NDICE

PAG . 1 1.-Introduccin ............................................................ 2.-Objetivos ................................................................. 2 2.1 Objetivo general: ............................................ 2 2.2 Objetivos especficos: ..................................... 2 3.- Marco terico ......................................................... 3 3.1 Material .......................................................... 4 3.2 Metodologa ................................................... 5 3.3 Resultados .................................................... 11 4.- Conclusin ............................................................ 13 5.- Bibliografa ........................................................... 14

1.-Introduccin
El estado de Mxico ha sido una regin visitada por numerosos botnicos, quienes han producido buena cantidad de trabajos florsticos y dejado vastas colecciones en herbarios extranjeros y nacionales. En muchos casos, tanto en lascolectas como en los trabajos, se incluyen o citan a los pteridofitosindirectamente (vase Jones, 1966; Rzedowski y Caldern, 1979 y Riba y Butanda, 1987). Matuda(1956a y 1956b) public Los helechos del estado de Mxico y Los helechos delvalle de Mxico y sus alrededores donde cit 93 y 76 especies y subespecficos respectivamente para el rea de estudio. De especial importancia son las contribuciones que Smith (1981), Mickel y Beitel(1988) y Mickel (1992) llevaron a cabo para Chiapas, Oaxaca y Nueva Galicia. A partir de la revisin de herbarios y de la literatura, as como de recolectas de campo llevadas a cabo desde 1984, el primer autor estim (Tejero-Dez, 1987) que la riqueza de pteridofitos en el estado de Mxico era muy superior a la conocida.Por tal motivo, se inici un estudio formal encaminado a conocer de manera integral la diversidad de helechos y plantas afines en el rea. Nmero de especies que dependen del bosque en un estudio realizado durante cuatro aos, se calcul queexisten 80 familias con 600 especies, entre especies maderables y no maderables. Para el bosque de Abies, se cuenta con 122 especies correspondientes a 40 familias de plantas vasculares, incluyendo 6 helechos. Para el bosque de pino-encino 426 especies corresponden a 80 familias de plantas vasculares, incluyendo 26 helechos y dos licopodios. Finalmente, las especies dependientes del bosque caducifolio son 221 especies correspondientes a 87 familias de plantas vasculares incluyendo 14 helechos y un licopodio.Entre las especies raras, se encuentran Symplocoscoccinea,

Sphaeropterishorrida, Nephalea mexicana y Valerinasorbiifolia.

2.-Objetivos
2.1 Objetivo general:
Evaluar los extractos biolgicos de la especie endmicaSphaeropteris horrida localizada en Santiago Comaltepec, Ixtlan, Oaxaca.

2.2 Objetivos especficos:

Identificar taxonmicamente a la planta Sphaeropteris horrida Preparar los extractos orgnicos de las hojas tiernas (que tiene el parentesco a una cola de mono) y evaluar la actividad biolgica. Analizar los extractos orgnicos en condiciones analticas mediante cromatografa en capa fina (CCF) y obtener el perfil cromatogrfico de aquellas sub fracciones de inters biolgico. Realizar los estudios de resonancia magntica nuclear (RMN300) a partir de los extractos contenidos en los viales con muestras preparadas.

3.- Marco terico

El estado de Mxico ha sido una regin visitada por numerosos botnicos,quienes han producido buena cantidad de trabajos florsticos y dejado vastas colecciones en herbarios extranjeros y nacionales Las categoras de la Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza (UICN) fueron asignadas subjetivamente segn el criterio de los expertos, como una primera aproximacin para evaluar la problemtica de las especies en peligro. Estos listados son tiles tanto para los jardines botnicos como para las autoridades involucradas en la toma de decisiones para protegerlas. Los helechos son un grupo de plantas que se distinguen porque en vez de flores y frutos poseen estructuras reproductoras denominadas soros, las cuales en lugar de formar semillas forman esporas y tambin por el tipo de crecimiento que presentan las hojas al desarrollarse formando una estructura denominada cayado. Esta estructura es utilizada para elaborar artesanas y macetas, las cuales se usan como sustrato para orqudeas, bromelias, helechos y otras epfitas. Las especies relacionadas a Sphaeropteris nmero de especies de este gnero horrida (fotografiadas por Tryon 1971), l

es difcil de estimar a causa de las varias

circunscripciones que han recibido de varios autores. Sin embargo es una especie rara, ya que poco se ha estudiado sobre esta planta. La cola de mono" es el material formado por las races adventicias de algunas especies de helechos arborescentes. Por su uso y comercializacin como sustrato para cultivar epfitas y como material de construccin y el indiscriminado deterioro de su hbitat muchas de las especies de Mxico se encuentran amenazadas. Se discuten diversos sustratos alternativos.

ESPECIE SPHAEROPTERIS HORRIDA

Nombre cientfico: Sphaeropterishorrida (Liebm.) Tryon Familia: Cytaheaceae Nombre comn: cola de mono Municipio: la esperanza Distrito: Santiago Comaltepecixtlan Regin: Sierra Norte Oaxaca Grosor: 85cm aprox. Altura: 3 metros Grado de divisin: tridipinada
Fig. 1. Sphaeropteris horrida

Uso: se usan las hojas tiernas que tiene el parentesco a una cola de mono (como la que se muestra en la foto), esto como para problemas cardiacos, en forma de t.

3.1 Material
Materiales Columna de cromatografa Pinzas Matraz de bola Pipetas Pasteur Algodn Varilla Capilar Placas de cromatografa de capa fina Embudo Viales Matraz kitazato Pipetas de 1ml Hielo seco Tubospara RMN Cmaras para cromatografa de capa fina Pinzas

Reactivos Hexano Diclorometano Metano Acetato de etilo Acetona Cloroformo deuterado CDCl3 TMS Sulfato crico

Equipos Rota vapor Bomba al vaco Molino Equipo para secado al alto vaco Equipo de RMN de 300 MHz Cmara al vaco Bao recirculador de presin Parrilla

3.2 Metodologa
1. Ya que la muestra este totalmente seca se tritura esto es realizado en un molino normal y se pesa lo obtenido.El contenido total de la planta fue de 367gr. de esta se ocuparon 50 gr para la obtencin de los extractos.(fig.2)
Fig. 2 Balanza analtica

2. Se monta el equipo para la extraccin. Se afianza bien con dos pinzas y luego se le agrega poco a poco la planta molida, ya que es muy fina tiende a volar con facilidad. Despus de haber agregado la planta a la columna de vidrio, se le adiciona 450 ml de hexano. Se dej macerando por dos horas. (fig.3)
Fig. 3 Montaje de la columna

3. Lugo de obtener la solucin se lleva al rotavapor, para extraerle el solvente, en este caso el hexano.Al utilizar el equipo, se comienza primero con colocar la muestra a secar, a este se agrega una pequea pinza para evitar que el matraz de fondo plano que contiene la muestra no se caiga (fig. 4).

Fig. 4 Rotavapor

4. La temperatura es regulada a 37c aprox. Se cierra la llave que regula la presin y se enciende el recirculador, luego se rota un poco, mientras se enciende la bomba al vaco, se observa cmo se condesa rpidamente, precipitando con facilidad y disminuyendo el tiempo.(fig. 5)
Fig. 5 Refrigerante

5. Ya obtenido el extracto condensado, se sigue a realizarle un anlisis en cromatografa de capa fina, se toma un pequea cantidad de la muestra con la ayuda de un capilar, este al utilizarse debe lavarse tres veces con acetona y secarse con papel.(fig. 6)
Fig. 6 matraz con muestra evaporada.

6. Se cortan las placas para cromatografa en capa fina, esto con la ayuda de un cortador de placas, con una medida de 1.5cm de ancho y 5cm de largo. (fig. 7)
Fig. 7 Cortador de placas

7. En un extremo de ella se defina una lnea con la ayuda de un lpiz y se seala el lugar donde sern aplicadas las muestras, se nombra y se anota la solucin en la
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que se correr. Luego es depositado en una cmara de cromatografa, en la cual contiene una solucin de Hexano-Acetato de etilo al 5%. Se deja correr hasta aproximadamente .5cm antes de terminar, se retira y se deja secar. (fig. 8)
Fig. 8 Cmaracromatogrfica

8. Y despus de secar, se observa a la lmpara de UV.Luego es revelado con sulfato crico, en el cual con la ayuda de un algodn mojado en sulfato crico (fig. 9), se da un
Fig. 9 sulfato crico Fig. 10 Parrilla

pasada sobre la placa corrida de arriba

hacia abajo, sin pasar por el mismo lugar, y enseguida colocado en una parrilla previamente calentada (fig. 10).

9. Luego el extracto que se encuentra en el matraz de fondo plano, es cambiado a un vial, esto con la ayuda de una pipeta Pasteur, y se le da tres lavadas al matraz para recoger toda la muestra. Luego de obtener cada una de las muestra, se llevan a secado en vaco (fig. 11).En este caso se monta este equipo con un matraz kitazato, en
Fig. 11 Vaco

donde son colocados los viales para que el extracto que tenga aun solvente, se evapore. Despus que se hayan secado, estas se llevan a pesar para ver el rendimiento obtenido y luego ser etiquetada (fig.12).
Fig. 12 Vial etiquetado

10. Se opta por realizarle un anlisis en el equipo de RMN, por lo cual se determina que se realice a las primeras extracciones de cada uno de los solventes (Hexano, Diclorometano, Acetato de etilo y Metano). Ya que las muestras en los viales se
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hayan secado, se toman las primeras extracciones, a estas se Fig.13 colocacin les agrega 1ml de acetona y se disuelve bien (utilizamos cetona porque es ms fcil y rpido de volatilizarse)(fig. 13).

11. Ya que la muestra est disuelta con acetona, se toma 0.2ml de esta, con la ayuda de una pipeta graduada de 1.0ml, es depositada en un vial ms pequeo. Esta es llevada a secar al equipo de secado de alto vaco, realizado esto en un tiempo de 5 minutos.(fig. 14)

12. Con la ayuda de una pipeta Pasteur (bien lavada) se le agrega una gota de CDCl3TMS , la cual servir como estndar. Ya que tengamos nuestra mezcla, con ayuda de otra pipeta Pasteur se toma el contenido del vial y es depositado en un tubo para RMN, se tapa el tubo y se etiqueta con un papel que solo ira por encima de l (fig. 15).Ya obtenidas
Fig. 14 equipo de secado

las muestras, nos llevan a explicar cmo funciona el equipo de RMN en el Instituto de Qumica UNAM, el equipo utilizado en el
Fig. 15 tubos para RMN

anlisis de la muestra es uno de 300 MHz.(fig. 16) .

13. Se llevan los tubos al equipo de RMN para su anlisis general y obtener los espectros preliminares mediante el software DELTApara cada extracto (fig. 17, 18, 19 y 20).
Fig. 16 RMN

Fig 17. RMN Hexano

Fig. 18 RMN Metanol

Fig. 19 RMN Acetato de etilo

Fig. 20 RMN Diclorometano

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3.3 Resultados
CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA QUE SE ESTUBO EN CADA UNO DE LOS EXTRACTOS.
Fig. 21 CCF Hexano Fig. 22 CCF Acetato de etlo Fig. 23 CCF CH2Cl2

En las dems extracciones se realizaron la elucin en Hexano: Acetato de etilo al 5% sin embargo en la de Metanol fue de Diclorometano: Metanol al 10% y claro con el revelado de sulfato crico, y se pudo observar lo que se muestra en las fotos.

Fig. 24 CCF metanol

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PESOS DEL VIAL CON EL RENDIMEINTO OBTENIDO

VIAL

PESO INICIAL

PESO CON MUESTRA SECA 14.138gr 13.902gr 13.814gr 13.718gr 13.367gr 13.392gr 13.275gr 13.251gr 14.237gr 14.025gr 14.437gr 14.264gr 16.705gr 16.108gr 15.328gr 14.802gr

LA RENDIMIENTO

EXTRACCIN EN HEXANO 1 13.706gr 2 13.833gr 3 13.751gr 4 13.700gr EXTRACCIN EN DICLOROMETANO 1 13.216gr 2 13.261gr 3 13.214gr 4 13.201gr EXTRACCIN EN ACETATO DE ETILO 1 14.174gr 2 13.983gr 3 14.371gr 4 14.221gr EXTRACCIN EN METANOL 1 14.223gr 2 14.335gr 3 14.018gr 4 14.267gr

0.432gr 0.069gr 0.063gr 0.018gr 0.151gr 0.131gr 0.061gr 0.05gr 0.063gr 0.042gr 0.066gr 0.043gr 2.482gr 1.773gr 1.31gr 0.535gr

Fig. 25 extractos de la planta en cada solvente

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4.- Conclusin
Para el anlisis de la planta se tendi a extraer con solventes ya mencionados, como el Hexano, Diclorometano, Acetato de etilo y metanol. El Hexano, fue el que arrastro (tericamente) todas las grasas de la planta para que en las siguientes extracciones pudiesen salir ms limpias y con otros compuestos que se puedan estudiar con mayor facilidad. Los anlisis de cromatografa de capa fina como ya se pudieron observar, nos arrojaron algunos resultados favorables, en ellos se puede mostrar que existen variedad de compuestos que dejaron verse al aplicar el revelador (sulfato crico),este revelador muestra compuestos con dobles enlaces, aunque en el caso del extracto de metanol, se dio mayor batalla para observar si exista algn compuesto, puesto que no llegaba a revelar alguna forma , sin embargo, al realizar la RMN se observaron algunos detalles que si bien pudieran ser importantes para la deteccin de algunos compuestos importantes de la planta, as tambin el anlisis RMN comprob lo que las placas de cromatografa de capa fina nos haban revelado, la existencia compuestos que ms adelante sern purificados y estudiados para poder detectar el principio activo . Es importante saber que si bien las pruebas no han terminado, las enseanzas sobre estas prcticass han sido de mayor provecho, el conocimiento adquirido es una virtud que podr percutir ms adelante en las expectativas que lleguemos a requerir.

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5.-Bibliografa
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