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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN Facultad De Ciencias Agropecuarias E.A.P Ing.

En Industrias Alimentarias

TEMA:
FENMENOS ONDULATORIOS

Presentado por: Oscar Hugo Chipana Condori N de matrcula: 2010-35165 Asignacin: Microbiologa Profesor: Amelia Castro Fecha de entrega: 10/02/2012

TACNA-PERU 2012

PRACITCA N1: COLORACION GRAM


I.OBJETIVOS: 1. Clasificar algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a la tincin de Gram. 2. Comprender la importancia que tienen estas tinciones para la caracterizacin e identificacin de las bacterias. III. FUNDAMENTO TEORICO Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambin conocido como murena)Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea. III. EQUIPO Y MATERIALES

Microscopio Asa de inoculacin Lminas de vidrio Alcohol-Acetona o alcohol 95o Solucin de cristal violeta Solucin de lugol Solucin de safranina Aceite de cedro Cultivos de Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus y saccharomyces cerevisae.

IV. PREPARACION DEL REACTIVO Solucin de cristal violeta: Composicin: -Cristal violeta 2gr. -Alcohol etlico a 95%...20ml. -Oxalato amnico 0,8 gr. Agua destilada 80 ml. Preparacin: -Disolver el cristal violeta en el alcohol y el oxalato amnico en el agua destilada. Mezclar las dos soluciones y esperar 24 horas antes de utilizar la mezcla. Solucin de Yodo: Composicin: -Yodo 1 gr. Yoduro potsico 2 gr. Agua destilada 100 ml. Preparacin: -Triturar el yoduro potsico y el yodo juntos en un mortero aadiendo sucesivamente pequeas cantidades de agua durante la operacin. Pasar la solucin a un matraz volumtrico y enjuagar el mortero completando el volumen a 100 ml. Nota: Puede utilizarse tambin la modificacin de Gram de la solucin de Yodo deLugol. Esta solucin es la misma que la de Burke, excepto que la cantidad de agua es de 300 ml. En lugar de 100 ml. Colorante de contraste: Composicin: -Safranina 0,25 gr. -Alcohol etlico 10 ml. Agua destilada 100 ml. Preparacin: -Disolver la Safranina en el alcohol y mezclar la solucin resultante con el agua destilad.

V. PROCEDIMIENTO: 1. Limpie 2 lminas portaobjetos. Realizar en cada una un frotis de los cultivos. 2. Secar al mechero bunsen a una temperatura moderada; pasando varias veces la lmina por la llama hasta que toda el agua sea evaporada. 3. Recubrir la lmina con una solucin de cristal violeta por 1 minuto. 4. Lavar suavemente con agua 5. Recubrir con la solucin de lugol por 1 minuto. Eliminar exceso. 6. Lavar con agua para eliminar el alcohol-acetona residual. 7. Recubrir la lmina de safranina por 30 segundos. 8. Lavar suavemente con agua. 9. Secar con un papel de filtro al calor del mechero. 10. Observar al microscopio con objetivo de inmersin.(emplear aceite de cedro) VI. RESULTADOS:

Casena

Salmuera de aceituna

salmuera de ac

Yogurt normal

Levadura de pan

Pimiento

levadura de vino

Agua de encurtido

VII. OBSERVACIN Realizar una tincin de Gram: mediante esta coloracin se pueden diferenciar las bacterias tpicas del yogur (Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus), que son Gram (+), de las bacterias VIII.CONCLUSION Hemos podido reconocer a travs del mtodo de tincin Gram, en este caso se identifico bacterias y sus formas y los lactobacillos del yogurt, en nuestro caso se juntaron las bacterias de streptococcus y los lactobacilos estando unidos en el portaobjetos y diferencindose por los colores rosa y los lactobacilos eran gram positivas y de color rosa y los streptococcus eran viene la observacin del microscopio se pudo apreciar su formas bien definidas y diferenciadas. Gram +violetas y cerradas y las Gram - incoloras y abiertas. IX. BIBLIOGRAFIA Madigan, MT; Martinko J, Parker J (2004). Brock Biology of Microorganisms (10th ed.). Lippincott Williams & Wilkins. Sogaard M, Nrgaard M, Schnheyder H (2007). "First notification of positive blood cultures: high accuracy of the Gram stain report (Epub ahead of publication)". J Clin Microbiol 45: 1113. http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/Clase Procariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20G ram.pdf http://es.scribd.com/anon-833341/d/5368278-Fundamentos-de-la-tincion-deGram