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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BIOQUMICA PRCTICA I GUA PARA PRACTICA DE LABORATORIO N3 1. TEMA: Extraccin de sangre venosa utilizando el sistema vacutainer y jeringuilla. 2. OBJETIVOS: 2.1 OBJETIVOS GENERALES Obtener y procesar correctamente muestras de sangre venosa de una persona adulta, para ejecutar anlisis bioqumicos. Cumplir con las precauciones estndares de Bioseguridad cuando se recolectan muestras de sangre y/o fluidos biolgicos. Identificar el equipamiento necesario para realizar una venopuncin. Correlacionar el color de los tapones de los tubos al vacio, con el aditivo que contiene cada uno de ellos y el orden adecuado de extraccin cuando se toman varias muestras a partir de una sola venopuncin. Localizar e identificar mediante palpacin las venas para una correcta venopuncin. Colocar correctamente el torniquete. Registrar la cantidad de sangre que contiene cada uno de los tubos al vacio utilizados en la prctica. Extraer sangre venosa de un paciente adulto (entre todos los compaeros del equipo de trabajo). Centrifugar la sangre venosa y separar suero del tubo tapa roja y plasma del tubo tapa lila. Describir las complicaciones presentadas en la extraccin de sangre venosa durante la prctica.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS: -

3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 1 Envase con torundas secas,1 frasco de alcohol al 70% y Curitas (grupal) 2 Agujas para Vacutainer N 21 (individual) 1 cpsula para Vacutainer y jeringuilla de 10 mL (individual). 1 Torniquete plano (rotulado con el nombre del estudiante, individual) 2 Tubos de ensayo con EDTA al vacio de vidrio (tapa lila, individual). 2 Tubos de ensayo sin anticoagulante al vacio de vidrio de 8 o 10 mL (tapa roja individual). 1Gradilla 2 tubos de ensayo pequeos limpios y secos, codificarlos. 3 tubos de ensayo grandes limpios y secos, codificarlos. 1 Pipeta automtica 100-1000L, puntas azules 1 Pipeta automtica 10-100L, puntas amarillas 1 vaso de precipitacin 50mL. Envase para desechos cortopunzantes Envase para desechos infecciosos Envase para desechos comunes Vaso de precipitacin hipoclorito de sodio (solicitar al responsable de laboratorio)
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Centrifuga

4. FUNDAMENTO TERICO LA SANGRE

La sangre es un tejido fluido que circula por capilares, venas y arterias de todos los vertebrados. Su color rojo caracterstico es debido a la presencia del pigmento hemoglobnico contenido en los eritrocitos. Es un tipo de tejido conjuntivo especializado, con una matriz coloidal lquida y una constitucin compleja. Tiene una fase slida (elementos formes, que incluye a los leucocitos (o glbulos blancos), los eritrocitos (o glbulos rojos) y las plaquetas) y una fase lquida, representada por el plasma sanguneo. Su funcin principal es la logstica de distribucin e integracin sistmica, cuya contencin en los vasos sanguneos (espacio vascular) admite su distribucin (circulacin sangunea) hacia casi todo el cuerpo. COMPOSICIN DE LA SANGRE Como todo tejido, la sangre se compone de clulas y componentes extracelulares (su matriz extracelular). Estas dos fracciones tisulares vienen representadas por: 1. Los elementos formes tambin llamados elementos figurados: son elementos semislidos (es decir, mitad lquidos y mitad slidos) y particulados (corpsculos) representados por clulas y componentes derivados de clulas.
1) El plasma sanguneo: un fluido traslcido y amarillento que representa la matriz extracelular lquida en

la que estn suspendidos los elementos formes. Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fraccin "celular"), adscribible casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% est representado por el plasma sanguneo (fraccin acelular). CARACTERSTICAS FSICO QUMICAS. a) La sangre es un fluido no-newtoniano (aquel fluido cuya viscosidad vara con la temperatura y la tensin cortante que se le aplica, como resultado, un fluido no-newtoniano no tiene un valor de viscosidad definido y constante, a diferencia de un fluido newtoniano), con movimiento perpetuo y pulstil, que circula unidireccionalmente contenida en el espacio vascular (las propiedades del flujo son adaptadas a la

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arquitectura de los vasos sanguneos). El impulso hemodinmico es proporcionado por el corazn en colaboracin con los grandes vasos elsticos. b) La sangre suele tener un pH entre 7,36 y 7,44 (valores presentes en sangre arterial). Sus variaciones ms all de esos valores son condiciones que deben corregirse pronto (alcalosis, cuando el pH es demasiado bsico, y acidosis, cuando el pH es demasiado cido). c) Una persona adulta tiene alrededor de 4-5 litros de sangre (7% de peso corporal), a razn de unos 65 a 71 mL de sangre por kg de peso corporal. VENOPUNCIN La venopuncin es la extraccin de sangre de una vena, generalmente tomada por profesionales de la salud. Tambin se conoce con los nombres alternativos de extraccin de sangre o flebotoma. Existen precauciones estndares para la recoleccin de sangre, y todas las muestras deben tratarse como infecciosas para evitar patgenos transmitidos por sangre (hepatitis C, B, D, sfilis, paludismo, VIH). El uso de guantes y el lavado de manos al comienzo del procedimiento son parte fundamental para prevenir la diseminacin de enfermedades infecciosas. La manera ms comn de recoleccin de las muestras de sangre es el empleo de un sistema de tubo al vacio. El sistema presenta un tubo sellado al vacio, una guja y un adaptador que se utiliza para asegurar la aguja y el tubo. SELECCIN DE UNA VENA PARA LA VENOPUNCIN DE RUTINA Las venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las ms comunes para la venopuncin. Las tres venas principales que se utilizan son: 1) Vena ceflica ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la mano. 2) Vena baslica ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo meique de la mano y 3) Vena cubital mediana, que conecta las venas baslica y ceflica en la fosa antecubital (flexin del codo) y es la vena de eleccin. Si el paciente aprieta el puo despus de aplicar el torniquete, la vena se torna ms prominente, el mdico o flebotomista debe palpar la vena con su dedo ndice, para determinar la profundidad, la direccin y el dimetro de la vena.

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Fig. 1 Venas del antebrazo dos incidencias

Fig. 2 Introduccin correcta e incorrecta de la aguja para venopuncin Se elegirn preferentemente venas en extremidades superiores, evitando venas varicosas, trombosadas o utilizadas previamente, adems se evitar repetir intentos de puncin en la misma zona por la formacin de hematomas. Si se prevn perfusiones o el paciente es portador de alguna patologa en un miembro concreto, utilizaremos el miembro contrario.

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En la sangre venosa se pueden realizar diferentes estudios analticos: 1. 2. 3. 4. Bioqumicos: Glucosa, colesterol, etc Hemticos: Biometra(hematimetra) Inmunolgicos: bsqueda de anticuerpos( Sida, hepatitis) Microbiolgicos

Se puede acceder a la sangre del paciente por tres vas. SANGRE VENOSA

SANGRE CAPILAR:

Lanceta SANGRE ARTERIAL:

Capilar Heparinizado

Sangre capilar

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Jeringa y aguja especficas para gasometra con heparina sdica TUBOS VACUTAINER Los tubos vacutainer estn predeterminados para llenarse con un determinado volumen de sangre por vacio, el tapn de caucho esta codificado por color, de acuerdo a su uso o sus aditivos. As por ejemplo:

USO: Bioqumica, Inmunologa, Banco de Sangre ADITIVO: Ninguno

USO: Bioqumica ADITIVO: Gel separador o coagulantes

USO: Hematologa ADITIVO: Anticoagulante EDTA

USO: Pruebas de coagulacin ADITIVO: Anticoagulante citrato de sodio.

ORDEN DE EXTRACCIN: Se recomienda el siguiente orden de extraccin cuando se toman varias muestras a partir de una sola venopuncin. Su propsito es evitar errores en los resultados debidos a contaminacin cruzada por los BIOQUMICA PRCTICA I
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aditivos de los tubos. 1. Hemocultivo

Frascos de hemocultivos 2. Tubo sin aditivos (tapn rojo). 3. Tubo para coagulacin (tapn celeste). 4. Otros tubos con aditivos: - Tubo con gel o separador de suero. - Tubo con heparina. - Tubo con EDTA. - Tubo con oxalato de potasio o Fluoruro de sodio. COMPLICACIONES EN LA RECOLECCIN DE SANGRE 1. Equimosis (contusin) 2. Sincope (desmayo) 3. Perdida de la vena 4. Petequias 5. Edema 6. Obesidad 7. Tratamiento intravenoso 8. Hemoconcentracin 9. Hemolisis 10. Venas quemadas, daadas, con cicatrices y ocluidas. 11. Convulsiones, temblores. 12. Vomito, ahogo. 13. Alergias.

HEMOSTASIA Y COAGULACIN SANGUNEA El trmino hemostasia significa prevencin de la prdida de sangre. Siempre que un vaso se rompe, ocurre una hemostasia que se produce mediante: 1. 2. 3. 4. Espasmo vascular. Formacin de un tapn de plaquetas. Formacin de un cogulo sanguneo debido a coagulacin de la sangre. Crecimiento final de tejido fibroso que cierra la rotura de forma permanente.
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MECANISMO DE LA COAGULACIN SANGUNEA La coagulacin sangunea se produce a travs de tres pasos esenciales:
A. En respuesta a la rotura o a la lesin de un vaso sanguneo, se forma un complejo de sustancias

llamado activador de protrombina.

B. El activador de la protrombina cataliza la conversin de la protrombina en trombina. C. La trombina acta como una enzima y convierte el fibringeno en hebras de fibrina, que forman una

malla alrededor de las plaquetas, las clulas sanguneas y el plasma para producir el cogulo. La protrombina se convierte en trombina. La protrombina es una protena plasmtica inestable que puede dividirse fcilmente en compuestos ms pequeos, uno de los cuales es la trombina. La protrombina se forma de manera continua en e hgado, pero cuando este no puede fabricarla, su concentracin en el plasma cae en 24 horas a valores demasiados bajos para que la coagulacin de la sangre sea normal. El hgado necesita vitamina K para sintetizar la protrombina, por lo que tanto las carencias de vitamina K como las enfermedades hepticas impiden la formacin normal de protrombina, lo que se traduce en una tendencia a las hemorragias. El fibringeno se convierte en fibrina, con formacin del cogulo. El fibringeno es una protena de elevado peso molecular que se sintetiza en el hgado. Debido al gran tamao de su molcula, la cantidad de fibringeno que en condiciones normales pasa por los poros capilares hacia el lquido intersticial es muy escasa. La trombina es una enzima que acta sobre la molcula de fibringeno, de la que separa cuatro pptidos de bajo peso molecular para formar una molcula de monmero de fibrina. Esta molcula de monmero de fibrina polimeriza con otras similares para crear las largas hebras de fibrina que producen la red del cogulo. La red de fibrina recin formada se refuerza gracias a una sustancia llamada factor estabilizador de la fibrina, que normalmente se encuentra en pequeas cantidades en el plasma. Las plaquetas atrapadas en el cogulo tambin liberan esta sustancia. El factor estabilizador de la fibrina y las hebras de fibrina adyacentes, reforzando as la trama de fibrina. Durante el inicio de la coagulacin se forma activador de la protrombina a travs de dos mecanismos bsicos: 1. Va extrnseca, que comienza con el traumatismo de la pared vascular y del tejido adyacente. 2. Va intrnseca, que se inicia en la propia sangre. En ambas vas interviene una serie de protenas plasmticas de tipo B-globulina. Estos factores de la coagulacin de la sangre son enzimas proteolticas que inducen las sucesivas reacciones en cascada del proceso de la coagulacin.

ENFERMEDADES QUE CAUSAN HEMORRAGIA EXCESIVA EN LOS SERES HUMANOS La hemorragia excesiva puede deberse a una deficiencia de vitamina K, a una hemofilia o a una trombocitopenia (deficiencia de plaquetas). La vitamina K es necesaria para la formacin de cinco importantes factores de la coagulacin: protrombina, factor VII, factor IX, factor X y protena C. En ausencia de vitamina K, la insuficiencia de los factores de la coagulacin puede conducir a una grave tendencia a la hemorragia.

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Las hemofilias se deben a las deficiencias de los factores VIII o IX y afectas de forma casi exclusiva a los varones. La hemofilia A o hemofilia clsica se debe a la deficiencia de factor VIII y es la responsable de alrededor del 85% de los casos. La causa del otro 15% es la deficiencia del factor IX. Estos dos factores se transmiten a travs del cromosoma femenino como rasgo recesivo; las mujeres casi nunca sufren hemofilia porque al menos uno de sus dos cromosomas X contiene los genes adecuados. La trombocitopenia es la deficiencia de plaquetas en el sistema vascular. Las personas con trombocitopenia tienden a sangrar a partir de vasos de pequeo calibre o capilares. La consecuencia es que se producen pequeas hemorragias puntiformes en los tejidos de todo el cuerpo. La piel de estas personas muestra muchas manchas violceas, pequeas, que son las que dan a la enfermedad el nombre de prpura trombocitopnica. ANTICOAGULANTES UTILIZADOS EN LA CLNICA

La heparina se extrae de distintos tejidos animales y puede prepararse en forma de sustancia casi pura. Aumenta la eficacia de la antitrombina III. La accin de la heparina en el organismo es casi instantnea, y una dosis normal (0,5-1 mg/kg) puede incrementar el tiempo de coagulacin desde alrededor de 6 minutos hasta 30 minutos o ms. Cuando se administra demasiada heparina, su efecto puede contrarrestarse con la sustancia llamada protamina, que se combina electroestticamente con la heparina y la inactiva. Los cumarnicos como warfarina disminuyen las concentraciones plasmticas de protrombina y de los factores VIII, IX y X. Warfarina produce su efecto compitiendo con la vitamina K por los lugares reactivos en los procesos enzimticos de la formacin de protrombina y de otros tres factores de la coagulacin.

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5. DISEO EXPERIMENTAL Anotar datos del paciente Nombre, Edad, Sexo, Tipo de anlisis, Fecha. Asignarles un cdigo, el mismo que se colocar en el tubo al momento de la extraccin. Explicar al paciente el procedimiento. Colocar el brazo hiperextendido, de manera que la mano est ms baja que el codo. Verificar que en el sitio a puncionar se encuentra intacto y lejos de focos de infeccin. Colocar el torniquete por encima de la flexura del codo de 5 a 10 cm, pedir al paciente que cierre el puo. Seleccionar la vena por palpacin cuidadosamente. Inmovilice la vena seleccionada colocando el pulgar debajo de la zona de puncin y tense la piel, desinfectar la zona elegida con una torunda de alcohol, dejar secar al aire. Rompa el sello de seguridad de la aguja e insrtela con un giro en el receptculo hasta el tope. Con el bisel hacia arriba puncione la piel con un suave y rpido movimiento. La pared superior de la vena debe ser puncionada y el bisel debe quedar en el interior de la vena. Cuando la aguja est asegurada se conecta el primer tubo una vez que empiece a salir la sangre soltar el torniquete. Si se usa sistema de vaco se encajar el tubo en el extremo y ste se llenar inmediatamente de sangre con un volumen hasta agotar el vaco del tubo. El tubo sin anticoagulante destaparlo y dejarlo reposar en la gradilla sin homogenizar por 10 minutos, el tubo con anticoagulante debe ser homogenizado suavemente. Una vez obtenida la cantidad necesaria de sangre retiraremos la aguja, con un movimiento rpido y suave hacia atrs y apretamos la zona con una torunda de alcohol. Separar suero del tubo tapa roja utilizando la centrifugar a 3000 RPM por 10 minutos. Separar plasma del tubo tapa lila utilizando la centrifugar a 3000 RPM por 5 minutos.

6. CUESTIONARIO 1. En qu especmenes biolgicos y muestra se realizan la mayor parte de anlisis bioqumicos? 2. Qu es un perfil bioqumico? 3. Que informacin nos proporciona una biometra hemtica completa? Seale los valores referenciales en hombres y mujeres adultos. 4. Qu analtos se cuantifican en los siguientes perfiles bioqumicos: Perfil heptico, Perfil renal y Perfil lipdico. 5. Algunas de las pruebas de coagulacin son: Tiempo de protrombina (TP) y Tiempo de Tromboplastina Parcial (TTP). Qu mecanismos de coagulacin evalan cada una de ellas, cuales son los valores referenciales? 6. Qu categora de medicamentos pueden alargar el tiempo de coagulacin y/o evitar la agregacin plaquetria? 7. Existe alguna diferencia entre los fluidos biolgicos: suero y plasma. 8. En el fundamento terico se numeran las complicaciones ms frecuentes al extraer sangre, como puede evitarlas y/o solucionarlas. 9. Cules son las razones para el rechazo de una muestra de sangre obtenida por puncin venosa para realizar determinaciones o anlisis bioqumicos?

REFERENCIAS:
1. 2. 3. http://www.meddics.com/apuntes-y-resumenes/fisiologia/hemostasia-y-coagulacion-sanguinea.html HENRY, John. 2005. El Laboratorio en el Diagnostico Clnico. Madrid, Marbn. MURRAY, Robert. Bioqumica de Harper. 16edicin, Manual Moderno. Mxico. 2004. Dra. Rosa Elisa Cruz T.

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