PRCTICA N06: DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES Y ALBMINA I.

INTRODUCCIN Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulacin, etc. La protena ms abundante en plasma es la albmina. Una de sus funciones ms importantes es la de permitir el transporte de cidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso. La concentracin de albmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presin coloidosmtica, lo que estara relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta. En condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma mltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orgenes, se observan hiperproteinemias. En general, ambas situaciones se ven acompaadas tambin por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con deshidratacin que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma. II. OBJETIVOS Determinar las protenas totales, albmina y la relacin A/G en suero. Realizar los clculos e interpretar los resultados en las pruebas bioqumicas de las protenas. III. IV. MARCO TERICO EQUIPOS Y MATERIALES Espectrofotmetro Centrfuga Bao Mara Reloj Cubetas Pipeta Frasco ampolla Algodn Alcohol Reactivo de EDTA/Cu

 Reactivo BCF V. PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES a) En tres tubos de ensayo marcadas B (Blanco), A (Standard) y M(Muestra colocar: B S M Agua destilada 50 l. Suero -standard 50 l. Suero- muestra 50 l. Reactivo edta/Cu 3.5 ml. 3.5 ml. 3.5 ml. b) c) d) e) Mezclar con varilla. Incubar 15 minutos a 37C. Leer en espectrofotmetro a 540 nm, llevando a cero con el blanco de reactivo. Las lecturas pueden efectuarse durante las 12 horas.

DETERMINACIN DE ALBMINA a) En tres tubos de ensayo marcadas B (Blanco), A (Standard) y M(Muestra colocar: B Suero -standard Suero- muestra Reactivo BCF b) c) d) e) 3.5 ml. S 10 l. 3.5 ml. M 10 l. 3.5 ml.

Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 C durante 10 minutos. Leer en espectrofotmetro a 625 nm, llevando a cero con el blanco de reactivo. Las lecturas pueden efectuarse durante los 20 minutos.

Clculo de los Resultados Protenas totales (g/dl) = M x F F= P.T. (g/dl) S Albmina (g/dl) = M x F F= Alb. (g/dl) S Relacin A/G = Albmina P.T. (g/dl)- Alb. (g/dl) Valores de Referencia Protenas totales : 6.1 a 7.9 g/dl Albmina : 3.5 a 4.8 g/dl Relacin A/G : 1.2 a 2.2 VI. RESULTADOS Y DISCUSIONES VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES VIII. CUESTIONARIO 1. Realice un cuadro comparativo de las protenas de la sangre (suero) mencionando su descripcin y funciones de cada una. 2. Realice un cuadro comparativo de las enfermedades donde los valores normales de protenas totales disminuyen y aumentan. 3. Realice un cuadro comparativo de las enfermedades donde los valores normales de albumina disminuyen y aumentan. 4. Mencione porque es importante realizar la determinacin de protenas fraccionas, y que protenas mide. 5. Explique el metabolismo de las protenas en nuestro organismo y su importancia clnica. IX. BIBLIOGRAFA

PRCTICA N07: DETERMINACIN DE GLUCOSA I. INTRODUCCIN Normalmente, la comida que ingerimos se convierte en glucosa, la cual es una forma de azcar. La glucosa pasa por el flujo sanguneo, donde se utiliza por las clulas como principal fuente de energa. Sin embargo, para que las clulas puedan utilizar la glucosa, la insulina tiene que estar presente. La insulina es una hormona producida por el pncreas, una glndula grande detrs del estmago. Si la insulina no est presente, o si las clulas no le responden, la glucosa se queda en el flujo sanguneo causando elevacin de los niveles de glucosa en la sangre. Cuando los niveles del azcar en la sangre son muy altos, se le llama hiperglicemia; y cuando el nivel de azcar en la sangre baja, se le llama hipoglicemia.

La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades metablicas caracterizadas por una hiperglucemia resultante de defectos en la secrecin de insulina, en la accin de la insulina o en ambas. La hiperglucemia crnica de la diabetes est asociada a lesiones, disfuncin y fallo de varios rganos, especialmente de los ojos, los riones, los nervios, el corazn y los vasos sanguneos. Fundamento del Mtodo La glucosa es oxidada enzimticamente por la glucosa oxidasa (GOD) a cido glucnico y agua oxigenada, el H2O2 en presencia de peroxidasa (POD) produce la copulacin oxidativa del fenol con la 4-aminofenazona (4-AF) dando lugar a la formacin de un cromgeno rojo cereza con absorbancia mxima a 505nm. Glucosa + O2 + H2O GOD 2 H2O2 + 4-AF + Fenol POD II. OBJETIVOS Realizar la determinacin de los niveles sanguneos de glucosa y valorar su importancia en el diagnstico de enfermedades como la diabetes. Realizar los clculos e interpretacin de los valores de glucosa. III. IV. MARCO TERICO EQUIPOS Y MATERIALES Espectrofotmetro Micropipeta Punteras para micropipetas Tubos de ensayo cido glucnico + H2O2 4(p-benzoquinona-monoimino) fenazona+ 4 H2O

 V.

Gradilla Standard de glucosa Solucin de Glucosa Oxidasa y Peroxidasa Solucin de 4-aminofenazona 25mmol/l Solucin de Fenol 55mmol/l Muestra sangre

PROCEDIMIENTO DOSAJE DE GLUCOSA a) La determinacin debe efectuarse en suero o plasma. Tomar la muestra de sangre al paciente en ayunas. b) Una vez completada la coagulacin de la muestra, separar el suero. c) Preparar 3 tubos de ensayo rotulados como el cuadro lo indica. BLANCO ESTANDAR MUESTRA 1ml. 1ml. 1ml. 10 l. 10 l.

Reactivo Estndar Suero

d) Incubar los tubos durante 10 minutos en bao de agua a 37C. Luego leer en el espectrofotmetro a 505 nm, llevando el aparato a cero con el blanco. Clculo Factor = Concentracin Estndar (mg/dl) Absorbancia Estndar Glucosa (g/l) = Factor x Absorbancia Muestra Valores de Referencia: 70 110 mg/dl VI. RESULTADOS VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES VIII. CUESTIONARIO 1. Explique los mecanismos metablicos y hormonales que regulan la concentracin de glucosa en la sangre. 2. Describa los tipos de diabetes mellitus. 3. Explique la diabetes gestacional. 4. Qu importancia tiene la curva de tolerancia a glucosa en clnica? 5. Cmo se comportan los niveles de glucosa sangunea en sujetos diabticos, tanto en condiciones basales como despus de ingerir una carga de glucosa?