He visto la luz

Jorge Jos Casal IFEVA, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires y CONICET. Av. San Martn 4453, 1417-Buenos Aires Argentina. e-mail: casal@ifeva.edu.ar Nuestro objetivo En sistemas animales las respuestas de comportamiento son las que predominan ante cambios en el ambiente mientras que el crecimiento y desarrollo ocurren en condiciones relativamente aisladas. Por el contrario, en las plantas el crecimiento y desarrollo son los que responden fuertemente a alteraciones del ambiente y aspectos fundamentales como la organognesis ocurren con intensidad luego de la formacin del embrin. . Si bien las plantas poseen mecanismos refinados que le brindan homeostasis al crecimiento y desarrollo, hay aspectos especficos de estos que se abren al control por seales del ambiente. Las plantas ofrecen una combinacin muy especial de homeostasis y cambio ante fluctuaciones del ambiente. La luz es una de las claves del ambiente que ms fuertemente afectan el desarrollo de las plantas. En ambientes terrestres la luz flucta en densidad de flujo, composicin espectral, duracin del perodo diario (fotoperodo) y direccin. Estos cambios se correlacionan con condiciones que representan serios riesgos para la supervivencia de las plantas. Por ejemplo, el fotoperodo flucta de modo predecible durante el ao y de ese modo provee claves relacionadas con las diferentes estaciones. La presencia de mecanismos que conectan la transicin entre la etapa vegetativa y la reproductiva al fotoperodo permite que la floracin, momento altamente sensible al estrs, ocurra en pocas favorables. Las fluctuaciones del ambiente luminoso que contienen informacin debido a su correlacin con situaciones que requieren ajustes y que pueden ser percibidas por la planta se constituyen en seales . Los cultivos agrcolas y las pasturas tienen ambientes caractersticos y la capacidad del hombre para modificarlos es limitada. Es posible en muchos casos regar o fertilizar pero no es practicable modificar el ambiente luminoso de los cultivos extensivos. Las altas densidades necesarias para aprovechar el suelo hacen que las plantas interfieran mutuamente la luz que reciben. En particular, la luz rojo lejana es reflejada y transmitida con mayor intensidad que la radiacin visible resultando en bajas relaciones entre luz roja y rojo lejana dentro de los cultivos en contraposicin con la relacin propia de la luz que llega a la superficie de los mismos. Gracias a que algunos miembros de la familia de los fitocromos se desactivan en respuesta a bajas relaciones rojo / rojo lejano de la luz causando modificaciones en el crecimiento y desarrollo de las plantas, las bajas relaciones constituyen seales de la presencia y densidad de plantas vecinas competidoras por recursos. Nuestro grupo estudia los mecanismos mediante los cuales las seales del ambiente lumnico controlan el crecimiento y desarrollo de las plantas. Como puede desprenderse de los prrafos previos, nuestro inters en el sistema tiene dos fundamentos: Uno ms bsico que toma a las plantas como organismos modelo en que se pueden estudiar los circuitos de sealizacin que controlan el crecimiento y desarrollo en respuesta al ambiente. Otro tendiente a alimentar las aplicaciones biotecnolgicas para mejorar el

ajuste de las plantas al ambiente lumnico de los cultivos. Si bien es poco factible manejar el ambiente luminoso de muchos cultivos es posible modificar la respuesta de las plantas a las seales de dicho ambiente de modo de incrementar su produccin en cantidad y/ o calidad. La distincin entre estos dos objetivos no es necesariamente ntida en cada uno de las lneas de trabajo ya que muchos experimentos sirven a ambos propsitos. Nuestra estrategia Abordamos el estudio del tema a distintos niveles y con herramientas variadas. Con preferencia combinamos estudios fisiolgicos en que se miden variables como el crecimiento del tallo en respuesta a distintos tratamientos lumnicos, con la utilizacin de plantas mutantes o transgnicas que permiten conocer o refinar el conocimiento de la funcin de genes especficos, y con la utilizacin de tcnicas de biologa molecular y genmica que nos permiten ahondar en los mecanismos. Naturalmente, los investigadores buscamos ofrecer algn enfoque diferente a los temas que resulte en un aporte original y que reduzca los riesgos de tropezarse con los mismos resultados obtenidos por otros grupos. Nuestra estrategia es utilizar las tcnicas ms modernas a nuestro alcance pero apoyndonos en el manejo de conceptos tradicionales de la Fisiologa Vegetal. Por ejemplo, la ocurrencia de interaccin entre las vas de sealizacin de los fotorreceptores haba sido sugerida por experimentos clsicos en que se combinaban luces de distintas regiones del espectro. Sin embargo, el estudio de estas interacciones haba quedado a ese nivel, ofreciendo un campo frtil para la aplicacin de herramientas de la Gentica, la Biologa Molecular y la Genmica capaces de ahondar en el tema. Lejos de entender las antinomias que a veces parecen plantearse entre expertos de estas disciplinas confiamos en que hay mucho para aprender si sabemos combinarlas con eficacia. Recientemente hemos realizado una serie de experimentos de caracterizacin del transcriptoma en colaboracin con distintos laboratorios. La mayor parte de los datos (de la inmensa cantidad de datos que se obtiene con estos experimentos) no ha sido publicada an y esperamos alcanzar ese objetivo en el transcurso del ao. La reciente llegada de un lector de microarreglos Affymetrix al instituto gracias a un PME obtenido junto a una red de investigadores permitir dar un renovado impulso a estos experimentos. Los integrantes de la red esperamos, asimismo, que el equipo que es el primero instalado en Latinoamrica sea til a otros miembros de la SAFV. Un aspecto que consideramos central en nuestra estrategia es la eleccin de la especie para los experimentos. Al respecto nuestro criterio es utilizar aquella especie que ofrezca las mejores herramientas para avanzar sobre el tema en cuestin. En la mayora de los experimentos utilizamos Arabidopsis thaliana porque hay disponibilidad de mutantes, incluyendo colecciones de mutantes por insercin que crecen con el objetivo de alcanzar al menos un mutante por gen, hay poblaciones mutagenizadas para buscar mutantes nuevos que puedan echar luz sobre las cuestiones estudiadas, est completamente secuenciada, es fcil de transformar, hay microarreglos confiables, ocupa poco espacio, tiene un ciclo corto, etc. Sin embargo, trabajamos con otras especies cuando la pregunta as lo requiere. Por ejemplo, las bajas relaciones rojo / rojo lejano de los cultivos densos reducen la produccin de macollos en gramneas. La descripcin de esta respuesta fue mi primer contacto con la experimentacin en Fisiologa Vegetal, cuando an era estudiante de Agronoma bajo la lcida direccin de Rodolfo Snchez. Hoy tratamos de comprender aspectos evolutivos y mecansticos de esta respuesta y especies como trigo o arroz son

evidentemente ms tiles. Debo admitir que la preponderancia de Arabidopsis thaliana en nuestros experimentos es un punto que me ha llevado a interesantes intercambios de opinn con colegas en el pas. Para muchos, la eleccin de Arabidopsis thaliana, la especie ms utilizada en todo el mundo implica un riesgo demasiado alto debido a la competencia de otros laboratorios. En nuestra opinin si elegimos una especie donde las herramientas no estn tan desarrolladas pudiendo elegir Arabidopsis thaliana el riesgo de competencia sin duda se diluye pero el resultado en general no es el buscado, por evitar la competencia se pierde. En efecto, nadie se conforma fcilmente con un avance en el conocimiento menor al posible con las herramientas disponibles. Otro punto que consideramos crucial es el de la eleccin y fortalecimiento de las colaboraciones con otros laboratorios del pas como del extranjero. Hoy es imposible hacerlo todo pero es tentador abordar los temas desde una perspectiva multifactica. Vivimos un momento sin precedentes por la disponibilidad de herramientas para entender la fisiologa de las plantas. Mucho de lo que hemos logrado no podramos haberlo realizado sin la colaboracin de otros investigadores. No puedo nombrarlos a todos porque son muchos (los nombres estn en la lista de publicaciones) pero aprovecho este espacio para expresar mi sincera gratitud. Las lneas de trabajo Los experimentos de nuestro grupo tienden a abordar dos temas: 1) La arquitectura y componentes del circuito de sealizacin que conecta a los fotorreceptores con el control del crecimiento y desarrollo y las consecuencias funcionales de ese circuito (la relacin entre seal y respuesta). 2) Los mecanismos y consecuencias de las respuestas de las plantas al ambiente luminoso de cultivos y el manejo biotecnolgico de dichas respuestas. Hemos observado que los fitocromos y criptocromos, dos de las familias de fotorreceptores ms importantes en plantas interactan en el control del crecimiento y desarrollo por la luz. Estos estudios han sido realizados a con mutantes simples y mltiples de fotorreceptores cruzados y seleccionados en nuestro laboratorio. La fenomenologa de las interacciones es compleja y estamos comenzando a abordar los mecanismos pero las consecuencias son claras. En situaciones diversas, las interacciones permiten refinar las respuestas a la seal reduciendo el impacto de las perturbaciones (fluctuaciones de la luz que no constituyen una seal). Por ejemplo, cuando el vstago de una plntula emerge del suelo la luz dispara modificaciones en la morfologa y fisiologa de la planta que llevan a la transicin de la plntula entre la heterotrofa (vida basada en las reservas obtenidas de la planta madre) a la autotrofa (competencia fotosinttica). Estos cambios reciben el nombre de des -etiolacin. La seal que dispara la des-etiolacin es la salida de la oscuridad plena experimentada bajo el suelo hacia los ciclos normales de luz y oscuridad. No importa demasiado si la plantulita ha emergido en un da nublado o uno despejado con mayor densidad de flujo de fotones, si ha emergido en una poca con fotoperodo corto o largo, en un lugar abierto o en uno sombreado, con bajas relaciones rojo / rojo lejano. En cualquier caso la des-etiolacin debe ocurrir. Precisamente, el estudio de mutantes simples y mltiples nos permite concluir que las interacciones entre fotorreceptores favorecen la homeostasis del sistema haciendo ms fuerte la respuesta a la seal (transicin entre oscuridad y ciclos de luz) y

menor el impacto de las fluctuaciones de la luz que no o l son (nivel de irradiancia, fotoperodo, etc.). Es interesante notar que las fluctuaciones que en alguna etapa no constituyen una seal en otro contexto de desarrollo pueden ser la seal principal. Si bien una plntula se puede des-etiolar en das cortos o en das largos la floracin puede ser muy fuertemente dependiente de la duracin del da. Esta es tan slo una de las manifestaciones de la versatilidad del circuito de sealizacin que opera aguas debajo de los fotorreceptores. Otro aspecto que evidencia la versatilidad se pone en evidencia al estudiar la capacidad de accin de un fotorreceptor como el fitocromo A (phyA). El phyA es capaz de percibir pequesimas cantidades de luz como las que recibe una semilla al ser expuesta por fracciones de segundo a la luz solar durante el laboreo de los campos, e inducir la germinacin de dicha semilla una vez que ha sido enterrada nuevamente. Adems, el phyA es capaz de causar respuestas a exposiciones prolongadas a la luz rojo lejana. Este proceso permite la des-etiolacin de plntulas que emergen del suelo bajo cultivos densos donde predomina dicha regin del espectro. De hecho hemos observado que los mutantes carentes de este fotorreceptor no sobreviven en dichas circunstancias porque no se des -etiolan normalmente. A estos dos tipos de respuesta se los conoce como respuestas a muy bajos flujos y respuestas a altas irradiancias o VLFR y HIR (siglas derivadas del ingls), respectivamente. Cuando se analiza un proceso como la inhibicin del crecimiento del hipocotilo por la luz rojo lejana, VLFR y HIR se manifiestan como dos fases claramente discretas, separables por los requerimientos de luz para ser inducidas. Hemos encontrado componentes del circuito de sealizacin que son requeridos por una de las dos fases y no por la otra. As como en levaduras el patrn temporal de las seales puede definir caminos alternativos del desarrollo operando por vas parcialmente comunes, el estudio de los mecanismos que participan en VLFR y HIR podrn ayudarnos a entender el modo en que las plantas alcanzan tal versatilidad. Las bajas relaciones rojo / rojo lejano de los cultivos producen modificaciones en el cuerpo de la planta que resultan en un patrn ms competitivo. El tallo crece con mayor intensidad y las hojas adoptan una p osicin ms erecta y en conjunto el follaje se proyecta hacia posiciones ms elevadas dentro del cultivo, donde la probabilidad de interceptar luz para fotosntesis es mayor. Al mismo tiempo se reduce la produccin de ramificaciones que generalmente tienen sus puntos de origen en estratos inferiores del cultivo (esto es particularmente claro en el caso de macollos en gramneas). Desde el punto de vista de la competencia de un individuo con otras plantas esta estrategia presenta ventajas claras pero cuando se trata de un monocultivo la situacin no es tan obvia. Hemos observado que si a plantas de girasol cultivadas a distancia una de otra se les reduce la relacin rojo / rojo lejano que les llega al tallo mediante filtros de luz selectivos el rendimiento en grano de sus captulos cae. Del mismo modo, al analizar cultivos densos de plantas transgnicas de papa que expresan fitocromo de Arabidopsis thaliana y que por lo tanto responden menos a la cada de la relacin rojo / rojo lejano (para ponerlo brevemente se comportan como si estuvieran encandiladas), obtuvimos mayores rendimientos en tubrculos que en las plantas normales. Esto argumenta en contra de las ventajas de mantener estas respuestas en plantas cultivadas. Sin embargo, esta conclusin es muy simplista. Si bien algunas respuestas competitivas ante la seal de bajas relaciones rojo / rojo lejano tienen impacto negativo sobre el rendi miento, otros componentes del sndrome tienen impacto positivo. En efecto, la respuesta a gradientes horizontales de dicha relacin facilita disposiciones del follaje que maximizan la intercepcin y minimizan la interferencia entre plantas. Por lo tanto se plantea el desafo de obtener herramientas que permitan modificar diferencialmente los procesos desatados

por las bajas relaciones rojo / rojo lejano de acuerdo a su impacto negativo o positivo sobre la poduccin de los cultivos. Buscamos genes que gracias a su funcin puedan cumplir con este propsito al ser modificados. Esta breve resea describe algunas de nuestras ideas y lneas de trabajo. Quienes deseen conocer ms en detalle nuestras contribuciones pueden consultar la pgina del instituto (http://www.ifeva.edu.ar/en/staff/casal.htm) o contactarnos a la direccin includa en el encabezamiento.