UNIVERSIDAD DE CRDOBA LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 1 PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS OBJETIVOS.

Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de molish. Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al reactivo de Benedict. Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos especficos. FUNDAMENTOS TERICOS. PRUEBA DE MOLISH: El cido sulfrico concentrado hidroliza los enlaces glicosdicos para dar monosacridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan con -naftol sulfonato, originando un complejo prpura. Esta reaccin es general para los carbohidratos pero algunos otros compuestos orgnicos dan tambin furfural con cido sulfrico concentrado. PRUEBA DE BENEDICT: Es una modificacin de la prueba de felhing, introducida por Benedict. En ella se usa nicamente una solucin, lo cual lo hace mucho ms simple con la ventaja adicional de que el reactivo es ms estable que el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores . PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es dbilmente cido y solamente puede ser reducido por monosacridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de hidrolizar los disacridos dando as reacciones falsamente positivas. El precipitado de oxido cuproso es menos denso que en los mtodos previos y se recomienda dejar el tubo en reposo hasta que el precipitado sedimente. PRUEBA BIAL PARA PENTOSAS. Cuando se calientan las pentosas en cido clorhdrico concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones frricos para dar un color verde azuloso. PRUEBA DE SELLIWANOFF. Las cetosas deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rosado; por lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que se est estudiando. PRUEBA PARA SACAROSA. La sacarosa es el nico disacrido comn no reductor y por lo tanto no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en solucin cida y luego se ensayan la glucosa y la fructosa resultante. PRUEBA PARA POLISACRIDOS. Los polisacridos contienen slo un grupo reductor por varios cientos o ms residuos, as que en la prctica, no son reductores. La hidrlisis cida libera los monosacridos constituyentes que luego son ensayados.

MATERIALES Y RECTIVOS

Estufa o calentador Pipetas de 5 y de 10ml. Beakers de 100 y 400ml. 10 tubos de ensayo. Pinza para tubos de ensayo Gradilla Gotero Papel tornasol Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa, Sacarosa, lactosa, fructosa, almidn, leche (traer de la casa) Leche (traer)

Reactivo de Molish Acido sulfrico concentrado Reactivo de Benedict Reactivo de Barfoed. Reactivo de Bial. Alcohol Amilico. Reactivo de Selliwanoff. Acido clorhdrico concentrado. Hidrxido de sodio 1M. Solucion de yodo.

PROCEDIMIENTO Prueba de Molish: Agregue 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra que contenga carbohidratos (Leche). Aada cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml de cido sulfrico concentrado, hasta que se formen dos capas. Observe cualquier cambio de color en la interfase de los dos lquidos . Prueba de Benedict: Tome 3 tubos de ensayo; agregue al primero 0.5 ml de solucin de lactosa, al segundo 0.5 ml de solucin de glucosa y al tercero 0.5 ml de solucin de sacarosa. Adicione 0.5 ml del reactivo de Benedict a cada tubo y colquelos en un bao de agua hirviendo por 3 min. La formacin de un precipitado de color rojo ladrillo indica la presencia de azcar reductor. Prueba de Barfoed: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5 ml de solucin de galactosa, al segundo 0.5 ml de solucin de ribosa y al tercero 0.5 ml solucin de almidn. Adicione 1 ml del reactivo de Barfoed a cada tubo, hierva por 2 min y deje reposar. La formacin de un precipitado de color rojo ladrillo indica la presencia de monosacridos. Prueba Bial : Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solucin de ribosa, al segundo 0.5ml de solucin de arabinosa y al tercero 0.5ml de solucin de almidn. Adicione 0.5 ml del reactivo de Bial a cada tubo y caliente hasta que empiece a hervir, dejar enfriar y luego agregue 1 ml de alcohol amilico y agite, la aparicin de una coloracin azul verdosa es prueba positiva es prueba positiva para pentosas. Prueba de Salliwanoff: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solucin de fructosa, al segundo 0.5ml de solucin de arabinosa y al tercero 0.5ml de solucin de glucosa. Adicione 1ml del reactivo de Selliwanoff a cada tubo. Caliente durante 1 min en un bao de agua hirviendo, la aparicin de un color rojo o rosado es prueba positiva para cetosas. Prueba para sacarosa: A 2.5 ml de una solucin de sacarosa agregue 3 gotas de cido clorhdrico concentrado, caliente durante 5 minutos en un bao de agua hirviendo, enfri y agregue Hidrxido de Sodio 1M hasta que la solucin sea neutra o ligeramente alcalina (prueba con papel tornasol), divida la solucin hidrolizada en dos porciones y realice por separado las pruebas de Benedict y Selliwanoff. 1. Prueba para polisacridos: Coloque 1ml de solucin de almidn, aada 1 gotas de solucin de yodo. Observe la produccin de un color azul. Caliente el tubo Qu observa? Deje enfriar y observe nuevamente, Qu ocurre? Explique sus observaciones.

CUESTIONARIO 1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos. 2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas? 2. Explique estructuralmente, por que la maltosa es un azcar reductor y por que el almidn no lo sus observaciones 3. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los carbohidratos. 4. Por qu la celulosa a pesar de estar formada por molculas de glucosa es insoluble en agua. 5. por que la sacarosa es un azcar no reductor?. Consulte las posibles estructuras de las muestras problemas. 6. Consulte el fundamento de otras tcnicas usadas para la determinacin de la glucosa en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA: PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A. CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F. LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de ciencias. Universidad Nacional de Colombia sede Bogota.