Crick and co-workers selected phenotypic revertants resulted from suppressor mutations, not back mutation is an addition, gene-product

activity migh be restored by a deletion (single base-pair) mutation in a nearby region, for example, the deletion of a CG base-pair as shown (mutant allele->revertan allele). The original addition mutation will change the reading frame (determining codons in phase for translation) for all codons distal (relative to the direction of translation) to the site of the mutation. The subsequent deletion (suppressor mutation) will restore the reading frame for the distal portion of the gene. If the altered amino acid sequence is not critical to function, the protein produced by the doubly mutant gene will be active. When the suppressor mutation were isolated in single-mutant strains by backcrosses to wild type, all were found to yield mutant phenotypes, just like the original mutation that they suppressed. Crick and colleagues then isolated proflavin-induced suppressor mutations of the previously isolated suppressor mutations(present in single mutans recovered from backcrosses). After repeating this process for several cycles, all the mutations were classified as plus (for single base-pair addition) or minus (for single base-pair deletion) on the basis that a plus mutation would suppress a minus mutation, but not another plus mutation, and vice versa. Actually, Crick and colleagues had no idea whether the plus group of mutation represented additions or not; they could just as likely have been deletions. The only important point was that all deletion ended up in one group (be it the plus group or the minus froup), and all additions ended up in the other group. Having so classified the mutations, Crick and co-workers next performed the critical experiment. They isolated recombinants carrying various combinations of plus and minus mutations. When two plus mutations were present in a recombinant, its phenotype was always mutant. The same was true in the case of recombinants with two minus mutations. However, recombinants containing three plus mutations (b) or three minus mutations frequently had wild type phenotypes. Thus, the wild-type reading frame for the distal portion of the gene was restored by three single base-pair additions or three single base-pair, but was altered by either one or two base-pair additions or deletions. These results are most easily explained if each codon contains three bases mutants. Recombinants carrying three (+) mutations (Fig. 10.30b) or three (-) mutations, however, often had wild-type phenotypes. This indicated that the additions of three base-pairs or the deletion of three base-pairs left the distal portion of the gene with the correct (wild type) reading frame, a result that would be expected only if each codon contained three nucle-otides. Confirmation that the coding ratio (nucleotides to amino acids) is indeed three has come from many sources. Considerable evidence favouring a triplet code evolved from studies using in vitro translation systems. The following observations were of major importance. (1) trinucleotides were found sufficient to stimulate specific binding of aminoacyl-tRNAs to ribosomes. For example 5UUC-3 stimulates ribosomal binding of phenylalanyl-tRNA phe . (2) chemivally synthesized RNA molecules, containing repeating dinucleotide sequences, directed the synthesis of copolymers with alternating amino acid sequences. Poly (UG)n, for example, when used as artificial mRNA in an in vitro system, directed

the synthesis of repeating copolymer(cys-val)n. (3) Molecules with repeating trinucleotide sequences, on the other hand, directed the synthesis of a mixture of three homopolymers (initation being random on such an mRNA in an in vitro system). Poly (UGG)n, for example, directed the synthesis of mixture of polyserine, polyarginine, and polyvaline. Again, these results are only consistent with a triplet code. Ultimately, the triplet nature of the code was definitively established by the results of correlated nucleic acid and protein sequencing (e.g., see Fig. 10.31 and chapter 12, Fig. 12.26). Decipthering the Code The decipthering of the genetic codethat is, determining (1) which codons specify which amino acidsl (2) how many of the 64 possible codong are used, (3) how the code is punctuated, and (4) whether different species use the same or different codonstook place during the early 1960s and was one of the most exciting periods in history if science. The cracking of the genetic code had an effect on the life science like the splitting of the atom did on the physical sciences. It opened up a vast new field of study of gene expression. The first major breakthrough vam in 1961 when M. W. Nirenberg (1968 Nobel Prize recipient) and J.H. Matthaei and then S. Ochoa (1959 Nobel Prize recipient) and coworkers demonstrated that synthetic RNA molecules could be used as artificial mRNAs to direct in vitro protein synthesis. That is, when ribosomes, aminoacyl-tRNAs, and the soluble protein factors required for translation are purified free of natural mRNAs, these components can be combined in vitro and stimulated to synthesize polypeptides by the addition of chemically synthesized RNA molecules. If these synthetic mRNA molecules are of known composition the composition of the polypeptides synthesized can be used to deduce which codons specify which codons specify which amino acids.

Transalean bahasa indonesia

Crick dan rekan kerja revertants fenotipik dipilih akibat mutasi penekan, tidak kembali mutasi tambahan, gen-produk migh aktivitas dikembalikan oleh penghapusan (tunggal pasangan basa) mutasi di daerah terdekat, misalnya, penghapusan dari CG pasangan basa seperti yang ditunjukkan (alel-> mutan revertan alel). Selain mutasi asli akan mengubah kerangka baca (menentukan kodon dalam fase untuk terjemahan) untuk semua kodon distal (relatif terhadap arah terjemahan) ke lokasi mutasi. Penghapusan berikutnya (mutasi penekan) akan mengembalikan bingkai membaca untuk bagian distal dari gen. Jika urutan asam amino diubah tidak penting untuk fungsi, protein yang dihasilkan oleh gen mutan ganda akan aktif. Ketika mutasi penekan diisolasi dalam satu-mutan strain oleh backcrosses ke tipe liar, semua ditemukan untuk menghasilkan fenotipe mutan, seperti mutasi asli yang mereka ditekan. Crick dan rekan kemudian terisolasi proflavin-diinduksi mutasi penekan dari mutasi penekan sebelumnya terisolasi (hadir dalam mutans tunggal pulih dari backcrosses).

Setelah mengulangi proses ini untuk beberapa siklus, semua mutasi diklasifikasikan sebagai plus (untuk single pasangan basa penambahan) atau minus (untuk single pasangan basa penghapusan) atas dasar bahwa mutasi ditambah akan menekan mutasi dikurangi, tetapi tidak lain ditambah mutasi, dan sebaliknya. Sebenarnya, Crick dan rekan tidak tahu apakah kelompok ditambah mutasi mewakili penambahan atau tidak, mereka hanya bisa mungkin telah penghapusan. Satu-satunya titik penting adalah bahwa penghapusan semua berakhir dalam satu kelompok (baik itu kelompok ditambah atau dikurangi froup), dan semua tambahan berakhir di kelompok lain. Setelah diklasifikasikan sehingga mutasi, Crick dan rekan kerja selanjutnya dilakukan percobaan kritis. Mereka terisolasi rekombinan yang membawa kombinasi berbagai mutasi plus dan minus. Ketika dua mutasi ditambah hadir dalam rekombinan, fenotipe yang selalu mutan. Hal yang sama terjadi dalam kasus rekombinan dengan dua mutasi minus. Namun, rekombinan yang mengandung tiga mutasi ditambah (b) atau tiga mutasi dikurangi sering memiliki fenotipe tipe liar. Dengan demikian, wild type membaca frame untuk bagian distal dari gen dipulihkan oleh tiga tunggal pasangan basa penambahan atau tiga pasangan basa-tunggal, tetapi diubah oleh salah satu atau dua pasangan basa penambahan atau penghapusan. Hasil ini paling mudah dijelaskan jika kodon masing-masing berisi tiga mutan basis. Rekombinan yang membawa tiga (+) mutasi (Gambar 10.30b) atau tiga (-) mutasi, bagaimanapun, sering memiliki tipe liar fenotipe. Ini menunjukkan bahwa penambahan tiga basa-pasang atau penghapusan tiga basa-pasang meninggalkan bagian distal dari gen dengan (wild type) yang benar reading frame, hasil yang akan diharapkan hanya jika kodon masing-masing berisi tiga nucle-otides . Konfirmasi bahwa rasio coding (nukleotida untuk asam amino) memang tiga telah datang dari berbagai sumber. Banyak bukti yang mendukung kode triplet berevolusi dari penelitian menggunakan dalam sistem penerjemahan vitro. Pengamatan berikut adalah major pentingnya. (1) trinucleotides ditemukan cukup untuk merangsang pengikatan tertentu aminoasil-tRNA ke ribosom. Misalnya 5'-UUC-3 'merangsang pengikatan ribosom dari phenylalanyl-tRNAphe. (2) chemivally disintesis molekul RNA, yang mengandung urutan dinukleotida mengulangi, mengarahkan sintesis kopolimer dengan bolak sekuens asam amino. Poli (UG) n, misalnya, bila digunakan sebagai mRNA buatan dalam dalam sistem vitro, diarahkan sintesis kopolimer berulang (Cys-val) n. (3) Molekul dengan mengulangi urutan trinucleotide, di sisi lain, mengarahkan sintesis dari campuran tiga homopolimer (initation yang acak pada seperti mRNA dalam dalam sistem in vitro). Poli (UGG) n, misalnya, mengarahkan sintesis campuran polyserine, polyarginine, dan polyvaline. Sekali lagi, hasil ini hanya konsisten dengan kode triplet. Pada akhirnya, sifat triplet kode itu definitif didirikan oleh hasil asam nukleat berkorelasi dan sekuensing protein (misalnya, lihat Gambar 10.31 dan pasal 12, Gambar.. 12,26). Decipthering Code The decipthering dari genetik kode-yaitu, menentukan (1) yang menentukan kodon acidsl amino (2) berapa banyak codong 64 mungkin digunakan, (3) bagaimana kode diselingi, dan (4) apakah spesies yang berbeda menggunakan sama atau berbeda-kodon terjadi selama awal 1960-an dan merupakan salah

satu periode yang paling menarik dalam sejarah jika ilmu. The "retak" dari kode genetik memiliki efek pada ilmu kehidupan seperti membelah atom lakukan pada ilmu fisika. Ini membuka bidang baru yang luas dari studi ekspresi gen. Terobosan vampaneze besar pertama pada tahun 1961 ketika MW Nirenberg (1968 Nobel Prize penerima) dan JH Matthaei dan kemudian S. Ochoa (1959 Nobel Prize penerima) dan rekan kerja menunjukkan bahwa sintetis molekul RNA dapat digunakan sebagai mRNA buatan untuk langsung dalam sintesis protein in vitro. Artinya, ketika ribosom, aminoasil tRNA-, dan faktor-faktor protein terlarut yang dibutuhkan untuk penerjemahan yang murni bebas dari mRNA alami, komponen ini dapat dikombinasikan in vitro dan dirangsang untuk mensintesis polipeptida dengan penambahan molekul RNA disintesis secara kimia. Jika molekul-molekul mRNA sintetis komposisi diketahui komposisi polipeptida disintesis dapat digunakan untuk menyimpulkan mana kodon menentukan kodon menentukan asam amino.