UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS LICENCIATURA EN QUMICO BILOGO (ACTUAL)

LABORATORIO DE HEMATOLOGA

PRCTICA # 4 BIOMETRIA HEMATICA, DETERMINACION DE HEMATOCRITO Y DE VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR MESA # 1 INTEGRANTES: Jimnez Garca Maricela Lpez Garca Cecilia Martnez Vicente Erika Pacheco Vsquez ngela Andrea Santiago Sanchez Isidro Sosa Luis Sorely Adelina Ortiz Cervantes Roberto Luis. CATEDRTICO:

M.C. NADIA ESTEVA DURN

GRADO: 6 GRUPO: UNICO

CICLO ESCOLAR: 2011-2012

fecha de elaboracin de la prctica 4 de octubrede 2011 fecha de entrega de reporte: 11 de octubre de 2011

PRCTICA # 4 BIOMETRIA HEMATICA, DETERMINACION DE HEMATOCRITO Y DE VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR. 1.- INTRODUCCIN:
La citometra Hemtica tambin denominada Hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que la informacin que de aqu se deriva nos proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del paciente, consta de 2 bloques:

Formula Roja: La determinacin de la frmula roja se compone de los siguientes parmetros: A. Hematocrito (Ht): Es el porcentaje de la sangre que est compuesta por eritrocitos. B. Hemoglobina (Hb): Es determinada la cantidad de esta protena expresada en g./dl. C. Conteo eritroctico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro de sangre. Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritroctico son: 1. Cambios que inciden directamente en la circulacin de eritrocitos: anemia, los tres parmetros disminuyen aunque este decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamao eritroctico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el clculo e interpretacin de los ndices de la formula roja son de ayuda en estos casos. policitemia, donde aumente el nmero de eritrocitos circulantes denominado policitemia absoluta, tambin puede darse un aumento transitorio en los eritrocitos circulantes denominado policitemia relativa (descritos posteriormente). 2. Cambios en el volumen plasmtico: deshidratacin.

parenteralmente dando una lectura que simula anemia. D. Indices eritrocticos: Determinados mediante clculos matemticos.

1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamao eritroctico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma: anemia macroctica en la que la interferencia en la sntesis del ADN causa inhibicin de la divisin celular y la resultante es la aparicin de eritrocitos de gran tamao (como ocurre en los casos de deficiencia de vitamina B12 y cido flico). Tambin aumenta transitoriamente en los casos de reticulocitosis ( anemia regenerativa).

2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en el eritrocitos expresada en picogramos.

extracelular tambin est implcita, aunque el ndice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Durante la reticulocitosis permanece normal o ligeramente elevado.

3. Concentracin de Hemoglobina Globular Media (CHGM): (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que est relacionada directamente con el eritrocito. Es el ndice ms preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes. ado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro, as mismo puede incrementarse en los casos de esferocitosis marcada.

4.- Velocidad de Sedimentacin globular media (Wintrobe): Es la precipitacin de los eritrocitos en un lapso de tiempo estandarizado (1 hora), se relaciona directamente con la tendencia eritroctica hacia la formacin de rouleau as como a la concentracin plasmtica de globulinas y fibringeno.

2.- OBJETIVOS
Saber realizar las pruebas correspondientes a la sangre para saber el estado de salud de un paciente. Conocer los trastornos y complicaciones que puede traer una deficiencia en la sangre

3.- FUNDAMENTOS

HEMATOCRITO La sangre est formada por una parte corpuscular (clulas sanguneas) y una parte lquida (plasma). De la parte corpuscular aproximadamente el 90% corresponde a glbulos rojos. Si la sangre se hace in coagulable (por EDTA en proporcin 1-9) y se centrfuga; se obtiene la separacin de la parte corpuscular y la plasmtica. La primera en la que se observa hemates, leucocitos y plaquetas es la que tiene mayor densidad por lo que quedar en el fondo del tubo, en cambio el plasma corresponder a la parte flotante

El hematocrito de una muestra de sangre es la relacin del volumen de eritrocitos con el de sangre total. Se expresa como un porcentaje P/V o preferiblemente en una fraccin decimal en las que las unidades L/L (son longitudes) estn implcitas. La heparina seca, el oxalato equilibrado o el EDTA resultan satisfactorios como anticoagulantes. El hematocrito venoso coincide estrechamente con el obtenido con la puncin cutnea (yema del dedo). Ambos son mayores que es hematocrito corporal total. El hematocrito se puede medir directamente (por centrifugacin con macromtodos o micromtodos) o de forma indirecta (como el producto de CVM -volumen corpuscular medio- por el recuento de hemates en aparatos automticos). Analizando la sombra que produce la poblacin eritrocitaria al reflejarse en un campo oscuro. LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR Es una propiedad fsica de la sangre. Si se dispone de un tubo de sangre con anticoagulante y se deja en reposo se observa que despus de un cierto tiempo las clulas sedimentan formndose un paquete de hemates a nivel del fondo del mismo. Una vez finalizado este proceso quedan 2 fases bien delimitadas que corresponden al plasma y a las clulas constituidas prcticamente en su totalidad por hemates. La VSG es equivalente a la longitud del recorrido descendente de la parte superior de la columna de hemates en un intervalo determinado de tiempo y varios factores contribuyen a este valor. La VSG constituye una medida de agregabilidad de los hemates y depende fundamentalmente de los siguientes valores:

FACTORES PLASMTICOS Los niveles elevados de fibringeno y en menor medida de las globulinas favorecen una VSG acelerada. Estas molculas asimtricas de protenas tienen un efecto mayor que otras protenas respecto a la disminucin de la carga negativa de los eritrocitos que tienden a tener los aparatos. La disminucin de este potencial promueve la formacin de apilamientos que sedimentan ms rpidamente que las clulas aisladas. La albmina y la lecitina retrasan la sedimentacin y el colesterol la acelera, FACTORES ERITROCITARIOS

La anemia es responsable de un incremento de VSG ya que la variacin de la relacin eritro-citoplasma favorece la formacin de apilamientos independientemente de las variaciones en la concentracin de protenas plasmticas. La VS es directamente proporcional al peso del agregado celular e inversamente proporcional al rea superficial. Los microcitos se sedimentan con mayor lentitud que los macrocitos que tienen un rea superficial disminuida en relacin con el volumen. Las pilas de monedas tambin tienen un rea superficial muy disminuida en relacin al volumen y aceleran la VSG. Los hemates con forma anormal o irregular tales como las clulas falciformes o los esferocitos dificultan la formacin de pilas y diminuyen la VSG. Factores plasmticos: 1- Fibringeno (, , -globulinas) elevacin de la VSG 2- Colesterol elevacin de la VSG 3- Albminas y lecitina disminuyen la VSG Factores eritrocitarios 1- Anemia aumenta la VSG FACTORES QUE HAY EN LA VSG La sedimentacin globular se realiza en 3 etapas: 1- Hemoglutinacin: o tendencia de los hemate4s a formar agregados en forma de pilas de monedas. (ms importante) (210') 2- Sedimentacin: o desplazamiento de los hemates hacia el fondo del recipiente a velocidad constante. (340') 3- Acmulo de hemates en el fondo del recipiente (315') La ms importante es la hemaglutinacin ya que de ella depender la velocidad de todo el proceso as cuanto ms pequeas sean los agregados ms lentamente se producir la sedimentacin y viceversa. Las protenas (fibringeno y globulinas) facilitan la hemoglutinacin y la tendencia a formar pilas de monedas. En un individuo normal la VSG se mantiene constante gracias al equilibrio existente entre el efecto de las albminas y el de las restantes protenas del plasma. Aunque se trata de una prueba emprica y altamente inespecfica la determinacin de VSG es de gran utilidad en clnica ya que fuera de las posibles variaciones fisiolgicas constituye siempre un signo de enfermedad.

4.- PROCEDIMIENTO
A B EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO tubos de wintrobe tubos capilares tubos de hemlisis con anticoagulante pipeta pasteur o cnula metlica. bulbo de hule gradilla de plastilina gradilla de sedimentacin microcentrfuga macrocentrfuga DESARROLLO DE LA PRCTICA

HEMATOCRITO (HTO) MACROMETODO: METODO DE WINTROBE. a) Se obtiene sangre venosa, se coloca en un tubo con anticoagulante y se mezcla por inversin. b) se llena el tubo de hematocrito de una sola vez hasta la marca de 10 evitando la formacin de burbujas. c) Se centrifuga a 3000 rpm durante 30 minutos. d) la altura de la columna de glbulos rojos se toma como valor hematocrito y se multiplica por 100 para expresarlo en valor porcentual. micromtodo: se utilizan tubos capilares de 1 mm de dimetro interno y 75 mm de longitud. a) la sangre sube por capilaridad en el tubo y se lleva hasta las dos terceras partes dejando sin llenar aproximadamente 15 mm del capilar. b) el extremo seco del capilar se cierra con plastilina o ala llama de un mechero. c) se centrifuga en microcentrfuga durante 5 minutos a 10 000 rpm. d) se lee el valor del hematocrito en una escala directa, en algn dispositivo diseado para esta lectura omitiendo y empleado la siguiente formula (regla de tres). VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG) a) Se llena el tubo de wintrobe hasta la marca de 10 cm. b) Dejar reposar en posicin vertical a temperatura ambiente durante 60 minutos. c) Hacer lectura cada 15 minutos hasta completar los 60 minutos. d) El valor se expresa en mm/hr. VALORES NORMALES HTO: MUJERES 37 47 % HOMBRES 42 52 % VSG : MUJERES 0 20 mm/hr HOMBRES 0 9 mm/hr

CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

MTODO MACRO MTODO: CAPILARES. LECTURAS DEL HCT CON DEFERENTES DISPOSITIVOS 1.- REGLA M2 (Maricela)= 45.9M1 (Andrea) = 38.59

2.- LECTOR PARA MICRO HEMATOCRITO

M1 (Andrea) = 38.00 M2 (Maricela)= 45.5

3.- CRIPTOCAPS M1 (Andrea) = 39.00 M2 (Maricela)= 41.0

RESUMEN: HEMATOCRITO (HTO) MACROMETODO: METODO DE WINTROBE. paciente regla Lector micrometacrito Angela 38.59% 38 Maricela 45.09% 40.5

para

Critocaps 39 41

MTODO MICRO MTODO: CAPILARES. 1.- REGLA M1 (Andrea) = 66.12 2.- LECTOR PARA MICRO HEMATOCRITO M1 (Andrea) = 39.00 3. - CRIPTOCAP M1 (Andrea) = 85.00

MACROMETODO: METODO DE WINTROBE. LECTURAS DEL VSG

SUERO

GLBULOS ROJOS

M1 (Andrea)M2 (Maricela) 57% SUERO 42% GLBULOS ROJOS

56% SUERO 42% GLBULO ROJOS

MICROMETODO: METODO DE WINTROBE. M1 (Andrea) 38mm/hrs SUERO 62mm/hrs GLBULOS ROJOS M2 (Maricela)

NOTA: NO SE REALIZO LA LECTURA CORRESPONDIENTE YA QUE EL LLENADO DEL TUBO DE WINTROBE CON LA MUESTRA SANGUNEA FUE INCORRECTA
VALORES NORMALES HTO: MUJERES 37 47 % HOMBRES 42 52 % VSG : MUJERES 0 20 mm/hr HOMBRES 0 9 mm/hr

5.- INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES Un valor bajo del hematocrito (HCT) suele ser signo del padecimiento de una anemia. Sin embargo, hay falsos descensos del HCT ocasionados por hemodilucin (por ejemplo, el de la hidremia* del embarazo).Paradjicamente, el HCT suele ser normal en la fase ms temprana de las hemorragias agudas, pues en stas se pierden clulas y plasma en la misma proporcin. Un valor alto del HCT suele ser signo del padecimiento de una poliglobulina. Sin embargo, tambin hay engaosos ascensos del HCT producidos por hemoconcentracin (por ejemplo, el de la deshidratacin). La VSG, fisiolgicamente, en determinadas circunstancias. As pues, es ms alta en la mujer, y aumenta en la vejez y a partir del tercer mes del embarazo. En esta ltima circunstancia, sus valores vuelven a la normalidad, un mes despus del parto. El aumento de las protenas (sobre todo el del fibringeno y el de las globulinas 2, y ) produce una alteracin en las propiedades fisicoqumicas del plasma que conlleva un bloque de las cargas elctricas negativas de los hemates. Este bloqueo acarrea un apilamiento de los eritrocitos y, por tanto, una formacin de agregados de glbulos rojos. Los agregados hemticos, al ser ms pesados y al tener un rea superficial ms baja (en comparacin con su volumen) que los hemates aislados, descienden ms fcilmente mientras el plasma asciende.

En el presente trabajo, en el que se mide de manera simultnea la VSG con un mtodo estndar (Wintrobe) y con un micro mtodo mediante capilares, encontramos que la medicin de la velocidad de sedimentacin globular mediante una muestra de sangre anti coagulada con EDTA y colocada en un capilar sin heparina es una prueba sencilla, barata, muy sensible y con una buena correlacin con la prueba de Wintrobe, cuya normalidad nos permite descartar las posible alteraciones de las mismas pruebas. Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prctica hemos llegado a las siguientes conclusiones que plantea la literatura revisada para la realizacin de ese protocolo, pudiendo afirmar los siguientes: Un valor bajo del hematocrito suele ser riesgo de padecimiento de una anemia. Sin embargo hay falsos descensos del hematocrito ocasionados por hemodilucin por ejemplo el de la hidremia durante el embarazo. Paradjicamente HCT suele ser normal en la fase temprana de las hemorragias agudas, pues en esas se pierden clulas y plasma en la misma proporcin.

Una valor alto de hematocrito suele ser signo de padecimiento de una poliglobulina, tambin hay engaosos ascensos del hematocrito por la hemoconcentracin por ejemplo la deshidratacin. La VSG fisiolgicamente en determinadas circunstancias es ms alta en la mujer y aumenta en la vejez y a parir del tercer mes de embarazo. En esta ultima circunstancia, sus valores se vuelven a la normalidad un mes despus del parto. El aumento de protenas produce una alteracin de las propiedades fisicoqumicas del plasma que conlleva un bloque de las cargas elctricas negativas de los hemates. Este bloqueo acarrea un apilamiento de los eritrocitos y por tanto una formacin de agregados de glbulos rojos los agregados hemticos al ser mas pesados y al tener un rea superficial mas baja que los hemates aislados, descienden ms fcilmente mientras el plasma asciende.

ANEXOS 1. Cul es la importancia de la determinacin de hematocrito, desde el punto de vista de diagnstico clnico? Es importante ya que es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que est compuesta de eritrocitos. Esta medicin depende del nmero de eritrocitos y de su tamao.Este es indicado cuando hay signos de anemia, deficiencia en la dieta, leucemia u otra afeccin mdica.

2. Indique otros mtodos para calcular el valor del hematocrito. Los mtodos que solo se mencionan son el micromtodo (microhematocrito) y el macromtodo (macrohematocrito).

3. .Que ventajas y desventajas tienen el microhematcrito con respecto al macrohematcrito? Los dos tienen como desventaja el que el plasma quede atrapado entre los eritrocitos empaquetados y el posible efecto de los leucocitos y plaquetas en la lectura. El macrohematocrito tiene como desventaja sobre el microhematocrito que tiene ms inexactitud e imprecisin.

4. Enumere tres padecimientos en los cuales se encuentra alterado el hematocrito.

 Anemia Sangrado Cardiopata congnita 5. A qu se deben los cambios en la sedimentacin de los glbulos rojos? Factores fsicos (la morfologa eritrocitaria y el VCM) Factores plasmticos (las protenas plasmticas y la albumina ya que se cree que estas protenas disminuyen la carga electrosttica de la membrana de los hemates, disminuyendo la repulsin entre ellos y favoreciendo su agregacin. Inflamacin Causas patolgicas y fisiolgicas. 6. Mencione 5 padecimientos en los que se encuentra elevada la VSG. Anemia Embarazo Artritis reumatoide Insuficiencia renal Neoplasias

7. Como se realiza la correccin de la VSG en padecimientos con anemia.

BIBLIOGRAFIA Manual de tcnicas de laboratorio en hematologaJoan Llus Vives i Corrons, Josep Llus Aguilar Bascompte - 2006 - 741 pginas http://es.wikipedia.org/wiki/Velocidad_de_sedimentaci%C3%B3n_globular www.abctusalud.com http://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina http://www.imbiomed.com.mx/1/PDF/Mu0318-08.pdf