INTRODUCCION A LA ENZIMOLOGIA ENZIMOLOGIA.

- ciencia encargada del estudio de la estructura, funcin, cintica qumica, naturaleza y modelos matemticos de las enzimas. ENZIMA.- las enzimas son catalizadores de los sistemas biolgicos, son molculas de gran inters que determinan la pauta de las transformaciones qumicas tambin intervienen en la transformacin de una forma de energa a otra. Su importancia radica en su alto poder cataltico, siendos capaces de acelerar las reacciones en los sistemas biolgicos, multiplicando su velocidad por un milln de veces o incluso ms. Adems las enzimas son altamente especficas tanto en la reaccin que cataliza como en la seleccin de las sustancias reaccionadas denominadas sustrato. La catlisis tiene lugar en un centro especfico de la enzima, llamado contra activo, todas las enzimas son protenas , pero no todas las protenas son enzimas. La especialidad de una enzima se debe a la interaccin precisa del sustrato con la enzima .esta precisin es el resultado de la compleja estructura tridimensional de la protena enzimtica. Las enzimas son compuestos de gran pm que sobrepasa los 12.103 g/ mol estn formadas de aminocidos y para su actividad catalica necesitan de cotactor y coenzima .en una enzima. La parte proteica --- apo enzima Grupo prosttico.- cuando el cafactoro coenzima o ambos estn unidos en forma ntima y permanente a la apoenzimas es estable la variacin de temperatura y ph lo que se desnaturaliza es la apoenzima (parte proteica) Coenzima compuesto orgnico complejo diferente a los aminocidos como vitaminas complejo B La enzima catalticamente completa se llama haloenzima= apoenzima+g prosttico. Cotactor

Coenzima Ambos IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS La vida de depende de la existencia de catalizadores poderosos y especficos que son las enzimas y prcticamente todos las reacciones bioqumicas son catalizadores por una enzima. Son importantes en el estudio de enfermedades especialmente en los que son genticamente heredables, puede haber una deficiencia o incluso una ausencia total de una o ms enzimas. Los frmacos ejercen sus efectos a travs de la interaccin con enzimas volvindose muy importantes en la industria qumica. Tienen en un gran poder cataltico muy superior al de los catalizadores sintticos u orgnicos y son muy especficos. Funciones en soluciones aciosas o en condiciones muy suaves de temperatura g ph Con la excepcin de pocas molculas de RNA catalticos, todas las enzimas conocidas son protenas .muchos necesitan coenzimas no proteicas o contactores para desempear cataltica. El fundamento bsico de una enzima es disminuir el gasto de energa en una reaccin qumica. APLICACIN Industria alimenticia.- lcteos panadera, cervecera, fabricacin de zumos, fabricacin de glucosa y fructuosa a partir de maz, refinado de azcar. Productos mdicos y farmacuticos: tratamientos teraputicos, rganos artificiales. Industrias textiles.- reduccin del tiempo de labrado de textiles. Ingeniera gentica.- produccin de enzimas recombinantes.

MOMENCLATURA. Las enzimas han sido nombradas y clasificadas de acuerdo al sistema de nomenclatura de la Unin Internacional de Bioquimica (UIB) por la comisin de enzimas (EC) la clasificacin y nomenclatura de las enzimas es definitiva hoy da y se apoya en tres principios generales. a) El nombre de las enzimas debe terminar en el sufijo asa y referirse solamente a la actividad cataltica cuando nos encontramos ante una accin cataltica llevada a cabo por un conjunto de enzimas que realizan un actividad compleja debe agregarse la palabra sistema sufijo para enzimas proteolticas. b) Las enzimas deben ser clasificadas de acuerdo con la reaccin que catalizan. c) La accin del sustrato y cosustrato (coenzimas) constituyen la base de la

clasificacin que consta de cuatro nmeros para cada enzima. d) El primer nmero se refiere a la accin y est constituido por seis grandes y grupos ( oxidaeductosas , trasteasos, hirolusas, liasas, el segundo indica la subclase el tercero a la sub-clase y el cuarto a los sustratos que forman parte en la reaccin. Ejemplo. Otras caractersticas de las enzimas. Las enzimas son protenas globulares ya que deben ser solubles. Las enzimas actan en concentraciones muy pequeas. Especialidad.- las enzimas son especificas al grupo que enfocan. Ejemplo Tripsina enzima proteoltica que atora los enlaces peptdicos provenientes de aminocidos con carga positiva. Ala-gly-phe-lgs-Met- Tgr- Mis- Cgs- Cgs-Mct. Quimiotripsima. Enzima paleolitica que atora a los enlaces pepticos provenientes de aminoacidos exclusivamente.

Las enzimas no influyen en el equilibrio de la reaccin. CLASIFICACION Las enzimas se clasifican en 6 clases que se nombran a continuacin. 1. Oxido reductosas.- enzimas que catalizan la transferencia de e, n normalmente de un sustrato a otro. Clasificacin Deshidrogenados.- utilizan coenzimas del tipo NAD+ O EL Fad como aceptores de electrones Oxidosas.- usan el oxigeno como aceptan de electrones pero no lo incorpore al sustrato. Peroxidosas.- usan el H20 como aceptan de electrones Hidroxilosas.- introducen un grupo hidroxilo Oxigenosas.- introducen oxigeno al sustrato.

Coenzimas de oxidoreductosas. Ejemplos 2. Trasterosas que catalizan la trasnferencia de grupos de un sustrato a otro o tenbios al agua. Clasificacin Ejemplo Glucosa + Arp - D glucosa G fosfato + ADp+Ah Fostotransferosas fosfato inorganico Acetil trasnterosas: grupo acilo Glicotransterosa; residuo de cabohidrato Pirotosfotransferosas, pirofosfato Metil transferosas; grupo metilo Aminotrasferosas: grupo amino

Oxal acetato +Alanina== Asp+ Piravato. TRANSAMINACION AX+B A + BX Formacin de un nuevo aminocido a partir de una fuente de nitrgeno o de un nuevo aminocido. Tres casos Condiciones

BG: piridoxina, vitamina, hidrosaluble, presenta 3 formas

Fosfato de peridoxal.- sirve de enzima para multiples enzimas que intervienen en prcticamente todas las reacciones. Mecanismo de reaccin 3. Hidrolosas.- Enzimas que catalizan reacciones de hidrolisis , teniendo como sustrato al agua. Clasificacin Estereasas.- rompan el enlace estar de los triacilgliceroles entre otros. Repticlasas. Rompan el enlace peptdico. Fosfatosas. Quitan al grupo Glucosidosas. Retican molculas de carbohidratos. A-B+H20- A-H-+ B-CH Ejemplos. 4. Liasas.- son enzimas que catalizan la transferencia de grupos al doble enlace o tambin alH20 ademas forma ciclos.

Clasifican. Aldolasas.- producen aldehdos a travs de reacciones de eliminacin Descarboxilasos.- liberar C02 por reacciones de eliminacin Sintasis.- unen dos molculas sin la intervencin del ATP Ejemplos. 5. Isomerosas.- tranferencia de grupos dentro de una misma molecula ,dando formas isomtricas. Clasifican. Racemasas.- interconvierten a los estereoisomeros L D Epimerosas. Intervienen epmeros Mutuosas. Transfieren grupos dentro de la misma molecula. Ejemplos. 6. Ligasas.- son enzimas que catalizan la unin hidrolitico de un trifosfato. Ejemplos Clasificacin Carboxilosas.- unen al CO2 con otra molecula Sintetosas. Utilizan al ATD para unir 2 moleculas. a expensas del rompimiento

PRINCIPALES COENZIMAS Y COFACTORES.

PROTEINAS. Las protenas son molculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. Estructura primaria de las protenas.-la estructura primaria de las protenas es la secuencia de los aminocidos de la protena. Nos indica que los aminocidos componen la cadena palipaptidica y el orden en que dichos aminocidos se encuentran. Esta determina la estructura tridimensional de la protena que a su vez determina sus propiedades .Aqui se pueden describir todos los enlaces covalentes ( principalmente enlaces peptdicos y partes disultura.) que unen los residuos de una cadena palipeptidica. Estructura secundaria de las protenas.- se refiere a las disposiciones particularmente estables de los aminocidos que den lugar a patrones estructurales respectivos .los aminocidos a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas que tienen capacidad de giro en sus enlaces adquieren una disposicin especial estable .en la estructura secundaria las cadenas palipeptidicos se pueden llegar en estructuras regulares como la hlice alta y la hoja plegada beta y giros y bucles. Estructura terciaria.- describe todos los aspectos del plegamiento tridimensional de un palipetido esta estructura secundaria de un polipedtico al plegarse a si mismo originado una conformacin globular la misma que les permite a las protenas solubles en agua se plieguen en estructuras compactas con un nuevo nucleo no polar con las funciones de transporte enzimticos, hormonales etc. Esta conformacin se mantiene gracias a enlaces entre los radicales de los aminocidos como puentes disulfuro, puentes de hidrogeno, puentes elctricos , interacciones hidrfobas.

Estructura cuaternaria de las protenas.- esta estructura informa de la unin mediante enlaces dbiles ( no covalentes) de varias cadenas polipeptidicos con estructura terciaria para formar un complejo proteico. Enlaces coval.- enlace peptdico enlace por puentes disulfuro. Enlaces por puente disulfuro.- se establece el oxidarse dos sistemas para formar una y unin de dos azufres. Enlaces ionicos salinas.- en las protenas hay distintas regiones con cargas opuestas que se atraen por fuerzas electrostticas esto es debido a la presencia de aminocidos con carga de ph fisiologa aminocidos ( acidos glog Asp) carga positiva y aminocidos bsicos (H3,Cgs,Ag) con carga negativa (-) Puentes de hidrogeno existen diferentes enlaces por puentes de hidrogeno la mayora de los enlaces por puente de hidrogeno estn formados por el esqueleto palipeptidica laminal B Interacciones metotubicas.- se dan en las cadenas laterales de los aminocidos hidrofobicos estos aminocidos suelen disponerse en el interior de la protena evitando de esta manera interacciones con el agua . Fuerzas de vander woals.-son afecciones elctricas dbiles entre diferentes atomos ,estas fuerzas son el resultado de las fuerzas atractivas y repulsivas que se establecen al acercarse los atomos de marea que existe una distancia en qye la estacin es mxima.Estas fuerzas se deben a que cada atomo posee una nube electrnica que puede fluctuar creando dipolos temporales , el dipolo transitorio en un enlace puede inducir dipolo comolemento que otro enlace,provocando que dos atomos de los diferentes enlaces se mantengan juntos. FUNCIONES PRINCIPALES DE LAS PROTEINAS. Estructural- cologeno Inmunolgica anticuerpos Enzimtica pepsina Contrctil actina y miosina Momeostatica

Traduccin de seal- rodposina Protectora o defnsiva- humbina tibiogeno Hormonas Protenas de almacenamiento Protenas de transporte

CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS SEGN SU CONFORMACION Proteinas fibrosas ( insolubles) Colgeno tejido conectivo, tendons De queratina - peloaos Elastina- tejido conectivo elstico PROTEINAS GLOBULARES (SOLUBLES) Immunoglobulinos- respuestas inmune Albuminas- coaguladas por calor Homogublina y mioglobunina - transportadores de 02 Insulina- hormona Tipsina- Mictolitica AMINOACIDOS Un aminocidos es un compuesto organico antotero formado por un grupo carboxilo y un grupo amino. Estos compuestos forman protenas ( monmeras) mediante la formacin de enlaces peptdicos Enlace peptdico= grupo carboxilo+ grupo amino del carbono alfa de otro aminodido. Aminoacido proteico

C004 HeM-C-HCH2 CH3 En disolucin acuosa los aminocidos presentan comportamientos anftero. Aminocidos proteicos. Estn certificados en los acidos nucleoicos.Existen 20 distintos y se incorporan como tales a Las protenas Aminocidos no proteicos.- no forman parte de las protenas y resultan de modificaciones de los aminocidos proteicos. CLASIFICACION DE LOS AMINOACIDOS Grupos R apolares alifticas. Grupos raromaticos Grupos R polares sin carga Grupos R cargados positivamente Grupos R cargados Ejercicio Realice un dipeptico. Realizar el siguiente polipeptido y predecir la migracin Ph=1 Carga+2 Migracin del catodo Pm=7

Todos los carbuxilos al catodo No hay migracin o ningn lado Carga=0 Ph=13 Todos los A.A. disociales Carga -2 Migracin del anodo ESTRUCTURAS MACROMOLECULARES Coenzima A Descarboxilacion oxidativa del acido pirvico Biosntesis y la oxidacin de acidos grasos G reactiva PRINCIPALES COENZIMAS NAD+ (Dinodeotico de adenina y milotinonda oxidado) NADP+ (Fosfato dinudeotico de adema y nicotinamida) FAD Flavina dinudeotico Purinas Adenina Pirimidinas Timina GTP( Guanosin trifosfato)

Nicotinamida METABOLISMO CELULAR Carbohidratos------- proceso de ------ ATP Lipidos--------------transformacion----- H20 o Co2 Protenas---------------------------------- Nh3 urea

Productos de desecho

monosacridos Aminocidos

H20 Co2 NH3

a. Grasos + glicerol

Glucolisis CICLO DEL ACIDO CITRICO. Reaccin neta de la glucolisis Glucosa + 2Pi + 2NAD + 2ADP ---- 2 Pirivato +2ATP+2(NAD+H+) + 2H20

Reaccin neta del ciclo de Krelos 2CH3-C-SCO4+6NAD+2FAD+2(ADP+Pi)+ 4CO2+L6(NADH+H+)+ 2FADH2+2ATP O GTP Vias anaerobicas 4H20 C04+ 2H2+

Proceso anarerobico facultative ( fermentacion alcohlica) Fermentacin y metabolismo del etanol Piruvato Descarboxilosa 2VH3-C-C00-------------------- 2CH3-C-H+C02 Piruvato ------------------ Acetaldehdo

Alcohol Deshidrogenosa 2CH3-C-H+2NAD+H-------------------------2NAD +2CH3-CH2-0M 0 Acetaldehdo 2CH3-C-000 + 2 (NADM+H)--------------- 2CH3-CH2-0H + 2NAD + SCO2 Ecuacin global de la fermentacin de la glucosa o medio anaerbico facultativo. D glucosa +2NAD+2(ADP+Pi)----- 2CH3-C-Cos+2(NADM+IH)+2ATP+2H20 2CM3-C-C00+ 2(NADH+H+)---- 2CH3-CH2-0H+2NAD+2CO2 D glucosa + 2(ADP+Pi)------------- 2 CH3-CH2-0H+2ATP+2H20+2C02 Descaboxilosos Deshidrogenosa( NAD+) Ecuacion global de la fermentacion de la glucose en medio anaerobico estricto Proceso anaerobico estricto----- fermentacion lctica Etanol

Lactato o piruvoto Deshidrogenosa 2CH3-C-C00+2>(NADH+M+)------------ 2CH3-CH-C00+2NAD Piruvato D glucosa + 2 NAD+ 2( ADP+Pi)----------- 2CH3-C-00+2(NADH+H+)+2ATP+2H20 Lactado o piruvato Deshidrogenosa D glucosa + 2 ( ADP+Pi)------------------------ 2CH3-CH-C00+2ATP+2H20 --------------------Loezima NAD+ Cofacter K+ Via aerobia Preparacin para ingreso de Krebs A formacin del oxacetato CH3 I=0 C=0+CO2+ATP ------ O Piruvato Carboxilosa Piruvato Ec:6 C00 oxalacetato C00 C=0 CH2 + ADP+ Pi

B. oxidacin del piruvato

2CH3-C-C00+2 ( H-S-CoA) +2H20+2NAD+ FAD ------< 2CH3-C-SCOA+acetil CoA Piruvato complejo piruvato Deshidrogenosa (E1.E2.E3) 2Hc03+2(NADH+M) E1.- Piruvato deshidrogenosa Complejo Multienzimatico enzimas E2.- Transacetilosa del dihidropolio E3.- Deshidrogenosa del hicropoito

Co.- Ash Coenzimas TPP- Tiamina pilosfato Ac lipoico FAD NAD Reoxidacion del FAD y del NAD NADH ADP+Pi ATP+H20 UBIQ C1 ADP+Pi ATP+H20 ADP+Pi CCC C2 ATP+H20

RENDIMIENTO DEL ATP 10(NADH+H+)+ 30(ADP+Pi)+ 5O2 ----- 30 ATP+10NAD+40H20 2(FADH2)+ 4(ADP+Pi)+02----- 4ATPD + 2 FAD+ GH20 ECUACION GLOBAL EN MEDIO AEROBICO DE LA GLUCOSA D. glucosa + 30 (ATP+Pi) +602- 30 ATP + 6 C02 + 44H20 MODO DE ACCION DE LAS ENZIMAS. Energia libre. En una reaccin qumica si los reactivos poseen mayor energa que el 0 los productos se libera energa durante la reaccin .El cambio de energa libre en el sistema esta dado por la ecuacin AG:AH-TAS La relacion que existe entre la energa esta dado por las siguientes AG=AG +RT Ke= constante de equilibrio Si la reaccin esta en equilibrio AG=0 AG= -RT lnKe ENERGIA DE ACTIVACION Cantidad de enrgia expresada en caloras necesarias para llevar todos los molculas de una mol de sustancia a una temperatura determinada al estado de transicin Eficiencia cataltica. Todos los enzimas exaltar la velocidad de Rx en un rango comprendido de 108 -1020 Los factores que contribuyen a la eficacia enzimtica son las siguientes:

1.- proximidad y orientacin .-el enzima se une al estrato de tal modo que el enlace suceptible no solo se halle prximo al grupo cataltico si no tambin este orientado del modo preciso de tal forma que el complejo (ES3) alcance un estado de transicin 2.- tensin y distorsion ( acoplamiento inducido) la unin del sustrato puede inducir un cambio de conformacin de la enzima que pone en tensin la estructura del centro activo y distersiona al sustrato unido colaborando a llevar al complejo ES al estado de transicin ,este cambio se llama acoplamiento incluido el E al S 3. Catalisis acido base.- el sitio activo de la E puede proporcionar grupos R de ( residuos de aa especificas que son buenos dedores y buenos aceptores estos grupos son potentes tratalizadores para reaccin en medio adverso. 4.-catalisis covalente.- el enzima reaccina con el sustrato para formar el complejo E-Sunidos por covalencia y muy estables que experimente una fx ulteria para formar los productos con mayor facilidad que en los RX no catalizados. Temperatura se considera por 10 de aumento la velocidad de Rx se duplica PM= cada enzima tiene un PH optimo de Rx Estomago_ acido Intestinos_basico Mitoconeria_ bsico Ruptura de enlaces: los enzimas pueden romper los enlaces de 2 maneras Ruptura hemoltica.-el rompimiento del enlace es igual ,el carbono y el hidrogeno se dividen los O y forman 2 radicales Carbonica : Cuando el carbn se lleva por el e+H+ Ruptura metecolitica Carbotica cuando el M se lleva el por el E

+M CINETICA ENZIMATICA CONCEPTOS IMPORANTES Molecularidad .-corresponde al numero de reactantes involucrados en una reaccin

elemental si dos reactantes A y B chocan con un par un producto entonces la molecularidad es 2 y si es n solo reactante la molecularidad es 1 Orden de reaccin.- es la suma de las protenas a las cuales se eleva los trminos de concentracin. 2A+B-C VR=K[ ] Molecularidad 3

1B-- O+E VR=K[ ] Orden Unimolecular A+B--D VR=K[ ] Orden 2

Unidad de actividad enzimtica.- (u) es la cantidad de enzima que en condiciones optimas de temperatura Ph y fuerza ionica es capaz de transformar en sus productos respectivos de nikemol de sustrato en un minuto. Katal.- cantidad de enzima necesaria para transformar 1 mol de 2 sustratos. Actividad especifica.- actividad enzimtica por miligramo de protena total, representa el grado de pacificacin enzimtica. AE:u/mg Km.- (constante para cada enzima) concentracin de S a la que Vo es v max es una medida de afinidad por el S

Kcat.- (constante para cada enzima) numero de recambio: numero de molculas de sustrato convertidos en producto por molculas de enzimas y unidad de tiempo en condiciones la saturacin del sustrato.

Principio de accin de masas.- la velocidad de una Rx qumica es proporcional a la Cj de los reactivos involucrados y las ctas de proporcionalidad se denomina ctas de velocidad. A+B-- -- K-1 C+D

Directa Vd= k1(A( B) Inversa Vi= K-1-(c) (o) En equilibrio Vd=Vi [ [ ]] [ ][ ]

[ ][ ] [ ][ ]

Velocidad de reaccin simplemente es el cambio de la C de una especie por unidad de tiempo

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REACCION ENZIMATICA 1) E+S 2) ES K1- ES Reaccion rpida= equilibrio rpido E+P Reaccion lenta= detiene la velocidad de reaccin. [ ][ ] [ ]

] [ ]

Vmax=Kcat(ET) ECUACION DE MICHAELIS-MENTEM El modelo anetico de michaelis-mentem describe entre la velocidad inicial (vo) y la concentracin de sustrato ( ES) A una concentracin constante de enzima la velocidad de reaccin o proporcional a la concentracin de sustrato hasta un valor asintatica v max La deduccin de M-H- supone una terminacin rpida del equilibrio entre la enzima y el complejo La Vo siempre ser proporcional ( directamente ) a la concentracin de ES Briggs.- la variacin de cualquier especie qumica en la que puede concentrarse el enzima es respecto al tiempo es = 0 [ ] [ ]

Es todo estacionario en el estado estacionario la velocidad de formacin es Es es igual a la V de comprensin del complejo es.

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] [ ] [ ][

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Balance de masas [

] [ ] [ ]

Constante de disociacin => Remplazando (1) (2)

][

[ ][ ] [ ]

SI se considera

Orden mixta cuando la S es del mismo orden en magnitud que km Rango de C optimo de sustrato FORMAS LINEALES DE LA EC DE MICHAELIS Y MENTEM

Se la obtiene multiplicando la E.C. de lineaves y Burt por ES Eadie & Motstee

Ejercicios resueltos La enzima de la glucomulosa cataliza la Rx glucosa 1 fosfato glucosa 6 Fosfato la cual tiene libre de grabs -- -7,3 Kj/ mol si la enzima se agrega a una sol de e las molculas de glucosa 1. Tostado a 37 cual seria la temposicion de la solucin en equilibrio

En los siguientes datos se obtuvieron la V de reaccin que tiene estequiametricamente. Determine el orden de reaccin Orden total de reaccin = Un estracto enzimtico crudo contiene 20 mg de protena /ml 10 ul es de estracto en un volumen de reaccin de 0,5 ml cataliza la produccin de 3 u o mas de productos en un minuto en condiciones optimas de trabajo calcula a) La Vo de reaccin en moles /min/ml b) La concentracin del enzima de U/ml de extracto c) La actividad especifica del extracto d) La actividad del extracto si tienes 100 ml del mismo

Calcular el # de recambio de una enzima de om 3000 si 1,5 mg de enzima contenido en alcuotas de 0,5 ml de una prepracion enzimtica volumen sobre el sustrato especifico con una v max inicial de 3 u moles Cual seria la actividad total de la preparacin si el volumen fuera de 100ml Cual seria la actividad especifica.

Se agrego una cantidad constante de una sol de enzima en una serie de mezclas de reaccin que contenan C de sustrato , se estima que la Vo de reaccin midiendo al pendiente inicial de la curva progresiva de formacin de productos de llenando los siguientes resultados.