Mtodos espectrofotomtricos cinticos

Los mtodos cinticos para anlisis difieren en una manera fundamental de los mtodos de equilibrio o estequiomtricos. Las mediciones se efectan en condiciones dinmicas en las que las concentraciones de reactivos y productos estn cambiando en funcin del tiempo. En cambio, las titulaciones o procedimientos que utilizan agentes complejantes para formar productos absorbentes se ejecutan en sistemas que tienen que llegar al equilibrio o al estado estable de modo que las concentraciones estn estticas. La mayor parte de los mtodos cinticos se apoyan en la espectrofotometra como tcnica para supervisar la reaccin. En los mtodos cinticos se pueden emplear diversos tipos de reacciones. Las reacciones catalizadas estn entre las ms populares; en ellas se determina un catalizador de acuerdo con la manera en que influye en la velocidad del reaccin, o bien, se elige uno de los reactivos. Por ejemplo, el yoduro es un catalizador en la reaccin de Ce(IV) con As(III). Las cantidades traza de I se pueden determinar al medir la velocidad de esta reaccin en funcin de la concentracin de I . Por lo general, se usa el mtodo de patrones externos para preparar una curva de calibracin de velocidad contra la concentracin de yoduro. Ms de 40 cationes inorgnicos y ms de 15 aniones se han determinado con base en su efecto cataltico.

Tambin mediante mtodos cinticos se han determinado catalizadores orgnicos. Las aplicaciones ms importantes de las reacciones catalizadas en los anlisis orgnicos requieren el uso de enzimas como catalizadores. El comportamiento de una gran cantidad de enzimas es compatible con el mecanismo general

E + S

= k
1

ES

P + E

Este proceso es denominado mecanismo de Michaelis-Menten, la enzima E reacciona en forma reversible con el sustrato S para formar el complejo enzimasustrato ES. Entonces, este complejo se descompone en forma irreversible para formar los productos y la enzima regenerada. Este modelo solo es vlido cuando la concentracin del sustrato es mayor que la concentracin de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, o sea que la concentracin del complejo enzimasustrato es constante. El estudio cintico de una reaccin puede ser usado para la caracterizacin del sistema o bien para cuantificar a uno de los componentes que participan en ella.

Caracterizacin. Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la concentracin del sustrato, [S], se aumenta hasta alcanzar una velocidad constante de formacin del producto. Esa es la velocidad mxima (Vmax) de la enzima. En este caso, los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.

Con concentraciones crecientes de sustrato [S], la enzima se acerca asintticamente a su velocidad mxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razn, no hay una [S] para la Vmax. De todas formas, el parmetro caracterstico de la enzima est definido por la concentracin de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad mxima (Vmax/2). La concentracin de sustrato a la cual se cumple esta condicin se conoce como constante de Michaelis-Menten, K . M Siguiendo la aproximacin del estado estacionario, que seala que la concentracin del complejo enzima-sustrato (ES) es pequea y se mantiene casi constante a lo largo de la reaccin enzimtica:

Sustituyendo esta expresin en d[P]/dt obtenemos:

d [P

]
dt

k 2 [E ]0 [ S ] [ ] = K S
m

Donde: [E]0= es el total de enzima. No es prctico medir la cantidad de complejo enzimasustrato durante la reaccin, por lo que debe escribirse su concentracin en trminos de cantidad total o inicial de enzima, que es una cantidad conocida. d[P]/dt =es la velocidad de produccin de producto . k2[E]0 = Vmax es la velocidad mxima
Cuantificacin. En el caso en el que la enzima est saturada con sustrato, [S] Km,

la velocidad d[P]/dt es directamente proporcional a la concentracin inicial de la enzima [E]0:

d [P ] dt = k

[ E ]0

Por lo tanto, las mediciones de la velocidad se pueden usar para obtener la actividad de la enzima (concentracin), [E] . 0 Asimismo, los sustratos se pueden determinar mediante mtodos cinticos. Para poder realizar esto se debe cumplir que [S] K , y la ecuacin del mecanismo de M Michaelis-Menten se reduce a
0

d [P ] = E]

[ S ] = k' [ S ]

dt

K
m

En este caso, la velocidad de la reaccin es directamente proporcional ala concentracin del sustrato [S]. Si las medidas se toman cerca del inicio de la reaccin (<5% de la reaccin), [S] ~ [S] y la velocidad es directamente proporcional a la concentracin inicial del 0 sustrato. Por lo tanto, se puede concluir que la velocidad inicial es proporcional a la concentracin del sustrato a muy bajas concentraciones, pero la velocidad es proporcional a la concentracin de la enzima cuando la concentracin del sustrato es muy alta. Los mtodos cinticos pueden ser ms selectivos que los de equilibrio si los reactivos y las condiciones se escogen de tal manera que se lleven al mximo las diferencias en las velocidades a las cuales reaccionen el analito y los posibles interferentes. En los mtodos que se basan en el equilibrio, la selectividad se efecta al aumentar las diferencias en las constantes de equilibrio.

Tipos de los mtodos cinticos para cuantificacin.

Los mtodos cinticos sepueden clasificar de acuerdo con la manera en que se efecten las mediciones. Con mtodos diferenciales se calcula la velocidad de reaccin y se le relaciona con la concentracin del analito. Las velocidades se determinan a partir de la pendiente de la curva de absorbancia contra tiempo. En el caso de los mtodos integrales, se utiliza una forma integrada de la ecuacin de la velocidad y se determina la concentracin del analito a partir de los cambios de absorbancia que se producen en varios tiempos.

Estudio espectrofotocrometricos de iones complejos

La espectrofotometra es una herramienta valiosa para determinar la composicin y constantes de formacin de especies que forman complejos en solucin. Las mediciones de absorcin son muy tiles para estudiar este tipo de sistemas ya que no afectan de manera importante al equilibrio que se esta estudiando (al menos en la mayora de los casos). Las tcnicas ms comunes que se utilizan para los estudios complejo-ion son 1) mtodo de las variaciones continuas, 2) mtodo de la relacin molar, 3) mtodo de la relacin de pendiente y 4) mtodo de ajuste de curvas con ayuda de computadora. Mtodo de las variaciones continuas. En este mtodo, las soluciones del catin y del ligando con concentraciones analticas idnticas se mezclan de tal manera que el volumen total y la cantidad total de mols de los reactivos en cada mezcla son constantes, pero la relacin molar de los reactivos vara en forma sistemtica, por ejemplo, 1:9, 8:2, 7:3, etc. Entonces se mide la absorbancia de cada solucin en una longitud de onda apropiada y se corrige por cualquier absorbancia que la mezcla pudiera manifestar si no ocurriera reaccin alguna. Por ejemplo, si el ligando absorbe, la absorbancia corregida sera la absorbancia de la mezcla de reaccin menos la absorbancia del ligando si no hubiera reaccionado. La absorbancia corregida se grafica contra la fraccin en volumen de un reactivo, es decir, VM/(VM + VL), donde VM es el volumen de la solucin del catin y VL es el volumen de la solucin del ligando. En la grfica se presenta un mximo, o un mnimo si el complejo es menos absorbente que los reactivos, cuando se da una relacin de volumen VM/VLque corresponde a la relacin de combinacin del catin y el ligando en el complejo.

La curvatura de la grfica obtenida es el resultado de que la reaccin de formacin de complejos es incompleta (la formacin de un complejo nunca es al 100% siempre queda un que no reacciona, el valor de es de mayor o menor grado dependiendo del sistema en estudio). La constante de formacin del complejo se puede evaluar mediante mediciones de las desviaciones respecto a las lneas rectas tericas, las cuales representan la curva que resultara si la reaccin entre el ligando y el metal fuese completa. Es posible manejar modelos matemticos para facilitar el clculo del valor Kf o se pueden aplicar mtodos de ajuste de curvas con ayuda de computadoras.

En este mtodo se prepara una serie de soluciones en las cuales la concentracin analtica de un reactivo, casi siempre el catin, se mantiene constante mientras la del otro vara. Luego se elabora una grfica de la absorbancia contra la relacin molar de los reactantes. Si la constante de formacin es razonablemente favorable, se obtienen dos rectas de diferentes pendientes que se cortan en una relacin molar que corresponde a la relacin de combinacin en el complejo. Cambien en este caso se encuentra una desviacin a la linealidad en la cercana de la relacin molar correspondiente al complejo debido a que la cuantitatividad de la reaccin no es al 100%. Cuanto ms cercana es la curva a las rectas extrapoladas; cuanto ms grande es la desviacin respecto a las rectas, ms pequea es la constante de formacin del complejo. La constante de formacin se puede evaluar a partir de los datos de la porcin curva de las grficas de relacin molar donde la reaccin es menos completa. Si se forman dos o ms complejos, podran ocurrir cambios sucesivos de la pendiente en la grfica de la relacin molar siempre que los complejos tengan distintas absortividades molares y constantes de formacin.
Mtodo de la relacin de pendientes.

Mtodo de la relacin molar.

Este mtodo es til en particular paracomplejos dbiles, pero es aplicable slo a sistemas en los cuales se forma un complejo sencillo. En el mtodo se supone que 1) la reaccin de formacin de complejos puede ser forzada a terminar mediante un exceso de cualquier reactivo y 2) en estas condiciones se cumple la ley de eer.Considere la reaccin en la cual se forma el complejo MxLy mediante la reaccin xM + yL MxLy Las expresiones de balance de masa para este sistema son CM = [M] + x[MxLy] CL = [L] + y[MxLy] donde CM y CL son las concentraciones molares analticas de los dos reactivos. Ahora se supone que a concentraciones analticas muy altas de L, el equilibrio se desplaza en forma marcada a la derecha y [M] << x[MxLy]. En estas condiciones, la primera expresin de balance de masa se simplifica a CM = x[MxLy]

Si el sistema se apega a la ley de Beer A1 = MxLyb[MxLy] = MxLybcM/x Una grfica de absorbancia en funcin de cM es lineal cuando hay suficiente L presente para justificar la suposicin de que [M] << x[MxLy]. La pendiente de la grfica es MxLyb/x.

Cuando cM es muy grande, se supone que [L] << y[MxLy], y la segunda ecuacin de balance de masa se reduce a cL = y[MxLy] y A2 = MxLyb[MxLy] = MxLybcL/y. Una vez ms, si las suposiciones que se han hecho son vlidas, se tiene que una grfica de A contra cL es lineal a altas concentraciones entre M y L:
Mx Ly

b/ = y

x b/ y
Mx Ly