UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA CENTRO UNIVERSITARIO DE OCCIDENTE DIVISION DE CIENCIA Y TECNOLOGIA CARRERAS DE AGRONOMIA Y GESTION AMBIENTAL LABORATORIO

DE BIOLOGIA GENERAL EL MICROSCOPIO Y SU USO INTRODUCCION: Con la invencin del microscopio en el siglo XVII por el cientfico holands Antn Van Leewenhoek (1632-1723), se inicia una nueva era en la investigacin cientfica del mondo microbiano. Este instrumento ptico permite ver objetos que por su tamao no son visibles a simple vista. Hoy da existen diversos tipos de microscopios tales como: Microscopio compuesto de luz Ultramicroscopio y microscopio de campo oscuro. Microscopio de fase Microscopio ultravioleta Microscopio fluorescente Microscopio electrnico de Transmisin Microscopio electrnico de Rastreo Microscopio Compuesto de Luz: Gran parte del conocimiento acerca de la clula y de sus organelos ha sido posible gracias al uso de este microscopio. Este utiliza un haz de rayos luminosos y consta de una parte mecnica y una parte ptica. A. Parte Mecnica: Base: Es la parte metlica que le da estabilidad al microscopio, generalmente tiene forma de herradura, pero puede variar de acuerdo al modelo. Columna o Brazo: Es una pieza que va adaptada es su parte inferior a la base y consta del asa para tomar y mover el aparato, la platina y el tubo portalentes. Platina: Es una lmina metlica horizontal fija o mvil que va unida al brazo y presenta un orificio central destinado a dejar el paso a los rayos luminosos. Sobre ella se ubican las pinzas para sujetar la preparacin y el carro mvil que permite mover la preparacin en diversos sentidos. Debajo de la platina se ubica la subplatina que es donde va montado el condensador. La distancia entre la platina y el condensador puede regularse utilizando un tornillo. Tubo Portalentes: Es un cilindro metlico de color negro en su parte interior para evitar la reflexin de la luz. En su extremo superior lleva el ocular y en el inferior el revolver que puede tener de 3 a 4 objetivos.

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Sistema de Enfoque: Permite desplazar el tubo Portalentes (subir y bajar en sentido vertical). Esta compuesto de dos tornillos: el macromtrico, que permite el enfoque rpido y micromtrico para un enfoque lento y preciso. Parte ptica: Fuente Luminosa: Puede utilizarse tanto luz natural como artificial, lo importante es obtener un cono homogneo y bastante ancho de iluminacin, los microscopios modernos traen incorporado el sistema luminoso. Espejo: solo lo poseen los microscopios sin luz propia. Es espejo siempre es doble, cncavo por un laso para luz prxima y plano por el otro lado para luz distante. Diafragma: Se ubica debajo del condensador y permite regular el haz luminoso, ya sea para aumentarlo o disminuirlo. Condensador: Consiste en un sistema de lentes situado debajo del orificio central de la platina y su funcin es concentrar los rayos luminosos sobre la preparacin. Tiene movilidad hacia arriba o hacia abajo mediante un sistema de tornillos. Existen diferentes tipos de condensadores de acuerdo a la tcnica de microscopia. Condensador de campo claro, de contraste de fases y campo oscuro. Ocular: Est constituido por dos lentes, el ms pequeo ubicado en la parte superior se denomina Lente Ocular y el de mayor tamao Lente Colectriz o de Campo. Generalmente los microscopios traen oculares cuyo aumento es de diez veces (10X), pero tambin existen oculares de mayor o menor aumento. Ej. 6X, 12X, 15X, 2OX. Todos los oculares al igual que los objetivos, traen indicado el nmero de aumentos. Objetivos: Se ubican en la parte distal del tubo y producen el primer aumento del microscopio y la imagen formada es aumentada a su vez por el ocular, generalmente son de 4X, 10X, 40X, 100X. Los objetivos llevan interiormente un sistema de lentes el que se encuentra ms cercano al objeto se denomina Lente Frontal. Cada microscopio posee de 3 a 4 objetivos que van atornillados a un mecanismo denominado revolver.

Existen fundamentalmente dos tipos de objetivos, uno de ellos es aquel en que el espacio entre la preparacin y el lente es el aire el de inmersin, en que se interpone entre la preparacin y el lente frontal un lquido de ndice de refraccin similar al del cristal de la lente, evitando la desviacin y prdida de rayos luminosos. El lquido ms utilizado es el aceite de Cedro. Los objetivos de inmersin se utilizan para obtener grandes aumentos y requieren de una fuente luminosa potente, ya que el aumento distribuye la luz sobre una superficie mucho mayor. Cuando se observa a travs del microscopio, es importante conocer cuntas veces se ha aumentado la imagen real del objeto. Para encontrar el aumento se multiplica el nmero marcado en el ocular por el nmero marcado en el objetivo que se esta usando. Por ejemplo, si el aumento del

ocular es de 10X (aumenta 10 veces la imagen) y el del objetivo 40X (aumenta 40 veces la imagen), por lo tanto el aumento total es de 10 por 40 esto sera igual a 400 veces la imagen. CUIDADO DEL MICROSCOPIO: El microscopio es un instrumento valioso en el laboratorio y de un costo relativamente alto por lo que debemos darle el mejor cuidado posible. Por lo tanto se recomienda que en el laboratorio siga las siguientes instrucciones: Transporte el microscopio con las dos manos, una debajo de la base y la otra en el brazo. Colquelo alejado del borde de la mesa, para evitar que se resbale. Evite inclinar el microscopio cuando use preparaciones hmedas. Limpie las lentes del microscopio nicamente con papel especial para lentes. Cuando termine su trabajo, guarde el microscopio, colocando el objetivo de menor aumento en la posicin de enfoque, la platina en su lugar ms bajo y el cordn elctrico enrollado. Preparativos Para el uso del Microscopio: Coloque el objetivo de menor aumento en su posicin de enfoque, usted sentir un clic cuando este encaje en su sitio. Obtenga la cantidad de luz correcta para visualizar el objeto. Algunas preparaciones se observan mejor con la luz opaca, otras con luz brillante. Asegrese que las lentes estn limpias. Si no lmpielas con papel especial para lentes. PARTE PRCTICA: 1. Recorte la letra T, A o F que le suministre su profesor, colquela en un portaobjeto limpio encima de una gota agua, esto se llama montaje hmedo. 2. Espere un momento antes de colocar el cubreobjeto, elimine el exceso de agua con papel secante, mantenga el cubreobjetos en un ngulo de 45o respecto al portaobjetos y entonces bjelo lentamente. Una ligera presin eliminar las burbujas de aire que pudiera haber quedado. 3. Coloque el portaobjetos sobre la platina y sujtelo con las pinzas de ajuste, mueva el portaobjetos de tal manera que la letra quede en el centro del orificio de la platina. Cercirese que el objeto de menor aumento est colocado en posicin de enfoque. Viendo por un lado la platina, use el tornillo macromtrico para bajar lentamente hasta que el objetivo llegue al tope o hasta que el objetivo este aproximadamente a 2 mm del cubreobjetos. 4. Mirando a travs del ocular, suba el objetivo con el tornillo macromtrico hasta que la letra este enfocada, use el tornillo micromtrico para afinar el enfoque. Compare cmo se ve la letra A a travs del microscopio y a simple vista.

5. Ponga los dos pulgares en cada extremo de la preparacin hmeda de la letra, mire a travs del ocular y mueva el portaobjetos hacia delante lentamente. Qu parece sucederle a la letra? Mueva el portaobjetos hacia la derecha, en qu direccin se desplaza la imagen? Qu puede decir acerca de la posicin relativa y el movimiento de los objetos cuando estos se ven a travs del microscopio compuesto? 6. Haga un montaje hmedo de dos cabellos de distinto color cruzados uno sobre otro. Observe con el objetivo de menor aumento y describa su apariencia. Coloque el portaobjetos de modo que el cruzamiento de los cabellos quede en el centro del campo. Gire el revlver hasta que el objetivo de 40X este en posicin de enfoque. NOTA: NO UTILICE EL OBJETIVO DE INMERSION PRECAUCION: Mientras est moviendo el objetivo, no utilice el tornillo macromtrico. ETAPAS PARA EL USO DEL OBJETIVO DE 4OX Enfoque la muestra con el objetivo de menor aumento Ajuste el diagrama para obtener la iluminacin ptima. Centre el objeto debajo del objetivo de menor aumento Mueva el revlver y coloque en posicin de enfoque el objetivo de 40X Aumente el enfoque solamente con el tornillo micromtrico Ajuste el diafragma para obtener la iluminacin ptima. Si usted no tiene xito en el enfoque con mayor aumento la primera vez, repita el procedimiento cuidadosamente desde la primera etapa. Mirando a travs del microscopio, usted puede diferenciar el cabello rubio del cabello negro, tambin puede observar cual esta abajo y cual esta arriba? 7. Describa y dibuje todo lo que observa. 8. Si el tiempo lo permite, examine otros materiales que le suministre el profesor de laboratorio. Dibuje todo lo que observa y reprtelo. 1. 2. 3. 4. 5. 6. CUESTIONARIO: 1. Haga un diagrama del microscopio ptico e indique sus partes. 2. Cul es el cuidado y uso que debe drsele al objetivo de Inmersin y para que se utiliza este objetivo? 3. Cul es la diferencia entre magnificacin y resolucin? 4. Cules son las diferencias bsicas entre un microscopio electrnico de transmisin y un microscopio electrnico de rastreo? 5. Describa cul es la funcin del siguiente equipo de laboratorio de Biologa: a. Incubadora b. Autoclave c. Horno Pasteur d. Cmara de inoculacin