EFECTO TOXICO DE CUATRO DETERGENTES EN LAS POSTLARVAS DEL LANGOSTINO Macrobrachium tenellum (DECAPODA: PALAEMONIDAE).

Luis Clemente Jimenez-Perez 1*+, Omar Alejandro Valero Trevio1 y Adriana Mendoza Gonzalez1. 1 Universidad de Guadalajara. Centro Universitario de la Costa. Departamento de Ciencias Biolgicas/ Av. Universidad de Guadalajara No. 203 Delegacin Ixtapa. Puerto Vallarta, Jalisco. C.P. 48280/jimenezluisc@Yahoo.com.mx, rea del Conocimiento: Ecotoxicologa acutica.

Resumen: Se evalu la toxicidad de cuatro marcas comerciales de detergentes (Ariel, Ace, foca y Roma) empleando postlarvas de Macrobrachium tenellum como organismos de prueba. La colecta de postlarvas se realiz en un pequeo lago o un canal de desage del mismo lago, situados cerca de nuestro laboratorio en el Centro Universitario de la Costa. Las postlarvas fueron capturadas manualmente con cucharones, depositadas en frascos de plstico con agua de los sitios de colecta y transportadas al laboratorio. Para determinar la toxicidad de los detergentes se realizaron bioensayos de tipo esttico agudo utilizando una solucin madre de 1000 ppm, cuatro diluciones decimales y el control. Durante los bioensayos los langostinos fueron mantenidos sin alimento. Los valores determinados de la concentracin letal media (LC50) mostraron diferencias en la toxicidad de las cuatro formulaciones comerciales. Para 24 horas de exposicin las LC50 fueron: Ace 1.0 ppm, Foca 10 ppm, Ariel 103 ppm, y Roma 209 ppm, mientras que para las 48 horas de exposicin las LC50 fueron: Foca 1 ppm, Ariel 65 ppm, y Roma 105 ppm. Estos resultados indican que las postlarvas de esta especie son susceptibles de ser utilizadas como organismos de prueba para evaluar la toxicidad por detergentes domsticos. Palabras Clave: Macrobrachium tenellum; detergentes; bioensayos; pruebas de toxicidad. Abstract: The toxicity of four formulations of detergents (Ariel, Ace, Foca and Roma) was assessed using Macrobrachium tenellum postlarvae as test organisms. The postlarvae were collected in a small lake and in a small drain channel of the same lake located near our laboratory. The captured prawn

postlarvae were deposited in plastic bottles containing water from the collection sites and transported to the laboratory. In order to determine the toxicity levels of the detergents, static acute bioassays were made using a 1000 ppm base solution with four decimal dilutions and one control. During the experiments the prawns were kept without food. Lethal concentration (LC50) estimations for 24 and 48 h of exposition showed strong differences in the toxicity of commercial detergents formulations. The 24 hours LC50 for the detergents were: ACE 1.0 ppm, Foca 10.0 ppm, Ariel 103 ppm, and Roma 209 ppm, while the LC50 48 hours were: Foca 1 ppm, Ariel 65 ppm, y Roma 105 ppm. Our results indicate that this specie postlarvae is likely to be used as test organisms of evidence to evaluate the toxicity by domestic detergents. Keywords: Macrobrachium tenellum; detergents; bioassay; toxicity tests.

1. Introduccin La contaminacin de los cuerpos de agua continentales constituye uno de los problemas ms comunes de la sociedad actual. Resulta lamentable que ros, arroyos, lagos y zonas marinas mexicanas sean el destino final de aguas residuales, basura y otros desechos. Entre las diversas formas de contaminacin que contienen las aguas residuales se encuentran los detergentes. El efecto ms visible de estas sustancias qumicas es la espuma que causan en las aguas superficiales de ros, arroyos, lagos, as como en todos los sitios donde se mezclan las aguas residuales. Sin embargo, este problema de apariencia puramente esttico, adquiere mayor relevancia si se toma en cuenta el efecto toxico que estos contaminantes podran estar ejerciendo en las poblaciones de invertebrados que habitan esas aguas. Estudios recientes han mostrado que algunas marcas comerciales de detergentes domsticos tienen un efecto toxico en algunas poblaciones de caracoles de los cuerpos de agua continental del Per y Cuba [1,2]. Sin embargo, a pesar de que estos problemas son bastante comunes en Mxico, pocos estudios han tratado de evaluar los efectos de estos contaminantes causan en las distintas poblaciones

nativas de los cuerpos de agua continentales. Por ejemplo, recientemente se ha estado estudiando este problema utilizando varias especies de poliquetos marinos [3]. Sin embargo, aunque se han determinado algunas respuestas, aun existen muchas poblaciones que habitan aguas continentales y marinas donde se desconoce la respuesta. En este estudio se seleccionaron postlarvas del langostino nativo Macrobrachium tenellum como organismos de prueba. Las poblaciones de M. tenellum est sometida a una pesquera artesanal a pesar de que existe una veda [4]. Su extraccin en ros, esteros y cuerpos de agua costeros es intensa y ocurre en muchas comunidades rurales de la costa del Pacifico [5]. Esta especie fue seleccionada por sus caractersticas biolgicas de ser bastante tolerante a las variaciones de temperatura [6], salinidad [7] y oxigeno disuelto [8]. El principal objetivo es determinar los niveles de la concentracin letal LC 50 en las cuatro formulaciones comerciales de detergentes. 2. Materiales y Mtodos Colecta de organismos y preparacin de medios Se recolectaron organismos de 10-35 mm, con un cucharn manual en un canal que permite la migracin de estos organismos desde los esteros cercanos hasta un lago artificial situado a pocos metros de nuestro laboratorio en el Centro Universitario de la Costa (CUCOSTA). El CUCOSTA se halla situado a 20 42 19 N y 105 13 16W. Los organismos recolectados se depositaron en recipientes de plstico de 1,500 mL de capacidad, con agua del sitio de colecta. Posteriormente fueron trasladados al laboratorio para efectuar los bioensayos. El Ingrediente Activo principal de la mezcla compleja de surfactantes fue el alquil aril sulfonato de sodio que corresponde a los detergentes llamados blandos o LAS fueron: Ace, Foca, Roma y Ariel). Los tres primeros son de naturaleza aninica, mientras que el cuarto (Ariel) es no inico. Para realizar los bioensayos se prepar una

solucin madre de 1,000 ppm % con agua del sitio de colecta. A partir de estas soluciones madre se prepararon cuatro concentraciones decimales: 100; 10; 1.0 y 0.1 ppm. Pruebas ecotoxicolgicas. Una vez obtenidos los langostinos y preparado las soluciones de prueba, se procedi a realizar los ensayos de ecotoxicidad. Las pruebas del tipo esttico agudo, estuvieron compuestas de un control y cinco concentraciones nominales de los detergentes: 0.1, 1.0, 10, 100 y 1,000 ppm. En cada envase se colocaron 5 individuos seleccionados al azar; se pusieron en una bandeja bajo condiciones de penumbra y realizaron lecturas de mortalidad se realizaron a las 1, 2, 6 y 24 h de exposicin. El fotoperiodo (horas de luz-oscuridad) fue el natural registrado para la zona norte del Pacifico durante el transcurso de la transicin de invierno a primavera (11-13 horas). Para cada bioensayo se utiliz un total de 60 especmenes. Durante la prueba no alimentaron los langostinos. Para la discriminacin de mortalidad se consider muerto el individuo incapaz de realizar algn tipo de movimiento durante 15 s de observacin. Anlisis de datos Las pruebas de ecotoxicidad esttica aguda para los cuatro detergentes se realizaron con dos repeticiones con las cinco concentraciones nominales sealadas previamente y el control en un diseo en bloque aleatorizado: 6 x 2. Los porcentajes de mortalidad se transformaron a unidades Probit para calcular la CL50, utilizando la formula de Finney [9]:

Cuadro1. Condiciones de pruebas ecotoxicolgicas usando Macrobrachium tenellum expuestas a soluciones de los detergentes Ace, Foca, Ariel y Roma.

Organismos de prueba

Macrobrachium tenellum

Tipo de prueba

Esttica, aguda (24 y 48 horas)

Origen del agua de dilucin

Lago artificial

Temperatura

24-26C

Fotoperiodo

11-13 horas

Tamao de frascos

40 ml y 1,000 ml

Numero de replicas

Concentraciones de la prueba

0.1, 1.0, 10, 100 y 1,000 ppm

Punto final de la prueba

Mortalidad poblacional

3. Resultados La mortalidad de postlarvas con el detergente Ace se hizo notar en la primera hora de haber iniciado el experimento pues la solucin madre present una mortalidad del 30%. La situacin no cambio en la siguiente hora, pero a las seis horas la mortalidad en la solucin madre fue del 50% (Fig. 1). En este periodo, la mortalidad a 100, 10 y 1.0 ppm fue del 10%. Sin embargo, a las veinticuatro horas la mortalidad fue del 100% en la solucin madre, as como de 70% tanto en los 100 ppm como en 10 ppm. En la solucin de 1.0 ppm se present una mortalidad importante (50%). La estimacin de la toxicidad aguda en trminos de CL50 de este detergente para 24 horas de exposicin fue de 1.0 ppm.

Figura 1. Determinacin de la LC 50 en el detergente Ace. La Figura 2 muestra las estimaciones de la mortalidad asociada con las diferentes concentraciones de prueba con el detergente Foca. Durante la primera hora de iniciado el experimento no se detect mortalidad, pero a las dos horas se registr un 10% de mortalidad en la solucin madre. A las seis horas, la mortalidad en la solucin madre aumento al 100%, mientras en la concentracin de 100 ppm se detect un 15% de mortalidad. Veinticuatro horas despus la solucin de 100 ppm alcanz el 100% de mortalidad, mientras en las soluciones de 10 y 1 ppm la mortalidad alcanz valores de 50 y 35%, respectivamente. En esta lectura, la solucin de 0.1 ppm present una mortalidad de 20%. Las estimaciones de la toxicidad aguda en trminos de CL50, de este detergente fue de 10.0 y 1.0 ppm para 24 y 48 horas de exposicin, respectivamente.

Figura 2. Determinacin de la mortalidad en el detergente Foca. El detergente Ariel fue menos toxico que los dos anteriores. En la figura 3 se puede observar que en la primera hora de iniciado el experimento no se detect mortalidad en ninguna de las concentraciones de prueba, pero a las dos horas se registr un 20% de mortalidad en la solucin madre. Seis horas despus la mortalidad aumento al 90% en la solucin madre, pero no hubo mortalidad en concentraciones menores. A las veinticuatro horas la mortalidad de la solucin madre fue del 100%, mientras que la de 100 ppm fue de 40%. A su vez, la mortalidad de las concentraciones de 10 y 1.0 ppm fue de 30 y 20%, respectivamente. La toxicidad aguda de LC50 de este detergente fue de 103 y 65 ppm en trminos de 24 horas y 48 horas, respetivamente. La toxicidad del detergente Roma fue ligeramente ms baja que la detectada para Ariel, pues durante las dos primeras horas no se registr mortalidad en ninguna de las concentraciones de prueba. A las seis horas se registr una mortalidad del 20% en la solucin madre y de 10% en 100 ppm. A las veinticuatro horas de iniciado el experimento se registr una mortalidad del 100% en la solucin madre, as como de 20% en la solucin de 100 ppm (Fig. 4). No se registr mortalidad en las concentraciones de 0.1, 1.0 y 10 ppm. La LC50 para este detergente fue de 209 ppm en trminos de 24 horas, misma que aumento a 105 ppm para el periodo de 48 horas. En general, se detect una secuencia de toxicidad aguda que present el siguiente orden: Ace > foca > Ariel > Roma.

Figura 3. Determinacin de la mortalidad en el detergente Ariel.

Figura 4. Determinacin de la mortalidad en el detergente Roma. 4. Discusin Los resultados obtenidos en este estudio indican que los detergentes pueden ser nocivos para las poblaciones de M. tenellum que habitan los cuerpos de agua continentales del norte de Jalisco. Adems, muestran que los niveles de toxicidad varan de uno a otro detergente dentro de un intervalo muy amplio. Este conocimiento podra ser de utilidad para seleccionar aquellos que causen menos dao al ambiente y sus poblaciones naturales. Considerando que los surfactantes amnicos son ms txicos que los no inicos [10] se esperaban que el detergente Ariel fuera el menos toxico de las cuatro

formulaciones consideradas en esta investigacin. Sin embargo, esto no fue as, pues fue la marca Roma la que present la menor toxicidad (LC50 de 209 ppm). En general, es complicado establecer comparaciones con resultados obtenidos con otras poblaciones de invertebrados, pues cada especie tiene su propia respuesta al ser expuestas a qumicas toxicas de esta naturaleza [11,12]. Adems, datos obtenidos con detergentes que son usados como dispersantes de hidrocarburos indican que las estimaciones de LC50 pueden generar un intervalo amplio, dependiendo del tiempo de exposicin y la temperatura [13]. La mayora de los datos disponibles en la literatura utilizan a plazos mayores (usualmente a 96 horas). Sin embargo, existen trabajos donde parece til hacer una comparacin. Por ejemplo, en determinaciones de la toxicidad de cuatro detergentes en las poblaciones del poliqueto Laeonereis culveri en un periodo de 48 horas, se han encontrando valores de LC50 entre 59.56 ppm y 91.83 ppm [3]. De acuerdo con estos autores, el detergente Foca fue el ms txico, mientras que los detergentes Roma y Puro sol fueron menos txicos. Nuestros resultados son similares a los obtenidos en este estudio, en el sentido de que el detergente foca fue uno de los ms txicos y el detergente Roma fue uno de los menos txicos. Sin embargo, los valores de toxicidad determinados en nuestro estudio presentaron un intervalo de variacin ms amplio. Ace y Foca fueron ligeramente ms txicos (1 y 10 ppm, respetivamente), Ariel se localiz dentro de ese intervalo (65 ppm), mientras que Roma fue ligeramente menos toxico (105 ppm). Los organismos de prueba de la formulacin Ace no sobrevivieron a las 48 horas de exposicin. En el plazo de 24 horas de exposicin, la toxicidad del detergente Ace resultaron ser dos rdenes de magnitud ms alta que la marca Roma, para las poblaciones de M. tenellum, mientras que la toxicidad de Ariel se ubic entre ambos extremos. Por otro lado, se ha determinado la toxicidad de otros detergentes utilizando algunas poblaciones de moluscos gasterpodos de agua dulce en periodos de 48 horas [1,2]. [2] encontraron valores de LC 50 entre 45.9 y 263 ppm, mientras que Iannacone y Alvario [1] reportaron valores de LC50 entre 71.4 y 201.07 ppm. Estos valores se encuentran dentro del mismo orden de magnitud que los valores determinados en nuestro estudio. Las determinaciones de los niveles de toxicidad de las cuatro marcas de detergentes analizadas en esta investigacin representan un primer esfuerzo por conocer los efectos que la contaminacin por detergentes comerciales ejerce en las poblaciones de M. tenellum de los cuerpos de agua continentales del estado de Jalisco. En consecuencia, las estimaciones de la LC50 obtenidas deben ser consideradas preliminares. Los valores definitivos sern determinados al establecer los lmites de confianza de ese parmetro para cada marca de detergente, una vez que concluya el estudio. Sin embargo, hay una buena noticia: que tanto nuestras determinaciones de toxicidad, como las efectuadas en otros estudios [1,2, 3] indican que en la actualidad, los niveles de contaminacin de los cuerpos de agua continental

no representan un problema importante para estas poblaciones, pues las concentraciones que corresponden a las estimaciones de las LC50 solo se han reportado en las aguas residuales [14]. Sin embargo, esto no significa que no les afecte. Investigaciones posteriores debern tomar en cuenta no solo los efectos letales, sino tambin los efectos crnicos. Es posible que concentraciones relativamente bajas afecten sus funciones fisiolgicas y reproductivas. 5. Conclusiones Entre los cuatro detergentes considerados en este estudio se registr un intervalo de variacin en sus niveles de toxicidad que abarc cuando menos dos rdenes de magnitud. Los de mayor toxicidad para las postlarvas de Macrobrachium tenellum fueron Ace y Foca, mientras que el menos txico fue Roma. La toxicidad de Ariel se ubic en un orden de magnitud intermedio. Referencias [1] Iannacone, J.; Alvario, L. (2002). Efecto del Detergente Domestico Alquil Aril Sulfonato de Sodio Lineal (LAS) sobre la Mortalidad de Tres Caracoles Dulceacucolas en el Per. Ecologa Aplicada 1(1), 81-87. [2] Alfonso-Insua, D.; Prez- Garca, C.; Morales-Monteagudo, A.; Valera Vzquez, Z.A.; Meneses Marcel, A. (2010). Evaluacin ecotoxicolgica de detergentes comerciales y naturales como criterio de contaminacin ambiental. REDVET. Revista electrnica veterinaria 1695-7504 (03B), 1-9. [3] Uc-Peraza, R.G.; Delgado Blas, V.H. (2011). Determinacin de la concentracin letal media (CL50) de cuatro detergentes domsticos biodegradables en Laeonereis culveri (Webster 1879)(Polychaeta: Annelida): Rev. Int. Contam. Ambie. 28(2), 137-144. [4] Diario Oficial de la Federacin. (2010). Acuerdo por el que se establecen pocas y zonas de veda para la pesca de diferentes especies de la fauna acutica en las aguas continentales de jurisdiccin federal en los Estados Unidos Mexicanos. Edicin del 31 de marzo de 2010, 88-90. [5] Hernndez-Sandoval. P. (2008). Efecto de la temperatura en el crecimiento y supervivencia del langostino Macrobrachium occidentale y del acocil Cherax quadricarinatus. Tesis de Maestra en Ciencias en Recursos Naturales y Medio Ambiente. Instituto Politcnico Nacional, Mxico. [6] Guzman-Arroyo, M. (1987). Biologa, ecologa y pesca del langostino Macrobrachiun tenellun (Smith 1871) en lagunas costeras del estado de Guerrero, Mxico. Tesis Doctoral en Ciencias del Mar. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

[7] Hendrickx, M.E. (1995). Camarones. En Gua para la identificacin de especies para fines de pesca. Pacifico centro-oriental. Fisher, W., Krupp, Schneider, W., Sommer, C., Carpenter, K.E, Niem, V.H. Eds; FAO, Italia. Volumen I. [8] Schiff, H.; M.E. Hendrickx. (1997). An introductory survey of ecology and sensory receptors of tropical Eastern Pacific crustacean. It. J. zool. 64, 13-30. [9] Finney, D. J. (1971). Probit Analysis. Tercera Edicion. Cambridge, University Press, 234 pp . [10] Snchez, M. (2007). Efectos Biolgicos de los Sulfonatos de Alquilbenceno Lineales (LAS) en Suelo Agrcola: Biotransformacin y Estudios de Biodiversidad. Tesis doctoral. Granada: Universidad de Granada. Facultan de Ciencias. Departamento de Microbiologa. 26 pp. [11] Singer,M.M.; Smalheer, D.L.; Tjeerdema, R.S.; Martin, M. (1991). Effects of spiked exposure to an oil dispersant on the early stages of four marine species. Environ. Tox. Chem. 10, 1367-1374. [12] Georges-Ares, A.; Clarke, J.R. (2000). Aquatic toxicity of two Corexit dispersants. Chemosphere 40, 897-906. [13] Georges-Ares, A.; Clarke, J.R. (2011). Acute aquatic effects of three Corexit products: overview.Int. Proceedings of the Oil Spill Conf. May 23-26, Portland Oregon. E.U., 1007. [14] Moreno, J.A.; Coln, A.; Vzquez, O. (1992). Remocin de fenoles, detergentes y coliformes presentes en las aguas residuales por medio de irradiacin. Rev. Int. Contam. Ambient. 8(1), 2952.