LABORATORIO DE GENTICA

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Prctica N2: MEIOSIS EN CELULAS ANIMALES
I. INTRUDUCCION La meiosis es una forma de reproduccin celular que solo la realizan las clulas sexuales. Es un proceso de divisin celular en el cual una clula diploide (2n) experimenta dos divisiones sucesivas, generando cuatro clulas haploides (n). Este proceso se lleva a cabo en dos divisiones nucleares y citoplasmticas, denominadas meiosis I y meiosis II. La meiosis es el eje del proceso de diferenciacin celular que culmina en las clulas que podrn formar un nuevo individuo de la especie, pues es durante esta doble divisin, con una sola duplicacin del material gentico, que se produce la reduccin del nmero cromosmico (de diploide a haploide), y el reordenamiento del material gentico procedente de cada uno de los progenitores. II. OBJETIVOS Al finalizar la siguiente prctica los alumnos estarn capacitados para: Reconocer y diferenciar los estados fisiolgicos por los que atraviesan los cromosomas durante el proceso meiotico en clulas animales. III. FUNDAMENTO TEORICO

MEIOSIS La reproduccin sexual se caracteriza por la fusin de dos clulas sexuales haploides para formar un cigoto diploide, por lo que se deduce que, en un ciclo vital sexual, debe ocurrir la meiosis antes de que se originen los gametos. En los animales y en otros pocos organismos, la meiosis precede de manera inmediata a la formacin de gametos. Las clulas somticas de un organismo individual se multiplican por mitosis y son diploides; las nicas clulas haploides son los gametos. Estos se forman cuando algunas clulas de la lnea germinal experimentan la meiosis. La formacin de gametos recibe el nombre de gametognesis. La gametognesis masculina, denominada espermatognesis, conduce a la formacin de cuatro espermatozoides haploides por cada clula que entra en la meiosis.

En contraste, la gametognesis femenina, llamada ovognesis, genera un solo vulo por cada clula que entra en la meiosis, mediante un proceso que asigna virtualmente todo el citoplasma a uno solo de los dos ncleos en cada divisin meitica. Al final de la primera divisin meitica se retiene un ncleo; el otro, llamado primer cuerpo polar, se excluye de la clula y por ltimo degenera. De modo similar, al final de la segunda divisin un ncleo se convierte en el segundo cuerpo polar y el otro ncleo sobrevive. De esta forma, un ncleo haploide pasa a ser el receptor de la mayor parte del citoplasma y los nutrimentos acumulados de la clula meitica original. Proceso celular Visin general de la meiosis. En la interfase se duplica el material gentico. En meiosis I los cromosomas homlogos se reparten en dos clulas hijas, se produce el fenmeno de entrecruzamiento. En meiosis II, al igual que en una mitosis, cada cromtida migra hacia un polo. El resultado son 4 clulas hijas haploides (n). Los pasos preparatorios que conducen a la meiosis son idnticos en patrn y nombre a la interfase del ciclo mittico de la clula. La interfase se divide en tres fases:

Fase G1: caracterizada por el aumento de tamao de la clula debido a la fabricacin acelerada de orgnulos, protenas y otras materias celulares. Fase S :se replica el material gentico, es decir, el ADN se replica dando origen a dos cadenas nuevas, unidas por el centrmero. Los cromosomas, que hasta el momento tenan una sola cromtida, ahora tienen dos. Se replica el 98% del ADN, el 2% restante queda sin replicar. Fase G2: la clula contina aumentando su biomasa.

Meiosis I En meiosis 1, los cromosomas en una clula diploide se dividen nuevamente. Este es el paso de la meiosis que genera diversidad gentica. Profase I: La Profase I de la primera divisin meitica es la etapa ms compleja del proceso y a su vez se divide en 5 subetapas, que son: Leptoteno: La primera etapa de Profase I es la etapa del leptoteno, durante la cual los cromosomas individuales comienzan a condensar en filamentos largos dentro del ncleo. Cada cromosoma tiene un elemento axial, un armazn proteico que lo recorre a lo largo, y por el cual se ancla a la envuelta nuclear. A lo largo de los cromosomas van apareciendo unos pequeos

engrosamientos denominados crommeros la masa cromatica es 4c y es diploide 2n.

Zigoteno: Los cromosomas homlogos comienzan a acercarse hasta quedar apareados en toda su longitud. Esto se conoce como sinapsis (unin) y el complejo resultante se conoce como bivalente o ttrada (nombre que prefieren los citogenetistas), donde los cromosomas homlogos (paterno y materno) se aparean, asocindose as cromtidas homlogas. Producto de la sinapsis, se forma una estructura observable solo con el microscopio electrnico, llamada complejo sinaptonmico, unas estructuras, generalmente esfricas, aunque en algunas especies pueden ser alargadas. La disposicin de los crommeros a lo largo del cromosoma parece estar determinado genticamente. Tal es as que incluso se utiliza la disposicin de estos crommeros para poder distinguir cada cromosoma durante la profase I meitica. Adems el eje proteico central pasa a formar los elementos laterales del complejo sinaptonmico, una estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y uno central que se van cerrando a modo de cremallera y que garantiza el perfecto apareamiento entre homlogos. En el apareamiento entre homlogos tambin est implicada la secuencia de genes de cada cromosoma, lo cual evita el apareamiento entre cromosomas no homlogos. Adems durante el zigoteno concluye la replicacin del ADN (2% restante) que recibe el nombre de zig-ADN.

Paquiteno: Una vez que los cromosomas homlogos estn perfectamente apareados formando estructuras que se denominan bivalentes se produce el fenmeno de entrecruzamiento (crossing-over) en el cual las cromatidas homlogas no hermanas intercambian material gentico. La recombinacin gentica resultante hace aumentar en gran medida la variacin gentica entre la descendencia de progenitores que se reproducen por va sexual. La recombinacin gentica est mediada por la aparicin entre los dos homlogos de una estructura proteica de 90 nm de dimetro llamada ndulo de recombinacin. En l se encuentran las enzimas que medan en el proceso de recombinacin. Durante esta fase se produce una pequea sntesis de ADN, que probablemente est relacionada con fenmenos de reparacin de ADN ligados al proceso de recombinacin.

Diploteno: Los cromosomas continan condensndose hasta que se pueden comenzar a observar las dos cromtidas de cada

cromosoma. Adems en este momento se pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinacin. Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se origina en un sitio de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron dos cromatidas homlogas que intercambiaron material gentico y se reunieron. En este punto la meiosis puede sufrir una pausa, como ocurre en el caso de la formacin de los vulos humanos. As, la lnea germinal de los vulos humanos sufre esta pausa hacia el sptimo mes del desarrollo embrionario y su proceso de meiosis no continuar hasta alcanzar la madurez sexual. A este estado de latencia se le denomina dictioteno.

Diacinesis: Esta etapa apenas se distingue del diploteno. Podemos observar los cromosomas algo ms condensados y los quiasmas. El final de la diacinesis y por tanto de la profase I meitica viene marcado por la rotura de la membrana nuclear. Durante toda la profase I continu la sntesis de ARN en el ncleo. Al final de la diacinesis cesa la sntesis de ARN y desaparece el nuclolo. Anotaciones de la Profase I: La membrana nuclear desaparece. Un cinetocoro se forma por cada cromosoma, no uno por cada cromtida, y los cromosomas adosados a fibras del huso comienzan a moverse. Algunas veces las ttradas son visibles al microscopio. Las cromatidas hermanas continan estrechamente alineadas en toda su longitud, pero los cromosomas homlogos ya no lo estn y sus centrmeros y cinetocoros se encuentran separados.

Metafase I: Los cromosomas homlogos se alinean en el plano de ecuatorial. La orientacin es al azar, con cada homologo paterno en un lado. Anafase I: Los quiasmas se separan. Los microtbulos del huso se acortan en la regin del cinetocoro, con lo que se consigue remolcar los cromosomas homlogos a lados opuestos de la clula, junto con la ayuda de protenas motoras. Ya que cada cromosoma homlogo tiene solo un cinetocoro, se forma un juego haploide (n) en cada lado. En la reparticin de cromosomas homlogos, para cada par, el cromosoma materno se dirige a un polo y el paterno al contrario. Por tanto el nmero de cromosomas maternos y paternos que haya a cada polo vara al azar en cada meiosis. Por ejemplo, para el caso de una especie 2n = 4 puede ocurrir que un polo tenga dos cromosomas maternos y el otro los dos paternos; o bien que cada polo tenga uno materno y otro paterno. Telofase I: Cada clula hija ahora tiene la mitad del nmero de cromosomas pero cada cromosoma consiste en un par de cromtidas. Los microtubulos que componen la red del huso mittico desaparece, y una membrana nuclear nueva rodea cada sistema haploide. Los cromosomas se desenrollan nuevamente dentro de la cromatina. Ocurre la citocinesis (proceso paralelo en el que se separa la membrana celular en las clulas animales o la formacin de esta en las clulas vegetales, finalizando con la creacin de dos clulas hijas). Despus suele ocurrir la intercinesis, parecido a una segunda interfase, pero no es una interfase verdadera, ya que no ocurre ninguna rplica del ADN. No es un proceso universal, ya que si no ocurre las clulas pasan directamente a la metafase II. Meiosis II La meiosis II es similar a la mitosis. Las cromatidas de cada cromosoma ya no son idnticas en razn de la recombinacin. La meiosis II separa las cromatidas produciendo dos clulas hijas, cada una con 23 cromosomas (haploide), y cada cromosoma tiene solamente una cromatida. Profase II: Profase Temprana: Comienza a desaparecer la envoltura nuclear y el nucleolo. Se hacen evidentes largos cuerpos filamentosos de cromatina, y comienzan a condensarse como cromosomas visibles. Profase Tarda: Los cromosomas continan acortndose y engrosndose. Se forma el huso entre los centrolos, que se han desplazado a los polos de la clula.

Metafase II: Las fibras del huso se unen a los cinetocros de los cromosomas. stos ltimos se alinean a lo largo del plano ecuatorial de la clula. La primera y segunda metafase pueden distinguirse con facilidad, en la metafase I las cromatides se disponen en haces de cuatro (ttrada) y en la metafase II lo hacen en grupos de dos (como en la metafase mittica). Esto no es siempre tan evidente en las clulas vivas. Anafase II: Las cromtidas se separan en sus centrmeros, y un juego de cromosomas se desplaza hacia cada polo. Durante la Anafase II las cromatidas, unidas a fibras del huso en sus cinetocros, se separan y se desplazan a polos opuestos, como lo hacen en la anafase mittica. Como en la mitosis, cada cromtida se denomina ahora cromosoma. Telofase II: En la telofase II hay un miembro de cada par homologo en cada polo. Cada uno es un cromosoma no duplicado. Se reensamblan las envolturas nucleares, desaparece el huso acromtico, los cromosomas se alargan en forma gradual para formar hilos de cromatina, y ocurre la citocinesis. Los acontecimientos de la profase se invierten al formarse de nuevo los nucleolos, y la divisin celular se completa cuando la citocinesis ha producidos dos clulas hijas. Las dos divisiones sucesivas producen cuatro ncleos haploide, cada uno con un cromosoma de cada tipo. Cada clula resultante haploide tiene una combinacin de genes distinta. Esta variacin gentica tiene dos fuentes: 1 Durante la meiosis, los cromosomas maternos y paternos se barajan, de modo que cada uno de cada par se distribuye al azar en los polos de la anafase I. 2 se intercambian segmentos de ADN.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS Un excelente material para la observacin de los procesos de divisin celular lo constituyen los insectos de la especie Grillos asimilis grillo domestico y Laplatacris sp. langosta. En los
individuos machos debe recuperarse el testculo despus de la diseccin en el que se estudiar la meiosis en clulas de maduracin (espermatocitos) de la zona proximal al canal deferente. El material a usar en el presente ejercicio es el siguiente:

Grillo o saltamontes macho Microscopio Mechero de alcohol Cloroformo Carmn actico Carnoy Solucin salina 0.7% Placas petri

Laminas porta y laminillas Algodn Estilete de punta fina Bistur

V. PROCEDIMIENTO Tomamos los grillos machos y los diseccionamos abrindolos por el dorso. Identificamos las gnadas (testculos), los restiramos y los colocamos en solucin salina procurando no exponer los rganos al aire para evitar posibles desecaciones.

 Tomamos un testculos y sobre una lamina porta los seccionamos en dos partes, colocamos cada parte en una lamina portar, y agregamos fijador Carnoy por 1 minuto

Tape la preparacin con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente. Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un lpiz presionar un poco ms fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa delgada (squash). Al realizar esta operacin, tenga cuidado para no romper el cubre objetos.

Limpie el exceso de colorante del porta objetos con papel higinico y lleve el preparado al microscopio para su observacin a menor y mayor aumento.

VI. RESULTADOS Al llevar nuestros porta objetos con las muertas ya preparadas y observar al microscopio pudimos identificar las siguientes fases de la meiosis:

LEPTOTENO ANAFASE I

METAFASE I

TELOFASE I VII. CONCLUSIONES

ANAFASE II

La miosis es el proceso de divisin celular por el cual se forman los gametos con un nmero haploide de cromosomas. Para su estudio se hace utilizacin de gnadas masculinas que permiten observar mejor el desarrollo y las fases de la meiosis. Para poder observar con detalle la distintas fases de la meiosis debemos utilizar el objetivo de inmersin junto con aceite de ricino. El proceso meiotico presenta muchas fases que se identifican por la posicin de los cromosomas dentro de la clula

VIII. REFERENCIAS De Robertis, Eduardo / Hib, Jose / Ponzio, Roberto BIOLOGA CELUALR Y MOLECULAR de De Robertis Duodcima edicin Editorial El Ateneo Argentina Pierce, Benjamn GENETICA Un Enfoque Conceptual Segunda edicin Editorial Medica Panamericana 2006 Espaa. http://es.wikipedia.org/wiki/Meiosis