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1987
EFECTO
DEL ACIDO GIBERELICO Y DEL PREENFRIAMffiNTO LA RUPTURA DEL REPOSO EN SEMILLAS DE SALVIA (Salvia splendens) 1/
SOBRE
Bernardo de la Vega* Ramiro A lizaga* ABSTRACT Effect of gibberellic acid and stratification on breaking ~ed donnancy in salvia (Salvia splendens). Doses of gibberellic acid from 50 to 200 ug/ml and stratification periods between 5 and 25 days were applied to dormant salvia (Salvia splendens) seeds.The best laboratory results in interrupting dormancy were obtained using 100 and 150 ug/ml of AG3. No improvement on germination was obtained with the stratification treatments tested. A significant increment in plant emergency in the Rreenhousewas obtained when the seeds were treated with AG3 or an additional treatment with sulfuric acid (98% ) for three minutes. In cultivars SB3, SBI0 and 29471 emergency values were over 80% when treated with AG3 , sulfuric acid or their combination. Polar germination inhibitors were detected in the embryonic axis and the seminal coat of dormant salvia seeds by using a standard procedure with lettuce seedsas indicators. INTRODUCCION La horticultura ornamental es una actividad que recientemente ha alcanzado gran importancia econ6mica para nuestro pals. En el caso especlfico de semilla de salvia, lag exportaciones realizadas durante el penodo 1982-1983 alcanzaron la suma de $ 120.800 y para 1983-1984 la suma de $ 138.878. Costa Rica por su situacion geografica, tiene grandes posibilidades de exportar plantas y semillas de ornamentales a los principales mercados consumidores rues debido a lag condiciones climaticas existentes es posible mantener una produccion constante durante todo el afio y de esta forma satisfacer la demanda, especialmente en log meses en que log raIses importadores no pueden autoabastecer su demanda interna. Uno de log principales problemas en la comercializaci6n de semilla de salvia es que presenta . .
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el 19 de noVlembre
un marcado penodo de reposo, esto es, la incapacidad de una semilla viable de activar 0 iniciar el proceso de germinaci6n cuando las condiciones del medio ambiente son favorables para que ocurra. En salvia el reposo se atribuye ala posible presencia de inhibidores de la germinaci6n que normalmente se localizan en el embrion y en la cubierta seminal. Ademas, esta semilla al absorber agua se rodea de una capa mucilaginosa que segtin Ballard (1973) y Bewley y Black (1982) impide el intercambio gaseoso.Atwater (J980) considera que lag semillas que presentan un exudado mucilaginoso, al excluir oxlgeno, pueden requerir luz, bajag temperaturas 0 la adici6n de acido giber61ico para estirnular su germinaci6n. Uno de log procedirnientos mas usados para inducir la germinacion de semillas en reposa, es someterlas a bajas temperaturas y a condiciones de alta humedad (preenfriarniento). AI respecto Mayer y Poljakooff (1975) mencionan que lag semillas hidratadas de muchas especies lefiosas y herbaceas son liberadas del reposo cuando se someten
d. . , 1 . expOSlCln a es as con lClonesvarIa con a espeCle. Otro m6todo usado es la aplicacion de giberelinas, que son consideradascomo lag promotoras
a temperaturas . .6 t
entre
1 y 15 C. El tiempo
de
90
AGRONOMIA COSTARRICENSE
mas importantes de la germinaci6n en semillas con requerimientos de preenfriamiento, de almacenamiento en seco, de luz y de oscuridad (Abdalla y McKelvie, 1980; Chen y Varner 1973; Gaspar etal.,1975). Debido a que la semilla de salvia presenta un perlodo de reposo que obliga a mantenerlas en almacenamiento entre cuatro y seis meses, el objetivo de esta investigaci6n rue encontrar un metoda adecuado para estimular una germinaci6n rapida y homogenea en semillas de salvia de cosecha reciente. MATERIALES Y METODOS Este estudio se Ilev6 a cabo en los laboratorios del Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS) de la Universidad de Costa Rica y en los invemaderos de la Compafi{a Linda Vista S. A., ubicados en Dulce Nombre de Cartago, en el perlodo comprendido entre maTZO de 1984 y agosto de 1985. Se utilizaron semillas de salvia (Salvia splendens) en estado de reposo, cosechadasde 15 a 30 d{as antes de iniciar el ensayo. Pruebasde lab oratorio En los tratamientos de laboratorio con acido giberelico (AG3), las semillas se colocaron sobre papel para germinaci6n humedecido con distintas soluciones de AG3. Las concentraciones empleadas fueron: 0, 50, 100, 150 y 200 ug/ml. En forma simultanea, se realizaon los tratamientos de preenfriamiento, que consistieron en colocar las semillas sobre papel humedecido en bandejas de metal para germinaci6n, protegidas pOTuna bolsa de plastico para evitar la desecaci6n.Estas bandejas se introdujeron en una camara con temperatura constante de 5 C. Los perlodos de preenfriamiento fueron de 0, 5, 10, 15,20 Y 75 d{as. Posteriormente, tanto las semillas preenfriadas como las tratadas con AG3, se colocaron en una camara para germinaci6n graduada a 30 C, donde permanecieron 12 d{as, al cabo de los cuales se procedi6 a evaluar la germinaci6n. En ambos ensayos se us6 un disefio irrestrictamente al azar con tres repeticiones; cada repetici6n const6 de 100 semillas. Los cultivares de salvia utilizados fueron los siguientes: S81, S846, S8144 y 7300. Las variables evaluadas en estos ensayosfueTon: porcentaje de plantulas normales, porcentaje
de plantulas anormales, porcentaje de semillas en reposo, porcentaje de semillas muertas y altura promedio de pIantulas. Las cuatro primeras variahies se evaluaron de acuerdo con las reglas para anaIisis de calidad del ISTA (1976). Para determinar la altura promedio en cada tratamiento, se tomaron diez plantulas pOTrepetici6n. Ensayos de invemadero Con base en los resultados obtenidos en el laboratorio, se seleccionaron los tratamientos mas eficaces para estimular la germinaci6n. Estos fueTon evaluados bajo las condiciones de invernadero normalmente utilizadas para realizar las pruebas de emergencia. Las condiciones que imperaron durante el desarrollo de este ensayo fueron: una temperatura diurna promedio de 29,8 C y una humedad relativa de 74,2 % ; en la noche se tuvo una temperatura promedio de 20,6 C y una humedad relativa promedio de 88,2% . El sustrato utilizado para la siembra consisti6 en una mezcla de granza de arroz y tierra con un alto contenido de materia organica esterilizada a vapor. En la prueba de invernadero, las semillas fueTon sumergidas par perlodos de 14,28 y 42 horas, en soluciones de 100 y 150 ug/ml de AG3' Ademas, se evalu6 el efecto de la escarificaci6n con acido sulfurico (H2SO4) en la ruptura del reposo, para 10 cual, las semillas fueron sumergidasen una soluci6n de H2SO4 concentrado (98%) durante un perlodo de tres minutos y luego se lavaron con agua durante dos minutos. Las semillas tratadas con H2SO4, se colocaron en agua durante perlodos de inmersi6n de 14, 28 y 42 horas y en las soluciones de 100 y 150 ug/ml de AG3, pOTiguales perlodos de inmersi6n. Los cultivaTes de salvia empleados fueron los siguientes: S83, S810, S811, 2071 y 29471. El diseno experimental rue un bloques completos al alar en un arregIo factorial 5x3x2x3 con cuatro repeticiones de 50 semillas cada una. . Las variables evaluadas fueron: porcenta)e de plantulas emergidas y altura promedio de las mismas. Ambas e:aluaciones se realizaron 12 d{as despuesde la Slembra. Bioensayo de inhibidores Para determinar la presencia de posibles inhibidores de la germinaci6n en las semillas en
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Cultivar
germinaci6n de lag semillasde salvia en reposo cuando se leg aplic6 AG3. Este incrementoinducido conflfma a lag giberelinascomo unas de lag promotoras mas importantes de la germinaci6n.
Efectos sernilares hall sido mencionados par
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20
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Abdalla y McKelvie (1980), Mayer y Poljakooff (1975) y Villers (1972). Con la dosisde 50 ug/ml de AG3 unicamente el cultivar SB46 super6 el 80% de plantulasnormales,10cual indica que
esta dosis no es suficiente para una estimulaci6n
50 100 150 200 Dosis deAG3(J gfml) Fig.1.Efectode dosisde 5cidogiber~lico (AG3)soble el porcentaje de p15ntulas n?rmales en cuatro cultivares ~e,salvia, ~nlaboratono.. repos?,se reallZoun bloensa.Yo con semillas de lechuga. Para esto, se separaron los embriones y las cubiertas seminales de lag semillas de salvia y
eficazde la germinaci6n. Los cultivares SB1, SB46 y SB144 superaroo el plantulas normales con las dosis de 100 80% y 150de ug/ml de AG3; mientras que el cultivar 7300 en ningun casoalcanz6un porcentaje de plantulasnormalessuperioral estipuladocomo aceptable. Esto pudo deberse a que sonnecesarias dosismayoresde AG3 paraestimular la germinaci6n de estecultivar 0 bien, a que ellote de semilIas no tuviera una calidad comparable a la de log otros cultivares.
a cada una de estaspartes se Ie hizo una extracci6n de sus componentes,mediante el m~todo de percolaci6n(UNA, 1983). Se utiliz6 hexano como media de extracci6n de los constituyentes no palaces,~ter etffico para los medianamente palaces y acetatode etilo paralog palaces. Una vel extraldoslos componentes, secoloc6 50 semillasde lechugaen platos petri sabre papel de fiItro humedecidocon cada uno de los extractosobtenidos.Paracadaextracto sehicieron tres repeticiones.Las semillas fueron puestasa germinar en una camaraa 20 C y ocho dias despu~sseevalu6la germinaci6n. RESULTADOS Y DISCUSION
Pr ue b as d e I a b ora t ono .
En general,los testigospresentaron un 13% como promediode germinaci6n, mientrasque,con las dosis de 100 y 150 ug/ml de AG3 se obtuvo un promedio de 87% , 10que represento un incrementa de 74% en el numero de plantulasnormales. AI evaluar el porcentajede plantulasanormaleg se observ6que el incrementopromedio de las mismasrue de solo un 4%, par' 10 que se puede considerar que lag dosisde AG3 aplicadas no provocaron efectosnegativosde importanciasabreel desarrollo normal de las plantulas.Esto se pudo debera que lag dosisde AG3 probadas fueron bajag en comparaci6n con las que se mencionanen la literatura (de 200 a 400 ug/ml) comoinductoras
de un
Tratamientocon acido giber~lico (AG3). Lascompafi{asinternacionales encargadas de la compray distribuci6n de semillasde ornamentales, hall establecido en 80 el porcentajemlnimo de plantulas normalespara las pruebasde germinaci6n.Cualquier tratamiento aplicado a semillasen reposa, debera estimular la germinaci6nhasta alcanzar un 80% de plantulas normalescomo mlnimo. Para determinar el efecto de lag diferentes dosisde AG3 sabrela germinaci6n, se realiz6 una
anormalldad (Gaspar et al., 1975;Rowey Gordon, 1981). Ademas,es 16gicoque en log tratamientos con AG3, al incrementarse la germinaci6nen una proporci6n tan apreciable,aumentala probabilidad de que entrelagsemillas germinadas aparezcan plantulasanorma:les debido a factoresintrmsecos de lagmismas. La mayor altura promedio para todos log cultivares,se present6con la dosis de 100 ug/ml de AG3 (Figura 2). En la literatura seinforma que lag plantulas provenientes de semillas tratadas
aumento .
considerable
en
el
porcentaje
de
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AGRONOMIACOSTARRICENSE
Cuadro 1.
Efecto de los inhibidores de la germinacion extraidos en embriones y cubiertas seminalesde salvia soble la gelminacion de semillasde lechuga. Embriones Cubiertas Semilla en reposo % 10 11 32 11 38 18 95 Semilla germinada % 93 93 93 93 83 95 54 Semilla en reposo % 6 6 7 7 17 5 46
Solventes Semilla germinada % Testigo (H2O) Hexano Extracto* de Hexano Eter etilico Extracto de eter etilico Acetato de etilo Extracto de acetato de etilo * 85 84 64 82 53 80 0
Extracto se refiere a los componentes extraidos con el solvente respectivo. Totales inferiores a 100% son debidos a la presenciade semilla muerta"
con AG3 experimentanuna elongaci6nconsidera5 ble de sus tejidos debido al efecto hormonal de 6, 6ste(Gaspar et al., 1975, Rowe y Gordon, 1981); sin embargo,la diferenciaobtenida.enla altura de las plantulas probablemente se deb16 a que en las 5,5 semillastratadas con AG3 la germinaci6nse iniS ci6 a los dos dlas mientrasque en los testigos6sta.!::.se observ6 hasta los seis dlas. El retraso en la germinaci6n de las semillas no tratadas se debi6 a la
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SB 1
presencia de inhibidoresendogenos de la germinaci6n. Par otra parte, las plantulasprovenientes de semillastratadascon AG3, posiblemente tuvieron una relaci6n favorable en el balance hormonal inhibidorjpromotor (Chen y Varner, 1973; Ketring, 1973). Tratamiento de preenfriamiento.A pesar de que el preenfriamientose recomienda como uno de los tratamientosmas eficaces parala ruptura del reposo (Atwater, 1.980;Bewley y Black, 198~), en el presenteestudlo,aun con el perlodo maXImaque rue de 25 dlas, el mayor porcentajepromedio de germinaci6nque se obtuvo rue de un 35Of. , par 10 que se puede concluir que estametodologla no presenta utilidad practica.
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Po
SB144 7300
SB46
200
Fig.2.Efectodedosis decido giber~lico (AG3)soble la alturade plntulas en cuatrocultivares de salvia, enlab oratorio. brionescomo de la soluci6nde cubiertasseminales de semillasde salviaen reposo(Cuadro 1).Cuando el papel sehum.edeci6 con acetato de etilo puro y aguala germinaci6nde las semillasde lechugano Determinaci6nde inhibidores de la gerrninaci6n. se via afectada,10 que indica que 1agerminaci6n La germinaci6nde las semillasde lechugase inhi- rue bloqueadapor la existenciade inhibidoresde bi6 en un grado apreciable cuandose pusieronen tipo polar, los cuales seconcentran principalmente contacto con los extractosobtenidoscon acetato en el embri6n (cotiledones y eje embrionario) de etiIo, procedentes tanto de la soluci6n de em- de las semillasen reposo.Los extractosobtenidos
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Fig. 3. Efecto de dosis de .(cido giber~lico (AG3)' de la escarificaci6n con ~cido sulf6rico y de su interacci6n soble la emergenciade cinco cultivaTesde salvia, en invernadero.
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94
AGRONOMIACOSTARRICENSE
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Fig. 4. Efecto de la escarificaci6n con 5cido sulff1ricosobrela altura de pl5ntulaspara cadadosisde kido giber~lico (AG3) evaluada.
que Ia semilla se tome mucho mas permeableal aguay al oxlgeno, 10 que facilita la remoci6n de posiblesinhibidores end6genos de Ia germinaci6n (Heydeckery Coolbear,1977). Este efecto qued6 conflfmado con la emergencia masrapiday uniforme que se observ6 en lagplantulasprovenientes de semillas escarificadas. El incrementoprovocadopar log diferentes tiempos de inmersi6nen el porcentajede emergencia y en Ia altura de pIantulas,rue muy pequeno como para sacarconclusionespracticassabre su eficacia. Con el fin de determinarel efecto que provocaron lag diferentesconcentraciones de AG3 sabre la altura de pIantulas,serealiz6 un anaIisisde regresionpara cada cultivar. Se observ6una mayor altura de lag plantulasconforme aument6la dosis de AG3 (Figura 4). El mayor incrementopromediD en la altura se obtuvo con 150 ugfml de AG3 y rue de un 24,8% (0,8 cm) con respectoal tratamiento testigo. Esto se debio a una emergencia mas rapida de lag plantulas cuando lag semillas fueron tratadas con AG3 0 con H2SO4, ya que 6sta se observ6a log tres dias de haber sido sembradas,mientrasque en log testigosla emergencia seempezo a notar seisd(asdespu6s. La escarificaci6ncon H2SO4 no produjo danos en lag estructuras intemas de lag semillas,
pues no se obtuvieron diferencias al compararlog promedios de altura con log de plantulasprovenientes de semillastratadascon AG3 (Figura 4). Esta observaci6n compruebaque el tiempo de exposici6n al H2SO4 (3 min) rue eficaz para provocar Ia eliminaci6n de Ia capa mucilaginosay el ablandamientode Ia cubierta seminal.Ademas, resultaevidenteque el efecto mecanicode la escarificaci6n qulmica con H2SO4,no provoc6 dafios al embri6n. Debe mencionarseque periodos de escarificaci6ncon H2SO4 superioresa log 5 mill causaron un aumentoconsiderable en log porcentajes de plantulasanormales y de semillas muertas. Los promediosde altura (Figura 4) observadog en log tratamientoscon 100 y 150 ugfrnl de AG3 fueron ligeramente mayores(3 rom) que log obtenidos cuando unicamente se escarific6 con H2SO4;par 10 que se puedeconsiderar que el tratamiento con AG3 no caus6elongaci6n de logtejidog y par 10 tanto Ia mayor altura observada se debi6 a quelagsemilIas tratadascon AG3 germinaran en un periodo mascarta. RESUMEN Dosis de acido giber61ico (AG3) desde50 basta 200 ug/ml y perlodos de preenfriamiento de 5 a 25 drag se aplicaron a semillasde salvia
.
DE LA VEGA y ALIZAGA: Ruptura del reposodeSalviasplendens
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