Biologa celular emergente del mar: El descubrimiento de Ciclinas

Desde las primeras divisiones de la clula despus de la fertilizacin a las aberrantes divisiones que ocurren en cnceres, los bilogos han estado interesados en el ciclo de vida de la clula. La vida de una clula en divisin ha sido dividida en etapas conocidas colectivamente como ciclo celular. Mientras que estudiaban el desarrollo temprano en invertebrados marinos a principios de 1980, Joan Ruderman y Tim Hunt descubrieron los ciclinas, los cuales son importantes reguladores del ciclo celular.

Antecedentes
La pregunta de cmo un organismo se desarrolla desde un huevo fertilizado contina conduciendo a un gran cuerpo de la investigacin cientfica. Considerando que tal investigacin era clsica de la preocupacin de lo embriologistas, el desarrollo del entendimiento de la expresin de genes en 1980 trajo nuevos acercamientos para contestar esta pregunta. Uno de los acercamientos fue examinar el patrn de expresin de genes en ambos, el ovocito y el huevo nuevamente fertilizado. Ruderman y Hunt estaban entre los bilogos que llevaron este acercamiento al estudio del desarrollo temprano. Los bilogos tenan bien caracterizado el desarrollo temprano de un nmero de sistemas de invertebrados marinos. Durante los primeros tiempos del desarrollo, las clulas embrionarias crecen sincrnicamente, lo cual permiti que una poblacin entera de clulas fueran estudiadas en la misma etapa del ciclo celular. Los investigadores haban establecido que una gran porcin de mRNA en el ovocito no fertilizado no est traducido. Sobre la fertilizacin, este mRNA materno es rpidamente traducido. Los estudios anteriores haban demostrado que cuando los huevos fertilizados son tratados con drogas que inhiben la sntesis de protena, la divisin celular podra no ocurrir. Esto sugiri que la explosin inicial de la sntesis de protena del mRNA materno se requiere en las primeras etapas del desarrollo. Ruderman y Hunt, mientras enseaban un curso de fisiologa en el Laboratorio de Biologa Marina, comenzaron una serie de experimentos diseados para descubrir los genes que fueron expresados a este punto as como el mecanismo por el cual esta explosin de la sntesis de protena era controlada.

El experimento
En un proyecto de colaboracin, Ruderman y Hunt observaron la regulacin de la expresin de genes en el huevo fertilizado de almeja de espcula solidsima. Considerando que era sabido que la sntesis de protena aumenta rpidamente en la fertilizacin, ellos quisieron descubrir si las protenas expresadas en las primeras etapas del desarrollo, en el embriones de dos clulas, era diferente a las expresadas en el huevo no fertilizado. Cuando cualquiera de los ovocitos o los embriones de dos clulas de almeja son tratados con aminocidos marcados radioactivamente, la clula toma el aminocido, el cual se incorpora posteriormente en las protenas nuevamente sintetizadas. Usando esta tcnica, Ruderman y Hunt monitorearon el patrn de la sntesis de protena abriendo las clulas, separando las protenas usando electroforesis de gel SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE), luego visualizando las protenas marcadas radioactivamente por autoradiografa. Cuando compararon el patrn de sntesis de protena en el ovocito con el embrin de dos clulas, ellos vieron que tres diferentes protenas que no fueron expresadas o fueron expresadas a un nivel extremadamente bajo en el ovocito fueron altamente expresadas en el embrin. En un estudio subsecuente, Ruderman examin el patrn de la expresin de protena en los ovocitos de las estrellas de mar Asterias forbesi cuando maduran. Ella observ otra vez la expresin de tres protenas de tamao similar a los que ella y Hunt haban visto en los embriones de almeja.

Pronto, en un tercer estudio, Hunt examin los cambios en la expresin de protenas durante la maduracin yfertilizacin de ovocitos de erizos de mar. Esta vez l realiz el experimento de una manera levemente diferente. Ms que tratar los ovocitos y embriones con aminocidos marcados radioactivamente por un perodo de tiempo, l marc las clulas continuamente por ms de 2 horas, removiendo las muestras para anlisis en intervalos de 10 minutos. Tres protenas representadas por tres prominentes bandas en una autoradiografa- fueron expresadas en los embriones, pero no en los ovocitos. Interesantemente, la intensidad de una de estas bandas cambi en cierto plazo; la banda era intensa en los primeros tiempos, despus de 85 minutos era apenas visible. Aument de intensidad nuevamente entre 95 y 105 minutos. La intensidad de la banda, represent la cantidad de protena en la clula, que apareci oscilante en una cantidad de tiempo. Esto sugiri que la protena fue rpidamente degradada y luego sintetizada nuevamente. Porque el marco de tiempo del experimento coincidi con las divisiones celulares embrionarias tempranas, Hunt luego se pregunt si la sntesis y destruccin de la protena fueron correlativas con el progreso del ciclo celular. l examin una porcin de clulas de cada punto en un microscopio, contando el nmero de clulas que se dividen en cada punto donde las muestras fueron tomadas para el anlisis de protenas. Hunt relacion entonces la cantidad de protena presente en la clula con la proporcin de clulas que se dividen en cada punto. l not que el nivel de expresin de una de las protenas era ms alto que antes de que la clula se dividiera y ms bajo sobre la divisin celular (ver Figura 13.1), sugiriendo una relacin con la etapa del ciclo celular. Cuando el mismo experimento fue realizado en la almeja, Hunt observ que dos de las protenas que l y Ruderman haban descrito previamente mostraron el mismo patrn de sntesis y destruccin. Hunt llam ciclinas a estas protenas que reflejan su cambio de expresin a travs del ciclo celular.

Discusin
El descubrimiento de las cilinas anunci una explosin de la investigacin en el ciclo celular. Ahora se sabe que estas protenas regulan el ciclo celular asocindose con las ciclinas dependientes de quinasas, las cuales, alternadamente, regulan las actividades de variados factores de la transcripcin que dirigen la progresin durante el ciclo celular. Con tantos de los reguladores clave de las funciones celulares, pronto fue demostrado que las ciclinas descubiertas en erizos de mar y almejas se conservan dentro de eucariotas de hongos al hombre. Desde la identificacin de las primeras ciclinas, los cientficos han identificado al menos 15 otras ciclinas que regulan todas las fases del ciclo celular. Adems del inters de la investigacin bsica en estas protenas, el rol central de las ciclinas en la divisin celular fue un punto focal en la investigacin del cncer. Las ciclinas estn implicadas en la regulacin de varios genes que se sabe que cumplen un rol importante en el desarrollo de tumores. Los cientficos demostraron que por lo menos esa ciclina, la ciclina D1, es sobre-expresada en un nmero de tumores. El rol de estas protenas en la divisin de clulas normales y aberrantes (con aberrante se refiere a divisiones celulares que causan tumores) continua siendo un campo activo y emocionante de investigacin hoy en da.