Vias de Sinalizao da Insulina

Jos B.C. Carvalheira Henrique G. Zecchin Mario J.A. Saad Departamento de Clnica Mdica, Faculdade de Cincias Mdicas, Universidade Estadual de Campinas, SP. Recebido em 29/07/2002 Aceito em 01/08/2002

RESUMO A insulina um hormnio anablico com efeitos metablicos potentes. Os eventos que ocorrem aps a ligao da insulina so especficos e estritamente regulados. Definir as etapas que levam especificidade deste sinal representa um desafio para as pesquisas bioqumicas, todavia podem resultar no desenvolvimento de novas abordagens teraputicas para pacientes que sofrem de estados de resistncia insulina, inclusive o diabetes tipo 2. O receptor de insulina pertence a uma famlia de receptores de fatores de crescimento que tm atividade tirosina quinase intrnseca. Aps a ligao da insulina o receptor sofre autofosforilao em mltiplos resduos de tirosina. Isto resulta na ativao da quinase do receptor e conseqente fosforilao em tirosina de um a famlia de substratos do receptor de insulina (IRS). De forma similar a outros fatores de crescimento, a insulina usa fosforilao e interaes protena-protena como ferramentas essenciais para transmitir o sinal. Estas interaes protena-protena so fundamentais para transmitir o sinal do receptor em direo ao efeito celular final, tais como translocao de vesculas contendo transportadores de glicose (GLUT4) do pool intracelular para a membrana plasmtica, ativao da sntese de glicognio e de protenas, e transcrio de genes especficos. (Arq Bras Endocrinol Metab 2002;46/4:419-425) Descritores: Fosforilao em tirosina; Tirosina quinase; Ao insulnica; Resistncia insulina; Receptor de insulina; Substratos do receptor de insulina ABSTRACT Insulin is an anabolic hormone with powerful metabolic effects. The events after insulin binds to its receptor are highly regulated and specific. Defining the key steps that lead to the specificity in insulin signaling presents a major challenge to biochemical research, but the outcome should offer new therapeutic approaches for treatment of patients suffering from insulin-resistant states, including type 2 diabetes. The insulin receptor belongs to the large family of growth factor receptors with intrinsic tyrosine kinase activity. Following insulin binding, the receptor undergoes autophosphorylation on multiple tyrosine residues. This results in activation of the receptor kinase and tyrosine phosphorylation of a family of insulin receptor substrate (IRS) proteins. Like other growth factors, insulin uses phosphorylation and the resultant protein-protein interactions as essential tools to transmit and compartmentalize its signal. These intracellular protein-protein interactions are pivotal in transmitting the signal from the receptor to the final cellular effect, such as translocation of vesicles containing GLUT4 glucose transporters from the intracellular pool to the plasma membrane, activation of glycogen or protein synthesis, and initiation of specific gene transcription. (Arq Bras Endocrinol Metab 2002;46/4:419-425) Keywords: Tyrosine phosphorilarion; Tyrosine kinase; Insulin action; Insulin resistance; Insulin receptor; Insulin receptor substrates

A INSULINA O HORMNIO ANABLICO mais conhecido e essencial para a manuteno da

homeostase de glicose e do crescimento e diferenciao celular. Esse hormnio secretado pelas clulas das ilhotas pancreticas em resposta ao aumento dos nveis circulantes de glicose e aminocidos aps as refeies. A insulina regula a homeostase de glicose em vrios nveis, reduzindo a produo heptica de glicose (via diminuio da gliconeognese e glicogenlise) e aumentando a

captao perifrica de glicose, principalmente nos tecidos muscular e adiposo. A insulina tambm estimula a lipognese no fgado e nos adipcitos e da reduz a liplise, bem como aumenta a sntese e inibe a degradao protica. Etapas Iniciais da Sinalizao Insulnica O Receptor de Insulina A figura 1 mostra um esquema simplificado das etapas de sinalizao intracelular desde a ligao da insulina ao seu receptor at a ativao do transporte de glicose. A sinalizao intracelular da insulina comea com a sua ligao a um receptor especfico de membrana, uma protena heterotetramrica com atividade quinase, composta por duas subunidades e duas subunidades , que atua como uma enzima alostrica na qual a subunidade inibe a atividade tirosina quinase da subunidade . A ligao da insulina subunidade a permite que a subunidade b adquira atividade quinase levando a alterao conformacional e autofosforilao, que aumenta ainda mais a atividade quinase do receptor (1). Os Substratos do Receptor de Insulina Uma vez ativado, o receptor de insulina fosforila vrios substratos proticos em tirosina. Atualmente, dez substratos do receptor de insulina j foram identificados. Quatro desses pertencem famlia dos substratos do receptor de insulina, as protenas IRS (2). Outros substratos incluem Shc, Gab-1, dok p60 ,Cbl, JAK2 e APS (3-5). A fosforilao em tirosina das protenas IRS cria stios de reconhecimento para molculas contendo domnios com homologia a Src 2 (SH2). Dentre estas se destaca a fosfatidilinositol 3quinase (PI 3-quinase). As funes fisiolgicas do IRS-1/2 foram recentemente estabelecidas atravs da produo de camundongos sem os genes que codificam o IRS-1 e IRS-2 (camundongos knockout para IRS-1 e IRS-2). O camundongo que no expressa IRS-1 apresenta resistncia insulina e retardo de crescimento, mas no hiperglicmico (6). Foi demonstrado que o IRS-2 poderia compensar parcialmente a ausncia de IRS-1, o que explicaria o fentipo de resistncia insulina sem hiperglicemia do camundongo knockout de IRS-1. O camundongo que no expressa o IRS-2 foi recentemente gerado (7) e apresenta um fentipo diferente do camundongo sem IRS-1: hiperglicemia acentuada devido a diversas anormalidades na ao da insulina nos tecidos perifricos e a falncia da atividade secretria das clulas acompanhada de reduo significativa da massa de clulas pancreticas. Em contraste, camundongos knockout para o IRS-3 e IRS-4 tm crescimento e metabolismo de glicose quase normal (8). Inibio da Sinalizao do Receptor de Insulina O receptor de insulina, alm de ser fosforilado em tirosina, tambm pode ser fosforilado em serina, o que atenua a transmisso do sinal atravs da diminuio da capacidade do receptor em se fosforilar em tirosina aps estmulo com insulina (9). Essas fosforilaes inibitrias causam feedback negativo na sinalizao insulnica e podem provocar resistncia insulina (10). Estudos recentes indicam que a resistncia insulina induzida pela obesidade pode ser decorrente da ativao seqencial da protena quinase C (PKC) e da quinase inibidora do fator nuclear kB (IKkB), entretanto os detalhes dessa via de sinalizao ainda no so claros (11,12). A ao da insulina tambm atenuada por protenas fosfatases de tirosina, que catalisam a rpida desfosforilao do receptor de insulina e de seus substratos. Vrias protenas fosfatases de tirosina foram identificadas dentre essas se destaca a PTP1B. Camundongos knockout para PTP1B tm aumento da fosforilao em tirosina do receptor de insulina e das protenas IRS no msculo, conseqentemente apresentam aumento da sensibilidade insulina (13). A PI 3-quinase A PI 3-quinase importante na regulao da mitognese, diferenciao celular e transporte de glicose estimulado pela insulina (14-17). A PI-3 quinase foi originalmente identificada como um dmero composto de uma subunidade cataltica (p110) e uma subunidade regulatria (p85). A ligao dos stios YMXM e YXXM (onde Y= tirosina, M= metionina e X= qualquer aminocido) fosforilados das protenas IRS ao domnio SH2 da subunidade p85 da PI 3 -quinase ativa o domnio cataltico associado (18). A enzima catalisa fosforilao dos fosfoinositdeos na posio 3 do anel de inositol produzindo fosfatidilinositol-3-fosfato, fosfatidilinositol-3,4-difosfato e fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (19). Atualmente, a PI 3-quinase a nica molcula intracelular considerada essencial para o transporte de glicose (20). As protenas alvo conhecidas dessa enzima so a Akt e as isoformas atpicas da aPKC (e ), porm a funo destas protenas no transporte de glicose ainda no est bem estabelecida (2125). A Via CAP/Cbl

Alm da ativao da PI 3-quinase, outros sinais tambm so necessrios para que a insulina estimule o transporte de glicose (5). Essa segunda via envolve a fosforilao do protooncogene Cbl (26). Na maioria dos tecidos sensveis insulina, Cbl est associado com a protena adaptadora CAP (27). Aps a fosforilao, o complexo Cbl-CAP migra para a membrana celular e interage com a protena CrkII, que tambm est constitutivamente associada com a protena C3G (28,29). A C3G uma protena trocadora de nucleotdeos que catalisa a troca de GDP por GTP da protena TC10 ativando-a. Uma vez ativada, TC10 causa um segundo sinal para a translocao da protena GLUT4, em paralelo ativao da via da PI 3-quinase (29). Cascatas de Fosforilao Estimuladas pela Insulina Semelhante a outros fatores de crescimento, a insulina estimula a mitogen-activated protein (MAP) quinase. Essa via inicia-se com a fosforilao das protenas IRS e/ou Shc, que interagem com a protena Grb2 (30). A Grb2 est constitutivamente associada SOS, protena que troca GDP por GTP da Ras ativando-a. A ativao da Ras requer a participao da SHP2. Uma vez ativada, Ras estimula a fosforilao em serina da cascata da MAPK que leva proliferao e diferenciao celulares (31). O bloqueio farmacolgico dessa via previne a ao da insulina no crescimento celular, mas no tem efeito nas aes metablicas do hormnio (32). A insulina aumenta a sntese e bloqueia a degradao de protenas atravs da ativao da mTOR. mTOR controla a translao de protenas diretamente atravs da fosforilao da p70- ribossomal S6 quinase rsk (p70 ), que ativa a sntese ribossomal de protenas atravs da fosforilao da protena S6 (33). A mTOR tambm fosforila a PHAS1, que aumenta a sntese protica via aumento da translao de protenas (34). Regulao da Sntese de Glicognio A insulina inibe a produo e liberao de glicose no fgado atravs do bloqueio da gliconeognese e glicogenlise. A insulina estimula o acmulo de glicognio atravs do aumento do transporte de glicose no msculo e sntese de glicognio em fgado e msculo. Este ltimo efeito obtido via desfosforilao da glicognio-sintetase. Aps estmulo com insulina a Akt fosforila e inativa a GSK-3, o que diminui a taxa de fosforilao da glicognio-sintetase aumentando sua atividade (35). A insulina tambm ativa a protena fosfatase 1, por um processo dependente da PI 3-quinase, que desfosforila a glicognio sintetase diretamente (36). Na neoglicognese, a insulina inibe diretamente a transcrio de genes que codificam a fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK), enzima chave no controle desse processo. O hormnio tambm diminui a taxa de transcrio do gene que codifica a frutose-1,6-bifosfatase e a glicose 6 fosfatase e aumenta a transcrio de genes de enzimas glicolticas como a glicoquinase a piruvato quinase (37,38). As vias de sinalizao que regulam a transcrio desses genes permanecem desconhecidas, mas envolvem a Akt e fatores de transcrio da famliaforkhead e o coativador do PPAR , PGC-1. Figura 2 A insulina tambm altera a quantidade de cidos graxos livres liberados da gordura visceral (39). O fluxo direto de cidos graxos na veia porta para o fgado modula a sensibilidade insulina nesse rgo regulando a produo de glicose. Regulao da Sntese e Degradao de Lipdeos A homeostase de lpides em clulas de vertebrados regulada por uma famlia de fatores de transcrio designada SREBP (sterol regulatory element-binding proteins). SREBPs ativam diretamente a expresso de aproximadamente 30 genes que se dedicam sntese e captao de colesterol, cido graxo, triglicrides e fosfolpides, assim como a de NADPH um cofator requerido para a sntese dessas molculas (40-43). No fgado, trs SREBPs regulam a produo de lipdeos. SREBP-1c aumenta preferencialmente a transcrio de genes envolvidos na sntese de cido graxo, entre eles a acetil CoA carboxilase (ACC), que converte a acetil CoA em malonil CoA e a cido graxo sintetase (FAS), que converte a malonil CoA em palmitato. Uma ao clssica da insulina estimular a sntese de cido graxo no fgado em perodos de excesso de carboidratos. Vrias evidncias sugerem que esses efeitos da insulina so mediados pelo aumento do SREBP-1c (44-46). In vivo, a quantidade total de SREBP-1c em fgado reduzida pelo jejum, que suprime a secreo de insulina, e aumenta com a realimentao (47,48). De forma semelhante, os nveis de mRNA do SREBP-1c diminuem em animais com diabetes induzido por estreptozotocina e aumentam aps tratamento com insulina. A hiperexpresso do SREBP-1c, em fgado de animais transgnicos, previne a reduo do mRNA das enzimas lipognicas.

Muitos indivduos com obesidade e resistncia insulina apresentam esteatose heptica. As evidncias indicam que a esteatose heptica da resistncia insulina causada pelo acmulo de SREBP-1c, que est elevada em resposta aos altos nveis circulantes de insulina. De maneira semelhante, os nveis de SREBP-1c esto elevados no fgado de camundongos ob/ob (48,49). Apesar da presena de resistncia insulina nos tecidos perifricos, a insulina continua a ativar a transcrio do SREBP-1c no fgado desses camundongos. O nvel elevado de SREBP-1c nuclear aumenta a expresso de genes lipognicos, a sntese de cido graxo e o acumulo de triglicrides (49,50). Em adipcitos a insulina tambm reduz a liplise atravs da inibio da lipase hormnio sensvel (51). Esta enzima ativada pela PKA (protena quinase A). A insulina inibe a atividade da PKA, ativando a fosfodiesterase AMP cclico especfica (PDE3B), que reduz os nveis de AMP cclico nos adipcitos (52). A ativao da PDE3B dependente e distal ativao da PI 3-quinase e Akt pela insulina. Figura 3 Perspectivas Houve um progresso cientfico considervel na compreenso dos mecanismos de ao da insulina, e nas alteraes moleculares que levam resistncia insulina. No entanto, muitas lacunas permanecem desconhecidas. necessrio definir algumas das etapas das vias de transmisso do sinal de insulina, elucidar os mecanismos de interrelao (cross-talk) com outros hormnios, determinar a susceptibilidade gentica da resistncia insulina e as interaes entre os genes e o ambiente. Esses estudos iro propiciar novos insights em relao ao diabetes e resistncia insulina, talvez permitindo uma abordagem teraputica individualizada incluindo a preveno dessas doenas.