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UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA SECCIONAL VILLAVICENCIO FACULTAD DE MEDICINA FISIOLOGA DE LA SANGRE GUIA DE ESTUDIO ALEXANDER HERNNDEZ, M.D.

, Profesor

HEMATIMETRIA COMO USAR ESTA GUA Esta gua de estudio contiene material terico necesario para la adecuada realizacin de las prcticas de sangre del curso de morfofisiologia; es necesario estudiar esta gua antes de llegar al laboratorio . Contiene adems informacin ampliada sobre los tpicos de la hematimetra dentro del contexto
de la fisiologa sangunea.Esta informacin es muy importante para su conocimiento y ser evaluada en su debida oportunidad. Se recomienda conservar este material el cual ser de utilidad en cursos y semestres posteriores I. SERIE ERITROCITARIA

La hematimetra se define como el conjunto de tcnicas y procedimientos para cuantificar los diversos componentes celulares de la sangre, as como las caractersticas fisicoqumicas de esta o sus fracciones. Los parmetros hematimtricos ms importantes son. Velocidad de sedimentacin globular Hematocrito Hemoglobinemia Conteo eritrocitario ndices eritrocitarios Conteo de reticulocitos Conteo leucocitario total Frmula blanca diferencial Conteo plaquetario ndices plaquetarios La agrupacin de estos parmetros hematimtricos, excepcin hecha del recuento de reticulocitos, conforma el llamado cuadro hemtico, el cual, sin duda, constituye unos de los procedimientos paraclnicos ms usados y de mayor utilidad diagnstica; sin embargo, la interpretacin del cuadro hemtico dista mucho de ser sencilla debido a la multitud de factores determinantes de cada uno de los parmetros De los parmetros, mencionados, los seis primeros hacen relacin a los glbulos rojos, por lo que se agrupan bajo el trmino de seri eritrocitaria. Consecuentemente, lo dos siguientes conforman la serie leucocitaria y los dos ltimos la serie plaquetaria. ANTICOAGULANTES QUE SE USAN PARA PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO La determinacin de los parmetros hematimtricos mencionados arriba implica la sangre se mantenga en estado lquido para poder ser procesada, es decir, que se impida la coagulacin fisiolgica. Para, este efecto se utilizan in vitro varios anticoagulantes, aqu entre los cuales tenemos: A. Oxalato de amonio y oxalato de potasio:
Estos se usan en una mezcla que contiene tres partes del primero y dos partes segundo. Este anticoagulante permite utilizar la sangre para determinacin de hemoglobina, hematocrito y conteos globulares. El plasma puede separarse y ser usado para varias determinaciones qumicas. Este anticoagulante (mezcla de oxalatos) tiene el inconveniente de no preservar bien la morfologa globular ni las plaquetas.

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B. Oxalato de potasio : Se usa frecuentemente en qumica clnica: 0.01 ml de una solucin al 30% (p/v) por cada 1.0 ml de sangre. C. Citrato de sodio: Se utiliza una solucin al 3.8% que es isotnica, en la proporcin de una parte de solucin de citrato por nueve de sangre en la investigacin de los mecanismos de coagulacin( p.ej. determinacin de tiempo de protrombina) y de una parte de anticoagulante por cuatro de sangre en la determinacin de la velocidad de sedimentacin globular(v.s.g.) por el mtodo segn Westergreen D. cido Ctrico-Citrato-Dextrosa(ACD), Citrato-Fosfato-Dextrosa(CPD) y Citrato-Fosfato-Dextrosa-Adenina(CPDA) Se utilizan como anticoagulantes para la preservacin de sangre en condiciones de Banco de Sangre para fines transfusionales E. E.D.T.A.: Esta es la sal di potsica del cido etilendiaminotetra-actico. Es anticoagulante que acta quelando el calcio. Su uso proporciona la determinacin de hemoglobina; hematocrito, v.s.g., recuentos globulares y morfologa globular Permite tambin la preservacin de las plaquetas ya que impide su adhesin. Es el anticoagulante de eleccin para hematimetra. F. Heparina: Este es el nico anticoagulante fisiolgico. Se usa para determinaciones en las cuales es necesario evitar al mximo la hemlisis, p Ej. en la gasometra sangunea. Se usan 0,1 mg por cada 1.0 ml de sangre. De todos los anticoagulantes aqu mencionado nico que puede usarse tambin in vivo. La mayora de estos anticoagulantes actan impidiendo que el calcio quede libre en solucin para actuar en el mecanismo, de la coagulacin fisiolgica, bien precipitndolo como una sal (oxalatos), o bien formando un complejo no ionizable (citrato y EDTA). La heparina acta como cofactor de una protena plasmtica, la Antitrombina III, la cual es capaz de inhibir la accin de la trombina y de otras proteasas de la coagulacin el factor Xa. NDICES HEMATIMTRICOS El avance experimentado en los ltimos aos en el desarrollo de contadores hematolgicos de elevada complejidad, permite al laboratorio Clnico actual, orientar con un alto grado de certeza sobre distintas patologas eritrocitarias. Su ventaja radica en que la medicin de las partculas por su tamao, brinda una medida ms exacta del nmero de clulas (recuento de glbulos rojos y plaquetas), como asimismo la medida del hematocrito y la hemoglobina son altamente reproducibles. Estos valores relacionados entre si, permiten formular con mucha precisin, los llamados ndices hematimtricos, que nos orientan con gran fiabilidad sobre las caractersticas de los glbulos rojos y son de alta utilidad clnica en el diagnstico y clasificacin de las anemias. Los ndices Hematimtricos ms aceptados son: 1. V.C.M. o M.C.V.(Volumen Corpuscular Medio). Es una expresin, en trminos absolutos, del volumen promedio de los eritrocitos. Los valores de referencia oscilan entre 80 y 100 micrones cbicos (u3). Valores superiores a 100 u3 indican MACROCITOSIS y menores a 80 u3 MICROCITOSIS. Para calcular el VCM se utilizan el hematocrito y el conteo eritrocitario aplicando la formula Hematocrito (en porcentaje) VCM = ---------------------------------------------x 10 Conteo eritrocitario (en millones, ul)

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H.C.M. o M.C.H. (Hemoglobina Corpuscular Media). Es la cantidad promedio de hemoglobina que contiene cada eritrocito. Los valores de referencia estn comprendidos entre 27 y 32 picogramos (pg). Valores inferiores a 27 pg se observan en anemias microciticas y valores superiores a 32 pg en anemias macrociticas. Segn se expresa en la
frmula HCM (picogramos, pg) = hemoglobina (g/dl) /nm. hematies/nl x 10

3.

C.H.C.M.o M.C.H.C (Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media). Indica la concentracin de hemoglobina promedio por unidad de volumen (100ml)de hemates agrupados. Los valores de referencia estn comprendidos entre 31 y 36 % (o gr/ml de hemates). Una CHCM disminuida indica que una unidad de volumen de hemates agrupados contiene menos hemoglobina de lo normal, o que la misma sido sustituida por estroma eritrocitario, como ocurre en las anemias macrociticasy en la deficiencia de hierro. Una CHCM elevada indica esferocitosis. Esta concentracin se
calcula como CHCM (g/dl) = Hemoglobina (g/dl) / hematocrito (l/l).

4. R.D.W.(Red Distribution Width) Amplitud de distribucin de los hemates. Se refiere a la amplitud de la curva Gausiana de distribucin de hemates o expresado de otro modo, es el coeficiente de variacin-CV%- que presenta dicha curva. La misma manifiesta el grado de anisocitosis que presentan los eritrocitos. Los valores de referencia oscilan entre 12 y 16 %. Es importante destacar que los resultados de estos ndices, requieren que el error en las mediciones de glbulos rojos, hematocrito y hemoglobina sean sensiblemente inferiores a (+), (-) 5%. Esto solo se logra con contadores electrnicos diferenciales automticos y usando calibradores para los mismos de muy buena calidad. Con estos valores podemos establecer una Clasificacin Morfolgica de las Anemias, clnicamente til y ampliamente aceptada: En base a V.C.M., H.C.M., y C.H.C.M. a) ANEMIA MACROCITICA NORMOCRMICA Valor promedio encontrado: VCM:95-160 u3 (mayor que el normal)HCM:32-50 pg (mayor que el normal)CHCM:32-36 % (normal) Causas posibles: Formas Megaloblasticas: deficiencia de vitamina B12 o cido flico, secundarias anomalas gastrointestinales, gastrectoma, enfermedad heptica, empleo de anticonvulsivantes, antimetabolitos y anticonceptivos orales, deficiencia diettica. Formas No Megaloblasticas: hemorragias, enfermedades hepticas crnicas, hipotiroidismo. b) ANEMIA NORMOCITICA NORMOCRMICA Valor promedio encontrado: VCM: 80-95 u3 (normal)HCM: 27-32 pg (normal) CHCM: 31-36 % (normal) Causas posibles: Hemorragias repentinas Anemias hemolticas: por agentes infecciosos, qumicos, fisicos, vegetales, animales, anomalas hereditarias, autoanticuerpos. Produccin anormal: por respuesta medular deteriorada(radiaciones toxicas)omenor estimulacin (insuficiencia renal, deficiencia endocrina). Hemoglobinopatas. c) ANEMIA MICROCITICA NORMOCRMICA Valor promedio encontrado: VCM: 60-80 u3 (menor que lo normal), HCM: 27-32 pg (normal), CHCM: 31-36% (normal) Causas posibles: Formacin atpica de hemates por: Inflamaciones subagudas y crnicas Efecto toxico de drogas Tumores malignos Alteraciones endocrinas d) ANEMIA MICROCITICA HIPOCRMICA Valor promedio encontrado: VCM: 60-80 u3 (menor que lo normol) HCM: 19-29 pg (menor que lo normal) CHCM: 20-30 % (menor que lo normal) Causas posibles:

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Deficiencia de hierro por: hemorragias agudas o crnicas, ingesta o absorcin insuficiente de hierro, demanda aumentada de hierro (embarazo, crecimiento, regeneracin sangunea) Causas diversas: talasemia, intoxicacin plmbica, anemias sideroblsticas hereditarias o adquiridas: asociada a drogas (isoniazida, piridoxina, cloranfenicol, alcohol) o a enfermedades crnicas o neoplsicas. En base a V.C.M. y R.D.W. R.D.W. Normal: 1) V.C.M. bajo : B-talasemia heterocigota, Anemia de enfermedades crnicas 2) V.C.M. normal : Hemoglobinopatas no anmicas(AS;AC), Quimioterapia, Leucemia Mieloide Crnica, Hemorragia aguda, Esferocitosis hereditaria, Mielotoxicidad, Aplasia, Diabetes, Enfermedad renal 3) V.C.M. elevado : Anemia aplsica, Sndrome preleucmico R.D.W. elevado: 1) V.C.M. bajo : Anemia ferropnica severa B-talasemia Hemoglobinopata H 2) V.C.M. normal : Deficiencia de cido flico o vitamina B12 en estado temprano, Hemoglobinopatas SS;SC, Anemia sideroblastica, Mielofibrosis, Anemia por deficiencia nutricionales 3) V.C.M. elevado : Deficiencia de cido flico o vitamina B12, Anemia Hemoltica inmune, Leucemia linfoctica crnica, Enfermedad de aglutininas fras HEMATIMETRA Denominacin: Hemograma, Estudio hematolgico de rutina. En un estudio rutinario de hematimetra se van a cuantificar y evaluar diferentes grupos celulares, las glbulos rojos (hemates), los glbulos blancos (leucocitos), las plaquetas, el contenido de hemoglobina, y otros parmetros relacionados con su cantidad, forma y contenido. Valores que se estudian Parmetro Nmero de hemates Hemoglobina Hematocrito VCM HCM CMHC Plaquetas VPM Nmero de Leucocitos Neutrfilos Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos Valores Normales 4 - 5,5 millones/ml 12 - 16 g/dl 37-52 % 80 - 99 fl 27-32 pg 32-36 g/dl 135-450 miles/ml 9,6 fl 4,5-11 miles/ml 42 -75 % 20.5- 51.1 % 1.7 - 9.3 % 0-1 % 0-0.2 %

Para qu se realiza la hematimetra?

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1. La cantidad de hemates puede ofrecer datos de salud o de la presencia de una anemia, enfermedades generales, o diferentes tipos de cncer. Como los hemates son los encargados de transportar la hemoglobina (protena que porta el oxgeno a los tejidos), su disminucin produce cansancio y sensacin de fatiga. 2. La concentracin de hemoglobina nos ofrecer datos complementarios sobre la posible alteracin del nmero de hemates. 3. El hematcrito, es el porcentaje de la masa del eritrocito con relacin al volumen sanguneo. Con esos datos son calculados los ndices hematimtricos (VCM, HCM, VMHC). La alteracin de estos parmetros nos ayudarn a orientar diferentes enfermedades que causan alteraciones en estos ndices (Ejemplo: diferentes tipos de anemias) 4. Los glbulos blancos (leucocitos) son los encargados de las defensas de la persona, por ello en cuadros de infeccin estn aumentados, o en ciertas enfermedades estn disminuidos. Tambin es importante saber cuales son las poblaciones de cada tipo de leucocitos, por ello en los resultados aparecen los neutrfilos, monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos. Segn los resultados de cada una de estas poblaciones se puede orientar hacia una u otra enfermedad. 5. Las plaquetas son las clulas encargadas de parte de la coagulacin por ello si su nmero disminuye pueden aparecer cuadros de hemorragias (sangrados) que puede deberse a diferentes problemas y enfermedades, y su nmero aumenta en diferentes enfermedades reumticas o autoinmunes. Cada uno de estos valores puede ofrecer mayor informacin; por ello se relacionan cada uno de ellos por separado. Procedimiento de Obtencin 1. Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas. 2. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clnica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente. 3. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de extraccin). 4. Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que las venas retengan ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles. 5. Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una palpacin localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor. 6. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco). 7. Si se requiere varias muestras para diferentes tipos de anlisis se le extraer ms o menos sangre o se aplicarn diferentes tubos de vaco. 8. Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodn o similar para favorecer la coagulacin y se le indicar que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas. Problemas y Posibles Riesgos 1. La obtencin mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor. 2. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos. 3. Aparicin de un hematoma (moratn o cardenal) en la zona de extraccin, suele deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la presin posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este problema. Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. 4. Inflamacin de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramente fsica o por que se ha infectado. Se deber mantener la zona relajada unos das y se puede aplicar una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deber consultarlo con su mdico. Hemoglobina Definicin: La hemoglobina es una protena que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glbulos rojos y es la encargada del transporte de oxgeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.

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La hemoglobina tambin transporta el dixido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de produccin de energa, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire. El anlisis de la hemoglobina se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetra, con el recuento de glbulos rojos o hemates. Valores normales de hemoglobina Recin nacido A los 3 meses Al ao de edad Entre los 3 y 5 aos De los 5 a los 15 aos Hombre adulto Mujer adulta 13,5 a 19,5 gr/dl 9,5 a 12,5 gr/dl 11 a 13 gr/dl 12 a 14 gr/dl 11,5 a 15 gr/dl 13 a 16 gr/dl 11,5 a 14,5 gr/dl

Qu indican los resultados anormales? Cuando el nivel de hemoglobina en un anlisis aparece debajo de los niveles normales se est describiendo una anemia que luego puede ser de diferentes orgenes: Anemias primarias Cncer Embarazo Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes Hemorragias Linfomas Problemas de alimentacin El nivel bajo de hemoglobina suele acompaarse de un nivel de hematocrito bajo. Si el nivel de hemoglobina aparece alto puede deberse a: Cardiopatas Deshidratacin Enfermedades pulmonares crnicas INDICE HEMATOCRITO Definicin: Tras una centrifugacin de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depsito de los glbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La relacin porcentual entre ambos es lo que describe el hematocrito y describe el porcentaje de clulas transportadoras de oxgeno con respecto al volumen total de sangre. El anlisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetra, con el recuento de glbulos rojos o hemates. VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO Recin nacido A los 3 meses Al ao de edad Entre los 3 y 5 aos De los 5 a los 15 aos 44 a 56 % 32 a 44 % 36 a 41 % 36 a 43 % 37 a 45 %

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Hombre adulto Mujer adulta

40 a 54 % 37 a 47 %

QU INDICAN LOS RESULTADOS ANORMALES? Un ndice bajo de Hematocrito puede deberse a: Anemia Fallos en la mdula sea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.) Embarazo Hemorragias Hipertirodismo Hemolisis (destruccin de glbulos rojos) por una transfusin Leucemia Problemas de alimentacin Artritis reumatoide Un ndice alto de Hematocrito puede deberse a: Cardiopatas Deshidratacin Eclampsia (en el embarazo) Enfermedades pulmonares crnicas Exceso de formacin de hemates (eritrocitosis) Policitemia vera Choque (shock) Estancias en lugares de mucha altitud Velocidad de Sedimentacin Globular Media (VSG) Denominacin: Medicin de la velocidad, VSG, Velocidad de sedimentacin eritrocitaria. Definicin: La velocidad de sedimentacin globular es la precipitacin de los eritrocitos (glbulos rojos) en un tiempo determinado (1-2 horas), que se relaciona directamente con la tendencia de los glbulos rojos hacia la formacin de acmulos (pilas de monedas) as como a la concentracin plasmtica de protenas (globulinas y fibringeno). La capacidad y la velocidad de formar estos acmulos depende de la atraccin de la superficie de los glbulos rojos. El anlisis de la VSG se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetra. Cundo se eleva la VSG? Si las protenas del grupo de las globulinas est elevado con respecto a la albmina la velocidad se eleva. Tambin una alta proporcin de fibringeno puede provocar esta elevacin. Para qu se mide la VSG? Los principales usos de la medicin de la VSG son: 1. Para detectar procesos inflamatorios o infecciosos. Como discriminador o reactante de presencia de enfermedad. 2. Como control de la evolucin de ciertas enfermedades crnicas infecciosas. 3. Para detectar procesos crnicos inflamatorios ocultos o tumores. El valor de la tcnica no es muy sensible y adems poco especfica, por s sola tiene poco valor y se debe asociar a otros estudios para poder orientar un diagnstico. En los primeros meses de embarazo puede aparecer elevada sin ms repercusiones. Valores normales En la sangre normal la velocidad de eritrosedimentacin es prcticamente nula, inclusive si el colesterol o otros lpidos estn muy elevados puede disminuir la capacidad de formar acmulos y disminuir ms la VSG.

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Recin nacidos Lactantes Escolares Hombres jvenes Hombres adultos Hombres mayores Mujeres jvenes Mujeres adultas Mujeres mayores

hasta 2 hasta 10 hasta 11 hasta 10 hasta 12 hasta 14 hasta 10 hasta 19 hasta 20

Utilidad ms discriminatoria: Si su valor es mayor de 100 mm/hora se debe de pensar que existe un problema de cncer, colagenosis, enfermedades reumticas, y otras enfermedades infecciosas crnicas. Resultados anormales La velocidad de sedimentacin VSG se eleva en: Anemia intensa Artritis reumatoide Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso) Enfermedades tiroideas Embarazo Fiebre reumtica Infecciones agudas Macroglobulinemia Mieloma mltiple Polimialgia reumtica Sfilis Tuberculosis Vasculitis La VSG puede aparecer disminuida en: Descenso de protenas en el plasma (por problemas hepticos renales) Disminucin del fibringeno Fallos cardiacos Policitemia NDICES HEMATIMTRICOS Definicin: son los parmetros que relacionan el ndice hamatocrito, la hemoglobina y el nmero de hemates o glbulos rojos. CUALES SON El VCM (volumen corpuscular medio) es una forma de expresar el tamao de los eritrocitos .El valor normal es de 80-100 fl (femtolitros por hemate).

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La HCM (hemoglobina corpuscular media) corresponde al contenido de la hemoglobina en cada eritrocito (Hemoglobina/nmero de hemates). Su valor normal es de 26 a 32 picogramos. La CHCM es la concentracin de hemoglobina comparado con el hematocrito . En los adultos sus valores normales son de 32 a 36 %. VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO El tamao de los glbulos rojos (VCM) nos puede definir si una anemia es microctica cuando el VCM es menor a lo normal, normoctica si es normal y macroctica si es superior a lo normal. Si el valor de la Hemoglobina corpuscular media (HCM) ES normal la anemia ser normocrmica, si es bajo ser una anemia hipocrmica hipercrmica si est elevado su valor. POSIBLES CAUSAS DE LA ALTERACIN DE LOS PARMETRIS HEMATIMTRICOS La macrocitosis puede deberse a defectos de cido flico, de vitamina B12, enfermedades hepticas, alcoholismo, etc. La microcitosis puede deberse a anemias por falta de hierro y por talasemias. La hipocromia suele coincidir con la microcitosis en la falta de hierro y las talasemias. La hipercromia suelen aparecer con la mcrocitosis se debe a defectos de cido flico, de vitamina B12, enfermedades hepticas, alcoholismo, etc. OTRAS ALTERACIONES DE LA FORMA DE LOS HEMATES El aspecto de los glbulos rojos vistos al microscopio nos puede ofrecer diversas variables que orientan a diferentes enfermedades. La esquistocitosis, aparece cuando los hemates son de diferentes formas (bastones, media luna, en forma de casco, con espinas, etc.). Se suele deber a enfermedades que atacan los hemates como la anemia hemoltica que aparece en enfermedades autoinmunes. La poiquilocitosis es cuando la forma de los hemates es de lgrima o de pera, aparece en diversas anemias. La eliptocitosis son hemates elpticos que se debe a anemias o a una enfermedad concreta que es la Eliptocitosis congnita. La drepanocitosis, la forma de los eritrocitos es de hoz, suele deberse a enfermedades congnitas La esferocitosis son glbulos rojos que alteraron su forma bicncava por la de una esfera. Es una enfermedad hereditaria que produce la alteracin de la forma del eritrocito por el dficit de ciertas sustancias necesarias. La presencia de eritroblastos es que aparecen los hemates con ncleo, y es por la aparicin de formas jvenes recin salidas de la mdula sea. Se debe a anemias, hemorragias, o hemlisis (rotura de hemates) por diversas causas. La Leptocitos son clulas delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crnicas debilitantes que producen anemia. La Estomatocitos son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en la estomatocitosis hereditaria del Alaska malamut y en enfermedades hepticas. Los cuerpos de Howell-Jolly, son manchas nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anmico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar problemas en el bazo. Los cuerpos de Heinz son estructuras localizadas en la membrana eritroctica producto de la desnaturalizacin de la hemoglobina causada por la accin oxidante de ciertas drogas o qumicos. Leucocitos. Glbulos blancos Denominacin Glbulos blancos, Medicin de leucocitos, Cuenta de leucocitos. Definicin Los leucocitos o glbulos blancos son clulas que estn principalmente en la sangre y circulan por ella con la funcin de combatir las infecciones o cuerpos extraos; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano. Se llaman glbulos blancos, ya que ste color es el de su aspecto al microscopio.

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Hay diferentes grupos de glbulos blancos: los llamados polimorfonucleares (neutrfilos, eosinfilos y los basfilos) y los mononucleares (los linfocitos y los monocitos). El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de clulas madres de la mdula sea. Para qu se realiza su estudio La modificacin de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cncer y leucemias, y otros procesos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Adems el porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecer una mayor informacin para precisar un diagnstico. Cuando en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los neutrfilos en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del porcentaje de los glbulos blancos polimorfonucleares, esto se denomina como desviacin "a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas. El estudio de los leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetra y recuento leucocitario completo. Valores normales de leucocitos Recin nacido A los 3 meses Al ao de edad Entre los 3 y 5 aos De los 5 a los 15 aos Hombre adulto Mujer adulta 10 a 26 mil/mm3 6 a 18 mil/mm3 8 a 16 mil/mm3 10 a 14 mil/mm3 5,5 a 12 mil/mm3 4,5 a 10 mil/mm3 4,5 a 10 mil/mm3

Qu indican los resultados anormales? Un nmero disminuido de leucocitos (leucopenia) pueden aparecer en ciertas enfermedades: Fallo de la mdula sea (por tumores, fibrosis, intoxicacin, etc.) Enfermedades autoinmunes (Lupus, etc.) Enfermedades del hgado o rin Exposicin a radiaciones Presencia de sustancias citotxicas Un nmero aumentado de leucocitos (leucocitosis) puede deberse a: Dao de tejidos en quemaduras Enfermedades infecciosas Enfermedades inflamatorias (por autoinmunidad-reumticas por alergia) Estrs Leucemia Alteraciones de la medicin por la actuacin de medicamentos Pueden aumentar el nmero de leucocitos: Alopurinol Epinefrina adrenalina Cortisona Cloroformo Heparina Quinina Triamterene Pueden disminuir el nmero de leucocitos: Antibiticos Anticonvulsivantes

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Antihistamnicos Antitiroideos Arsenicales Barbitricos Diurticos Quimioterpicos Sulfonamidas

FRMULA LEUCOCITARIA Denominacin: Poblaciones de leucocitos, Recuento de leucocitos. Definicin: La frmula de leucocitos o leucocitaria mide el porcentaje presente de cada tipo de leucocitos en el total de glbulos blancos. Al ser un porcentaje al aumentar un grupo de leucocitos disminuye otro, aunque en ocasiones solo existe un aumento o disminucin de un tipo concreto y por ello solo el porcentaje ofrece una valoracin orientativa pero se debe contar el nmero total de cada grupo para saber cul es la variable a tomar en cuenta y estudiar. GRUPOS DE LEUCOCITOS Hay diferentes grupos de glbulos blancos, los llamados polimorfonucleares (neutrfilos, eosinfilos y basfilos) y los mononucleares (linfocitos y monocitos). Los leucocitos neutrfilos son los ms numerosos y porcentualmente los ms significativos que se encuentran. Su funcin es la fagocitosis que se entiende como si fuera una absorcin y digestin de sustancias extraas (bacterias, cuerpos extraos, tejidos, etc.). Las formas inmaduras que aparecen cuando hay un estmulo intenso medular para su produccin se llaman cayados (por la forma del ncleo); suele indicar la existencia de actividad intensa de las defensas contra infecciones por bacterias. Los leucocitos eosinfilos se llaman as por el color rojo en el que aparecen al microscopio por una tincin con eosina. Suelen estar elevados en ciertas enfermedades causadas por alergia o por infecciones parasitarias. Los basfilos suelen tener un comportamiento similar. Los leucocitos mononucleados son los linfocitos y los monocitos. Tienen un ncleo celular nico y pequeo. Sus funciones son las combatir infecciones virales y bacterianas crnicas. PARA QU SE REALIZA SU ESTUDIO La modificacin del porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos. Cuando en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los neutrfilos en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del porcentaje de los glbulos blancos polimorfonucleares. esto se denomina como "desviacin a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas. La "desviacin a la derecha" se dice cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se encuantra aumentado con respecto al de los polimorfonucleares (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), se asocia en general a enfermedades vricas. La eosinoflia, que es el aumento del porcentaje o del nmero total de eosinfilos, sugiere un cuadro alrgico o una infeccin parasitaria. El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetra y recuento leucocitario completo. Valores normales Grupo de leucocitos Neutrfilos Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos Valor % 55 a 70 % 20 a 40 % 2a8% 1a4% 0a1% Valor absoluto 2.500 a 8.000 mil/mm3 1.000 a 4.000 mil/mm3 100 a 700 mil/mm3 50 a 500 mil/mm3 25 a 100 mil/mm3

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PRACTICA: DETERMINACIN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR, EL HEMATOCRITO Y RECUENTO FORMULA DIFERENCIAL 1. PRUEBAS A EFECTUAR DURANTE LA PRCTICA. a. Toma de la muestra de sangre venosa b. Determinacin de la velocidad de sedimentacin globular (mtodo segn "Wintrobe) c. Medicin del hematocrito (micro mtodo con tubo capilar) d. Determinacin de la formula blanca diferencial 2. PROCEDIMIENTOS 2.1. TOMA DE LA MUESTRA DE SANGRE VENOSA 2.1.1. MATERIALES - Jeringa desechable de 5 mil, con aguja - Torniquete - Algodn y alcohol antisptico - Tubo de ensayo(conteniendo anticoagulante EDTA, cantidad suficiente para 5 ml de sangre) 2.1.2 2 REACTIVOS - anticoagulante EDTA: 0.1 ml de una solucin al 10%(p/v) para cada 5 ml de sangre. 2.1.3. PROCEDIMIENTO 1-Aplique el torniquete sobre el brazo de la persona voluntaria a quien se le extraer la muestra de sangre, apretndolo lo suficiente para disminuir el retomo venoso pero no tanto como para impedir la circulacin arterial. Haga que el voluntario apriete y afloje el puo varias veces. 2-Escoja una vena adecuada en el pliegue del codo y desinfecte cuidadosamente la piel sobre la vena, cuidando que el bisel de la guja quede hacia arriba. 3-Deje secar el alcohol y puncione la piel y la vena, cuidando que el bisel de la aguja quede hacia arriba. 4-Succione lentamente la sangre a la jeringa y simultneamente afloje el torniquete o si usa Vacutainer este succiona solo por el vaco que hay en el tubo. 5-Retire la aguja de la vena y aplique una torunda de algodn sobre el sitio de la puncin, ejerciendo presin moderada. 6-Sin tardanza retire la aguja de la jeringa y transfiera cuidadosamente la sangre al tubo de ensayo que contiene el anticoagulante EDTA y mezcle por inversin varias veces. Esta sangre anticoagulada es la que se utilizar en todas las determinaciones de la prctica. 7-Descarte la aguja usada en un recipiente de bioseguridad (guardin) y la jeringa y las torundas de algodn contaminadas con sangre en el recipiente color rojo destinado a material no corto punzante de riesgo biolgico. 2.2. DETERMNACIN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (v.s.g.) 2.2.1. MUESTRA -Sangre venosa anticoagulada con EDTA (aproximadamente 1,2 ml) 2.2.2 MATERIALES -Tubo de eritrosedimentacin segn Wintrobe: estos son tubos de vidrio, de 11,5 cm de largo y 3 mm de dimetro interno, con una escala en milmetros a lo largo del tubo, con el valor de los centmetros expresado en nmeros tanto en el sentido

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ascendente como descendente. Adems de usarse para la v.s.g. estos tubos pueden utilizarse para la determinacin del hematocrito mediante la tcnica macro (Wintrobe) -Cnula de Wintrobe: esta es una aguja metlica roma, de 15 cm de largo y que se utiliza para llenar con sangre los tubos de eritrosedimentacin con la ayuda de una jeringa -Jeringa de vidrio -Soporte para tubos de Wintrobe -Reloj 2.2.3. REACTIVOS Ninguno 2.2.4. PROCEDIMIENTO 1-Coloque la cnula de Wintrobe en la jeringa de vidrio. 2-Succione aproximadamente 1.5 ml de sangre anticoagulada dentro de la jeringa; manteniendo esta en posicin vertical para que las burbujas suban al cuerpo de jeringa. 3-Utilizando la jeringa con la cnula llene con sangre el tubo de Wintrobe. Para ello introduzca la cnula hasta el fondo del tubo y expulse muy lentamente la sangre de jeringa mientras que simultneamente retira la cnula hacia la boca del tubo, cuidando que no queden burbujas de aire atrapadas dentro de la columna de sangre. La cantidad de sangre finalmente colocada en el tubo debe ser la suficiente para llenarlo hasta marca "0" superior. 4-Coloque el tubo en el soporte especial para tubos de Wintrobe cuidando que quede ( estricta posicin vertical). 5-Registre el tiempo y efecte lecturas de la sedimentacin cada 15 minutos hasta completar 60 minutos, registrando estos valores en la tabla de datos del informe c prctica. 6- El valor de la sedimentacin globular es el nmero de milmetros de plasma libre de eritrocitos que se encuentra por encima de la columna de clulas sedimentadas 7- Diligencie la tabla de valores y realice una grfica colocando en las abscisas y en ordenadas el valor de la sedimentacin Nota: entre muestra y muestra de sangre es necesario lavar la jeringa de vidrio cnula de Wintrobe. primero con agua corriente y luego con solucin salina fisiolgico (solucin de NaCl 0.9% p/v). 2.3. MEDICION DEL HEMATOCRITO 2.3.1. MUESTRA -Sangre venosa anticoagulada con EDTA (aprox. 60 l) 2.3.2. MATERIALES -Tubos capilares de vidrio - Plastilina para sellar los tubos - Regla milimtrica 2.3.3. REACTIVOS Ninguno 2.3.4. EQUIPOS -Micro centrfuga para hematocrito: esta es una centrfuga de velocidad fija (14.000 rpm) que permite centrifugar los tubos capilares una vez llenados con sangre anticoagulada y sellados con plastilina 2.3.5. PROCEDIMIENTO 1-Para cada muestra llene por capilaridad, hasta aproximadamente 3/4 de su longitud, un tubo capilar con sangre anticoagulada

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2- Selle uno de los extremos del tubo con plastilina 3- Coloque los tubos en la micro centrfuga 4- Centrifugue los tubos por 5minutos y espere a que la centrfuga se detenga automticamente al final del tiempo seleccionado 5-Determine el valor del hematocrito de la siguiente manera: Altura total de la muestra dentro del tubo (mm) = 100% Altura total de la columna de clulas rojas (mm) = porcentaje de hematocrito 6-Transfiera el valor obtenido a la tabla de resultados del informe. 7-Descarte los tubos capilares usados en el recipiente de bioseguridad (guardin) Nota: este mtodo puede tambin usarse con sangre capilar obtenida por puncin lanceta. Para ello deben utilizarse tubos capilares previamente heparinizados

FISIOLOGA DE LA SANGRE - SESIN DE LABORATORIO HOJA DE INFORME Grupo:__Mesa:__Fecha:_______________ Alumnos:

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Muestra:___________________ 1. RESULTADOS DE ERITOSEDIMENTACION: Tiempo (minutos) 15 30 45 60 Sedimentacin (mm) 2. GRFICA DE ERITROSEDIMENTACION:

3. RESULTADOS DE HEMATOCRITO: Altura de la muestra (mm) Altura de la columna de clulas rojas (mm) Valor del hematocrito (%) 4. PREGUNTAS PARA RESPONDER: a. Luego de realizada la prctica, que entiende Usted por v.s.g.? b. Y por hematocrito? c. A qu variaciones fisiolgicas est sujeta la v.s.g.? d. Y a cules el hematocrito? e. Cules de los parmetros determinados le serviran a Usted para diagnosticar anemia y por qu?

DETERMINACIN DE LA FORMULA BLANCA DIFERENCIAL EN LA SANGRE 2.3.1. MUESTRA -Sangre venosa anticoagulada con EDTA (1 gota)

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2.3.2. MATERIALES -Dos lminas portaobjetos -Pipeta segn Pasteur -Goteros para colorante 2.3.3. REACTTIVOS -Colorante de Wright: que es un colorante complejo formado por una mezcla de azul de metileno y eosina junto con bicarbonato; esta mezcla es conocida como polvo Wright. El colorante, est listo para su uso, se prepara de la siguiente manera: Polvo de Wrigtj 0.1 g Glicerol 3 ml Metanol absoluto 60 ml -Buffer segn Giordano: este es un buffer fosfato usado para lograr el contraste coloracin Wrigt. Contiene: Fosfato potsico monobsico anhidro 6.63 g Fosfato sdico di bsico anhidro 2.56 g Agua destilada q.s.p. 1000 ml Ajustado a pH 6.5. 2.3.4. EQUIPOS -Microscopio de luz 2.3.5. PROCEDIMIENTO 2.3.5.1. PRIMERA ETAPA: Elaboracin y tincin del extendido de sangre 1-Mezcle por inversin el tubo de ensayo que contiene la sangre anticoagulada. 2-Usando una pipeta segn Pasteur. Coloque una gota de sangre anticoagulada, de i mm de dimetro, sobre un portaobjetos, a 1 o 2 cm de uno de los extremos. 3-Coloque la lmina sobre la mesa. 4-Para realizar el extendido se usa otra lmina portaobjetos (extendedor), de la siguiente manera: coloque el extremo angosto del extendedor sobre la superficie de la lmina con la gota de sangre, formando un ngulo diedro de unos 30 quedando la gota hacia la concavidad del ngulo y a unos 5 mm del borde del extendedor. Luego desplace lentamente el extendedor hasta tocar con su borde la gota de (inmediatamente la gota de sangre se dispersar hasta abarcar toda la longitud extremo del extendedor). A continuacin y manteniendo el ngulo de 30 se mueve extendedor, con un movimiento suave y uniforme, hacia el otro extremo del portaobjetos; con esto, la sangre queda dispersa formando un extendido sobre el portaobjetos. 5- Deje secar el extendido al aire 6- A continuacin proceda a la tincin del extendido de la siguiente manera: a. coloque la lmina con el extendido en la gradilla para coloraciones b. usando un gotero cubra completamente el extendido con colorante segn Wright c. Deje actuar el colorante durante 3 minutos d) A continuacin y sin retirar el colorante, adicione una cantidad similar de fosfato segn Giordano sobre el colorante, cuidando de no causar la salida de este del portaobjetos. e) Deje actuar la mezcla colorante-buffer por 4 minutos. f) Lave la lmina con agua corriente. g ) Deje secar completamente la lmina al aire.

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2.3.5.2. SEGUNDA ETAPA: Conteo de las poblaciones leucocitarias El conteo de las poblaciones leucocitarias en el extendido previamente teido consiste en la enumeracin de los diferentes tipos de clulas blancas presentes. Para ello: 1-Coloque la lmina en posicin sobre la platina del microscopio. 2-Examine al microscopio el frotis, usando primero el objetivo 10X; observe la distribucin general de las clulas y la proporcin de leucocitos con respecto a los eritrocitos. 3-Usando el objetivo 100X de inmersin en aceite, examine cuidadosamente los diversos tipos de leucocitos en el frotis; una vez se haya familiarizado con caractersticas especficas de cada tipo, cuente 100 leucocitos, apuntando en la hoja de informe su clasificacin en cada una de las clases de leucocitos. 4-La frmula blanca diferencial o recuento diferencial queda constituido por la proporcin, expresada en porcentaje de cada una de las clases de leucocitos presentes la muestra.

No. 2 HOJA DE INFORME: Grupo:__ Mesa:_ Fecha:______ Alumnos: 1. RESULTADOS DEL RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS: Tipo de leucocito Nmero Neutrfilo segmentado Neutro tilo en banda

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Eosinfilo Basfilo Linfocito Monocito TOTAL 100 2. PREGUNTAS PARA RESPONDER: a) Luego de realizada la prctica, qu entiende Usted por recuento leucocitario? c) Qu entiende por "frmula blanca diferencial"? d) A qu variaciones fisiolgicas esta sujeta la frmula blanca diferencial? e) Qu significan los siguientes trminos? - Leucocitosis: - Leucopenia: - Neutrofilia: - Neutropenia: - Eosinofilia: - Linfocitosis: - Linfopenia__