. Esta tcnica apareci en el ao 1995 y ha supuesto un gran impulso en el estudio de ncleos cuadrupolares por RMN de estado slido. En este mtodo el ngulo del rotor permanece fijo y la magnetizacin evoluciona en dos coherencias diferentes. En lugar de fijar m a y utilizar como grado de libertad, en el MQMAS el ngulo es fijo (el ngulo mgico), y la magnetizacin evoluciona durante los tiempos inicial y final bajo los efectos de dos rdenes de transicin m1 y m2 diferentes. Se eligen las condiciones de manera que se cumpla la condicin: C 2I (m1 )t1 + C 2I (m2 )t 2 = 0 C 4I (m1 )t1 + C 4I (m2 )t 2 = 0 [19]

El ngulo elegido es el ngulo mgico, ya que elimina las interacciones dipolares, la CSA y es segundo orden del polinomio de Legendre, por lo que slo son relevantes las anisotropas de cuarto rango. Debido a las reglas de seleccin m=1, slo se puede observar durante t2 la transicin central, m2=1/2, el single cuanto. La eleccin de m1 estar determinada por I. El signo de m1 que determina el sentido de evolucin durante t1 est bajo control del experimentador mediante ciclos de fases standard. Por lo tanto se puede elegir t1 de manera que se elimine la anisotropa de cuarto rango, obteniendo un eco de alta resolucin a: t 2eco = C 4I (m1 ) t1 C 4I (1/ 2) [20]

Resonancia Magntica Nuclear de slidos

301

para I=3/2, el trmino de cuarto rango se elimina para t1/t2=42/54. La figura 6 describe el experimento MQ/MAS de dos pulsos, que se inicia excitando la transicin 3Q (o MQ en general), y los spines evolucionan durante t1. A continuacin la coherencia 3Q se transfiere a 1Q, y se forma un eco a t2 cuando el trmino de rango cuatro se cancela. Debido a que las anisotropas 3Q y 1Q son proporcionales, la componente istropa aparece a lo largo de la recta t2=(7/9)t1. Normalmente se realiza una transformacin en el espectro, el shearing, de manera que produce unas formas de lnea cuya proyeccin en uno de los ejes espectrales F1 posee slo componentes istropas mientras que las anistropas se mantienen en la dimensin F2 (Figura 6).

1 t1
+3 +2 +1 0 -1 -2 -3

2 = 0 t2, Rx

Figura 6: Experimento MQ/MAS: izquierda, secuencia de dos pulsos; derecha: espectro bidimensional de 27Al del AlPO4-14

7.2 Adquisicin de espectros cuadrupolares

Debido a las propiedades de los ncleos cuadrupolares, hay que tener en cuenta algunas recomendaciones para la adquisicin de espectros con un solo pulso. Se pueden distinguir dos casos extremos para la excitacin con un solo pulso prximo a la frecuencia de Larmor, que dependen de la magnitud relativa de QCC y la potencia del pulso de excitacin 1: 1) si 1 >> Q; para ncleos en centros con simetra cbica o especies mviles, o en el extremo para los lquidos Q=0 se excitan todas las transiciones, la central y las satlites, y el espectro se puede tratar como el de una transicin . La banda central contendr la intensidad del 100% de los spines. La frecuencia de nutacin del sistema de spines es 1. 2) 1 << Q: irradiacin selectiva de la transicin central. El campo efectivo de radio frecuencias es mayor que en el caso de radiacin no selectiva, la frecuencia de nutacin del ncleo es mayor, y la longitud del pulso de radiofrecuencia que produce el mximo de intensidad es ms corto que en el caso de radiacin no selectiva. La frecuencia de nutacin en este caso es (I+1/2) 1. 3) Para valores de 1 intermedios, el grado de excitacin depende de 1 y Q. La excitacin depende de la frecuencia de acoplamiento, y por lo tanto del sitio qumico del ncleo cuadrupolar, pero tambin de la orientacin de la molcula o el cristal. Por

302

Teresa Blasco Lanzuela

lo tanto, en una muestra en polvo, ncleos en sitios qumicos equivalentes pero en diferentes cristales, experimentan diferentes grados de excitacin. Estos dos factores resultan en diagramas en polvo distorsionados y las intensidades ya no son proporcionales al nmero de spines presentes. El problema disminuye al disminuir la duracin del pulso de rf y aumentar su potencia. Normalmente: 11 </6 radianes.
Bibliografa

Solid State NMR Spectroscopy, Principles and Applications, Editado por M. J. Duer, Blackwell Science, 2002. D. D. Laws, H-M L. Bitter, A. Jerschov, Solid State NMR Spectroscopic Methods in Chemistry, Angew, Chem. Int. Ed. 41 (2002) 3096. W. Kolodziejski, J. Klinowski Kinetics of Cross-Polarization in Solid State NMR: A guide for Chemists, Chem. Rev. 102 (2002) 613. C. P. Grey Solid State NMR Spectroscopy of non-integer spin nuclei, C. R. A. Catlow y A. Cheetham Eds., en New Trends in Material Chemistry, Kluwer Academic Publisher, The Netherlands, 1997. A. Medek, L. Frydman Multiple Quantum Magic Angle Spinnin NMR: A new Technique for Probing Quadrupolar Nuclei in Solids, J. Braz. Chem. Soc. 10 (1999) 263. D. Massiot, High Resolution Solid State NMR en High Magnetic Fields: Applications in Condensed Matter Physiscs and Spectroscopy, LNP Vol. 595, eds C. Berthier, L. P. Levy, G. Martnez, Springer-Verlag, 2002.