DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIA MOLECULAR

Dr Eduardo Kremenchutzky

1- los genes se componen de ADN y estn situados dentro de los cromosomas. 2-Cada gen contiene informacin codificada en forma de una serie especfica de nucletidos de purina y pirimidina dentro de la molcula de ADN 3- la unidad de informacin gentica es el CODN que es un grupo de tres nucletidos adyacentes que especfican un Aa en una cadena de protenas 4- el cdigo gentico es un cdigo tripleto 5- la molcula de ADN consta de dos cadenas complementarias de polinucletidos arrollados entre si en una espiral y unidas por enlaces de hidrgeno entre pares especficos de bases de purina y pirimidina. 6- la molcula de ADN se duplica cuando las dos tiras de la espiral se separan y cada una acta como modelo para la formacin de una nueva cadena complelementaria. Cada par de tiras , uno antiguo y uno nuevo se arrrolan formando dos espirales hijas.

Estructura y replicacin del material gentico

Objetivos tema 6: Estructura y replicacin del material gentico

Debern quedar bien claros los siguientes puntos: Cmo se descubri la naturaleza qumica del material hereditario La composicin qumica de los cidos nucleicos La estructura 3D del DNA: naturaleza complementaria y antiparalela de la doble cadena del cido desoxirribonucleico (DNA) La extraordinaria capacidad explicativa del modelo del DNA de la funcin biolgica fundamental de esta molcula La replicacin semiconservativa Enzimologa de la replicacin

La transformacin bacteriana en Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)

Rugosa

Muerte por neumona

Cepa resistente

Lisa

No muere

Muere

Cul es el Principio transformante?

Principio Rugosa Lisa

Colin MacLeod

El elemento transformante es el DNA (1944)

Maclyn McCarty

Oswald Avery

Ver animacin experimento tranformacin bacteriana

Slo DNA produce transformacin

Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase con fagos (1952)

Bacterifago T4

El DNA es el material infeccioso

Componentes de los cidos nucleicos

adenina timina guanina citosina

Reglas de Chargaff

1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas A+G=C+T 2. 3. A=T G=C

1953. Ao culminante: J. Watson y F. Crick resuelven la estructura tridimensional del DNA (Nature 171: 737-738)
Watson y yo hemos encontrado el secreto de la vida

1953. Ao culminante:

Dos lneas de evidencia: Reglas de Chargaff Fotografas de difraccin de rayos X

Significado reglas de Chargaff

Complementariedad de las bases

Difraccin de rayos X

Hemoglobina Linus Pauling

Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA

Rosalind E. Franklin

Crick

Modelo en metal del DNA

J. Watson y F. Crick Concluyen: La estructura del DNA es una

doble hlice, formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas). La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrgeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las cadenas

Doble hlice, formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas).

La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrgeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las cadenas

Desnaturalizacin del DNA

Separacin de las dos hebras por calor Una mayor proporcin G-C tiene una mayor temperatura de desnaturalizacin (fusin)
100 Porcentaje G + C 80 60 40 20 70 80 90 100 110

Temperatura de fusin (desnaturalizacin)

Hlices levgiras y dextrgiras

DNA-B dextrgira

Ver artculo Nature 1953

La estructura del DNA suministra una explicacin asombrosamente simple del fenmeno de la herencia
La estructura explica: La naturaleza de la secuencia lineal de los genes (informacin digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monmeros A,T,G,C) El mecanismo de replicacin exacta de los genes La naturaleza qumica de las mutaciones Por qu la mutacin, la recombinacin y la expresin gnica son fenmenos separables a nivel molecular

Esencial a la relacin ntima entre estructura molecular y funcin gentica del DNA es el concepto de molde
La complementariedad de las bases nitrogenadas permite que la secuencia de una cadena sencilla de DNA acte como un molde para la formacin de una copia complementaria de DNA (replicacin) o de mRNA (transcripcin)

Antes pensbamos que nuestro futuro estaba en las estrellas. Ahora sabemos que est en nuestros genes. James Watson

Una estructura tan bonita tena, por fuerza, que existir J. Watson

Una estructura tan bonita tena, por fuerza, que existir J. Watson

El DNA contiene informacin digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monmeros A,T,G,C (cristal aperidico)

Hay grandeza en esta concepcin de la vida,... que mientras este planeta ha ido girando segn la constante ley de la gravitacin, se han desarrollado y se estn desarrollando, a partir de una un comienzo molculatan sencillo, infinidad helicoidal asombrosa, de formas infinidad cada devez formas ms bellasvez cada y maravillosas ms bellas y maravillosas Charles Darwin

Estructura de los genes y del ARN

Estructura del gen

ARNm

ARNt

ARNr

Replicacin del DNA

25 de Abril 1953

It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material.

Posibles modelos de replicacin

Replicacin del DNA

Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una nueva cadena El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958) demuestra que la replicacin es semiconservativa

Mathew Meselson

Frank Stahl

Replicacin del DNA

Enzimas que sintetizan (replican) el DNA E. coli DNA polimerasa I (rellena huecos y repara) DNA polimerasa II y III (funcin principal en la sntesis) Aade bases en ambas cadenas en la direccin 5 3 Requiere un 3 OH final Eucariotas 5 polimerasas y principal en replicacin , y exonucleasas Correccin de pruebas: actividad 3 5 exonucleotdica. Sustituye bases mal emparejadas (10-5) por correctas (10-7); mecanismos de reparacin
adicionales la reducen hasta 10-10

3 Las polimerasas conocidas aaden nucletidos solamente en la direccin 5 3

Por qu no hay una enzima que polimerice en la direccin 3-> 5?

No funcionara la correccin de errores por falta de un trifosfato que suministre la energa de enlace covalente azcar-fosfato

Adicin 53

+ H2O

P P P

OH

P P P
OH

OH

OH

P PP

P
3

OH

OH 5

Adicin 35 (hipottica)

P P
OH OH

P
PP P
OH

Adicin 35 (hipottica)

OH

P
3 OH

P P

P PP

+ H2O

PPP

OH

P PP

P PP

Correccin de errores

P P P
OH 5

P OH
P P P P

PP P P P
OH

+ H2O

OH

OH

Adicin 53

P
OH

OH

POH

P
3

Adicin 35 (hipottica)

P PP

Replicacin del DNA (2)

Replicacin: continua (cadena adelantada, cebador slo inicio) y discontinua (cadena retrasada) Discontinua Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos aadido por enzima primasa o RNA pol que provee 3 OH. Fragmento de Okazaki por DNA pol III (1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas) Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena huecos (gap) Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)

Polimerasa III

Polimerasa I

Por qu el cebador es RNA?

El cebador es ms proclive al error, por lo que debera eliminarse y el RNA puede detectarse y eliminarse fcilmente por la DNApol I

Replicacin del DNA (3)

El replisoma: complejo enzimtico de la replicacin que coordina la sntesis de las dos cadenas, maquinaria molecular Dmero de la DNA pol III (ncleos catalticos) Primosoma: formado por dos enzimas Primasa Helicasa (desenrolla el DNA) Protena de unin a cadena sencilla, ssb (Unin Y, estabiliza el DNA de cadena sencilla) Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena) y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA ligasa -> Relajacin del superenrollamiento

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva

El replisoma: una maquinaria de replicacin extraordinaria

Topoisomerasas

Replicacin del DNA (4)

Origen de replicacin: Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por protenas iniciadoras. Varios orgenes en eucariotas La replicacin es bidireccional

Horquilla replicacin

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de replicacin (~500 en levaduras y 60000 en mamferos). Cada unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es bidireccional

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes de replicacin (~500 en levaduras y 30000 en mamferos). Cada unidad de replicacin es un replicn. La replicacin es bidireccional

Transcripcin

Se forma un precursor llamado TRANSCRIPTO PRIMARIO ,que luego se transforma en el producto final por un mecanismo llamado PROCESAMIENTO DEL ARN.

Procesamiento del ARN

El transcripto primario puede modificarse por alguno de los siguientes procesos : 1- clivaje: es la formacin de una molcula ms grande que luego se rompe originando la molcula final que es ms chica. 2- empalme: se sacan partes internas de la molcula que luego vuelve a empalmarse. 3- alargamiento: se agregan segmentos al final del trascrito primario que es ms corto que el producto final. 4- modificacin: cambios qumicos en los nucletidos.

Genes Transcriptos
Estructurales transcripcin ARNm

Determinantes

transcripcin

ARNt

Determinantes nucleolares

ARNr transcripcin

Transcriptos primarios
ARNhn procesamiento ARNm

ARNpre-t

procesamiento

ARNt

ARNpre-r

ARNr procesamiento

Procesamiento del ARNhn

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ARN polimerasa

La ARN polimerasa se asocia a una regin del ADN y desenrolla una vuelta de hlice, permitiendo la polimerizacin del ARN a partir de una de las hebras de ADN que se utiliza como molde. Hay tres tipos de ARN polimerasa: nuclear , nucleolar y mitocondrial

Subunidades de la ARN polimerasa

ARN pol

Promotor

Formacin del complejo promotor cerrado: ARN pol unida por su subunidad especficamente al promotor.

Formacin del complejo promotor abierto: la ARN pol desenrolla el ADN quedando as una hebra de ADN como molde (la 3- 5). La ARN pol inicia la sntesis de ARN. La subunidad se disocia y la sntesis contina. Subunidad La sntesis de ARN contina hasta que la ARN pol encuentra una seal de terminacin: se detiene la transcripcin, se separa el ARN y la polimerasa y la enzima se disocia del ADN.
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Traduccin
El ARNm pasa al citoplasma y se asocia con los ribosomas, para la sntesis de protenas, que es la expresin del cdigo gentico.

Iniciacin

El primer paso consiste en la formacin del COMPLEJO DE INICIACION. El ARNm se une a la subunidad menor del ribosoma. Luego el primer aminoacil-transfer se une por medio de su anticodn al codn correspondiente. Despus se aparea la subunidad mayor.

Elongacin

Es el agregado de aminocidos a la cadena peptdica, segn el orden de los codones del ARNm . Los aminocidos se van agregando por medio de una unin peptdica entre ellos , unin que es catalizada por una enzima que se encuentra en la subuni-dad mayor del ribosoma , llamada Peptidil-transferasa o Pptido sintetasa.

Terminacin

El ribosoma se desplaza sobre el ARNm hasta encontrar un codn sin sentido como UAA, UAG o UGA. Luego se libera la protena formada y se disocia el ribosoma en sus dos subunidades