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n nuovo concetto di sal ute, intesa gano svolti sempre più frequentemente (6) e tumori (7). Lo stress ossidativo è
parti colare attenzione allo studio e a lla portato all'ipotesi che la compos iZIon e identificazione delle molecole selezio
valorizzazione delle proprie tà salutisti di natura polifenolica della fibra rossa nate è stato inoltre necessario lo svilup
che del Baobab (Adansonia digitata L.) possa essere responsa bile di questo po di una idonea metodica estrattiva e
un albero il cui millenario uso da parte comportamento. di purificazione del prodotto in analisi.
delle popolazioni africane ha portato a
definirlo "albero farmacista". • Scopo del lavoro • Materiali e metodi
I! lavoro qui descritto rapp resenta un I prodotti ottenuti da Adansonia Digi
. 11 Baobab approfondimento della valutazio ne della tata sono stati forniti da Baobab Fruit
(Adansonia digitata L.) capacit à antiossidante di tale pianta, sia Company Senegal e anali zza ti in seguito
Il Baobab è una pianta pantropicale esplorando nuovi estratti da essa otteni a estrazione con metanolo. Gli estratti
appartenente alla famiglia delle Bomba bili sia mediante metodiche alternative secc hi di piante e frutti sono stati forniti
caceae originaria dell'Africa centrale, alla fotochemiluminescenza (PCL) già da Polichimica srl. I frutti freschi sono
in particolare delle zone sahariane del da noi applicata (lO). Nelle precedenti stati acquistati presso i supermarket
Mali, successivamente diffusasi in varie ricerche da noi condotte erano emerse locali e analizzati, freschi o liofilizzati,
regioni del mondo con clima tropicale. interessanti proprietà antiossidanti nei in seguito a estrazione con metanolo.
Tale pianta riveste una notevol e prodotti di Adansonia digitata , eviden I test per la determinazione della
importanza per le popolazioni del con ze utilizza te per la recente inclusione capacità antiossidante e dei fenoli totali
tinente afri cano, dove tutte le sue parti del frutto nell'elenco dei novel foods sono stati eseguiti, in triplicato, utiliz
trovano utilizzo a scopo fitoterapico (13); abbiamo ritenuto pertanto impor zando le seguenti metodiche descritte
e nutri zionale (12). Sono infatti note tante indagare le proprietà antiossidanti in seguito.
le sue nume rose proprietà: da quella del Baobab ne i confronti di diverse spe I! test DPPH, c he prevede l'utilizzo
analgesica, antipiretica e antinfiamma cie ossidanti e i possibili meccanismi del radicale 1,1-difenil-2-picril-idrazile
toria a quella antiossidante del frutto d'azione. In particolare per questo stu (DPPH), è una delle metodi c he più
fino all'attività nei confronti di virus, dio sono stati selezionati il test ORAC semplici e veloci per la valutazione
batteri e parassiti umani di foglie e fiori (Oxygen Radical Absorbance Capacity), del potere a ntiossidante di estratti o
o quella sull'apparato ci rcolatorio della standard universalmente riconosciuto composti puri, ma ha lo svan taggio di
corteccia. Dal punto di vista nutriziona della misura della capacità antiossi essere piuttosto aspecifica poich é il
le la parte della pianta più interessante dante verso radi cali perossidici; il test radicale preso in considerazione non è
é il frutto. La polpa del frutto di Baobab del radicale DPPH (1,l-difenil-2-picril ti picame nte biologico. Questa metodica,
può essere, infatti , ritenuta una fonte idrazile), utile per l'aIutale l'attività nei infatti , consente di misurare l'attività
preziosa di principi nutrizionali , quali confronti dei radi cali dell'azoto, e il riducente di molecole antiossidanti nei
glucidi, microelementi, fibre solubili e test FRAP (Ferric Reducing Antioxidant confronti del DPPH' caratterizzato da
non , e soprattutto di vitamina C, pari Power), che mette in evidenza la capa un colore l'OSSO porpora, che alla pre
a 2,8-3 g per ogni kg di prodotto. Tali cità riducente dei prodotti in esame. Al senza di un agente antiossida nte deco
caratteristiche conferis cono a questo fine di valutare comparativamente le lora . Quest'abilità è valutata attraverso
alimen to importanti proprietà nutraceu proprietà di Adansonia digitata que la misura della diminuzione dell'as
tiche da quella antiossidante a quella sti stessi test sono stati effettuati in sorbanza a 517 nm della soluzione di
prebiotica. A supporto di quanto appena parallelo su altri frutti, sia freschi c he radicale dopo la reazione con i prodotti
riportato la polpa del frutto di Baobab e liofilizzati e s u estratti secchi di piante da testare e i risultati vengono espressi
stata recente mente inserita nell'ele nco e frutti noti per la buona attività radical come ICon ' ovvero la concentrazione
dei novel foods e ha ottenuto l'autoriz scavenger. dell'estratto c he causa una diminuzione
zazione dalla Commissione Europea a I.:investigazione è stata completata del DPPH" iniziale del 50%.
essere immessa nel mercato europeo da un'analisi qualitativa dei polifenoli La valutazione dell'attività antiossi
(13). Durante lo studio abbiamo osser presen ti nella fibra del frutto, che ha dante in vitro di un prodotto può essere
vato che la polpa e i se mi del frutto sono mostrato la capacità antiossidante più effettuata anche con metodo ORAC
ricoperti da un fitto reticolo di fibre di elevata in tutti i test effettua ti . Tale (Oxygen Radical Absorbance Capacity)
colore ros ato, che assumono un' intensa a nalisi è stata condotta mediante tecni che consente di misurare la capac ità
colorazione l'ossa dopo apertura del ca HPLC e per confronto con un set di inibente che può eserci tare un antios
frutto ed esposizione a luce e aria. Tale molecole antiossidanti da noi seleziona sidante nei confronti dei radicali peros
processo non si verifica quando il frutto te, acqu isendo oltre al cromatogramma silici (ROO'), estremamente diffusi a
viene mantenuto in atmosfera ine rte anche gli spettri UV-vis e di massa dei livello fisiologico. La metodica ORAC
e questa osservazione empirica ci ha composti analizzati. Per una COlTetta è già stata largamente utilizzata per ~
~ determinare la capacitìl antiossidante degl i a ntiossidanti in esame di ridurre per trasferimento di idroge no (raclical
di composti puri, di estratti ottenu ti da (median te trasferimento di elellroni) gl i quen c hin g). Questo potrebbe rappre
materi,lle vegetale, come frulla e verdu ioni ferro da Fe'l+ a Fe 2 +che, in prese nza senta re un limite , tutta via, se usato in
re, o di alimenti come succhi d i frutta d i TPTZ (2,4,6- tri s(2-p yrid yl)-s-t ri az i combinazio ne co n altri tes t, può essere
o altre I)evande. Il test s i basa s ull 'ef ne) formano un complesso (Fe1 +-TPTZ) sfruttato utilme nte per clisti nguere il
fettivH capacitù protettiva cle i compos ti di colore blu co n un assorbimento mas mecca nismo di azio ne dominante in
s tudiati nel catturare radi cal i liberi , e s imo a 593 nm . La reazione è pH-dipen prese nza di d iv e rs i a ntioss idanti.
viene va luta ta cOllie la capacità di p ro dente (ideale pH 3.6) e l'assorban za Il test per la determinazione ciel
teggere la f1uoresceina (FI) dalla deg ra clecresce in moclo proporzionale alla co ntenuto di fenoli totali si basa sul
dazione indolta daIrattività radi cali ca . co nce ntrazio ne e all' attivitù dei prodotti l'utili zzo ciel rea ttivo di Folin-Ciocal
I ri s ultati ottenuti so no s ta ti es pressi in esa me . Questo saggio è in graclo di teau , una mis cela di acido fosfotunsti
come ~mul Trolox® equ iva le nti , utili z misurare solamen te l'abilità ridu cente co (R,PW I 2 0 I0) e acido fosfomolibdieo
za ndo questo compos to come s tandard del co mposto in esame nei confronti (RlMo 2010) c he si riducono in seguito
di riferi me nto. dello ione ferrico (uno dei meccani s mi all'ossiclazione dei fenoli. Nel rea tti
LI Ille todo FRAP (Fe rric Redl1cing a ntioss idanti fisiologici) mentre non è in l'O co mmerc iale cii Folin-Ciocalteau i
AlIlioxidanl Power) è basa to s ull'abilità grado di rivelare composti che agiscon o co mpost i s i trova no in solu zio ne Hcida
co me co mpless i iclra ti ottaecl ri e i clegli
ossidi ciel metallo eoordinati attorno al
TABELLA 1. CAPACITÀ ANTIOSSIDANTE DEI PRODOTTI IN fo sfa to eentrale . Il rea tti l'O s i presen ta
ANALISI OTrENUTA MEDIANTE L'UTILIZZO DI DIVERSI TEST come una solu zione g ialla c he dopo la
rea zione in prese nza di composti feno
CAMPIONI I ORAC I DPPH I FRAP I lic i s i ridu ce a una miscela ci i ossidi
blu cii tungs te no e molibdeno (W S02:j e
I mmol ICso mmol mmol MosO n ). l?analisi fornisee un dato ehe
Trolox g (mg!mL) Trolox/g Troloxlg corris ponde al co nt e nuto totale di poli
- fe noli in rel a zione a ques ta variazione
DERIVATI DEL BAOBAB colorimetrica, la quale viene misura
Polpa del frutto 243 690 82 97 ta tramite spe ttrofo tometro a 765 nm.
I ri s ultati otten uti so no s tati espressi
Foglia Micronizzata 362 72 696 526 cOllìe milli gra mmi eq uivalenti di aeido
Picciolo (Pezzetti) 177 152 337 245 gallico (GAE), uti li zzando questo com
posto co me s tandard d i riferimento.
Fibra Rossa non micronizzata 301 104 468 473 È s tata co nd ott a e sviluppata una
Fibra Rossa micronizzata 505 46 1081 1143 metodologia HPLC al fine cii poter
caratterizzare la fibra rossa per la s ua
Fibra Rossa (micronizz.) composizione in polifenoli .
Estratto Metanolico 1450 12 4363 4000
• Risultati e discussione
Seme (Polvere) 75 > 3500 - 13 Come s i può notare dai ri s ultati ripor
Buccia Seme (Pezzetti) 50 > 3500 - 1,8 tati in Tabella l e Figura l , le foglie,
le fibre ricava te d al frutto di Baobab e
FRUTII la polpa del frutto hanno mostrato una
Kiwi liofilizzato 146 1900 26 70 buona capac ità antiossidante in tutti i
test effe ttuati.
Kiwi fresco - 14000 3,8 - In pmti colare l'a ttività della polpa
Arancia liofilizzata 250 1800 28 133 del frutto nei confronti dei radieali
dell'azoto (test delracli cale DPPH = 82
Arancia fresca - 11000 4,8 - mmolTrol ox/g), ris ulta esse re s u perio
ESTRAni re a quella di due frutti cara tterizzati
da un elevato co ntenuto di vitamina
Estratto di Tè Verde C come aran cia e kiwi , ana li zza ti s ia
(70% Polifenoli) 5321 7,3 6687 6849 freschi (k iwi = 3.8, arancia = 4 .8 mmol
Trolox/g) c he in seguito a liofilizzazione
Estratto di Vite Rossa 618 > 750 - 6,4 = =
(kiwi 26, aran c ia 28 mm ol Trolox/g).
Estratto di Mirtillo Lo s tesso prodotto ha mos trato invece
un 'attività paragona bile a qu e lla cle i
(1% Antocianosidi) 922 397 128 185 frutti di rife rime nto li ofilizza ti (ara nc ia
Estratto di Mirtillo e k iwi) ne i rim anen ti due tes t dimo
s tra nd o di avere L1na capac ità radical
(25% Antocianosidi) 7657 20 2649 4561
sca venge r ne i co nfronti del radicale
Estratto di Ribes 818 750 71 128 perossile e una ca paci tà riclucente in
lin ea eo n le medesime attività esplica te
8000
Capacità antiossidante di varie parti del Baobab a confronto con quella di altri frutti
7000
6000
~ 5000
o><
e
l
4000
o
~ 3000
2000
1000
ORAC
DPPH FRAP
D Fibra Rossa non mi cron izzata • Fibra Rossa Micronizzata D Fibra Rossa (Micronizz.) Ex! MeOH
... vi applicati è stata valutata misurando di massa dei composti analizzati. dosaggio dei fenoli totali con il metodo
il contenuto di polifenoli totali presenti Per l'ottimizzazione della procedu di Folin-Ciocalteau ha mostrato che le
nell'estratto in rapporto ai grammi di ra estrattiva con metanolo sono state condizioni basiche da noi scelte forni
fibra utilizzati per l'estrazione (Tabella effettuate numerose prove, variando sia vano risultati migliori rispetto alle altre
2). La metodica che permette di valu i tempi sia il numero di estrazioni suc strategie testate.
tare questo parametro è stata messa a cessive; tale studio ha portato all'iden
punto da Otto Folin e Vintila Ciocalteau tificazione dell'estratto metanolico • Conclusioni
e si basa sull'ossidazione dei composti ottimizzato (EMO) ottenuto mediante Adansonia digitata, pianta estrema
fenolici in presenza di un particolare tre estrazioni successive di l ora cia mente diffusa nelle regioni con clima
reattivo. In questo modo è stato possi scuna operate sulla fibra rossa di Bao tropicale, vanta diverse proprietà a uso
bile identificare la procedura di estra bab. J..:estratto così sviluppato (EMO) salutistico e nutraceutico (12), da quel
zione più efficace al fine di ottenere ha mostrato una capacità antiossidante la analgesica, antipiretica e antinfiam
estratti ricchi in molecole a struttura superiore a quella esplicata dagli estrat matoria a quella antiossidante del frutto
fenolica. ti di Vite rossa, Mirtillo (l % antociano fino all'attività nei confronti di virus,
Confrontando i valori ottenuti con la sidi) e Ribes, caratterizzati da una ben batteri e parassiti umani di foglie e fiori
metodica di Folin-Ciocalteau, si è potu nota attività radical scavenger, in tutti i o quella sull'apparato circolatorio della
to stabilire che il contenuto più elevato test effettuati (Tabella l). corteccia.
di composti fenolici a parità di fibra Un importante fattore da considerare Lo scopo del lavoro qui riportato
utilizzata corrisponde all'estratto otte nella valutazione dei polifenoli in un è stato uno studio approfondito delle
nuto mediante macerazione in metanolo estratto vegetale, è la possibilità che proprietà antiossidanti di diverse palti
a temperatura ambiente, la quale risulta questi composti siano presenti, nelle di Adansonia digitata utilizzando varie
pertanto essere la metodica più efficace matrici vegetali stesse, liberi oppure in metodiche analitiche (test del radicale
nell'estrazione di polifenoli dalla fibra forma coniugata ad altri componenti, DPPH, test FRAP e test ORAC) al fine
rossa del frutto di Baobab (Tabella soprattutto zuccheri. Poiché si è scel di valutarne l'attività nei confronti di
2). Una volta identificata la metodica to di procedere alla caratterizzazione diverse specie ossidanti e i possibili
estrattiva idonea ai nostri scopi, si è dell'estratto limitandoci al confronto meccanismi d'azione coinvolti.
poi proceduto con l'ottimizzazione della con un set di standard costituito da I risultati sin qui raccolti hanno
metodica stessa, la valutazione delle polifenoli liberi, si è ritenuto opportuno messo in evidenza una buona capaci
proprietà antiossidanti degli estratti e effettuare un'idrolisi basica sull'estrat tà antiossidante di alcune parti della
infine con la caratterizzazione di alcune to, al fine di rendere disponibile per il pianta, in particolare della polpa e della
delle molecole responsabili di tale atti riconoscimento il maggior numero di fibra ottenute dal frutto di Baobab, che
vità per confronto con un set di moleco composti d'interesse. La scelta della presentano un'elevata attività radical
le antiossidanti a struttura fenolica da reazione di idrolisi in condizioni di scavenger sia nei confronti dei radicali
noi selezionate, acquisendo oltre al cro alcalinità è stata effettuata dopo prove dell'azoto che di quelli perossilici asso
matogramma anche gli spettri UV-vis e di reazioni in condizioni diverse. Il ciata a una buona capacità riducente nei
mbrosialab nasce nel 2003 come spin dell'Università di Ferrara) ruota uno staff
per cosmesi ed integrazione
A off universitario dell'Ateneo di Ferrara,
ponendosi quindi - secondo il tipico
di specialisti, con dotto rato di ricerca o
es
pubblicato dal nostro gruppo di ricerca
(lO) basato su analisi cond otte mediante
fotochemiluminescenza , una metodica
che consente di valutare l'attività dei
prodotti nei confronti del pericoloso
anion e superossid o. Successivamente
sono stati sviluppati diversi estratti di
per chi bada
fibra rossa, la parte di pianta che ha
mostrato la capacità antiossidante più
alla sostanza
elevata, arricchiti in composti a struttu
ra fenolica al fine di procedere con una
determinazione qualita ti va di alcune Estratti vegetali in tavolette
delle molecole responsabili dell'attività pratiche, efficaci,
radical scavenger.
Il metodo HPLC di caratterizzazione di uso flessibile e modulabile
messo a punto ha reso possibile iden
tificare con certezza la presenza nella
fibra rossa di Baobab di acido gallico,
acido omova nillico, acido p-cumarico,
acido ferulico e acido cinnami co, i
quali hanno mos tra to coincidenza con
i tempi di ritenzione, gli spettri UV e
il peso molecolare degli standard. •