cromatografa

Curso: Qumica Analtica II Loreto Ascar 2013

INTRODUCCIN
Cmo determinar un analito en una muestra problema?

Proceso Analtico

Etapas de un anlisis cuantitativo

Eleccin del mtodo

Obtencin de la muestra
Procesamiento de la muestra Solubilizar la muestra Separacin del Analito de interferencias Medir la propiedad Resultados

Separacin de analitos
Mtodos clsicos Precipitacin Destilacin extraccin
Mtodos Instrumentales

Cromatografa Electroforesis

Comienzos de la cromatografa
Mikhail Tswett, 1903 Separacin de pigmentos vegetales

CaCO3

Del griego: Chroma color graphein escribir

La cromatografa es la ciencia y el arte de separar entre s los componentes de una mezcla

Fase Mvil Muestra A+B+C

IUPAC Definicin de Cromatografa (1993)

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a ser separados se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria mientras que la otra se mueve en una direccin definida
C B A

Fase Estacionaria

Movimiento de la Fase Mvil

Cromatograma Componentes separados Componentes Eluidos Detector

Muestra

Solvente pasando continuamente

Componentes:
Fase estacionaria (fe): Puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta como soporte de gran rea superficial Fase mvil (fm): Gas, lquido o fluido supercrtico, que se hace pasar a travs de la fe. Es el portador de la muestra.

Matriz de la columna

Componentes separados

trB > trA

Aplicacin de la cromatografa a compuestos no coloreados, mediante el uso de detectores

Dilucin del analito

Detectores ms sensibles

tR

Seal detector
tm

Tiempo de retencin Inyeccin

tR: indica la posicin de la seal y sirve para identificar los componentes de la muestra El rea bajo la curva es un parmetro que se puede relacionar con la concentracin

Determinacin cuantitativa

Respuesta

Seal detector

x x x x x x

t1

Tiempo

Concentracin

Determinacin cuantitativa
Se requiere determinar la concentracin de un analito A en una muestra problema
A (mg L-1)
3.0 9.0 18.0 27.0 36.0 45.0 Muestra problema

Area
137966 399357 969969 1493236 1973723 2437518 1284589
3,0E+06 2,5E+06

y = 478404x - 439118 R = 0,9937

2,0E+06
1,5E+06 1,0E+06 5,0E+05 0,0E+00 3.0 9.0 18.0 27.0 36.0 45.0

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS CROMATOGRFICOS

De acuerdo al tipo de contacto existente entre las 2 fases involucradas

Superficie Plana

Columna

Capa Fina (TLC) En papel (PC) Electrocromatografa (EC)

De gases Lquida Fluidos supercriticos

GASES

FLUIDO SUPERCRITICO

LIQUIDO

CROMATOGRAFIA GAS - SOLIDO

CROMATOGRAFIA GAS - LIQUIDO LSC

COLUMNA

PLANAR

BPC

IEC
GPC

SEC
GFC

TLC

PC

BPC - RP
LSC : Cromatografa slido-lquido o de adsorcin BPC : Cromatografa de fase enlazada IEC : Cromatografa de intercambio inico SEC : Cromatografa de exclusin por tamaos

BPC - NP

BPC-RP : Cromatografa de reparto de fase inversa

BPC-NP : Cromatografa de reparto de fase normal

GPC : Cromatografa de permeacin en gel GFC : Cromatografa de filtracin en gel

Velocidad de migracin y ensanchamiento de banda

Especie B es ms retenida que especie A Al avanzar en la columna se produce un ensanchamiento de banda

Velocidad de migracin y ensanchamiento de banda

b
Seal del detector

c Tiempo

Tiempo de retencin

tR: tiempo de retencin, corresponde al tiempo que transcurre desde la inyeccin de la muestra hasta que llega al detector tM: tiempo muerto, corresponde al tiempo que demora una especie que no es retenida : Velocidad promedio lineal

VELOCIDAD DE MIGRACIN DE LOS SOLUTOS

La eficacia en la separacin cromatogrfica depende de la velocidad relativa con la que eluyen ambas especies, las que estn determinadas por la magnitud de las constantes de equilibrio con las que se distribuyen ambas especies en las respectivas fases (estacionaria y mvil)

A mvil = A estacionaria B mvil = B estacionaria

K: Cte de distribucin, razn de distribucin o coef. de distribucin Cs : Concentracin molar del soluto en la fase estacionaria CM : Concentracin molar del soluto en la fase mvil
Idealmente, k debe ser constante en un amplio rango de concentraciones Picos simtricos

Factor de retencin o factor de capacidad (K`A)

Parmetro que da cuenta de la velocidad con que el analito difunde en la columna

: Ideal entre 2 y 10 VS y VM : volumen de la fase estacionaria y mvil

Factor de selectividad ()

Resolucin de la columna

2 compuestos A y B fueron separados por cromatografa con tiempos de retencin de 370 y 385s respectivamente y W de 16,0 y 17,0s. Un analito no retenido present un tiempo de 10,0s. Calcular K`A, K`B, y Rs

Ensanchamiento de las seales

Teora de los Platos tericos Teora Cintica

TEORA DE LOS PLATOS TERICOS

Columna compuesta por una serie de capas horizontales, estrechas y continuas separadas, llamadas platos tericos
En cada plato tiene lugar un equilibrio del soluto entre la fase mvil y la fase estacionaria El movimiento del soluto y del disolvente es una serie de transferencias sucesivas entre un plato y otro

Eficiencia de la columna
N: nmero de platos tericos H: altura de los platos tericos L: longitud de la columna

2: Varianza de una medida

Esta teora explica la forma gaussiana de los picos cromatogrficos y la velocidad de desplazamiento a travs de la columna, pero considera que se producen equilibrios en los platos tericos situacin que no es posible debido al movimiento de la fase mvil.

Determinacin experimental de H y N

Determinacin experimental de H y N

2 compuestos A y B fueron separados por cromatografa con tiempos de retencin de 370 y 385s respectivamente y W de 16,0 y 17,0s. Un analito no retenido present un tiempo de 10,0s. Calcular H y N, para una columna de 20 cm de largo.

TEORA CINTICA
Esta teora describe con xito los efectos de las variables que afectan el ancho de la banda de elusin. El ensanchamiento de banda se produce como consecuencia de la velocidad finita con la que ocurren los diferentes procesos de transferencia de masa durante la migracin de una especie en el interior de una columna

Ecuacin de van Deemter

Lquida

Gases

Ecuacin de van Deemter

H: altura de plato, cm
: velocidad lineal de la fase mvil, cm s-1. A: Camino mltiple B: Difusin longitudinal C: Transferencia de masa entre las fases

Camino mltiple (A), Difusin en remolino o de Eddy

dp: dimetro de las partculas de relleno, cm : Es el factor de empaque

Est relacionada con el tamao de las partculas, la geometra y lo compacto del empaque A menor velocidad de flujo, la mayora de las partculas prueban muchos caminos, llegando en promedio muy prximas al valor medio, no originando ensanchamiento de banda

Difusin longitudinal (B/)

Migracin de las molculas o iones desde la zona ms concentrada hacia las mas diluidas

DM: coeficiente de difusin en la fase mvil (cm2 s-1), para gases es mayor que para lquidos : factor de obstruccin

A menor flujo de la fase mvil incrementa el ensanchamiento, debido a que el analito tiene ms tiempo para realizar difusin

B = 2DM
Donde es el factor de obstrucin, una medida que da cuenta del impedimento de la difusin molecular libre causada por la presencia de las partculas de la fase estacionaria El ensanchamiento, debido a la difusin longitudinal, puede reducirse disminuyendo la temperatura y aumentando la velocidad de flujo

Transferencia de masa fuera del equilibrio (CS y CM)

C = (Cs +CM)
K`: factor de retencin
df: grosor de la pelcula de soporte, cm

DS: coef. de difusin del soluto en la fase estacionaria, cm2 s-1

Dp : dimetro de las partculas DM: coef. de difusin del soluto en la fase mvil, cm2 s-1

Si la velocidad de flujo de la fase mvil es alta no se logra alcanzar un verdadero equilibrio entre las fases
A menor velocidad de flujo hay ms tiempo disponible para alcanzar el equilibrio El termino C depender de la transferencia de masa en la fase estacionaria y la velocidad de la fase mvil

Efecto del dimetro de partculas que constituyen el relleno

Influencia de sobre H

Optimizacin de la eficacia de la columna

Se realizan variaciones de las condiciones experimentales con la finalidad de que los componentes de una mezcla se separen completamente en el menor tiempo posible