LAS CELULAS Los progresos de la biologa celular han permitido mostrar por un lado la universalidad de las estructuras celulares

y sus principios de funcionamiento (funciones de mantencin) con sus implicancias en materias de evolucin, y por otro lado, la existencia de una especializacin celular, las funciones especializadas de un tejido estando condicionado por las actividades celulares particulares (funciones de 'lujo'). La existencia de estas ultimas implica que los programas genticos de cada clula es comn a todas las clulas del organismo pero que se expresa de manera desigual en cada clula del organismo. El estudio microscpico de diferentes tipos celulares debera permitir de subrayar estas ideas. Es tambin la ocasin de desarrollar las capacidades de expresin grafica de los estudiantes guardando en mente que el dibujo cientfico es ante todo un medio de comunicacin. Las observaciones de clase, por apasionantes que sean, quedan incompletas al mirar desde la perspectiva de los conocimientos actuales de biologa celular. Por lo tanto, ser ms interesante completar los datos obtenidos por la observacin al microscopio ptico con la observacin de las fotografas de microscopa electrnica. La realizacin de calcos anotados y comentados de las estructuras observadas sobre fotografas de microscopa electrnica es un ejercicio de formacin porque apunta a retener los elementos ms pertinentes de la observacin. Finalmente el clculo de los aumentos de las lentes es muy til para comprender el orden de magnitud puestos en juego cuando uno se ocupa de biologa celular.

1. OBSERVACION DE CLULAS ANIMALES 1.1 Observacin de clulas humanas al microscopio ptico. Tiempo: 10 min Material: Azul de metileno, esptula, portaobjetos y cubreobjetos Curso o nivel: _____________________ CONTENIDO: La teora celular PROTOCOLO Raspar delicadamente con la ua o una pequea esptula o cotonete el interior de la mejilla (boca). Depositar un poco de este producto obtenido en una lmina de vidrio portaobjeto. Cubrir con una gota diluida de azl de metileno. Colocar una lmina de cubreobjeto (inclinada para despejar burbujas). Observar al microscopio. Dibujar e indicar el tamao del aumento empleado (segn aumento del lente ocular y del lente objetivo) Es posible notar la membrana celular, el ncleo con nuclolos, el citoplasma. En ocasiones en la muestra se nota un trozo plano, o sino el trozo plano con un doblez en la esquina.

1.2 Realizacin de un frotis de sangre Tiempo: 30 min Material : Sangre animal, comprado en el comercio (resto de la sangre de un bistec crudo) (la sangre de los estudiantes no debe ser ms usada en clase). Laminas de vidrio: portaobjetos y cubreobjetos, placa de Petri, colorante de May-Grunwald y Giemsa. Cuso o nivel: _________________________ CONTENIDO: Algunos aspectos del metabolismo energtico, transporte del oxgeno Inmunologa, las clulas del sistema inmunitario El renovamiento celular PROTOCOLO Depositar una gota de sangre en el extremo de una lmina de vidrio portaobjeto. Inclinar la lmina cubreobjeto en 45 grados sobre la gota de sangre para que se estire por capilaridad. Arrastrar cuidadosamente la lmina cubreobjeto sobre la gota a travs de portaobjeto. Secar la lmina de vidrio sin cubreobjeto, agitndola y despus colocar en una placa de Petri. Cubrir la lmina con el colorante de May-Grunwald (20 gotas) y dejar actuar por 2 a 5 minutos, segn su frescura. Mientras tanto mezclar 20 gotas de colorante de Giemsa en 20 ml de agua destilada. Agregar 20 gotas de agua destilada sobre el frotis y dejar actuar 1 min. Enjuagar en agua destilada. Colocar la lmina en colorante de Giemsa, frotis hacia abajo, en otra placa de Petri. Dejar actuar 5 min. Lavar con agua destilada y secar con toalla absorbente de papel. No es necesario de una lmina cubreobjeto para conservar, ya que se conserva as por mucho tiempo.

1.3 Observacin de movimientos ciliares Tiempo: 15 min Material: Ostras o choritos, tinta china, portaobjetos y cubreobjetos, pinzas finas, estroboscopio (optativo), microscopio ptico con espejo. Curso o nivel:_______________________ CONTENIDO: Caractersticas del metabolismo energtico en los ectotermos PROTOCOLO Recortar un pequeo fragmento de las branquias del molusco, y depositar en una gota de agua proveniente de la concha, en un portaobjeto. Cubrir con un cubreobjeto. Observar al microscopio ptico y ubicar el borde de la branquia con el aumento menor. Aumentar, y observar el movimiento de los cilios. Emplear un microscopio con espejo para iluminar y apuntar ah la luz de un estroboscopio, del que se puede regular la frecuencia, para tener la impresin de enlentecer o detener a voluntad el movimiento de los cilios. Depositar otra muestra en una gota de tinta china diluida. Observar el efecto de las corrientes de las partculas. Segn la temperatura en que uno trabaja, uno podr observar una aceleracin o un aumento en la velocidad de los movimientos ciliares: en los organismos ectotermos o heterotermos, el metabolismo depende directamente de las condiciones trmicas externas.

2 OBSERVACION DE CELULAS VEGETALES Los tejidos vegetales, por la facilidad en su preparacin, su rigidez y la gran talla de sus clulas, se prestan particularmente bien a las observaciones al microscopio. Las especias mencionadas aqu, son conocidas por algunas de sus cualidades, pero cualquier otro vegetal puede ser usado tambin: los vegetales son una fuente inagotable de material de observacin. 2.1 Formacin de vacuolas Tiempo: Preveer la puesta en marcha de la germinacin de semillas algunos das antes de la actividad, luego 30 min. Material: Centeno, Trigo o Maz, semillas germinadas. Portaobjetos y cubreobjetos. Rojo neutro concentrado en 1g/L en un tampn fosfato a pH 7. Curso o nivel: ______________________________ CONTENIDO Renovacin celular Actividad metablica durante la germinacin PROTOCOLO Poner a remojar las semillas en agua durante medio da. Retirar el agua y colocar las semillas en un recipiente con algunas capas de papel absorbente o filtro que uno debe mantener hmedo. En algunos das las semillas darn brotes. Algunas semillas han sido tratadas para impedir su germinacin o brotacin. Conviene comprar semillas no tratadas. Seccionar la extremidad de la joven raz (0,5cm) y depositarla en un portaobjeto, sobre una gota de rojo neutro. Esperar algunos minutos y colocar una lmina de cubreobjeto y apretar en cima con el pulgar para aplastar ligeramente la preparacin. De esta manera se podr ver clulas diferenciadas de la punta que se separan de las clulas meristemticas (no diferenciadas). En estas ltimas la s vacuolas, coloreadas por el rojo neutro, son muy numerosas y chiquitas. En las primeras clulas, las de la punta del brote, hay una sola gran vacuola que provendra de la fusin de las vacuolas pequeas. Es imperativo que el rojo neutro sea tamponado ya que el pH cido frena, o impide la penetracin del rojo neutro en las clulas.

2.2 Puesta en evidencia de las substancias disueltas o cristalizadas en las vacuolas Tiempo: Preveer la puesta en alcohol de las muestras de tuberculos de Dalia (Dahlia spp) y de Topinambur (Helianthus tuberosus, pariente chico de la maravilla) varios das antes de la actividad de laboratorio. Estas muestras se conservan por mucho tiempo. Material: Lenteja de agua, pecolos de Begonia (Begonia tuberosa), tuberculos de Dalia (Dahlia spp) o de Topinambur (Helianthus tuberosus) cortados en cubitos y conservados en alcohol de 100, despus de varios das en alcohol en que se cambia el alcohol regularmente. Portaobjetos y cubreobjetos. Hoja de afeitar. Util para cortar: Palitos de la mdula de Suco (Sambucus sp.). Glicerol (glicerina). Microscopio equipado con platina polarizante. Curso o nivel: ______________________________ CONTENIDOS Puesta en reserva de la desintoxicacin en los vegetales, puesta en evidencia de las substancias solubles o cristalizadas de las vacuolas, constitucin de la pared vegetal. PROTOCOLO Lenteja de agua : Seccionar la fronda en el sentido del espesor con una hoja de afeitar y colocar en una gota de agua entre portaobjeto y cubreobjeto. Observar los rfidos de oxalato de calcio en algunas de las clulas. Colocar la preparacin sobre una platina polarisante de un microscopio que posea buena iluminacin. Mientras uno observa puede girar el polarizados hasta que la preparacin se vea negra, mientras que los cristales se van aclarando dada su doble refraccin. Si a iluminacin es suficiente, uno podr observar tambin la iluminacin de una parte de la pared celular, mostrando as que la celulosa de las paredes secundarias est depositada en capas paralelas, paracristalinas y birrefractante y que la lmina media, no es refractante, no tiene fibrillas de celulosa. Dalia o Topinambr: Realizar un corte fino desde el trozo en cubo y observar en un a gota de glicerina sobre portaobjeto, con cubreobjeto. La inulina de las vacuolas ha precipitado bajo la accin del alcohol en cristales esfricos. Observar tambin al microscopio polarizante. Begonia: Hacer un corte delgado en un pecolo ayudndose de la mdula de Suco. Las vacuolas contienen un precipitado cristalino de oxalato de calcio donde los cristales tienen la forma (como erizos) diferente de las lentejas de agua, que tiene rfidos (en forma de barrita). Observar tambin al microscopio polarizante.

2.3 Vacuolas slidas: los granos de Aleurona Tiempo: preveer la germinacin de granos de ricino, una semana antes Manipulacin 30 min. Material: Semillas de Ricino, brotes de ricino, hojas de afeitar, lugol, rojo neutro, portaobjetos y cubreobjetos. Curso o nivel: _____________________________ CONTENIDO Importancia del agua para los seres vivos. / Actividad metablica en la germinacin PROTOCOLO Practicar cortes muy finos despus de haber cortado en dos una semilla y colocar las muestras en portaobjetos y cubrir con cubreobjetos, usando una gota de lugol. Observar los granos de aleuronas donde el cristaloide es coloreado en caf amarillento, mientras que el globoide no lo es. Colocar las muestras de semillas y brotes en un portaobjeto con una gota de rojo neutro. La substancia fundamental y el globoide se colorean indicando su nuevo estado de hidratacin. Hacer una prueba contraria con una muestra seca.

Uno puede adems colorear los granos de aleurona con azul de toluidina despus de haber pasado unos cortes en formol. En este caso la coloracin permite diferenciar mejor los cristaloides, coloreados en azul, de los globoides, coloreados en rojo por metacromacia.

2.6 Los plastos - Los cloroplastos Tiempo: 15 min por muestra Material: jvenes hojas de Elodea (Egeria densa), Lentejas de agua (Lemna minor), hojas de puerro (Allium porrum), musgo (Funaria hygrometrica que tiene cloroplastos grandes), algas filamentosas (Spirogira por ejemplo), algas unicelulares (Pleurococos formando la pelusa verde depositada sobre los troncos de los rboles), porta objetos y cubre objetos, hojas de afeitar y palitos de medula de Suco para cortar. Curso o nivel: ________________________________ CONTENIDO Actividad fotosinttica de las clulas clorofilianas Conversin de la energa radiativa en energa qumica en los organismos clorofilianos PROTOCOLO Los fragmentos de las hojas de Elodea, de Algas Filamentosas, o de Musgo, las muestras de algas, pueden ser observadas directamente en una gota de agua entre portaobjeto y cubreobjeto. Para la lenteja de agua, es posible cortar la fronda en dos, en el sentido del espesor, con una hoja de afeitar, para poder mirar a travs. En cuanto al parnquima clorofiliano del Puerro, hay que hacer un corte transversal ayudndose de un palito de mdula de Sauco, partido en dos, para mantener el fragmento de la hoja (ver tcnica otro capitulo). Las algas filamentosas son particularmente interesante por la diversidad de formas de sus cloroplastos y por la dimensin, frecuentemente importante de sus enclaves de almidn que facilita su observacin, particularmente si se trata previamente con lugol. Los pleurococos son interesantes por su facilidad de conservacin y su cloroplasto nico. En su parnquima clorofiliano las hojas de elodea, veremos como se mueven los cloroplastos en forma cclica, lo que permite deducir como es la forma de las vacuolas. Testear la accin de la temperatura y de la luz en los movimientos de ciclosis.

Traducido del francs. Junio 2013. M.Isabel Font