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Qumica Clnica

Manual de Prcticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermdez Chvez

PRACTINA NO________ DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) INTRODUCCION La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monosteres del cido ortofosfrico en medio alcalino. En el adulto proviene en parte del higado (termoestable) y en parte de hueso, sistema reticuloendotelial y vascular (termolabil) dando lugar a distintas izoenzimas. La actividad serica de ALP sea, en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los nios en edad de crecimiento, llegando a triplicar los niveles del adulto, debido a que esta izoenzima se localiza en los osteoblastos. Tambin es fisiolgico el aumento que se produce al final de primer trimestre de embarazo, a expensad de la izoenzima placentaria que en este periodo alcanza niveles mximos. Entre las patologas que afecta la actividad srica de ALP se pueden citar: carcinomas metastticos en higado y hueso, colestasis biliar, infarto al miocardio, pulmonar o renal. FUNDAMENTO La ALP hidroliza al p-nitrofenilfosfato, incoloro, produciendo fosftato y p-nitrofenil a pH de 9.8, la velocidad de aparicion del anion p-nitrofenolto a 405nm, es proporcional a la actividad enzimatica en la muestra. La dietanolamina regula en pH de reaccion y actua como aceptor del fosftato liberado por la fosfatasa. ALP + p-NFF PO4 + p-Nitrofenol (pH 9.8) Esta prueba se realiza en el contexto de otras pruebas hepticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GGT) y se utiliza para evaluar problemas hepticos. Suele asociarse en la elevacin de GGT excepto en problemas seos donde solo se eleva la ALP. REACTIVO Buffer DEA : dietanolamina Sustrato pNFF MUESTRA Suero MATERIAL Espectrofotmetro y cubetas Bao maria Agua destilada Pipetas Estandar de calibracin Reactivos de ALP

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PARAMETROS Longitud de onda Temperatura de reaccin Tiempo Vol final de reaccin

405nm 25, 30 o 37C 3 minutos 2.52mL

PROCEDIMIENTO Colocar en cubeta a temperatura de Reaccion: Sustrato reconstituido 2.5mL Preincubar unos minutos, despus agregar Muestra 20uL Leer absorbancia inicial en espectro a 405nm, disparar cronmetro Registrar absorbancias despus de 1,2 y 3 minutos despus de la primera lectura. Determinar la diferencia promedio de Absorbancia / min (A/min), restando cada absorbancia y obteniendo el promedio.

CALCULOS ALP (U/I) = A/min x 6812

RESULTADOS ALP= ______________ (U/I) VALORES DE REFERENCIA Adultos: Nios y adolescentes 25C = 40-190 U/I hasta 400 30C = 45-213 U/I hasta 450 37C = 65-300 U/I hasta 645 CONCLUSIONES

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PRACTICA NO. ____ DETERMINACION DE CREATININA DEPURACION DE CREATININA INTRODUCCION La determinacin de niveles sricos de creatinina, producto de la degradacin de la creatina, se utiliza como ndice de funcionalismo renal, dado que su eliminacin se efecta a travs del rin y casi exclusivamente por filtracin. FUNDAMENTO La creatinina reacciona con el picrato alcalino, segn la reaccin de Jaff, para dar un cromgeno rojizo. La cantidad de cromgeno que se forma bajo condiciones controladas, es directamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra y se mide fotomtricamente a 490-510nm. La reaccin de jaff es una reaccin no especfica para creatinina, pero las otras sustancias que reaccionan con el picrato alcalino, lo hacen durante los primeros 30 segundo de iniciada la reaccin. MATERIAL REQUERIDO Espectrofotmetro Cubetas de lectura Material volumtrico Sistema de termostatizacion (20-30C) Cronmetro PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Ajuste a cero PROCEDIMIENTO Pipetear en cubetas Estandar Muestra espectrofotomtricas: Reactivo de Trabajo 2.0mL 2.0mL Equilibrar a temperatura de trabajo y pipetear Estandar 0.4mL Muestra 0.4mL Mezclar inmediatamente y disparar el cronmetro A los 30 seg exactos de incubacin registrar las lecturas de Abs de S1 y M1. A los 5 minutos exactos de incubacion registrar las lecturas de Abs de S2 y M2. CALCULOS *SUERO Creatinina (mg/L) = (M2-M1) x f 500nm (490-510) 25C agua destilada

f= 20mg/L S2-S1

*ORINA DE 24 HORAS Creatinina (g/24h) = (M2 M1) x f

f= 0.020g/L x 50 x V S2-S1

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Donde 50 es el valor de dilucin y V= vol de diuresis en litros en 24h. *DEPURACION DE CREATININA ENDOGENA D.C.E. ml/min = RESULTADOS Creatinina en Suero ___________________mg/L Creatinina en Orina ___________________g/24h D.C.E. ___________________ml/min VALORES DE REFERENCIA Suero 8-14mg/L Orina 8-23 mg/kg / 24h DCE 80-140 ml/min CONCLUSION creatinina en orina (g/24h) Creatinina en suero (mg/L) x 694

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PRACTINA NO___ CLORO FUNDAMENTO El cloro reacciona con el tiocianato de mercurio para formar un compuesto coloreado. REACTIVO Reactivo: formado por tiocianato de mercurio, nitrato de hierro y cido nitrico. Estandar: Cloro MUESTRA Suero Plasma heparinizado Orina PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Blanco Reactivo 1mL Agua destilada 10Ul Estandar Muestra Mezclar, incubar 5 minutos Leer abosrbancias (densidad optica DO) Color final estable 1 hora. CALCULO Muestra DO Estandar DO n= 100mEq/L 100mmol/L 335mg/dL RESULTADO Cloro = ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma 98-107 mEq/L 98-107 mmol/L 348-380 mg/dL CONCLUSION x n Estandar 1mL 10uL 10uL Muestra 1mL 480nm 37C 1cm de paso de luz blanco de reactivo

orina 110-250 mEq/24h 3900-8870 mg/24h

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PRACTICA NO._____ TRIGLICERIDOS PRINCIPIO DEL METODO Los triglicridos son grasas que suministran energa a la clula, al igual el colesterol son transportados por LPL en la sangre. Una dieta alta en grasa eleva los triglicridos, cirrosis, hepatitis, obstruccin biliar, pueden estar relacionadas con esta enfermedad. Los triglicridos son incubados con LPL, liberan glicerol y cidos grasos libres, el glicerol es fosforilado por glicerofosfato deshidrogenada y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y ADP, el D3P es convertido en dihidroxifosfato y perxido de Hidrgeno por GPO. Al final el H2O2 reacciona con 4-AF y p-clorofeno por la enzima peroxidasa provocando coloracin roja. MUESTRA Suero o plasma PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura 37C o 15 a 20 C Ajustar el cero con agua destilada. 505nm

Blanco Patron Muestra R ml 1mL 1mL 1mL Patrn uL 10uL Muestra uL 10uL Mezclar Incubar 10 minutos a temperatura ambiente Leer absorbancia del calirador, de la muestra frente a blanco. Color estable 30 min. CALCULOS ABS muestra ABS Patron x 200 (conc) =__________mg / dL

RESULTADO Triglicridos = ____________mg/dL VALORES DE REFERENCIA Hombres 40 a 160 mg/dL Mujeres 35 a 165 mg /dL CONCLUSION

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PRACTICA NO._____ COLESTEROL Los esteres de colesterol se hidrolizan por la accin de la colesterol ester hidrolasa para liberar colesterol y cidos grasos. El colesterol libre exisente junto con el producido por esta reaccin se oxida por la accin de colesterol oxidasa en 4-colestenona y perxido de hidrgeno. Este ultimo, en presencia de peroxidasa, oxida el sistema cromgeno (4-aminoantipirina/fenol) en un compuesto de color rojo. PRECAUCIONES toxico! El estandar coniene 2-mettoxietanol, evitese la exposicin, nocivo por inhalacin, ingestin o contacto con la piel. Inflamable. Puede perjudicar la fertilidad, riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto. MUESTRAS Suero Plasma heparinizado PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura Cubeta Leer contra blanco de reactivo Reactivo Agua destilada Estandar Muestra Blanco 1mL 10uL 500nm (492-550) 37C 1cm de paso de luz Estandar 1ml 10uL Muestra 1mL 10uL

Mezclar, y tras una incubacin de 5 min, leer la densidad ptica (DO) El color final se mantiene estable durante 1 hora. CALCULOS Muestra DO *n = Estandar DO n= concentracin de std, 200mg/dL 2g/L 5.17mmol/DL

RESULTADO CHOL= ___________mg/dL VALORES DE REFERENCIA 150-260 mg/dL 1.5 2.6 g/L 3.87 6.71 mmol/L CONCLUSION

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PRACTINA NO______ BILIRRUBINA Significado Clnico La bilirrubina es un compuesto de degradacin de la Hemoglobina, captada por el hgado para su conjugacin y excretada en la bilis. Alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar su aumento (hiperbilirrubinemia). La determinacin de la bilirrubina srica en nios recien nacidos es de gran importancia, ya que aumenta con un consecuente riesgo de difucin al sistema nervioso, esto se debe a que en la eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recien nacido, patologa provocada por incompatibilidad materno-fetal, se produce una destruccin excesiva de glbulos rojos. Fundamento del Mtodo La bilirrubina reacciona con el cido sulfanlico diazotado originando un producto color rojovioleta (azobilirrubina), que se mide a 530nm. La bilirrubina directa reacciona con el diazorreactivo , pero la indirecta requiere de un desarrollador acuoso. De manera, que para que reaccione la Bilirrubina Total (directa e indirecta) de la muestra, es necesario agregar benzoato de cafena al medio de reaccin. Reactivos Desarrollador solucin acuosa de Benzoato de cafeina 0.13mol/L Nitrito de Sodio Reactivo Sulfanlico Bilirrubina STD (no provista) Agua destilada (no provista) Muestra Suero o Plasma heparinizado. Libre de hemolisis. Estable 48 horas de 2 a 10C. la accin de la luz puede destruir en una hora el 50% de la bilirrubina, es necesario proteger. Material Espectrofotmetro Pipetas y micropipetas Reloj Condiciones de Reaccin Longitud de Onda Temperatura de Reaccion Tiempo de Reaccin Vol Muestra Vol final de Reaccion PROCEDIMIENTO Colocar en tubos separados Blanco Muestra 200Ul Agua destilada 2.5mL Desarrolador Reactivo Sulfanlico 200uL Diazorreactivo

530nm en espectrofotmetro Ambiente 5 min 200uL 2.9mL

Directa 200uL 2.5mL 200uL

Total 200uL 2.5mL 200uL

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CALCULOS Bilirrubina Total (mg/L) = Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta (libre) Factor RESLTADOS Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta Bilirrubina Total (T B) x f (D B) x f BR Total Br Directa Calclar con en el Estandar de bilirrubina

____________mg/L ____________mg/L ____________mg/L

VALORES NORMALES Adultos Directa hasta 2mg/L Total hasta 10mg/L Recien Nacidos Sangre de cordon 24 horas 48 horas 3 a 5 dias CONCLUSION A termino 25mg/L 60mg/L 75mg/L 120mg/L prematuros 80mg/L 120mg/L 230mg/L

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PRACTICA NO.______ ELECTROLITOS EN SUERO CALCIO El calcio tiene numerosas funciones dentro del cuerpo, no solo es factor estructural de huesos y dientes sino que tambin se encuentra en la sangre y en la funcin neuromuscular. INCREMENTOS Hipercalemia se puede desarrollar en pacientes con enfermedad de Pager de hueso e hiperparatiroidismo, el incremento se debe al aumento de la reabsorcin en los huesos causada por metastasis o factor humoral producido por celulas tumorales. DECREMENTO Hipocalemia METODO Arsenazo III El Arsenazo III se combina con los iones del calcio a pH de 6.75 y forma un cromoforo coloreado cuya absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de calcio en la muestra. Arsenazo tiene alta afinidad por los iones de calcio y no muestra interferencia por los otros cationes que se encuenran en suero, plasma u orina. Reactivo El reactivo esta listo para su uso Muestra Suero, plasma heparinizada u orina. Muestra estable 7 dias a temperatura de 2 a 8C y seis meses en congelacin. PARAMETROS Longitud de Onda Volumen de la muestra Volumen de Reactivo Incubacin Concentracin STD Blanco 630nm 10/20 uL 500-1000uL 1 min a 37C 10mg/dL Reactivo STD 1000 20 20 MUESTRA 1000

PROCEDIMIENTO Pipetear dentro de BLANCO tubos marcados Reactivo 1000 Agua destilada 20 Estndar Muestra Mezclar y leer absorbancia a 630nm CALCULOS Calcio mg/dL =

ABS M / ABS STD X (Concentracin STD) =

RESULTADO Calcio = _______________mg/dL

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MAGNESIO El magnesio forma coloracion purpura al reaccionar con la calmadita en medio alcalino, proporcional a la concentracin de Mg en la muestra. Es el segundo cation mas numeroso en el organismo. Niveles altos de Mg se hallan en uremia, fallo renal o enfermedad de Addison. REACTIVOS Reactivo 1 Reactivo 2 Magnesium cal amino metil propanol - EGTA Calmagita Patron de Mg

MUESTRA Suero o plasma heparonizado libre de hemolisis, estable 7 dias a temperatura de 2 a 8C. tambien puede utilizarse orina. PROCEDIMIENTO Longitud de onda Temperatura Ajustar Pipetear en cubeta Rt Ml Patron uL Muestra uL CALCULOS ABS M / ABS P X 2 (CONC PAT) = mg / dL de Mg. RESULTADO Magnesio : _______________mg/dL Blanco 1 520 nm 371C o 15-20 con agua destilada Patron 1 10 Muestra 1 10

VALORES NORMALES Suero o plasma Orina 1.5 a 2.5 mg/ dL 24 a 244 mg /dL

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FOSFORO INTRODUCCION El fsforo es esencial para la formacin de tejido oseo y en el metabolismo energtico celular. Aprox. El 85% se encuentra en hueso y dientes. Niveles bajos se deben a hipervitaminosis D, hipertiroidismo, desordenes renales, mala absorcin. Niveles altos se atribuyen a la dieta, metstasis de huesos, alcoholismo, diarreas, alteraciones de hgado. FUNDAMENTO Mtodo para deteccin de fsforo inorgnico. El Pi reacciona en medio cido con molibdato amnico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo, de intensidad proporcional a la concentracin de Pi presente en la Muestra. REACTIVO R molibdico Phosphorus Cal MUESTRA Suero o plasma libre de hemolisis Orina PARAMETROS Longitud de onda Cubeta Temperatura Ajustar a cero 340nm 1cm 37-30-25C con agua destilada

PROCEDIMIENTO Pipetear en una cubeta Blanco Patrn Reactivo 1Ml 1mL Patrn 10uL Muestra Mezclar e incubar 5 min Leer abs Patron y Muestra frente a Blanco de Reactivo. CALCULOS Suero ABS M x 5 (conc. P) = mg/dL ABS P Orina 24h ABS M ABS P x 5 x Vol (dL) orina /24h = mg/24h

Muestra 1mL 10uL

RESULTADO Fsforo = _____________mg/dL VALORES NORMALES Suero o plasma Orina Nios 4-7mg/dL Adultos 2.5-5mg/dL 0.4-1.3g/24h

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PRACTICA NO.____ ALBUMINA FUNDAMENTO La albmina se une al azul de bromocresol a pH ligeramente cido produciendo coloracin amarilla a azul verdoso dependiendo de la concentracin de la albmina en la muestra. La albmina es una protena plasmtica importante producida por el hgado, sus niveles se alteran en enfermedades hepticas, desnutricin, dermatitis. REACTIVO Verde bromocresol pH 4.2 Patrn primario acuoso de albmina MUESTRA Suero o plasma libre de hemlisis Estable 1 mes a 2-8C. PARAMETROS Longitud de onda Temperatura Cubeta Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Blanco Patrn Muestra Reactivo 1mL 1mL 1mL Patron 5uL Muestra 5uL Mezclar, incubar 10 minutos a temperatura ambiente. Leer absorbancia de Patrn y Muestra contra blanco, color estable 1 hora. CALCULOS ABS M X 5 (conc. Patrn) = g/dL ABS P 630nm 15-25C 1cm agua destilada

RESULTADO Albmina = _______________g/dL

VALORES NORMALES 3.5 a 5 g/dL CONCLUSIONES

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PRACTICA NO.____ PROTENAS TOTALES En medio alcalino las protenas dan color violeta azulado en presencia de sales de cobre, la intensidad es proporcional a la concentracin de la protena total en la muestra. Las protenas se encuentran distribuidas en el organismo actuando estructuralmente y de transporte. Se dividen en dos fracciones: Albmina y Globulina Se deteccin es util para deteccin de: Hiperproteinemia Hipoproteinemia. REACTIVO Reactivo de Biuret T protein Cal MUESTRA Suero o plasma heparinizado. Estable un mes en nevera a 2-8C PARAMETROS Longitud de onda Cubeta Temperatura Ajustar a cero PROCEDIMIENTO Reactivo Patron Muestra 25uL Mezclar, incubar 5 min a 37C o 10 minutos a temperatura ambiente. Leer absorbancia de Patrn y Muestra contra blanco, color estable 30 min. CALCULOS Abs M Abs P x 7 (conc. P) = g/dL Blanco 1ml Patrn 1mL 25uL Muestra 1mL 540nm 1cm 37C/15-25C con agua destilada

RESULTADOS Proteinas Totales = ___________g/dL VALORES NORMALES Adultos : 6.6-8.3 g/dL Recien Nacidos : 5.2-9.1 g/dL CONCLUSIONES

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PRACTICA NO__ AST ASPARTATO AMINOTRASMINASA INTRODUCCION La AST tiene una alta concentracin en el msculo cardiaco, las clulas hepticas, las clulas msculo esqueltico y en menores grados en otros tejidos. Aunque un nivel elevado se AST en el suero no es especifico de la enfermedad heptica, se utiliza principalmente para diagnosticar y verificar el curso de esta enfermedad ( junto con otras enzimas como la ALT, ALP y bilirrubina) Tambien se ha usado para monitorear a los pacientes con los ataque cardiacos, pero es mucho menos especifica que los izo enzimas CPK y DHL para este propsito. MUESTRA Suero sin hemolisis Plasma EDTA Reactivo 1 L- aspartato LDH Acida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica

PARAMETROS 340 nm longitud de onda 30-37C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada

PROCEDIMIENTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra 1 ml 100 ul

Mezclar uncubar un minuto, medir cambio de densidad ptica durante 3 min. Procedimiento de dos reactivos Reactivo 1 1mL Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto Reactivo 2 100uL Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica. CALCULOS 340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 334mn : actividad U/L = cambio DO/ min x 365mn : actividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADO AST = _______________ U/L VALORES NORMALES 30C hasta 30 U/L 37C hasta 46 U/L CONCLUSION: Un reactivo 2 reactivos 1.746 1.780 3.235 1.942 3.529 1.905

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ALT ALANINA AMINO TRANSAMINASA INTRODUCCION Este examen se usa para determinar si un paciente tiene lesin heptica. La ALT es una enzima que involucrada en el metabolismo del aminocido alanita y se encuentra en varios tejidos, pero presenta concentraciones mayores en el hgado. Cualquier lesin en el hgado hace que se libere esta enzima a la sangre. MUESTRA Suero sin hemlisis Plasma EDTA PARAMETROS 340nm longitud de onda 30-37C Cubeta de 1 cm paso de luz Blanco agua destilada PROCEDIMIENTO Procedimiento de un reactivo Reactivo de trabajo Muestra Reactivo 1 L-alanina LDH Azida sodica Reactivo 2 a-cetogluterato NADH azida sodica

1ml 100ul

Mezclar, incubar un minuto, medir cambio de densidad optica durante 3 min.


Procedimiento de dos reactivos Reactivo 1 1ml Muestra 100uL Mezclar y esperar 1 minuto Reactivo 2 100uL Mezclar, incubar 1 minuto, y medir cambio de Densidad Optica por 3 minutos Obtener Diferenta promedio de Densidad Optica.

CALCULOS 340nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 334nm : actividad U/L = cambio DO/ min x 365nm : actividad U/L = cambio DO/ min x RESULTADOS ALT = __________________UL VALORES NORMALES 30C hasta 35 UL 37C hasta 49 UL CONCLUSION

un reactivo 1.746 1.780 3.235

2 reactivos 1,905 1,942 3,529

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PRACTICA NO_____ LIPASA FUNDAMENTO La lipasa en una enzima que se usan en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber. La enzima se encuentra en la leche materna y, segn estudios bioquimicos, es idntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancretica no especifica) por lo que se supone que le origen que el origen es pancretico y llega a las glndulas mamarias a travs de la circulacin sangunea. La lipasa gstrica, producida por las glndulas gstricas, reduce los triglicridos, u tipo de lpidos presentes en la leche, a cidos grasos y glicerol. REACTIVOS Reactivo de trabajo Patron de lipasa

MUESTRA Suero

PROCEDIMIENTO 1. Precalentar reactivo de trabajo a 37C durante unos minutos 2. Pipetear a una cubeta Reactivo de trabajo Muestra/Patron 750 ul 15 ul

3. Mezclar e insertar en los portacubetas del termostalizado a 37C. poner el cronometro


en marcha, a los 3-5 minutos aadir: Reactivo C 250uL Mezclar 4. leer y anotar absorbencias inicial y cada minuto durante 3 minutos 5. Comprobar que las difencias sean sensiblemente iguales, obtener incremento de absorbencia por minuto promedio (A/min) CALCULOS (A/min)MUESTRA (A/min)PATRON

X Concentracin del patron = U/L

RESULTADOS Lipasa = _________________U/L VALORES NORMALES 7-59 U/L

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AMILASA INTRODUCCION La amilasa es una enzima que tiene la funcin de dirigir el glicgeno y el almidn para formar azucares simples, se produce principalmente en las glndulas salivares ( glndulas partidas) y en el pncreas. Cuando una de estas glndulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el anlisis de la amilasa serica. MUESTRA Suero Plasma heparinizado Orina diluida una parte en dos de agua

PROCEDIMIENTO Longitud de onda 405 nm Temperatura 30 a 37 C Cubeta 1 cm Blanco Agua destilada REACTIVO MUESTRA 30C 1mL 25uL 37C 1mL 15uL

Mezclar y medir densidad optica por minuto durante 3 minutos Obtener (A/min) CALCULOS Actividad

Cambio Densidad Optica / min X 2715 a 30C Cambio Densidad Optica / min X 4640 a 37C

RESULTADOS Amilasa = _______________ U/L VALORES DE REFENCIA En suero: <67 U/L a 30C <86 U/L a 37C CONCLUSION

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PRACTICA NO. PRUEBAS SEROLOGICAS


PROTEINA C REACTIVA Es una tecnica de aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las particulas de latex recubiertas con anticuerpos anti PCR humana son aglutinadas por molecuas de PCR presentes en la muestra del paciente. La proteina C Reactiva es una proteina de fase aguda presente en sueros de pacientes sanos la cual puede incrementrase en procesos infecciones bacterianos, virales, inflamacin, y neoplasias malignas. El incremento se produce despus de unas horas de desarrollarse inflamacin alcanzando niveles de 300mg/L en 12-24h. Reactivos: Latex Control (rojo) Control (azul) Suspensin de latex cubiertas de IgG de cabra anti PCR humana. Suero humano Suero animal

Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8C o 3 meses a -20. No hemolisadas ni lipmicas. PROCEDIMIENTO Cualitativo. 1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. en un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo. 3. homogeneizar suavemente el reactivo de PCR latex y depositar una gota (50uL) junto a cada una de las gotas anteriores. 4. mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos distintos. 5. situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin exceso. Semicuantitativo. 1. realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9g/L 2. proceder para cada dilucin como la prueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscpicamente presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente al retirar el agitador. Aglutinacin positiva indica una concentracin de PCR igual o mayor a 6mg/L En el semicuantitativo, se define el titulo como la dilucin mayor que da resultado positivo. CALCULOS La concentracin de PCR aproximada en la Muestra se obtiene con la siguiente formula: 6xTitulo de PCR = mg/L VALORES DE REFERENCIA Hasta 6mg/L RESULTADO Aglutinacin: __________________ CONCLUSION:

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FACTORES REUMATOIDES PRINCIPIO DEL METODO FR Latex es una tecnica de aglutinacin en porta para deteccion cualitativa y semicuantitativa de los factores reuimatoides en el suero humano. Las particulas de latex recubiertas con Gammaglobulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra. Los FR son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccioin Fc de inmunoglobulinas G. Su inters clnico es el diagnstico de la Artritis Reumatoides, aunque estan presentes tambien en Lupus eritematoso y sintrome de Sjorgen. Reactivos Latex Control Rojo Control Azul suspensin de latex cubierto con gammaglobulina humana Suero humano Suero animal

Muestra: Suero fresco estable 7 dias a 2-8C o 3 meses a -20. No hemolisadas ni lipmicas. PROCEDIMIENTO Cualitativo. 1. Atemperar muestras y reactivo a temperatura ambiente. 2. En un portaobjetos, depositar 50uL de M, y una gota de los controles positivo y negativo. En circulos distintos. 3. Homogeneizar el reactivo FR Latex y depositar una gota junto a cada una de las gotas anteriores. 4. Mezclar las gotas con un palillo y extender la mezcla por el interior del circulo. Con palillos distintos. 5. Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 80-100 rpm y agitar durante dos minutos sin exceso. Semicuantitativo. 1. realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9g/L 2. proceder para cada dilucin como la prueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACION Examinar microscpicamente presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente al retirar el agitador. Aglutinacin positiva indica una concentracin de FR Latex igual o mayor a 8UI/mL En el semicuantitativo, se define el titulo como la dilucin mayor que da resultado positivo. CALCULOS 8 X TITULO DE FR = UI/mL VALORES DE REFERENCIA Hasta 8 UI/ mL RESULTADO Aglutinacin: _____________________ CONCLUSIN

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Eduardo Otoniel Bermdez Chvez

REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19. Salmonella. La reaccin de Widal en un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las fiebres tifoideas, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra una suspensin de microorganismo conocidos. La Salmonella son bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres especies clnicamente importantes de Salmonella: enteritidis, choleraeauis y thyphi. Tres sndromes principales, resultan de la infeccin por salmonella. 1. gastroenteritis ( la forma ms comn ). 2. fiebre tifoidea. 3. septicemia. Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La brucelosis es una enfermedad aguda o crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han dado lugar al nombre de fiebre ondulante de la enfermedad. Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antignos idiotpicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relacin se us en el diagnstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeos plemrfos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duracin, con algunas excepciones. El tifus endmico puede causar recaadas 10 o 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas. FUNDAMENTO. Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar MUESTRA Suero libre de hemolisis REACTIVOS Paratifico A Paratifico B Tifico O Tifico H Proteus OX Brucella PROCEDIMIENTO. Puede efectuarse por medio de dos maneras. Mtodo de aglutinacin rpida en placa. 1. Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio. 2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se vayan a utiliza. 3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. 4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno. 5. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2 3 minutos. 6. Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma.

Qumica Clnica

Manual de Prcticas de Laboratorio

Eduardo Otoniel Bermdez Chvez

Mililitros de suero 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005

Dilucin 1:20 1:40 1:80 1:160 1:329

INTERPRETACION Reportar el resultado, empleando la recproca de la dilucin ms alta que presenta aglutinacin. Grado de aglutinacin. 100% ++++ Sedimentacin de los grumos y el sobrenadante claro. 75% +++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante claro. 50% ++ sedimentacin marcada y sobrenadante ligeramente claro. Negativo. Ninguna evidencia de aglutinacin, sobrenadante idntico al control. RESULTADO Paratifico A Paratifico B Tifico O Tifico H Proteus OX Brucilla __________________ __________________ __________________ __________________ __________________ __________________

CONCLUSION

Qumica Clnica

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Eduardo Otoniel Bermdez Chvez

VDRL INTRODUCCION La prueba del VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) constituye una tcnica serolgica con la suficiente sensibilidad y especificidad para complementar el diagnstico de sfilis y analizar la respuesta al tratamiento especfico. Su costo y complejidad la hacen ideal para el estudio de esta enfermedad de trasmisin sexual en grandes masas de poblacin.1-4 El Mdico de la Familia es el mximo responsable de los programas nacionales para el control de las enfermedades sexualmente trasmisibles; por tanto, entre sus funciones bsicas se encuentran la indicacin y la interpretacin a primera instancia de los resultados de sta.5,6 El VDRL es una tcnica de floculacin que utiliza el antgeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponmicos inespecficos producidos por el individuo ante una infeccin sifiltica. Se practica normalmente en lmina de cristal, en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento), con una suspensin fresca de antgeno de cardiolipina; esta mezcla se agita de forma rotatoria y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculacin utilizando un microscopio de bajo aumento; sus resultados pueden expresarse tanto cualitativa como cuantitativamente. MUESTRA Suero o plasma libre de hemolisis. PROCEDIMIENTO En un porta, depositar una gota (50uL) de suero del paciente, Aadir una gota de reactivo y mezclar con un palillo de madera extendiendo por todo el circulo Observar el resultado. RESULTADO VDRL ____________________ CONCLUSION