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TALLER DE BIOQUMICA GENERAL

TEMA: ENZIMAS

JOS ANTONIO RUBIO ARRIETA JOS FERNANDO BERROCAL OVER CAVADIA JOS MANUEL HERAZO

UNIVERSIDAD DE CRDOBA FACULTAD DE INGENIERAS

INGENIERA DE ALIMENTOS SEDE BERASTEGUI 2013

Cul es la estructura qumica de las enzimas.

Las enzimas son biocatalizadores porque regulan la mayor parte de las reacciones metablicas de las clulas. Qumicamente son casi todas protenas. Segn su composicin qumica se pueden distinguir dos tipos de enzimas: Ribosomas: Son enzimas de ARN capaces de catalizar la unin o separacin de ribonucletidos de una cadena de ARN. Enzimas proteicas: La inmensa mayora de las enzimas son protenas de forma globular, solubles en agua (salvo muy raras excepciones) y con gran difusibilidad en los medios lquidos de los organismos. Pueden ser: a) Enzimas que son estrictamente proteicas, es decir formadas exclusivamente por aminocidos. Este tipo de enzimas son poco frecuentes, ejemplos son la ribonucleasa y la lisozima. b) Holoenzimas, formadas por una parte proteica a la que se llama apoenzima y otra parte de naturaleza no proteica que puede ser de naturaleza inorgnica, en cuyo caso se llama cofactor o bien de naturaleza orgnica y entonces se llama coenzima. Tanto la apoenzima como la coenzima son inactivas por s mismas y tienen que estar unidas mediante enlaces para que la enzima (holoenzima) sea activa. [1]

Sitio activo de una encima

El sitio activo de una enzima, tambin llamado centro activo, es la zona de la enzima a al cual se une el sustrato, para que la reaccin se produzca. Las enzimas son protenas. Ciertas caractersticas en su estructura terciaria son las que determinan la forma del sitio activo de la enzima, y por lo tanto delimitan los sustratos sobre los cuales la enzima podr actuar. Dicho de otra manera, la estructura tridimensional de la enzima determina tambin la estructura del sitio activo, y le brinda especificidad a la enzima, que slo podr actuar sobre ciertos sustratos: aquellos capaces de unirse a su sitio activo.

Muchas veces, el sitio activo tiene la forma de una hendidura o una cavidad en la estructura de la enzima. El sitio activo suele estar formado por cadenas laterales de residuos especficos, y es por esta razn que con frecuencia tiene una estructura tridimensional distinta al resto de la enzima. La estructura y composicin del centro activo est configurado para que nicamente un determinado sustrato tenga la afinidad suficiente como para unirse a esta zona de la enzima.

Por qu tres aminocidos que forman parte del sitio activo pueden estar alejados en la estructura primaria.

Los tres aminocidos estn separados en la estructura primaria porque esta solo contiene la secuencia de estos y la cantidad de estos aminocidos que conforman una protena que se pliegan en la formacin de la estructura secundaria y luego al alcanzar su estructura tridimensional que es donde adquiere la funcionalidad y la formacin de los sitios activos como tal. Izoencimas

Isozimas o Isoenzimas son protenas con diferente estructura pero que catalizan la misma reaccin. Con frecuencia, las isoenzimas son oligomeros de diferentes cadenas peptdicas, y usualmente difieren en los mecanismos de regulacin y en las caractersticas cinticas. Desde el punto de vista fisiolgico, la existencia de isoenzimas permite que haya enzimas similares con diferentes caractersticas, personalizadas de acuerdo a los requerimientos especficos del tejido o a determinadas condiciones metablicas. Un ejemplo de las ventajas que ofrecen las isoenzimas al permitir un ajuste fino del metabolismo, en diferentes condiciones metablicas y en diferentes rganos, es el siguiente: Glucoquinasa y Hexokinasa son ejemplos tpicos de isoenzimas. De hecho, hay cuatro Hexoquinasas: I, II, III y IV. Hexokinasa I est presente en todos los tejidos, y la Hexoquinasa IV, tambin conocida como Glucoquinasa, est presente principalmente en el hgado, el pncreas y el cerebro.

Ambas enzimas catalizan la fosforilacion de la glucosa: Glucosa + ATP Glucosa 6 (P) + ADP Hexokinasa I tiene un bajo Km y es inhibida por Glucosa 6 (P). Glucokinasa no es inhibida por Glucosa 6 (P) y tiene un alto Km. Estos dos hechos indican que la actividad de Glucoquinasa depende de la disponibilidad de substrato y no de la demanda del producto. Debido a que la Glucoquinasa no es inhibida por Glucosa 6 (P). En condiciones en que la concentracin de glucosa es alta, esta enzima continua fosforilando glucosa, la cual puede ser usada para la sntesis de glucgeno en el hgado. Adems, debido a que la Glucoquinasa tiene un alto Km, su actividad no compromete el suministro de glucosa a otros rganos; en otras palabras, ya que la Glucoquinasa no es inhibida por glucosa 6 (P), si esta enzima tuviera un bajo Km, continuara convirtiendo glucosa a glucosa 6 (P) en el hgado, haciendo que la glucosa no estuviera disponible para otros rganos (recuerde que despus de las comidas, la glucosa llega primero al hgado antes que a los otros rganos, a travs del sistema porta.) Debido a que las isoenzimas tienen diferente distribucin tisular, su estudio es un importante instrumento en la determinacin del dao sufrido por rganos especficos. Ejemplos del uso diagnstico de isoenzimas son el estudio de la Lactato Deshidrogenasa y de la Creatina quinasa Deshidrogenasa Lctica (LDH) Esta enzima est formada por la asociacin de cinco cadenas peptdicas de dos diferentes tipos de monmeros: M y H. Las variantes encontradas en el ser humano son: LDH1: M M M M (abundante en el corazn, el cerebro y los eritrocitos; alrededor del 33 % de la LDH en el suero humano es de este tipo) LDH2: M M M H (abundante en el corazn, el cerebro y los eritrocitos; alrededor del 45 % de la LDH en el suero humano es de este tipo) LDH3: M M H H (abundante en el cerebro, los riones y los pulmones; constituye alrededor del 18 % de la LDH en suero humano)

LDH4: M H H H ((abundante en el hgado, musculo esqueltico y el tejido renal; constituye alrededor del 3 % de la LDH srica) LDH5: H H H H ((abundante en el tejido heptico, musculo esqueltico y el ileum; apenas hasta 1 % de la LDH del suero humano es LDH5) En el infarto del miocardio, la LDH total en suero aumenta, y debido a que el musculo cardiaco contiene ms LDH1 que LDH2, el nivel de LDH1 en suero se hace mayor que el de LDH2 entre 12 y 24 horas despus del infarto, por lo que el radio LDH1/LDH2 se hace mayor y se mantiene invertido durante varios das. Se observa un aumento de LDH5 en diversas patologas hepticas como la cirrosis, hepatitis y otras. Un aumento de LDH5 durante una enfermedad cardiaca sugiere congestin heptica secundaria.

De qu depende la especificidad de las enzimas

Las enzimas se distinguen en los catalizadores inorgnicos por su especificidad. Estos ltimos catalizan muchas reacciones; as, los iones de hidrgeno (de los cidos) que hidrolizan indistintamente protenas, grasas e hidratos de carbono. Las enzimas, sin embargo son ms especficas. Muchas de ellas catalizan solamente una reaccin qumica, mientras que otras, no tan especficas, tienen una accin bastante selectiva para atacar a cierto tipo de configuracin o de enlace: las lipasas desdoblan las grasas, las enzimas proteolticas hidrolizan las protenas. De este modo, su accin se limita a cierto tipo de sustancias. Algunas enzimas son completamente especficas; p.ej., la dipeptidasa, que no desdobla ningn dipeptido si no est libre en el grupo amino o carboxilo. Ciertas enzimas muestran estereoespecificidad; as, la forma natural de ciertos compuestos es atacada mucho ms rpidamente que en su antpoda sinttico. La Especificidad ptica: algunas enzimas actan, por ejemplo, sobre ismeros de la serie L (enzimas relacionadas con el catabolismo de aminocidos), mientras que otros actan sobre los de la serie D (los involucrados en el metabolismo de los carbohidratos).

La Especificidad del Grupo: algunas enzimas actan sobre un grupo determinado de molculas, por ejemplo, las enzimas que digieren las protenas: catalizan reacciones hidrolizando enlaces entre aminocidos especficos; sin embargo, estos enlaces sern hidrolizados en cualquier protena que los contenga y, por eso, su especificidad es relativa. La mejor descripcin que se conoce de la especificidad enzimtica es la de Emil Fischer, quin comparo el sustrato y la enzima de la cerradura de llave. Esta analoga es particularmente notable si se considera la especificidad estereoqumica de las enzimas. Una de las propiedades ms caractersticas es su alto grado de especificidad. La mayor parte de las enzimas presentan una especificidad de reaccin absoluta, esto es, catalizan tan solo un determinado tipo de reaccin. Sin embargo, algunas enzimas son capaces de catalizar ms de un tipo de reaccin. Por ejemplo, algunas peptdicas catalizan tanto la hidrlisis de los enlaces peptdicos como reacciones de transamidacin (transpeptidcido); en las ltimas, un grupo acilo (C=O) es transferido del grupo amino (NH 3) de una molcula al de otra, intercambiando aminocidos en el sustrato:

RC NHR + NH2R RC NHR + NH2R Ciertas enzimas presentan una absoluta especificidad del substrato, es decir, actan solamente sobre un compuesto. Por ejemplo, la ureasa (cuyo nombre sistemtico es el de una amidohidrolasa) que cataliza la hidrlisis de la urea, dando anhdrido carbnico y amonaco, parece ser absolutamente especfica de la urea. Una gran variedad de derivados de la urea no son afectados por dicha enzima. Otras enzimas son capaces de actuar sobre cierto nmero de compuestos que poseen un determinado grupo qumico. Por ejemplo, la fosfatasa alcalina (monoster ortofosforicohidrolasa) hidroliza diversos steres fosfricos, tales como fenilfosfato, glicerofosfato, etc. Este tipo de especificidad puede ser designado como especificidad de grupo. Muchas enzimas actan nicamente sobre uno de los ismeros pticos de un compuesto, exhibiendo, por consiguiente, especificidad estereoqumica. De modo inverso, cuando se sintetiza enzimticamente un compuesto que contiene un grupo asimtrico a partir de un precursor pticamente inactivo, solo se obtiene, normalmente, uno de los posibles ismeros pticos. Un buen ejemplo de enzima con especificidad de grupo y tambin estereoqumica es

la L-amino-cido oxidasa (L-aminocido: O 2 oxidorreductosa desaminante). Dicha enzima cataliza la oxidacin de mltiples compuestos del tipo R-CH(NH2)COOH, si bien la velocidad de la reaccin vara sensiblemente de acuerdo con la naturaleza del grupo R. La reaccin no tiene lugar cuando el grupo carboxlico (COOH) o el grupo amnico se hallan substituidos. Esta enzima tiene especificidad absoluta para los aminocidos de configuracin L. Los Daminocidos correspondientes, que no son afectados por esta enzima, son oxidados por otra enzima especfica del grupo, la D-aminocido oxidasa. La glicocola, que carece de tomo de carbono asimtrico, es totalmente indiferente a la accin de las enzimas, siendo oxidada por otra enzima distinta.[2] . Actividad enzimtica

La actividad enzimtica proporciona informacin sobre las velocidades de reaccin. Los estudios cinticos miden tambin la afinidad de las enzimas por los sustratos y los Inhibidores, y proporcionan conocimientos sobre los mecanismos de reaccin. La velocidad de la reaccin anterior es proporcional a la frecuencia con la que las Molculas reaccionantes forman el producto. La actividad especfica de una enzima, una magnitud que alcanza para controlar la Purificacin de la enzima, se define como el nmero de unidades internacionales por miligramo de protena. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, Presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. Las enzimas son catalizadores pero bioqumicos y su actividad se mide relacionando la concentracin de su sustrato y la concentracin de su producto. Esta relacin es la que nos indica que tan activa est una enzima. . Los mtodos se pueden clasificar de la siguiente manera: Segn la fase de la reaccin estudiada.

Todos los ensayos enzimticos miden el sustrato consumido o el producto generado en la reaccin durante un tiempo. Existe un gran nmero de mtodos diferentes para medir la concentracin de sustratos y productos, y muchas enzimas pueden ser ensayadas de

diferentes maneras. Habitualmente en bioqumica se estudian las reacciones catalizadas por enzima usando cuatro tipos de experimentos: Medida de la velocidad inicial.

Cuando una enzima se mezcla con un gran exceso de sustrato (a concentracin saturante), el complejo intermedio enzima-sustrato se genera en una rpida fase inicial transitoria. Despus, la reaccin llega a una cintica constante durante la cual el complejo enzimasustrato se mantiene prcticamente en cantidades invariables en el tiempo y la velocidad de reaccin es constante. La velocidad se mide en un corto periodo despus de lograr un estado cuasi-constante, que se detecta tpicamente monitorizando la acumulacin de producto durante el tiempo. Como las mediciones se efectan en un periodo muy corto y por la concentracin saturante de sustrato, puede considerarse que el sustrato libre es igual al sustrato inicial y que la velocidad medida es la mxima que la enzima puede alcanzar en las condiciones de reaccin dadas, porque no se estn dando reacciones inversas o degradacin enzimtica. Estas mediciones son las ms simples de realizar y analizar al estar relativamente libres de complicaciones, y por tanto ste el tipo de ensayo ms usado en cintica enzimtica. Medida del progreso de la curva.

En estos experimentos los parmetros cinticos se determinan a partir de expresiones de las concentraciones de las diferentes especies como funciones del tiempo. La concentracin del sustrato o del producto se mide en momentos posteriores a la rpida fase inicial y durante un tiempo lo suficientemente largo que permita a la reaccin acercarse al equilibrio. Este tipo de ensayos se intenta evitar por el error matemtico que se puede introducir y es cada vez menos practicado, pero fue muy ampliamente utilizado en los primeros periodos del estudio de la cintica enzimtica. Medida de la fase transitoria.

En estos experimentos se observa el comportamiento de la reaccin durante la rpida fase inicial transitoria en la que el complejo molecular intermedio llega a un periodo cintico constante. stos son los ensayos ms difciles de realizar porque requieren el uso de tcnicas de mezclado y medicin realmente rpidas.

Experimentos en la fase de equilibrio.

En estos experimentos se perturba una mezcla de enzima, sustrato y producto que ha alcanzado el equilibrio qumico, por ejemplo cambiando la temperatura, la presin o el pH, y se estudia cmo regresa la mezcla al equilibrio. El anlisis de estos experimentos requiere que la reaccin sea reversible. Adems, estos experimentos son relativamente insensibles a detalles mecansticos y por lo tanto no suelen usarse para la identificacin de mecanismos de reaccin. Segn el seguimiento de la reaccin

Los ensayos enzimticos pueden dividirse en dos grupos segn la manera en que se sigue la medicin. Por una parte estn los ensayos continuos, en los que el mtodo ofrece una lectura continua de la actividad monitorizando a tiempo real el sustrato consumido o el producto generado. Por otra parte existen ensayos discontinuos, en los que la reaccin se detiene en un punto y se mide la concentracin de los sustratos o los productos. Ensayos continuos

Son los ms convenientes, al obtener simplemente con el ensayo la velocidad de la reaccin, sin necesitar trabajo adicional. Hay muchos tipos diferentes. Espectrofotomtricos

En los ensayos espectrofotomtricos puede seguirse el curso de una reaccin observando cmo cambia la luz absorbida por la solucin en la que se est dando la reaccin. Para poder utilizar un ensayo de este tipo debe haber entre los sustratos o los productos alguno que absorba luz a una longitud de onda determinada, y que sea la nica molcula de la mezcla de reaccin que lo hace a la misma; de esta forma, se puede observar el aumento o la disminucin de la absorbancia a dicha longitud de onda. Cuando la luz absorbida se encuentra en el espectro visible es posible observar un cambio en el color de la muestra, y entonces hablamos de mtodo colorimtrico. Tambin es usual el uso de la luz ultravioleta (luz UV), especialmente porque sirve para monitorizar reacciones en las que participan NADH y NADPH, coenzimas que participan en infinidad de reacciones bioqumicas y que absorben luz UV en forma reducida (NADH y NADPH) pero no en forma oxidada (NAD + y NADP+). As, la actividad de una

oxidorreductasa que use NADH como coenzima puede ser monitorizada siguiendo el descenso de la absorbancia a 340 nm a medida que se consume el NADH. Ensayos directos y acoplados

Incluso cuando la reaccin enzimtica a estudiar no provoca ningn cambio de absorbancia o sta no es especfica, pueden usarse ensayo espectrofotomtricos para la enzima realizando un ensayo acoplado. En ste, el producto de la reaccin a estudiar se usa como sustrato de una segunda reaccin, que ha de ser de fcil seguimiento y cuyos otros sustratos, coenzimas y enzimas deben encontrarse a concentraciones saturantes para que la velocidad de la segunda reaccin sea la mxima. Fluorimtricos

En el fenmeno de la fluorescencia una molcula emite luz de una longitud de onda determinada tras absorber luz a otra longitud de onda. Los ensayos fluorimtricos usan la diferencia en la fluorescencia entre producto y sustrato para medir la reaccin enzimtica. Estos ensayos son generalmente mucho ms sensibles que los espectromtricos, ya que son ms especficos al tener que utilizar dos longitudes de onda en lugar de una, pero pueden sufrir ms interferencias por impurezas presentes en el medio o por la inestabilidad que muchos compuestos fluorescenten presentan al ser expuestos a la luz. Un ejemplo de estos ensayos es, una vez ms, el uso de las coenzimas NADH y NADPH. En este caso, las formas reducidas son fluorescentes y las oxidadas no. Las reacciones de oxidacin pueden, por tanto, ser seguidas por el descenso de la intensidad de fluorescencia, y las de reduccin por el aumento. Tambin existen sustratos sintticos que liberan un fluorforo en reacciones catalizadas por enzima, como por ejemplo el 4-metilumbeliferil--Dglucurnido para ensayar la -galactosidasa. Calorimtricos

La calorimetra es la medida del calor liberado o absorbido por una reaccin qumica. Estos ensayos son muy generales, ya que muchsimas reacciones llevan asociado algn cambio de calor y utilizando un microcalormetro no es necesario utilizar grandes cantidades de enzima o sustrato. Estos ensayos pueden ser usados para medir reacciones imposibles de medir con otros mtodos.

Quimioluminiscencia

La quimioluminiscencia es la emisin de luz por una reaccin qumica. Algunas reacciones enzimticas producen luz y sta puede ser medida para detectar la formacin de producto. Estos tipos de ensayo pueden ser extremadamente sensibles, ya que la luz producida puede ser registrada en una pelcula fotogrfica por das e incluso semanas, pero al mismo tiempo son de difcil cuantificacin, porque no toda la luz emitida por la reaccin ser detectada. La deteccin de la peroxidasa de rbano por quimioluminiscencia enzimtica (ECL, enzymatic chemiluminiscence) es un mtodo comn para detectar anticuerpos en el western blot. Otro ejemplo de quimioluminiscencia es la luciferasa, enzima presente en las lucirnagas que produce luz de forma natural a partir de su sustrato, luciferina. Ensayos discontinuos

En un ensayo discontinuo se toman muestras de una reaccin enzimtica en intervalos y se mide en ellas la cantidad de producto formado o sustrato consumido.

Radiomtricos

En los ensayos radiomtricos se mide la incorporacin de radiactividad en los sustratos o su liberacin desde sustratos. Los radioistopos ms usados en estos ensayos son 14C, 32P, 35S y 125I. Como los istopos radiactivos permiten el marcaje de un slo tomo de un sustrato, estos ensayos son extremadamente sensibles y especficos. Son frecuentemente utilizados en bioqumica y son a menudo la nica manera de medir una reaccin especfica en extractos crudos (mezclas complejas de las enzimas liberadas al lisar clulas). En estos procedimientos la radiactividad es normalmente medida en contadores de centelleo. Cromatogrficos

En los ensayos cromatogrficos se mide la formacin de producto separando los componentes de la mezcla de reaccin por cromatografa. Normalmente se lleva a cabo mediante HPLC. Aunque esta aproximacin puede requerir grandes cantidades de material de partida, su sensibilidad puede incrementarse mediante marcaje radiactivo de los sustratos o los productos.

Influencia de la temperatura en la velocidad de las reacciones enzimticas

Todas las enzimas trabajan en un rango de temperaturas especficas del organismo al que pertenecen. Los aumentos de temperatura generalmente provocan un incremento de la velocidad de reaccin. Esto se debe a alteraciones de la estructura de la protena debidas a la interrupcin de uniones inicas que resultan en la estabilizacin de la estructura tridimensional de la enzima. La temperatura ptima de las enzimas humanas se encuentra generalmente entre los 35 y los 40 C; la temperatura media del organismo del ser humano es 37 C. As, las enzimas humanas comientzan a desnaturalizarse rpidamente a partir de los 40 C. En cambio, las enzimas de las arqueas termfilas, que se encuentran en manantiales calientes, son estables hasta a 100 C Sin embargo, la idea de una velocidad "ptima" para una reaccin enzimtica es engaosa, ya que la velocidad observada a cualquier temperatura es el producto de dos velocidades, la velocidad de reaccin y la velocidad de desnaturalizacin. Si se usase un ensayo para medir esta segunda actividad por segundo, la velocidad sera alta a altas temperaturas, y usando un ensayo para cuantificar la formacin de producto sta sera baja a esas temperaturas. En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima (Figura de la derecha). Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

[3] Influencia del pH en la actividad enzimtica

Solo se logran distinguir dos encimas una que su conformacin es ms adecuada a pH bajos y otra que su actividad aumenta a pH altos en donde se puede observar que las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. Con respecto siguiente grafico responda al

Qu tipo de informacin proporciona.

En la figura se puede observar la tpica evolucin de una curva obtenida en un ensayo enzimtico. Inicialmente, la enzima transforma el sustrato en producto siguiendo un comportamiento lineal. A medida que avanza la reaccin, se va agotando la cantidad de sustrato y va disminuyendo la cantidad de producto que se genera por unidad de tiempo (disminuye la velocidad de la reaccin), lo que se manifiesta en forma de curva asinttica en la grfica. La informacin que se obtiene de la grfica son las siguientes Se puede obtener la velocidad de la reaccin La cantidad de producto formado Cantidad de tiempo empleado para consumir cierta cantidad de reactivo. Se puede evaluar Km Se puede hallar la velocidad mxima y la velocidad promedio de la reaccin catalizada. Como se hara la construccin de esta grafica

El mtodo ms apropiado sera el de medida del progreso de la curva. Para estos experimentos los parmetros cinticos se determinan a partir de expresiones de las concentraciones de las diferentes especies como funciones del tiempo. La concentracin del

sustrato o del producto se mide en momentos posteriores a la rpida fase inicial y durante un tiempo lo suficientemente largo que permita a la reaccin acercarse al equilibrio. A que se le denomina enzima michaeliana. Protenas con estructura globular terciaria. Poseen un sitio activo que es donde se introduce el sustrato y donde es catalizada la reaccin. Las enzimas son especficas para los sustratos. ste se une al sitio activo REVERSIBLMENTE a travs de interacciones de tipo intermolecular (dbiles) y producen el siguiente graficas del siguiente tipo.

Seale el Km Vmax Para y

en la

grafico

determinar los

parmetros segn el modelo de Michael menten en ausencia y en presencia de un inhibidor no competitivo el se obtuvo siguiente

grfico. Con respecto a esto explique.

Como se denomina dicho grfico. Se denomina grafico de lineweaver-burk

Indique cul de las recta es la corresponde a la ausencia o presencia de dos concentraciones diferentes de inhibidores.

La grafica de abajo es la que no tiene inhibidor puesto que su velocidad es mayor La segn presenta menor cantidad de inhibidor y la tercera recta la de mayor pendiente presenta la mayor concentracin de inhibidor. Esto se debe a que la intercepcin de las grficas con el eje y corresponde al inverso de la velocidad lo que indica que entre menor sea este valor mayor ser la velocidad de reaccin de la encima. Escriba la reaccin catalizada por la lactato deshidrogenasa

Indique a la clase que pertenece cada una de las siguientes enzimas

glucosa fosfatoisomerasa La glucosa-6-fosfato isomerasa (EC 5.3.1.9) es una enzima, presente en gran parte de los seres vivos; cataliza la reaccin reversible de glucosa-6-fosfato a fructosa-6-fosfato. En el citoplasma, forma parte de las rutas metablicas de la gluclisis y lagluconeognesis, y en la matriz extracelular funciona como factor neurotrfico para cierto tipo de neuronas. La reaccin es la siguiente:

Glucosa-6-fosfato

Fructosa-6-fosfato

Fosfofructoquinasa

hay dos tipos Fosfofructoquinasa-1 (PFK-1, de Phosphofructokinase-1) (EC 2.7.1.11) es la principal enzima reguladora de la gluclisis. Es una enzima alostrica compuesta de cuatro subunidades y controlada por varios activadores e inhibidores. PFK-1 cataliza la fosforilacin de la fructosa-6-fosfato con gasto de una molcula de ATP para formar fructosa 1,6bisfosfato y ADP. Fructosa-6-fosfato + ATP fructosa-1,6-bisfosfato + ADP La fosfofructoquinasa-2 (PFK2) o 6-fosfofructo-2-kinasa (EC 2.7.1.105) es una enzima responsable de la regulacin de la velocidad de la gliclisis y la gluconeognesis en el cuerpo humano. Tambin tiene actividad fosfatasa correspondiente a lafructosa-2,6-bisfosfato 2-fosfatasa (nmero EC 3.1.3.46). Las reacciones catalizadas son: Actividad quinasa: fructosa-6-fosfato + ATP fructosa-2,6-bisfosfato + ADP fructosa-6-fosfato + fosfato Actividad fosfatasa: fructosa-2,6-bisfosfato + H2O sucinil-COA sintetasa. La succinil-CoA sintetasa (SCS) o succinato-CoA ligasa es una enzima que cataliza la reaccin reversible desde succinato a succinil-CoA. Para la realizacin de esta reaccin consume un nucletido-trifosfato (ATP o GTP). Por ello se distinguen dos enzimas diferentes: Formadora de GDP (EC 6.2.1.4): succinato + CoA + GTP Formadora de ADP (EC 6.2.1.5): succinato + CoA + ATP succinil-CoA + fosfato + GDP succinil-CoA + fosfato + ATP

Esta enzima juega un papel importante como uno de los catalizadores que participan en el ciclo de Krebs, una metablica central en el metabolismo celular. Lipasa. EC.3.1.1.3 La lipasa pancretica es una enzima que se produce en el pncreas y se secreta en el intestino delgado donde ayuda a descomponer las grasas (lpidos) que comemos para convertirlas en cidos grasos y glicerol. Fumarato hidratasa. La fumarasa (FH) o fumarato hidratasa (EC 4.2.1.2) es una enzima que cataliza la reaccin reversible dehidratacin/deshidratacin del fumarato a S-malato.

Figura 1. Conversin del fumarato a S-malato. La fumarasa pertenece a la familia de las liasas, especficamente a las hidroliasas, que rompen enlaces carbono-oxgeno. citocromo oxidasa. La enzima citocromo c oxidasa o complejo IV (nmero EC 1.9.3.1) es una protena transmembrana que se encuentra incluida en bicapas lipdicas de bacterias y en mitocondrias. Se trata de la ltima enzima de la cadena de transporte de electrones, recibiendo un electrn de cada uno de las cuatro molculas de citocromo c; despus, los transfiere a una molcula de oxgeno, reducindola a dos molculas de agua. Acoplada a este proceso, se produce una translocacin de protones a travs de la membrana, lo cual genera un gradiente electroqumico que la enzima ATP sintasa emplea para sintetizar adenosn trifosfato(ATP) La tripsina es una enzima muy activa en la hidrolisis de numerosas protenas. Las clulas pancreticas producen la tripsina, la secretan en forma de precursor tripsinogeno-inacctivo seale porque razn estas clulas no secretas tripsina libre.

Si estos enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal. Es necesario que los residuos de aminocidos del sitio activo se encuentren muy cerca en la estructura primaria? Explique su respuesta.

No es necesario puesto que estos se pueden unir durante las otras etapas de formacin de una protena.

Describa el tipo de general de reaccin bioqumica que requiere de cada una de las siguientes coenzimas.

Pirofosfato de tiamina.

Su forma activa, el pirofosfato de tiamina o difosfato de tiamina, es sintetizado por la enzima tiamina-pirofosfoquinasa, la cual requiere tiamina libre, magnesio y ATP (Trifosfato de adenosina), acta como coenzima en el metabolismo de los hidratos de carbono, permitiendo metabolizar el cido pirvico o el cido alfa-cetoglutrico. Adems participa en la sntesis de sustancias que regulan el sistema nervioso. Las enzimas de la va son la fosfopentosa isomerasa; la fosfopentosa epmerasa; la transcetolasa (su coenzima es la tiamina pirofosfato, un derivado de la tiamina) y latransaldolasa.

Figura: formacin de la coenzima tiamina pirofosfato

Estas reacciones permiten que la ribulosa 5-fosfato (producida en la parte oxidativa de la va) pueda ser convertida en ribosa 5-fosfato, necesaria para la sntesis de nucletidos; o bien intermediarios de la gluclisis, como la fructosa-6-fosfato y el gliceraldehdo 3-fosfato. Por tanto, la va de las penosas fosfato no es un ciclo aislado y repetitivo, est integrado a la gluclisis. La parte no oxidativa de la va de las penosas fosfato est controlada

principalmente por el aporte de intermediarios. La nica coenzima necesaria en esta parte de la va es la tiamina pirofosfato en la reaccin de la transcetolasa. Fosfato de piridozal.

La coenzima que contiene un aldehdo, el fosfato de piridoxal (PLP) que es un derivado de la piridoxina (vitamina B6).

Para transportar al grupo amino, las aminotransferasas requieren de la participacin de esta coenzima

Dinucleotido de nicotinamida adenina.

El dinucletido de nicotinamida y adenina, ms conocido como nicotinamida adenina dinucletido (abreviado NAD+ en su forma oxidada y NADH en su forma reducida), es una coenzima encontrada en clulas vivas y compuesta por un dinucletido, ya que est formada por dos nucletidos unidos a travs de sus grupos fosfatos, siendo uno de ellos una base de adenina y el otro de nicotinamida. Su funcin principal es el intercambio de electrones e hidrogeniones en la produccin de energa de todas las clulas. En el metabolismo, el NAD+ est implicado en reacciones de reduccin-oxidacin, llevando los electrones de una a otra. Debido a esto, la coenzima se encuentra en dos formas: como un agente oxidante, que acepta electrones de otras molculas. Actuando de ese modo da como resultado la segunda forma de la coenzima, el NADH, la especie reducida del NAD+, y puede ser usado como agente reductor para donar electrones. Las reacciones de transferencia de electrones son la principal funcin del NAD+, que tambin se emplea en otros procesos celulares, siendo el ms notable su actuacin como sustrato de enzimas que adicionan o eliminan grupos qumicos de las protenas en las modificaciones postraduccionales

Describa que tipo de enzimas se le aaden a los detergentes para disolver mancha de sangre, catalticos y los sitios activos de una enzima alosterica.

Las enzimas utilizadas en los detergente para remover las manchas de sangre, huevo, leche o hierba es la Enzimas de la proteasa Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T (Figura inferior):

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos (Figura inferior izquierda).

Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos. Si estos moduladores actan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores alostricos (Figura superior derecha) . La accin cataltica de una encima sucede con el sustrato unido con el sitio activo cmo puede alterarse la actividad cataltica del sitio activo por la unin de otro tipo de compuestos en un sitio activo distante de dicho sitio activo? Esto puede suceder por que los inhibidores suelen contener grupos funcionales reactivos como mostazas nitrogenadas, aldehdos, haloalcanos o alquenos. Estos grupos electroflicos reaccionan con las cadenas de aminocidos para formar uniones covalentes. Los residuos modificados son aquellos que contienen en sus cadenas laterales nuclefilos como por ejemplo un grupo hidroxilo o un grupo sulfhidrilo. Esto incluye a los aminocidos serina

(como en el DFP ), cistena, treonina o tirosina causando la modificacin del sitio activo o afectando la especificidad de las enzimas. Compare y contraste las caractersticas de os cuatro tipos de regulacin como lo son: alosterismo, modificacin covalente, ruptura proteolica e isoenzima. Modificacin covalente Ruptura proteolica dos Isoenzima distinta funciones similares en

Alosterismo Se adoptan

pasan de una forma Las enzimas no son Estructura con ms activa unindose sino grupo qumico como que un formas biolgicas

formas conformaciones interconvertibles. moduladores

o menos activa a otra sintetizadas como tal pero covalentemente a un inactivas pequeo tamao como de el Pi o el AMP

luego que se traduce en cambios ataque sus propiedades.

de son activadas atreves ligeros hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos.

positivos. El propio sustrato menudo modulador es a

un Tambin se da el caso positivo. inverso, en el que un al liberar

Las molculas que enzima muy activo se favorecen la forma R desactiva pero que sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos moduladores negativos. Si estos moduladores actan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores alostricos actan algn grupo qumico

Explique el fundamento de los modelos concertados y secuenciales para enzimas alostericas.

Modelo alosterico concertado. Es la regulacin de una enzima u otra protena ligando una molcula efectora en el sitio alostrico de la protena (otro sitio que no sea el sitio activo de la protena). Los efectores que aumentan la actividad de la enzima se denominan activadores alostricos y aquellos que disminuyan dicha actividad se llaman inhibidores alostricos. Modelo concertado. El modelo concertado simtrico bsicamente postula que frente al estmulo de un modificador alostrico sobre una subunidad, TODAS las SUBUNIDADES van a cambiar de conformacin, de T(tenso) a R(relajado) o de R a T dependendiendo del caso pero todas por igual. Modelo secuencial. El modelo secuencial lo que plantea es que al recibir una subunidad el estmulo de un modificador alostrico, las subunidades contiguas irn cambiando su conformacin de manera progresiva,la primera induce a la segunda a que cambie su forma [4] El metabolismo del alcohol se produce fundamentalmente en el hgado en dos pasos: al principio el etanol se oxida a acetaldehdo por la enzima alcoholdesidrogenasa (EDH) que consume NAD+ el acetaldehdo es mediana mente toxico, dado que normalmente es oxidado por el aldehdo deshidrogenasa (ADH) a acetato. El metanol tambin es un sustrato del etanol deshidrogenasa pero el producto formado que se acumula es muy toxico Una persona ingiri vino adulterado con metanol posteriormente debi ser hospitalizada como parte del tratamiento, el medico suministro un exceso de etanol cual es el fundamento de este tratamiento.

El metanol es metabolizado por la enzima alcohol deshidrogenasa, la misma que metaboliza el etanol, pero esta enzima es 22 veces ms afn por el etanol que por el metanol, razn por la cual se utiliza el etanol como antdoto de esta intoxicacin, ya que al preferir la enzima como sustrato el etanol estamos evitando la formacin de los metabolitos txicos del metanol, causante de los sntomas, los cuales son el formaldehdo y el cido frmico .

Los orientales son muy sensibles a las bebidas alcohlicas. Esto se debe a que la forma mitocondriales la enzima aldehdo deshidrogenasa. De bajo km est ausente. Estas personas solo poseen la enzima citosolica de alto km a: en base a esta informacin explique la mayor susceptibilidad de alcohol en esos individuos que son entre si las formas mitocondrial y citosolica de la enzima aldehdo deshidrogenasa El etanol contenido en cualquier bebida alcohlica es degradado por el hgado para ser posteriormente eliminado por los riones en forma de agua o por los pulmones en forma de dixido de carbono. En el interior de las clulas hepticas el etanol sufre una serie de cambios, siendo transformado en sustancias ms sencillas e inocuas que sean fcilmente eliminables gracias a la accin de unas enzimas hepticas, el alcohol deshidrogenasa y el aldehdo deshidrogenasa. El alcohol deshidrogenasa convierte el alcohol en acetaldehdo, y el aldehdo deshidrogenasa contina la cadena de reacciones para formar dixido de carbono y agua que se eliminan con la respiracin y la miccin. Existen sustancias que al ser ingeridas consiguen alterar la aldehdo- deshidrogenasa, lo que impide que el etanol se degrade de forma correcta, formndose un producto derivado del l, acetaldehdo, que no puede seguir degradndose y se acumula en el organismo. A la unin de la sustancia a esa enzima y el posterior acmulo de acetaldehdo se le denomina efecto Antabus. Poniendo un ejemplo algo grotesco, es como si hiciramos la masa de un bizcocho pero no la cociramos y la tomramos de esa forma, sin terminar de hacerse. Ese acetaldehdo es un txico que provoca malestar general, mareos y vrtigos, rubor facial, ojos rojos, palpitaciones, bajada de tensin, nuseas y vmitos. Tambin pueden aparecer sudoracin, visin borrosa y disminucin del nivel de conciencia ( una somnolencia bastante profunda, atontamiento, etc). En general lo que pasa es que se est formando aldehdos de la degradacin del etanol pero este no es transformado lo suficiente mente rpido porque el bajo km de la encima de los orientales limita la reaccin de conversin del aldehdo a dixido de carbono y agua.

Bibliografa [1] www.biologia.edu.ar/metabolismo/enzimas.htm [2] Annimo, 15 de Julio de 1972. Gran Enciclopedia RIALP, Especificidad. Editorial RIALP. S.A., Tomo 8. Bioqumica, sin fecha. Bioqumica, la Ciencia de la Vida, Enzimas. Editorial UNED. Primera edicin, 204. San Jose, Costa Rica.

Raymond E.Kirk, 1962. Enciclopedia Tecnologia qumica, Cristalales enzimasinustriales. Editorial H-A tomo 6. Pgina 987

[3] http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#t [4]http://www.mancia.org/foro/uba-bioquimica/80967-modelos-enzimas-alostericas.html