Tu tiempo de ser Bilogo Molecular en Primera Persona

* Por Mariano All y Paola Bertucci

Hemos recorrido juntos un largo camino viajamos al pasado muchas veces y tambin lo hemos hecho hacia el futuro. Ahora estamos, verdaderamente, cerca de llegar al final de este libro. Sern cada uno de ustedes los encargados de escribir las ltimas pginas Por unos das debern ponerse en la piel de un investigador, de un bilogo molecular, se enfrentarn a problemas reales, se harn preguntas, elaborarn hiptesis y las pondrn a prueba. Finalmente discutirn con sus compaeros, a esta hora colegas, sobre las implicancias de sus respectivos trabajos. Defendern su hiptesis y aprendern de las de los dems al igual que un investigador lo hace en un congreso. Esperamos puedan disfrutarlo. El captulo, en realidad, va a estar dividido en varias actividades diferentes. En primer lugar, el curso se dividir en varios grupos para que, cada uno, pueda localizarse en la resolucin de una situacin problemtica expuesta. El esquema de trabajo de cada grupo ser el siguiente: 1) Debern elegir un gen de la lista que se adjunta en el apndice (Lista de Genes) de este captulo. Una vez elegido el gen tendrn que bajar y analizar la secuencia del mismo (podrn bajarla desde la pgina del INET www.inet.edu.ar) utilizando un procesador de texto. Separando la secuencia en codones (de a tres letras desde la primera) y, utilizando, la tabla del cdigo gentico (adjunta tambin en el apndice) debern traducir todo el gen a su secuencia de aminocidos. Hecho esto, buscarn los sitios de terminacin o STOP en dicha secuencia. 2) Los miembros del grupo investigarn en internet sobre el gen elegido y elaborarn un informe con toda la informacin que hayan podido adquirir. l mismo debe especificarse la funcin del gen en humanos (al menos la que, actualmente, se cree que tiene), la localizacin (en qu cromosoma est), el nmero de aminocidos de la protena (que podrn sacar de los datos de la secuencia hasta la aparicin del primer sitio de terminacin o STOP). 3) La hora de sumarte al club de los mutantes ha llegado. Cada grupo deber modificar la secuencia del gen (mutarlo, cambiar sus letras, agregar o quitar algunas segn las indicaciones) de manera que se alterar su constitucin aminoacdica (la secuencia de aminocidos) lo que, probablemente, alterar la estructura y funcin de la protena. Grupo A. Debern cambiar una o dos letras consecutivas al inicio del gen de manera que, una vez que ste sea traducido, aparezca un codn de terminacin entre los 5 y 10 primeros aminocidos.
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Grupo B. Debern cambiar una o dos letras consecutivas al final del gen de manera que, una vez que ste sea traducido, aparezca un codn de terminacin entre los 5 y 10 aminocidos anteriores al codn de terminacin original. Grupo C. Debern ingresar una secuencia de nucletidos (letras), elegida por los alumnos, de manera que se duplique la cantidad de aminocidos antes del codn de terminacin. La secuencia de aminocidos agregada debe ser elegida de manera que no sea la repeticin de la primera mitad. 4) Anlisis de los mutantes. Grupo A. La aparicin de un codn de terminacin prematuro, dentro de los primeros 10 aminocidos, generar la prdida de funcin de esa protena. El gen se transcribir normalmente, pero, cuando sea traducido producir un pequeo pptido (secuencia de aminocidos unidos) que nunca lograr cumplir con la funcin de la protena original. Sin embargo, recordemos que siempre contamos con dos cromosomas (uno paterno y uno materno) y cada cromosoma tiene una copia de dicho gen (a excepcin de los cromosomas sexuales X e Y). Si el gen mutado est en un cromosoma, pero en el otro existe una versin normal del gen, entonces esto no debera generar un gran problema para el organismo ya que tendramos la protena funcional gracias al alelo bueno del gen. Pero qu ocurrira si los dos alelos fueran mutantes? La protena dejara, literalmente, de existir en esa persona y, de acuerdo a su importancia, en el organismo podrn aparecer enfermedades con diferentes niveles de gravedad. El siguiente informe que el grupo deber elaborar constar de: I. Una seccin de anlisis de secuencia, donde mostrarn los datos de la secuencia de ADN original del gen y su traduccin completa. Adems, marcarn la aparicin de codones de terminacin. Mostrarn a su vez, la secuencia de ADN del gen mutante, con su traduccin trunca. Harn un esquema para explicar la diferencia de aminocidos en cada caso. II. De acuerdo al tipo de mutacin generada, podemos decir que el alelo va a convertirse en recesivo. Supongamos que un hombre llamado Daniel posee un alelo de este gen normal y uno mutante, se casa y tiene hijos con una mujer (Claudia) que tambin posee un alelo normal y uno mutante. Debers realizar un esquema grfico que muestre todas las posibles combinaciones de los alelos del gen en los hijos de este matrimonio y especular qu tipo de enfermedades portaran (en las combinaciones apropiadas) de acuerdo a lo que has aprendido sobre este gen. Es decir, si el gen es importante para el desarrollo de los receptores de luz de la retina, entonces, podras especular que la falta parcial de esta protena podra generar, en una persona portadora de un solo alelo mutante (el otro sera normal), dificultades en la vista, sin embargo, en una persona portadora de los dos alelos mutantes le causara ceguera. Es importante remarcar que el objetivo de esta parte del informe no es que describan a la enfermedad real generada por la mutacin de dicho gen. Sino y, muy por el contrario, lograr que los alumnos especulen, y propongan hiptesis respecto a cmo podran generarse a partir del conocimiento previo de la actividad del gen. III. Por ltimo, los alumnos debern imaginar una posible herramienta molecular para resolver el problema y curar la enfermedad. En el apndice se dejarn tres estrategias posibles para el tratamiento de estas enfermedades de origen gentico
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(Herramientas moleculares de tratamiento). Debern optar por una de ellas y elaborar un informe describiendo cul ha sido la estrategia elegida. Explicando por qu la han seleccionado en detrimento de las restantes. Finalmente, debern imaginar un escenario de fase de prueba de esa herramienta en humanos y realizar un grfico de torta mostrando los porcentajes de mejora en las personas tratadas durante X tiempo con la herramienta elegida. El tiempo del tratamiento tambin tendr que ser elegido por los alumnos de acuerdo a algn criterio que ellos mismo tendrn que explicar. Grupo B. La aparicin de un codn de terminacin prematuro, entre los 5 y 10 aminocidos finales de la protena, generar (al menos en nuestro ejemplo hipottico) una protena muy parecida a la normal, pero incapaz de disparar la funcin de la protena original. Por lo tanto, actuar en forma negativa, ya que competir con la protena normal (sern casi idnticas) slo que la mutante no har nada. Por ejemplo, en caso de una protena de membrana (un receptor) a la cual se une una determinada molcula A en respuesta a un estmulo. Cuando se encuentra la protena normal ubicada en la membrana, luego de que se le una la molcula A, disparar toda una serie de eventos en el interior de la clula en respuesta al estmulo inicial. Pero cuando se encuentre la protena mutante en la membrana, la unin de la molcula A no iniciar ninguna respuesta. Entonces, en un individuo que posea los dos alelos de este gen, vamos a encontrar las dos protenas en la membrana y por ms que existan protenas normales, las protenas mutantes competirn por la unin de la molcula A opacando su funcin, inhibindolas de alguna manera. Este fenmeno es importante porque, muchas veces, la presencia de un alelo normal no es suficiente para que no se produzca una enfermedad, ya que el alelo mutante lo enmascara y acta en forma dominante sobre l. A veces suele llamarse a este tipo de dominancia dominante negativo. El siguiente informe que el grupo deber elaborar constar de: I) Una seccin de anlisis de secuencia, donde mostrarn los datos de la secuencia de ADN original del gen y su traduccin completa. Adems marcarn la aparicin de codones de terminacin. Mostrarn, a su vez, la secuencia de ADN del gen mutante, con su traduccin trunca. Harn un esquema para explicar la diferencia de aminocidos en cada caso. II) De acuerdo al tipo de mutacin generada, podemos decir que el alelo va a convertirse en dominante negativo. Supongamos que un hombre llamado Jorge posee un alelo de este gen normal y uno mutante, se casa y tiene hijos con una mujer (Cristina) que, tambin, posee un alelo normal y uno mutante. Debers realizar un esquema grfico que muestre todas las posibles combinaciones de los alelos del gen en los hijos de este matrimonio y especular qu tipo de enfermedades portaran (en las combinaciones apropiadas) de acuerdo a lo que has aprendido sobre este gen. Es importante remarcar que el objetivo de esta parte del informe no es que describan a la enfermedad real generada por la mutacin de dicho gen. Sino, y muy por el contrario lograr que los alumnos especulen y propongan hiptesis respecto a cmo podran generarse a partir del conocimiento previo de la actividad del gen. III) Por ltimo, los alumnos debern imaginar una posible herramienta molecular para resolver el problema y curar la enfermedad. En el apndice se dejarn tres
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estrategias posibles para el tratamiento de estas enfermedades de origen gentico (Herramientas moleculares de tratamiento). Debern optar por una de ellas y elaborar un informe describiendo cul ha sido la estrategia elegida. Explicando por qu la han seleccionado en detrimento de las restantes. Finalmente, debern imaginar un escenario de fase de prueba de esa herramienta en humanos y realizar un grfico de torta mostrando los porcentajes de mejora en las personas tratadas durante X tiempo con la herramienta elegida. El tiempo del tratamiento tambin tendr que ser elegido por los alumnos de acuerdo a algn criterio que ellos mismos, tendrn que explicar. Grupo C. La insercin de una secuencia de nucletidos (letras) duplicando la cantidad de aminocidos antes del codn de terminacin, generar (en nuestro caso hipottico) una protena completamente nueva, adems de ms grande. Esta protena tendr la funcin de la protena original, sumada a la aparicin de una nueva funcin producto de la insercin. Los alumnos debern suponer que la nueva funcin puede ser tanto positiva como negativa para el organismo portador. Para ello debern imaginar, dos escenarios y proponer dos nuevas funciones que puedan asociarse a la previa, una de carcter positivo para el organismo y la otra negativa. El siguiente informe que el grupo deber elaborar constar de: I) Una seccin de anlisis de secuencia, donde mostrarn los datos de la secuencia de ADN original del gen y su traduccin completa. Adems, resaltarn la secuencia insertada y marcarn la aparicin de codones de terminacin. Es importante que no aparezcan codones de terminacin en la secuencia ingresada para respetar el paradigma propuesto. Harn un esquema para explicar la diferencia de aminocidos en cada caso. II) De acuerdo al tipo de mutacin generada, podemos decir que el alelo va a convertirse en dominante. Supongamos que un hombre llamado Ezequiel posee un alelo de este gen normal y uno mutante, se casa y tiene hijos con una mujer (Grisel) que tambin posee un alelo normal y uno mutante. Debers realizar un esquema grfico que muestre todas las posibles combinaciones de los alelos del gen en los hijos de este matrimonio y especular qu tipo de enfermedades portaran (en las combinaciones apropiadas) de acuerdo a lo que has aprendido sobre este gen. Y qu beneficios aportaran en el caso de que la insercin fuese positiva. Es importante remarcar que el objetivo de esta parte del informe no es que describan a la enfermedad real generada por la mutacin de dicho gen, sino y, muy por el contrario, lograr que los alumnos especulen, y propongan hiptesis respecto a cmo podran generarse a partir del conocimiento previo de la actividad del gen. III) Por ltimo, tomando el ejemplo en el cual la insercin fuera negativa, los alumnos debern imaginar una posible herramienta molecular para resolver el problema y curar la enfermedad. En el apndice se dejarn tres estrategias posibles para el tratamiento de estas enfermedades de origen gentico (Herramientas moleculares de tratamiento). Debern optar por una de ellas y elaborar un informe describiendo cul ha sido la estrategia elegida. Explicando por qu la han seleccionado en detrimento de las restantes. Finalmente, debern imaginar un escenario de fase de prueba de esa herramienta en humanos y realizar un grafico de torta mostrando los porcentajes de mejora en las personas tratadas durante X tiempo con la herramienta elegida. El tiempo del tratamiento tambin tendr que ser elegido por los alumnos de acuerdo a algn criterio que ellos mismo tendrn que explicar.
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5) La ltima tarea del grupo ser elaborar un pster de una dimensin mayor a 1,10 cm de ancho x 1,50 cm de alto, al cual lo dividirn en las siguientes reas: Ttulo: mximo 10 palabras. Autores: el nombre y apellido de los miembros del grupo. Introduccin: breve explicacin y descripcin del gen elegido. Resultados: Parte 1. Esquema del gen original y el mutante con las secuencias de ADN y de aminocido (en el cdigo de una letra, por ejemplo A=Alanina, la tabla se encuentra en el apndice del captulo). Parte 2. Explicacin de la enfermedad generada en pacientes portadores de uno o dos alelos mutantes. Parte 3. Estrategia de tratamiento. Breve descripcin de la misma. Debern colocar el grfico de torta con los resultados hipotetizados del tratamiento en pacientes. Discusin: un breve resumen de todo el trabajo y cul ha sido el aporte principal para la formacin de los alumnos segn su propia opinin. Bibliografia: detalle de la bibliografa utilizada durante el trabajo. 6) Se propone como actividad final que todos los grupos compartan su aprendizaje y el nuevo conocimiento adquirido de manera similar a como lo hacen los cientficos en los congresos. En una fecha previamente estipulada, cada grupo colgar su pster. Cada miembro del grupo deber explicar su pster al menos una vez a un compaero de otro grupo, y a su vez deber observar, preguntar y aprender sobre los restantes pster. De esta manera, todos habrn defendido sus propias teoras y habrn escuchado y discutido las de los otros grupos. Al final de ese encuentro el docente realizar una pequea evaluacin cruzada, donde a cada alumno se le harn preguntas generales sobre los ejemplos y las problemticas de algn otro grupo y sobre cmo la resolvieron.

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