BIOFILMS

LEONEL JOS TORRES CANTILLO

Taller I

Profesor MSC. RAFAEL OYAGA MARTNEZ

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC FACULTAD DE CIENCIAS AMBIENTALES MICROBIOLOGA, GRUPO AD BARRANQUILLA 2013

BIOFILMS

1. Qu relacin evidente hay entre los biofilms y las enfermedades nosocomiales? La relacin evidente es que existen muchas enfermedades que se agravan con la accin infecciosa de Biofilms, lo que genera las distintas enfermedades nosocomiales. La infeccin por biofilm se demuestra por sntomas que clnicamente recurren durante el tratamiento con antibiticos. Ms del 60% de todas las infecciones microbianas son causadas por biofilms, de igual manera se les atribuye el 60% de las infecciones nosocomiales, incrementando la estancia hospitalaria, los costos de atencin y la mortalidad debido a su gran resistencia a los antimicrobianos mil veces mayor que la de las clulas que viven en forma planctnica. Despus de la adherencia inicial a los materiales biolgicos la patogenia de la infeccin aparentemente involucra la interaccin especfica con diversos componentes tisulares y sricos del husped, como el tejido conectivo, el colgeno, el lamineno y las protenas sricas, como la fibronectina y la vitronectina permitiendo la colonizacin tisular y el establecimiento de infecciones de heridas, la colonizacin puede permitir que la bacteria invada las superficies mucosas alterando el flujo del calcio en las clulas epiteliales; liberando toxinas, proteasas y otros exoproductos. El biofilm es la causa de infecciones comnmente repetitivas del tracto urinario, causadas por E. coli y otros patgenos, infecciones de odo medio en nios causadas por Haemophilus influenzae, la formacin de placa bacteriana, la gingivitis y la peridontitis causada por biofilms formados por Streptococcus, Fusobacterium y Porphyromona que produce la inflamacin crnica de los tejidos que soportan la enca y pueden eventualmente generar la prdida de los dientes y la infeccin pulmonar en pacientes con fibrosis qustica causada por Pseudomonas aeruginosa, donde una infeccin con respuesta inflamatoria hiperactiva que destruye la funcin pulmonar puede generar la muerte del paciente (44,45,49-51). De igual forma, el papel del biofilm en la contaminacin de los implantes mdicos ha sido bien establecido en vlvulas cardiacas, catteres de lnea central, intravenosos y urinarios que pueden conducir a bacteremia o sepsis e infeccin de lentes de contacto.

2. Qu Caractersticas hacen ms evidente la resistencia de los biofilms frente a las bacterias libres? Las bacterias en las biopelculas demuestran resistencia intrnseca al estrss antimicrobiano ms eficaz que las formas planctnicas. Las concentraciones de los antimicrobianos necesarios para inhibir las biopelculas bacterianas pueden ser de hasta 10 a 1000 veces superiores a las necesarias para inhibir la bacteria misma crecidas en condiciones planctnicas. Las bacterias de un biofilm pueden ser hasta 1.000 veces ms resistentes a los antibiticos que esas mismas bacterias crecidas en medio lquido. Esto podria estar dado por: La barrera de difusin fsica y qumica a la penetracin de los antimicrobianos que constituye la matriz de exopolisacridos. stos previenen el acceso de ciertos agentes antimicrobianos o restringen la difusin de los componentes al interior del biofilm, contienen metales, aniones, cationes y toxinas que pueden ser la clave para la transferencia de estos al ecosistema y actan como protectores de una gran variedad de condiciones de stress ambiental como rayos ultravioleta, cambios de pH, shock osmtico y desecacin. En los biofilms que estn formados por mltiples especies, puede resultar una asociacin entre organismos metablicamente cooperativos y la proximidad interespecies, facilita el cambio de sustratos y la distribucin de productos metablicos, la sntesis de molculas como la acyl - homoserina lactones (acyl-HSLs) contribuye a la estructura tridimensional de ste. La cercana entre las clulas facilita la transferencia horizontal de genes, plsmidos o fagos, lo cual es importante para favorecer la diversidad gentica de las comunidades microbianas naturales. El crecimiento ralentizado de las bacterias del biofim debido a la limitacin de nutrientes. La existencia de microambientes que antagonizen con la accin del antibitico. Las bacterias pueden colonizar una amplia variedad de superficies en ambientes biticos o abiticos habitados por formas superiores de vida y espacios adversos; su habilidad para persistir en la biosfera obedece en parte a su versatilidad metablica y su plasticidad genotpica. La activacin de respuestas de estrs que provocan cambios en la fisiologa de la bacteria y la aparicin de un fenotipo especfico del

biofilm que activamente combata los efectos negativos de las sustancias antimicrobianas. Se ha encontrado que hasta el 30% de los genes puede expresarse de manera diferente en la misma bacteria desarrollada en condiciones planctnicas o en un biofilm. La resistencia antimicrobiana es a menudo transferida horizontalmente entre bacterias relacionadas y esto ocurre con notable facilidad dentro de un biofilm. As por ejemplo, las biopelculas en tubos endotraqueales usados en la practica clnica forman parte de la gama de mecanismos por los que la resistencia a mltiples drogas se transfiere en hospitales humanos y veterinarios, as como en ambientes de produccin animal tales como las industrias lcteas y los sistemas de las aves de corral y produccin de cerdos.

3. Describa la ruta invasiva del biofilm

Despus de la adherencia inicial a los materiales biolgicos la patogenia de la infeccin aparentemente involucra la interaccin especfica con diversos componentes tisulares y sricos del husped, como el tejido conectivo, el colgeno, el lamineno y las protenas sricas, como la fibronectina y la vitronectina permitiendo la colonizacin tisular y el establecimiento de infecciones de heridas, la colonizacin puede permitir que la bacteria invada las superficies mucosas alterando el flujo del calcio en las clulas epiteliales; liberando toxinas, proteasas y otros exoproductos. Esta infeccin es raramente resuelta por el sistema inmune del husped. El biofilm bacteriano libera antgenos y estimula la produccin de anticuerpos, inhibe la proliferacin de los linfocitos T y los monocitos perifricos por

induccin de prostaglandina E2, e interfiere sobre la blastognesis de las clulas B y la coagulacin. Tambin parece afectar adversamente la opsonizacin y la fagocitosis al inhibir la quimiotaxia, e induce la degradacin e inhibe las actividades metablicas dependientes de oxigeno de los leucocitos PMN, conduciendo a la muerte intracelular. Existen numerosas evidencias epidemiolgicas que relacionan los biofilms con distintos procesos infecciosos: 1. Colonizacin de sustratos por bacterias adhesivas formadoras de biofilm. 2. Presencia de un biomaterial, tejido daado, o sustrato de tejido relativamente acelular. 3. Iniciacin de infeccin por pequeos inculos bacterianos 4. Resistencia mediada por el biofilm bacteriano a los mecanismos de defensa del husped y a la terapia antibitica. 5. Infecciones causadas con mucha frecuencia por Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Pseudomonas aeruginosa. 6. Infecciones persistentes por resistencia al tratamiento antimicrobiano. 7. Presencia de inflamacin, tejido celular daado, y necrosis en la interfase tejido-implante (zona fibroinflamatoria, inmunoincompetente) generado por partculas debridadas del biomaterial. 8. Alteracin de la respuesta mediada por clulas y posiblemente humoral del husped por la presencia del biomaterial y bacterias.

4. Qu bacterias podran ser ms suceptibles a formar biofilms y porqu?

Microorganismo Estafilococos Cuagulosa Negativa Staphylococus Aereus Enterococos Escherichia Coli Clostidium Hongos Otras Bacterias GramNegativa Porcentaje T. de Infeccin 25% 16% 10% 23% 13% 6% 7% Porcentaje Resistencia 89% 60% 29% 5-32% Infecciones Sepsis Neumona Infecciones por Heridas Quirrgicas Neumona + Infecciones por Heridas Quirrgicas Diarreas Nosocomiales Infecciones Urinales y Sepsis Infecciones por Heridas Quirrgicas

5. Qu elementos son los responsables de la resistencia adquirida del biofilm? Los mecanismos por los cuales se hacen resistentes an no son completamente claros, pero se han considerado: la inactivacin de antibiticos por polmeros extracelulares modificaciones enzimticas, la baja disponibilidad de nutrientes lo que contribuye a una baja tasa de crecimiento, los cambios fenotpicos que adquiere la poblacin bacteriana dentro del biofilm y la persistencia bacteriana; solos o en combinacin estos factores son usados para explicar la supervivencia de las bacterias dentro de estas comunidades . El biofilm en su interior contiene una gran cantidad de agua y solutos del tamao de los antibiticos, por lo cual estos podran difundirse fcilmente dentro de la matriz. Sin embargo, la movilidad fsica de los antibiticos en el biofilm no asegura que el antibitico penetre dentro de este. La penetracin es restringida debido a que la matriz de exopolisacridos limita la difusin de sustancias y la unin del antimicrobiano proporcionando una efectiva resistencia a las clulas en su interior, contra grandes molculas como antimicrobianos, protenas, lisozimas y complemento. La obstaculizacin de la difusin es probablemente efectiva contra pequeos pptidos antimicrobianos y sus anlogos. Por otra parte, la carga negativa de los exopolisacridos es muy efectiva en la proteccin celular contra antibiticos cargados positivamente como los aminoglicosdos, por restriccin de la permeabilidad durante toda la unin. En otros casos, como en biofilms formados por Pseudomonas, se ha podido demostrar un sinergismo entre la difusin retardada del antibitico y la degradacin de este en el interior. La matriz de exopolisacridos puede actuar como una barrera retardando la difusin del antimicrobiano lo que disminuye la concentracin del antibitico que ingresa al biofilm, para que en su interior enzimas semejantes a las lactamasas lo destruyan, logrando as una resistencia efectiva. Dicho sinergismo es anlogo al existente entre el interior de la membrana y la resistencia a frmacos por las bombas de exclusin que transportan antimicrobianos a travs de esta barrera permeable, como los descritos para E. coli AcrAB-TolC localizado tras la membrana, que actuan como una bomba de multiresistencia semejante a la bomba de exclusin del Cloramfenicol CmlA localizada en el citoplasma, la cual capta al cloramfenicol y se lo presenta ala bomba Mex que se encarga de expulsarlo de la clula. Un elemento para su adaptacin es su capacidad para posicionarse en lugares en donde pueda propagarse. De los numerosos mecanismos de posicionamiento que han sido descritos en las bacterias, el ms comnmente

observado es el movimiento flagelar y los diferentes mtodos de traslocacin superficial incluyendo contraccin, deslizamiento y precipitacin. Otro factor considerado como responsable de la resistencia del biofilm es la disminucin de la tasa de crecimiento, virtualmente todos los antibiticos son muy efectivos en el ataque rpido de las clulas en crecimiento, condicin que es absolutamente requerida por algunos antibiticos para poder atacar. La Penicilina y la Ampicilina no atacan clulas que no estn en crecimiento y la tasa de ataque es proporcional a la tasa de crecimiento. Algunos de los ms avanzados lactmicos, Cefalosporinas, Aminoglicosidos y Fluoroquinolonas pueden atacar clulas en fase estacionara, pero ellos son indistintamente ms efectivos en el ataque rpido de clulas en divisin. En algunos biofilm la poblacin de bacterias es heterognea con respecto a la fase de crecimiento y cubre desde el espectro rpido hasta la fase metablica inactiva. Las zonas de no crecimiento del biofilm estn bien posicionadas y contribuyen a su supervivencia despus del ataque del antibitico. Otro mecanismo por el cual la disminucin del crecimiento contribuye a la resistencia del biofilm es el gradiente qumico que se establece dentro. El oxigeno es conocido por modular la accin de los aminoglucosidos y los gradientes de pH pueden impactar negativamente la eficiencia de los antibiticos. As mismo, las bacterias en respuesta y acoplamiento a fluctuaciones ambientales como cambios de temperatura, oxidacin, baja disponibilidad de oxigeno y daos al DNA expresan genes, los cuales se transfieren entre ellas por donacin mediante la conjugacin logrando un mecanismo de supervivencia especfico que explica su notable resistencia al ataque de un gran nmero de agentes, como el caso de la galactocidasa la cual es expresada en respuesta al Imipenen y la Piperamicina; o las bombas de difusin de multiresistencia a los medicamentos como la expresada por E. coli en respuesta al Cloramfenicol. Muchas de dichas respuestas han sido bien caracterizadas molecular y genticamente para cada casoen particular. La sensibilidad de la bacteria es usualmente restablecida cuando es separada del biofilm. Esta reversin rpida sugiere un mecanismo adaptativo de resistencia ms que una alteracin gentica. El ltimo factor considerado recientemente es la persistencia y la tolerancia, las bacterias del biofilm no solo evaden el ataque de los antibiticos, tambin resisten a los desinfectantes qumicos como el hipoclorito y al glutaraldehido. Las clulas persistentes pueden constituir una pequea fraccin de la poblacin total, pero estas pocas clulas son altamente protectoras semejantes al estado de espora de los Bacillus.