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PSEUDOMONAS AERUGINOSA - ANTIBIOGRAMM Empfindlichkeitsprfung Die Blttchen sind mit verschiedenen Antibiotika getrnkt.

Es entstehen verschieden groe Hemmhfe um die Pseudomonaskolonien. Die Hemmhofgre lsst auf Antibiotikawirksamkeit schlieen und korreliert mit der Empfindlichkeit. AGARDIFFUSIONSTEST = ANTIBIOTIKA - EMPFINDLICHKEITSPRFUNG Bestimmung der Resistenz von Bakterien gegenber verschiedener Antibiotika. Die Einteilung der Bakterienkultur erfolgt, anhand der Gre der Hemmzonen, in die Kategorien: sensibel, intermedir oder resistent. Durchfhrung: Eine Nhragarplatte wird homogen mit einem Prfstamm beimpft. Anschlieend werden Antibiotika getrnkte Filterpapierscheibchen aufgelegt. Die Platte wird bebrtet, und es bilden sich kleine, grere oder keine wachstumsfreien Hemmzonen um die Blttchen. Hochresistente Bakterien wachsen bis an das Blttchen heran. Je sensibler die Bakterien, desto grer der Hemmhof. Beispiele: Pseudomonas aeruginosa: sensibel geg. Piperacillin, Ceftazidim, Gentamicin,Ciprofloxacin Staphylococcus aureus: sensibel geg. Ampillicin, Penicillin, Oxacillin, Vancomycin ANTISTREPTOLYSIN - O - TEST Test zur Erfassung von Streptokokken- Infektionen und Streptokokken- Folgeerkrankungen. Es werden dabei Antikrper (= Anti-Streptolysin O) gegen das von Streptokokken produzierte hmolysierende Protein Streptolysin O nachgewiesen. Wenn sich AK im Patientenserum befinden, hemmen sie die durch das Streptolysin O verursachte Hmolyse. Die Reaktion wre somit positiv und lsst auf eine Infektion schlieen. Links: Klar --> Negativ Es sind keine neutralisierenden AK gegen Streptolysin O vorhanden. Deshalb findet Hmolyse statt. --> keine Infektion Rechts: Trb --> Positiv Es sind Streptolysin O- AK vorhanden, was sich in einer fehlenden Hmolyse (intakte Erythrozytensuspension) ausdrckt. --> Infektion Api 20 E - System Identifizierung von Enterobacteriaceae mit API 20 E anhand von biochemischen Merkmalen. Positive und negative Reaktionen werden durch Farbumschlag erkennbar. Das Api 20 E System erfolgt nach dem Prinzip der Bunten Reihe. b - LAKTAMASE - BILDUNG Agar mit Enterobacter cloacae beimpft. Antibiothikablttchen in 2 cm Abstand aufgelegt. 1. Induktion von b - Laktamasen (halbmondfrmiger Hemmhof) durch Imipenem und Cefoxitin 2. Resistenz gegenber b - Laktamasen: Imipenem rechts unten / links unten: Cefotaxim (CTX) oben: Imipenem (IPM) rechts mitte: Cefoxitin (FOX)

BORRELIEN - IMMUNOBLOT Antigene werden in Polyacrylamid elektophoretisch getrennt. Durch die Behandlung mit dem ionischen Detergenz Sodiumdodecylsulfat (SDS) werden alle Proteine solubilisiert und negativ geladen. Die Auftrennung im elektrischen Feld erfolgt demnach nur nach dem Molekulargewicht. In einem 2. Schritt werden die Proteine mittels Elektophorese auf Nitrozellulosefilterpapier bertragen, das dann mit Patienten-Serum inkubiert wird. Der Nachweis gebundener AK erfolgt nach dem Prinzip des ELISA. Der Vorteil des Immunoblots gegenber dem ELISA, liegt in der Darstellung der Immunreaktion gegen Borrelia burgdorferi spezifische Proteinbanden. BUNTE REIHE Unterscheidung von Enterobacteriaceae anhand ihrer Stoffwechseleigenschaften Escherichia coli 1.Kligler: Lactose - Fermenter 2.Citrat: negativ, Grnfrbung 3.Harnstoff: negativ, Gelbfrbung 4.Indol:positiv,Rotfrbung Beispiel fr andere biochemische Reaktionen 1.Kligler: Lactose - Nonfermenter 2.Citrat:positiv,Blaufrbung 3.Harnstoff: positiv, Pinkfrbung 4.Indol: positiv, Rotfrbung

KLIGLER Gleichzeitige Prfung von mehreren Stoffwechseleigenschaften, Lactose,- Glucose- Abbau, Gas- und- Schwefelwasserstoffbildung. Der Kigleragar ist ein Schrgagar, der eine 10 mal hhere Lactose - als Glucosekonzentration enthlt. Als Indikator fr die Surebildung wird Phenolrot verwendet, das bei Surebildung nach Gelb umschlgt. Eine Schwefelwasserstoffentwicklung zeigt sich anhand der, durch Eisensulfidfllung entstandenen, Schwrzung. Bilden sich Blasen im Agar, produziert das Bakterium Gase. KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION Antikrpernachweis. IgM oder IgG bindet an das Antigen. Dabei wird am Fc- Stck des Antikrpers die Komplementbindungsstelle frei. Bei Zugabe von Meerschweinchenkomplement bindet dieses an den AK und wird verbraucht. Nun folgt eine Indikatorreaktion mittels Hammelerythrozyten und Hammelerythrozyten-AK. Ist noch Komplement vorhanden, werden die Erythrozyten lysiert (linkes Rhrchen). Ist kein Komplement mehr vorhanden, dann findet auch keine Lyse statt, und die Erythrozyten sedimentieren auf dem Boden des Rhrchens (rechts) . Dies kann fr einige Erreger als Nachweisreaktion ihrer Antikrper verwendet werden, z.B.Treponema pallidum. LEZITHINASE - BILDUNG Willis- Platte (= Eigelbagar ) zur Prfung der Lezithinasebildung. Das im Eigelb enthaltene Lezithin stabilisiert die Protein- Fett-Emulsion. Bildet ein Bakterium Lezithinase, fhrt dies zur Auflsung der Emulsion, und es werden Przipitate, helle, undurchsichtige Hfe um die Kolonien sichtbar. Clostridium perfringens: bildet Lezithinase Clostridium sporogenes: bildet keine Lezithinase MANCINI - TEST Der Mancini - Test dient der quantitativen Bestimmung der Immunglobulinkonzentration im Patientenserum. Patientenseren werden in die Vertiefungen gegeben und bilden bei berschu lsliche Komplexe mit dem Antikrper. Der Durchmesser des Przipitationsringes

korreliert mit der Konzentration des Antigens im Patientenserum: je grer der Ring, um so grer der Radius des Przipitats. NEISSERIEN KULTUR & OXIDASE -TEST Der Kochblutagar (="Schokoladen-Agar" ) wird zur Kultur anspruchsvoller Bakterien, wie Gonokokken, Meningokokken und Haemophilus verwendet. Anzucht in 5-10% Kohlendioxyd-Atmosphre, 37C. Neisserien auf Kochblutagar Kleine farblose Kolonien. Neisserien sind Oxidase - positiv. Der Nachweis der Cytochromoxidase erfolgt durch Auftropfen eines farblosen Reagenzes, das bei einer positiven Reaktion einen dunkelblauen Farbumschlag zeigt. THIOGLYKOLAT BOUILLON Dient zur Anzucht anaerober Bakterien. In der Bouillon enthalten sind Natriumthioglyklat als reduzierende, sauerstoffbindende Substanz und der Redoxindikator Resazurin, der die Eindringtiefe des Sauerstoffs in die Bouillon zeigt. ( Umschlag des Indikators bei rH > 13 ) ( Von links nach rechts ) 1. Rhrchen beimpft mit Clostridium sporogenes --> unten Trbung, anaerobes Wachstum 2. Rhrchen beimpft mit Pseudomonas aeruginosa --> Kahmhaut an der Oberflche, anaerobes Wachstum 3. Rhrchen beimpft mit E. coli --> Gasbildung, komplett getrbt, fakultativ anaerobes Wachstum TREPONEMA PALLIDUM SSP. PALLIDUM - Syphillis- Diagnostik 1. Spezifische Tests TPHA Test = Treponema pallidum Hmagglutinationstest Screening Test Es wird eine indirekte Hmagglutinationsreaktion durchgefhrt, wobei mit Treponema pallidum - Antigen beladene Schafserythrozyten anschlieend mit Patientenserum inkubiert werden. Bei einem positiven Testergebnis ist ein 2. spezifscher Test essentiell. (FTA- AbsTest) FTA - Abs Test = Fluoreszenz-Treponemen-Antikrper-Absorptions-Test Antigene bei dieser Reaktion sind abgettete Treponemen, die mit Patientenserum inkubiert werden. Gebundene Antikrper knnen mit Fluorescein - markiertem Antihuman- IgG nachgewiesen werden. (Treponema pallidum wird auf einem Objekttrger fixiert ) Achtung!!! Beide Test reagieren nach Ausheilung einer Syphillis positiv!!! UREASE TEST Das Enzym (Urease) z.B. im Bakterium Helicobacter pylori vorhanden, kann Harnstoff in Ammoniak und Kohlendioxid spalten. Hier mittels Indikator farblich zu unterscheiden. Durch die Alkalisierung erfolgt ein Farbumschlag nach rot.

KLIGLER-AGAR Escherichia coli Lactose - Fermenter Abbau von Glucose und Lactose Hoch- und Schrgflche zeigen Farbumschlag nach gelb keine Schwefelwasserstoffbildung Gasbildung Blase im Agar Shigella Lactose - Nonfermenter nur Abbau von Glucose Hochschicht gelb, Schrgflche rot keine Gas- und Schwefelwasserstoffbildung Salmonella Lactose - Nonfermenter nur Abbau von Glucose Hochschicht schwarz, da Schwefelwasserstoffbildung!!! Eisensulfidniederschlag keine Gasbildung Pseudomonas aeruginosa Nonfermenter kann weder Glucose, noch Lactose verwerten --> kein Farbumschlag Agar bleibt rot (Diffusion des Phenolrot aus Schrgflche)

von links nach rechts: E.coli, Shigella, Salmonella, Pseudomonas


Basti, Januar 2003