INSTITUTO TECNOLGICO DE TUXTLA GUTIRREZ INGENIERA BIOQUMICA MATERIA: BIOQUMICA DEL NITRGENO Y REGULACIN GENTICA PRACTICA No.

3 EXTRACCION DE ADN BACTERIANO Nombre del alumno: Daz Castillo Dulce Nazaret Fecha: 26 de febrero de 2013.

RESUMEN: El ADN es un polmero lineal formado por cuatro monmeros distintos. Posee un esqueleto fijo del cual sobresalen distintos sustituyentes. Este esqueleto est constituido por unidades repetitivas de 1 azcar-fosfato que forman dos hlices cada una unida por puentes de hidrgeno y enlaces fosfodiester . La extraccin o aislamiento del ADN permite el estudio y anlisis de esta biomolcula. Hay tres pasos fundamentales para una correcta extraccin y purificacin del ADN (bacteria burcolderia 25) los cuales son: 1. Lisis de las clulas. 2. Degradacin de la fraccin proteica asociada al ADN (mediante la adicin de una proteasa). 3. Purificacin.

INTRODUCCIN: El ADN, cido desoxirribonucleico, se define como un biopolmero (compuesto qumico formado por unidades estructurales que se repiten) que constituye el material gentico de las clulas. La molcula de ADN est formada por dos cadenas formada por compuestos qumicos llamados nucletidos unidos por enlaces de puente de hidrgeno y covalentes. Existen cuatro tipos de nucletidos que se diferencian por sus bases nitrogenadas: adenina, timina, citosina y guanina. El protocolo que fue usado se llama el kit de aislamiento de ADN marca Amershan Biosciences el cual consta de doce pasos. OBJETIVO: Conocer y aplicar el protocolo de aislamiento marca Amershan Biosciences que permita la extraccin del ADN de una cepa bacteriana. PROCEDIMIENTO: Primero la cepa fue cultivada ++ ++ en el medio de cultivo PY-Ca (peptona de casena y extracto de levadura plus calcio), luego se procedi con la suspensin bacteriana se ++ prepar medio de cultivo PY , posteriormente los matraces fueron inoculados con las cepas correspondientes para lograr las suspensiones bacterianas que se emplearon en la extraccin del ADN, luego se procedio con el protocolo de ADN bacteriano utilizndose el kit de aislamiento de ADN marca Amershan Biosciences, (consta de 12 pasos).

RESULTADOS Y DISCUSIN: Del procedimiento de obtencin de ADN de la bacteria burcolderia 25 con el que se utiliz el kit de aislamiento de ADN marca Amershan Biosciences: se obtuvieron 25 l de ADN y se colocandose en un tubo eppendorf en el refrigerador a una temperatura de 8C. Para que las cepas se desarrollen necesitan medio nutriente necesario en su medio de cultivo a condiciones aspticas como tambin controlar su temperatura, pH y la concentracin de los nutrientes. CONCLUSIONES: Se obtuvo 25 l de ADN bacteriano el cual se puede utilizar para mltiples tcnicas de cuantificacin como la electroforesis en gel de agarosa y PCR (Reaccin en Cadena de 2 la Polimerasa) . BIBLIOGRAFA: 1. Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL. (2008). Bioqumica. Ed. Revert. Barcelona. P: 4. 2. Chen W, Kuo T. (1993). A simple and rapid method for the preparation of gram-negative bacterial genomic DNA. Nucleic Acids Res. 21: 2260-2264.