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Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una tcnica de rutina bsica cuando se aborda un esquema de purificacin de una

protena concreta, cuando se quiere conocer la actividad especfica de una preparacin enzimtica, para el diagnstico de enfermedades, as como para otros muchos propsitos. Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas:

MTODO DE BIURET Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. Cu2+ se acompleja con 4 NH produciendo un color violeta-morado. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero). La absorbancia del color producido es leda a 540nm. MTODO DE LOWRY Combina la reaccin de biuret con la reduccin del reactivo de fenol folinciocalteau (cido fosfomolbdicofosfotngstico) por los residuos de tirosina y triptofano de las protenas. El color azuloso desarrollado es ledo a 750nm (alta sensibilidad para una concentracin protica baja) o a 500nm (alta sensibilidad para una concentracin protica alta) La reaccin que tiene lugar en el metodote Lowry es bastante compleja y no del todo conocida. Se desarrolla en las siguientes fases:

1.-Reaccin previa de la protena en medio alcalino con iones Cu2+, en presencia de tartrato para evitar la precipitacin. Es esencialmente idntica a la reaccin del Biuret, formndose un complejo de coordinacin entre el cobre y el nitrgeno peptdico. 2.-Reaccin con el reactivo de Folin-Ciocalteau para fenoles (cido fosfomolibdotungstico), que se reduce por medio de los grupos fenol (y en menor medida imidazol e indol) presentes en la protena a un complejo de color azul oscuro, que se mide colorimtricamente. El complejo coloreado, cuya composicin es desconocida, presenta dos mximos de absorcin a las longitudes de onda de 560 y 680 nm. La eleccin de una u otra depende de la concentracin proteica de la muestra estudiada. Dado que este mtodo da resultados variables se requiere una curva de calibracin que se hace a partir de seroalbmina bovina. MTODO DE BRADFORD Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 (tambin Serva Blue) a las protenas. El colorante, en solucin cida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las protenas se unen a la forma azul para formar un complejo protena-colorante con un coeficiente de extincin mayor que el colorante libre. Este mtodo es sensible (115 g), simple, rpido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinacin. Entre las sustancias que interfieren estn los detergentes y las soluciones bsicas. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE PROTENA EN LA MUESTRA.

BIBLIOGRAFA:
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimicabiolmol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%2 0LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNAS.pdf

https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:NMSt1I20FZMJ:docencia.izt.uam.mx/lyanez/analisi s/material_adicional/notasproteinas2.ppt+metodo+de+biuret&hl=es&gl=mx&pid=bl&srcid=ADGE ESju1PA8xlQ1ot_mH463stwLOciApMSNCCPPGJrtpu4he0U84FNjRwi0XQRowV0WWimpCZtkqv2Lq UK0J94zzVko7E6KLZOdswvC8l39cbrtJRgbUbk1_HKB0KGztb0lPqC8G9m&sig=AHIEtbQM_YnEpayos dgcnztfMx7OC7bLmg&pli=1 https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:fwZYTr1jXY4J:webpages.ull.es/users/acasti/docenc ia/practicas/4.pdf+metodo+lowry+proteinas&hl=es&gl=mx&pid=bl&srcid=ADGEESgeAfGbUI1OrA UNET5_JBFdjQ_icD_Fp9hoxyvkeL9FFsMRG5mv0wp8ajNnjSpgwlYFDqWSDZOlztAJiw6NH8hCqY9U8j Cj7d7l86W1CRlOebbupSfaDTnTYQ2SJxdiF5Qy4J89&sig=AHIEtbTSEYHHOwc-6cID981H7uYjZTB13w