UNIVERSIDAD NACIONAL DE RIO CUARTO FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FISICO-QUIMICAS Y NATURALES DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA

CARRERA: MICROBIOLOGIA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA I CODIGO: 2159

PROFESOR RESPONSABLE: Dra Mirta Demo.

Plantel docente: Dra. Carina Magnoli Dra Mara Marta Reynoso Dr Germn Barros, Dra Mara de las Mercedes Oliva Mic. Melina Sartori Mic mara Evangelina Carezzano

AO: 2012 FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FISICA, QUIMICA Y NATURALES DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA ORIENTACION MICROBIOLOGIA.

ASIGNATURA: Microbiologa I. Cdigo: 2159.

CARRERA: Microbiologa

Carga horaria semanal: 10 horas: Clases teorca: 4 hs. Laboratorio y Terico-prcticas: 6 hs Carga horaria total: 140 horas

PROFESOR RESPONSABLE: Dra Mirta Demo PROFESOR CORESPONSABLE: Dra Mara Marta Reynoso Plantel docente: Dra. Carina Magnoli, Dra Maria Marta Reynoso, Dr. Germn Barros. Mic. Melina Sartori OBJETIVOS GENERALES DEL CURSO -Lograr conocimientos sobre el mundo microbiano y sus actividades beneficiosas y perjudiciales en la bisfera. -Conocer fundamentos morfolgicos, nutricionales, fisiolgicos, metablicos y reproductivos de los microorganismos procariontes y su adaptacin al ambiente. -Adquirir conocimientos bsicos del trabajo con microorganismos en el laboratorio. -Desarrollar tcnicas de uso frecuente en la preparacin de los materiales y medios de cultivos, esterilizacin, asepsia, siembra y aislamiento e identificacin de

microorganismos

ACTIVIDADES Temtica terica: Se desarrollarn 2 clases a la semana de 2 horas cada una. Desarrollo: Presentacin del tema y orientacin bibliogrfica por parte del docente. Anlisis y discusin del cuestionario de orientacin por parte del alumno en forma grupal. Sntesis y conclusiones finales por el docente Terico-prctico: Se dictarn 8 terico-prcticos desarrollados en 7 semanas (2 das/semana de 3hs clase/da) Desarrollo: En ellos el alumno deber resolver situaciones problemticas y contestar preguntas contenidas en un cuestionario de orientacin, las que se discutirn en forma

grupal en el aula, adems el docente presentar una gua bsica de los mtodos de laboratorio comprendidos en la actividad para que en forma grupal se conformen los protocolos de trabajo a emplear en el laboratorio. Presentacin de propuestas innovadoras de la actividad de laboratorio por parte de los alumnos. Discusin y anlisis de factibilidad. Seleccin de las propuestas a ejecutar en el laboratorio. Laboratorio: Se realizarn 6 actividades de laboratorio. Cada laboratorio se desarrollar en 6 horas por semana (2 das/semana de 3hs clase/da) El alumno trabajar en pequeos grupos y analizar los resultados de su propio trabajo y el de sus compaeros de comisin, para evaluacin de los aciertos y errores operativos obtenidos en la aplicacin de las tcnicas del laboratorio microbiolgico. Presentacin por parte del alumno de un informe donde conste la hiptesis planteada, la experiencia desarrollada, los resultados obtenidos y conclusiones MATERIAL DIDCTICO Terico y terico-prctico: Bibliografa, transparencias, videos, CD, pginas web, cuestionarios de orientacin, planteamiento de situaciones problemticas. Laboratorios: autoclaves, estufas, microscopio, espectrofotmetro, material de vidrio, medios de cultivos, drogas y reactivos.

EVALUACIONES a) Asignatura (temtica terica, laboratorio y terica-prctica): se efectuarn dos parciales escritos en el cuatrimestre y un parcial prctico integrador al final del cuatrimestre. b) Laboratorios y terico-prcticos: se efectuarn cuestionarios orales y escritos durante el cuatrimestre y presentacin de informes. REGULARIDAD Para lograr la regularidad el alumno debe cumplir los siguientes requisitos:

IIIIII-

Aprobar el 80% de los laboratorios y terico-prcticos desarrollados. Asistencia al 80% de clases tericas Aprobar los dos parciales escritos de la asignatura y el parcial prctico.

Un alumno queda desaprobado por: a) no alcanzar el nivel requerido (5 puntos); b) ausente. RECUPERATORIOS El alumno que tenga reprobado terico-prctico, laboratorios y parcial, podrn

recuperarlos slo una vez durante el desarrollo de la asignatura.

PROGRAMA ANALTICO SECCION I: La Microbiologa en las Ciencias Naturales, sus disciplinas y aspectos generales de los microorganismos. Bioseguridad en Microbiologa.

TEMA 1: Los microorganismos, su descubrimiento y estudio: Desarrollo de la Microbiologa. Grupos principales de microorganismos y disciplinas microbiolgicas. El mundo invisible y nuestro mundo: microbiologa clnica, ambiental, industrial y agrcola. Alcances de la microbiologa. Relacin evolutiva entre los organismos vivos. Breve historia de la microbiologa. La microbiologa en la actualidad.

TEMA 2: Aspectos generales de los microorganismos. Descripcin y comparacin biolgica de sus principales grupos: algas, hongos, protozoos, bacterias, y virus. Niveles de organizacin: a) celulares: uni, pluricelulares o cenocticos Tipo de clula y principales aspectos estructurales, funcionales, de desarrollo y reproduccin entre los microorganismos procariontes (bacterias) y eucariontes (algas, hongos y protozoos). b) no celulares: los virus, su organizacin, unidad estructural y funcionamiento biolgico.

TEMA 3: Bioseguridad en Microbiologa. Clasificacin de los microorganismos en base al riesgo, agentes infecciosos, vas de transmisin. Hbitos e higiene personal. Prevencin de las infecciones: barreras primarias, secundarias y terciarias. Emergencias. SECCIN II: Estructura y funcin de las principales subunidades de la clula bacteriana. Mtodos de estudio de los microorganismos.

TEMA 4: Estructura y funcin de las principales subunidades de la clula bacteriana: Morfologa de la clula bacteriana: tamao, forma, agrupacin. Diversidad morfolgica bacteriana. Pared celular bacteriana; propiedades y funciones. Estructura de la pared celular de Gram + y Gram -. Sustancias parietolticas. Protoplastos, esferoplastos. Pared celular de las bacterias cido alcohol resistentes. Envolturas extramurales: Cpsulas. Composicin qumica. Macro y micro cpsula. Slime. Concepto de glicocalix. Membrana citoplasmtica: Composicin qumica. Funciones de la membrana

plasmtica en los procariotas. Transporte de nutrientes. Estructuras asociadas. clorosoma, cromatforos, tilacoides y mesosomas El citoplasma procaritico: El ribosoma procaritico. Regin nuclear, morfologa y estructura. Relaciones entre la regin nuclear y la membrana citoplasmtica. Vacuolas de gas. Sustancias de reserva. Motilidad y apndices superficiales: Caractersticas del movimiento de los procariotas. El flagelo bacteriano. Morfologa, estructura y funcionamiento. Movimiento por deslizamiento, movimiento de las espiroquetas, movimientos coloniales. Quimiotaxis y fototaxis. Fimbrias y pili: morfologa, estructura y funciones. Formas de resistencia. Endosporas: Morfologa y estructura. Fenmenos asociados a la esporulacin. Germinacin de la espora. Ensamble y Polimerizacin de estructuras bacterianas: pared celular, flagelos, pili, cpsula. TEMA 5: Mtodos de estudio de los microorganismos: Microscopio y microscopia: Microscopio ptico, de contrate de fase, campo oscuro, fluorescencia. Microscopio electrnico de barrido y transmisin. Observacin de microorganismos: preparacin en fresco. Tinciones simples y diferenciales: tincin de Gram, Ziehl Neelsen, esporas, cpsula y flagelo.

SECCIN III: Nutricin y metabolismo microbiano

TEMA 6: Nutricin microbiana: Concepto de nutriente. Composicin qumica de la clula y nutrientes: macro y micronutrientes, aporte y destinos fundamentales. Fuentes de carbono, de energa de poder reductor y categoras nutritivas. El oxgeno en la nutricin y el comportamiento de los microorganismos. Enzimas detoxificantes de las formas reactivas del oxgeno. Factores de crecimiento, proto y auxotrofia. Nutricin cruzada y satelitismo. Macromolculas y nutricin enzimas extracelulares, endo y exohidrolticas, constitutivas e inducibles. TEMA 7: Metabolismo Bioenergtico: Actividades bioqumicas procesos catablicos y anablicos, niveles nutricionales y tipos de vas generadoras de ATP. Hetertrofos; respiraciones y fermentaciones, principales tipos, rendimientos energticos de ambos procesos, oxidaciones parciales e incompletas. Auttrofos; la respiracin en quimiolittrofos. Los fottrofos, procesos fotoqumicos de generacin de ATP. Fotosntesis anoxignica y oxignica, principales caractersticas y diferencias entre ellas.

TEMA 8: Aplicacin en el Laboratorio: Formulacin de medios nutritivos para el cultivo de microorganismos. Tipos de medios: sintticos, complejos, selectivos diferenciales, lquidos y slidos. Cultivos de microorganismos: de aislamiento, de produccin, de enriquecimiento, etc. Mtodos de procesamiento y siembra de muestras. Pruebas bioqumicas para la identificacin bacteriana. SECCIN IV: Modelos de Crecimiento. Efecto del Medio Ambiente sobre el Crecimiento. Control de los Microorganismos.

TEMA 9: El Crecimiento Microbiano: Crecimiento celular y poblacional. Etapas o fases del crecimiento de una poblacin microbiana. Concepto de muerte en microorganismos. Mediciones de poblaciones: mtodo de recuentos celulares, totales y viables; mtodo de cuantificacin de la masa. Cintica y parmetros del crecimiento microbiano, velocidad de crecimiento, tiempo de generacin, cosecha mxima. Cultivos discontinuos (o en lote) y cultivos continuos. Crecimiento en medios lquidos y slidos, aspectos macroscpicos de los cultivos.

TEMA 10: Influencia del Ambiente Fsico: Acciones favorables y desfavorables del medio. Efecto de la temperatura (rayos calricos), parmetros trmicos de los microorganismos. Temperatura mnima, T ptima y T mxima o crtica. Rangos trmicos de desarrollo; absolutos y parciales, microorganismos psicrfilos, mesfilos y termfilos. Temperatura de muerte microbiana. Otras radiaciones electromagnticas, efectos de las diferentes radiaciones. El ambiente fsico-qumico, efecto del pH, presin osmtica, actividad de agua y otros. TEMA 11: Influencia del Ambiente Qumico: Efectos negativos del agente qumico antimicrobiano inhibitorio o letal. Mecanismos, niveles de accin de las principales sustancias qumicas. Mecanismos de accin de desinfectantes y antispticos. Clasificacin de los quimioterpicos antimicrobianos. Toxicidad selectiva. Los antibiticos, principales niveles y mecanismos de accin sobre la clula. TEMA 12: Capacidad de Supervivencia y Crecimiento en Condiciones Ambientales Extremas: Osmoadaptacin en microorganismos. Las bacterias frente a la baja actividad de agua; concentracin salina en citoplasma, los osmolitos orgnicos: respuesta a hiperosmolaridad de no-halfilos, de halfilos y/o halotolerantes.

Respuesta al estrs por pH. Expresin gnica dependiente del pH. Resistencia al estrs por pH. Aspectos generales. TEMA 13: Aplicaciones y Usos de los Factores Fsicos y Qumicos: Mtodos de control de los microorganismos: Esterilizacin a) Trmicos: calor seco y calor hmedo. b) Radiaciones gamma y UV. c) Qumicos. d) Filtracin. Otros mtodos antimicrobianos: a) Trmicos: pasteurizacin, b) Qumicos:

desinfeccin, antisepsia y quimioterapia. Mtodos de detectar y medir la actividad antimicrobiana, pruebas de sensibilidad, prueba de Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) y Concentracin Bactericida Mnima (CBM)

SECCION V: Reproduccin Viral y Gentica Microbiana.

TEMA 14: Reproduccin Viral: Propiedades generales de los virus. Caractersticas generales de la replicacin vrica. Interaccin bacterifago clula husped. Ciclo ltico y ciclo lisognico. Virus vegetales. Virus animales. Viroides y priones. TEMA 15: Gentica Microbiana: El ncleo bacteriano, su estructura, composicin qumica y su funcin. ADN extracromosomal: plsmidos, su estructura y funcin. Variabilidad gentica; mutacin, concepto y diferencia con la adaptacin fenotpica. Mecanismos y tipos de mutantes; agentes mutagnicos. Recombinacin gentica en bacterias, diferencias con eucariticas. Tipos de recombinaciones: Transformacin, transduccin, conjugacin. Los virus bacterianos en la variabilidad gentica, su papel en la transduccin y en la conversin fgica. Aspectos genticos de la resistencia a drogas y otras caractersticas transferibles entre las bacterias SECCION VI:. Asociaciones biolgicas de los microrganismos. Diversidad Microbiana. Sistemtica y Taxonoma Microbiana.

TEMA 16: Asociaciones biolgicas de los microorganismos: comensalismo, mutualismo, simbiosis y parasitismo, comportamiento saprobio. Relacin huspedparsito, concepto de infeccin y enfermedad, patogenia y virulencia. Factores de patogenicidad o virulencia, propios del microorganismo: adhesividad, invasividad, toxicidad. Mecanismos de defensa del husped: inespecficas, barreras naturales, piel y mucosas. Rol de las floras microbianas normales. Factores humorales inespecficos, especficos.. Ensayos biolgicos de patogenicidad: Postulados de Koch. Dosis letal 50% .

TEMA 17: Diversidad Microbiana, Sistemtica y Taxonoma Microbiana: Ubicacin de los microorganismos en el reino de los seres vivos. Principales intentos de clasificacin. Ordenamiento y clasificacin de los microorganismos. Sistemtica y Taxonoma Microbiana, sus conceptos, sistemas naturales y artificiales de clasificacin la analoga y la homologa entre bacterias. Concepto de especie en bacterias, criterios de clasificacin y taxonoma clsica, numrica o gentico molecular. Identificacin de bacterias, estrategias y mtodos de identificacin.

PROGRAMACION DE ACTIVIDADES DE LABORATORIO Y TEORICO-PRACTICAS

ACTIVIDADES DE LABORATORIO

Laboratorio N1: Microscopia y Coloracin. Objetivo: Descubrir el mundo microbiano a travs de diferentes mtodos para observacin de microorganismos. Comparar bacterias y levaduras y hongos filamentosos con respecto a su estructura, formas, tamao y agrupacin, utilizando tcnicas de observacin en fresco y coloraciones.

Laboratorio N 2: - Esterilizacin y Preparacin Medios de Cultivo Objetivo: Preparacin y esterilizacin del material de uso en el laboratorio microbiolgico. Aprendizaje del manejo de aparatos ms comnmente utilizados en esterilizacin Diseo, elaboracin y esterilizacin de medios de cultivo. Laboratorio N 3: Mtodos de Siembra y Cultivo de Microorganismos. El Medio Ambiente en el Control del Desarrollo. Objetivos: Aprendizaje de los distintos tipos de siembra. Adquisicin de criterio en la eleccin de los distintos medios de cultivo. Utilizacin de factores fsicos como herramienta microbiolgica para estimular o inhibir el desarrollo microbiano.

Laboratorio N 4: Curva de Crecimiento Bacteriano y Mtodos de Recuento de Poblaciones Bacterianas Objetivos: - Conocer diferentes mtodos para medir crecimiento. Analizar los efectos de unas sustancia antimicrobiana sobre el desarrollo de los microorganismos. Aplicacin prctica de las tcnicas de medicin del crecimiento microbiano Laboratorio N 5: Influencia del Medio Ambiente Objetivos: Determinar el efecto de la actividad acuosa sobre microorganismos de diferentes ambientes. Determinar el efecto de pH sobre microorganismos de diferentes ambientes. Determinar el efecto inhibitorio de agentes qumicos con distintos mecanismos de accin. Determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin bactericida mnima (CBM) de un agente qumico. Laboratorio N 6: Pruebas Metablicas Objetivo: Usar pruebas metablicas como herramientas microbiolgicas para conocer el comportamiento fisiolgico de los microorganismos e identificacin de grupos

taxonmicos

ACTIVIDADES TERICO-PRCTICAS Terico Prctico N 1 Fundamentos de Microscopa ptica y Microscopia Electrnica Objetivo: Reconocer cada una de las partes del microscopio ptico. Adquirir destreza en el manejo del microscopio ptico y en el mantenimiento bsico del mismo. Verificacin de unidades de medidas Adquirir conocimientos acerca de las diferentes partes de un microscopio electrnico de transmisin y de las diferencias entre los componentes de un microscopio ptico y uno electrnico. Conocimientos de tcnicas especficas para la observacin de ultraestructura y morfologa externa de diferentes muestras, en un microscopio electrnico de transmisin (TEM). Adquirir destreza en la manipulacin de los diferentes materiales para microscopa electrnica.

Terico Prctico N 2: Bioseguridad en Microbiologa Objetivo: Discusin sobre riesgo en el laboratorio, clasificacin de agentes infecciosos segn el riesgo, vas de transmisin. Hbitos de higiene personal. Prevencin de las infecciones: barreras de prevencin. Toma de conciencia personal y grupal de actitudes sobre bioseguridad en el laboratorio

Terico Prctico N 3: Microscopa y Coloraciones. Objetivo: Discusin sobre tcnicas para observacin de microorganismos: cultivo en fresco y tipos de coloraciones. Conocer la aplicacin del microscopio de campo oscuro, contraste de fase, fluorescencia y electrnico. Formulacin de hiptesis y diseo experimental factibles de realizar en el laboratorio por parte de los alumnos. Terico Prctico N 4: Esterilizacin Objetivo: Conocer el fundamento de los mecanismos de accin de muerte por mtodos fsicos, qumicos y mecnicos, su aplicacin en la prctica mdica y en la conservacin de alimentos. Curvas de muerte. Conocer mtodos de conservacin de microorganismos, fundamentos de los mismos.. Eleccin de procesos de esterilizacin Terico Prctico N 5: Medios de Cultivo, Cultivo de Microorganismos y Mtodos de Siembra Objetivos: Seleccionar diferentes medios en funcin del tipo de muestra y del objetivo

perseguido

(transporte,

aislamiento,

enriquecimiento).

Diferenciar

los

medios

dependientes de su origen, naturaleza fsica, composicin qumica y propsito de uso en el laboratorio. Disear medios de cultivo segn los requerimientos nutritivos del microorganismo que se desea cultivar. Conocer los mtodos de siembra para la conservacin y aislamiento de microorganismos. Formulacin de hiptesis y diseo experimental factibles de realizar en el laboratorio por parte de los alumnos. Terico Practico N 6: Crecimiento. Mtodos de Medicin de Poblaciones Objetivos: Discusin sobre mtodos y medidas de crecimientos: mtodos de recuentos celulares totales y viables; mtodo de cuantificacin de la masa.

Resolucin de problemas de cuantificacin de crecimiento. Diseo experimental de curvas de crecimiento cerrado o en batch para evaluar diferentes parmetros. Terico Practico N 7: Influencia Del Medio Ambiente Fsico Y Qumico Sobre Crecimiento Microbiano. Objetivos: Conocer la influencia de los parmetros ambientales en cultivos microbianos. Conocer los mecanismos de accin de distintas sustancias

antimicrobianas. Aplicaciones prcticas de los mismos... Formulacin de hiptesis y diseo experimental a fin de evaluar la accin de agentes fsicos y/ o qumicos sobre el desarrollo microbiano

Terico Practico N 8 Mtodos de Identificacin de Microorganismos Objetivos: Conocer diferentes mtodos de identificacin de microorganismos: basados en criterios morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos, serolgicos y genticos. Discusin de reacciones metablicas (catabolismo y anabolismo) celular de aplicacin en el laboratorio. Bases y fundamentos de marchas de aislamiento y pruebas diagnstico .Diseo experimental de aislamiento e identificacin en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA

-ATLAS, R M (1990). Microbiologa. Fundamentos y aplicaciones. Compaa Editorial Continental. -ATLAS, RM AND BARTHA, R (1993) Microbial Ecology: fundamentals and Applications. The Benjamin/Cummings Publishing Co, Redwood City, CA. -BROCK, TD; MADIGAN, M.T,PARKER, J (2003) Biologa de los microorganismos. Prentice Hall Inc. 10 Edicin -COLLINS, CH, LYNE, PM (1989) Mtodos microbiolgicos. Editorial Acribia. Zaragosa. Espaa. -FINEGOLD, SM; BARON E J (1992) Bailey/Scott. Diagnstico Microbiolgico. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires. -INGRAHAM, J; INGRAHAM,C; (1998). Introduccin a la Microbiologa. Editorial Revert. S.A. -JAWEST, E; JOSEPH, L; MELNICK, P; ADELBERG, E; BROOKS, GF; BUTEL, JS; ORNSTON, LN (1990). MICROBIOLOGA MDICA. Editorial El Manual Moderno. S. A de CV Mjico DF. PRESCOTT L. M, HARLEY J, KLEIN D; 2002 Microbiology. 5ta edicin Editorial Mc Grau Hill Company -MURRAY, P; DREW, W; KABAYSHI, G AND THOMSON, Y (1992) Microbiologa Mdica 1 Edicin. Mosby-Year Book. Espaa S.A. PELCZAR, M; CHAN, E; KRIEG, N (1993) Microbiology Concepts and Applications. Editorial McGraw-Hill,INC. -PUMAROLA, A., RODRGUEZ-TORRES, A; GARCA RODRGUEZ, JA.; PIEDROLA ANGULO, G (1987). Microbiologa y Parasitologa Mdica. Ediciones cientficas y Tcnicas. Salvat. -STANIER, RY; INGRAHAM, J.L.; WHEELIS, ML.; PAINTE, PR (1984) El mundo de los microbios. Prentice Hall. -TORTORA G.J.,FUNKE B. R.,CASE C.L. (2007) Introduccin a la Microbiologa. 9 ed. Editorial Mdica Panamericana .