UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS ESCUELA PROFESIONAL Y ACADMICA DE AGRONOMA

PRODUCCIN Y TECNOLOGIA DE SEMILLAS

- GUA DE PRCTICAS -

Ing. MSc. Hctor Medina Dvila Ing. Patricia Camargo Ing. Dennis Macedo Valdivia

AREQUIPA PERU 2005

INDICE

Pg. PROLOGO INTRODUCCION PRACTICA N 1: Contenido de Humedad PRACTICA N 2: Pureza Fsica PRACTICA N 3: Prueba de Germinacin PRACTICA N 4: Prueba del Verde Rpido PRACTICA N 5: Prueba de Vigor PRACTICA N 6: Ensayos de Crecimiento de la Plntula PRACTICA N 7: Ensayos de Evaluacin de la Plntula PRACTICA N 8: Ensayo de Fro PRACTICA N 9: Ensayo Topogrfico al Tetrazolio PRACTICA N 10: Ensayo al Tetrazolio de Aleurona BIBLIOGRAFIA: 3 4 6 12 16 19 22 28 31 33 36 36 41

PROLOGO

La presente gua de prcticas se utilizar en la asignatura Produccin y Tecnologa de Semillas, que se desarrolla en los planes de estudio de la Escuela de Agronoma de la UNSA. En efecto la informacin contenida deriva de la recopilacin y adaptacin de los contenidos que responden a las reglas Internacionales sobre Ensayos de Semillas, desarrolladas la Asociacin Internacional de Ensayos de Semillas (I.S.T.A.). Documento que permitir al estudiante conocer los ms modernos mtodos de anlisis de calidad de semillas, como son los anlisis de rutina: Contenido de Humedad, Pureza fsica, Germinacin y vigor entre otras pruebas de viabilidad.

GUIA DE PRCTICAS

PRODUCCIN Y TECNOLOGIA DE SEMILLAS

INTRODUCCIN
La ley general de Semillas en el pas al igual que las de la mayora de los pases latinoamericanos preconiza el uso de las Reglas Internacionales para el Anlisis de Semillas, elaboradas y publicadas por las ISTA. Estas reglas normas estn en proceso de revisin continua, la cual est a cargo de Comits integrados por autoridades mundiales en materias especficas.

CONTENIDO GENERAL DE LAS REGLAS INTERNACIONALES: Incluyen definiciones y mtodos estandarizados que deben emplearse cuando se desea efectuar transacciones en el comercio internacional. Siendo ste el propsito, es necesario tener un alto grado exactitud y reproducibilidad. A medida que la semilla traspasa fronteras internacionales tendr que ser analizada en laboratorios de diferentes lugares, por tal razn se usan mtodos estndares. Se incluyen dos partes: Las reglas propiamente dichas Los Anexos.

Las reglas indican los objetivos y los principios de cada prueba, las definiciones en trminos generales procedimientos y mtodos a emplearse. Los anexos amplan definiciones y describen en ms detalle los procedimientos y mtodos prescritos.

CONTENIDO ESPECIFICO DE LAS REGLAS: Las Reglas Internacionales para el anlisis de semillas ISTA, versin 1995, incluyen: Muestreo Anlisis de pureza. Determinacin de otras especias por nmero. Prueba de germinacin. Pruebas bioqumicas de viabilidad. Anlisis de sanidad de semillas. Verificacin de especias y cultivares. Determinacin del contenido de humedad. Determinacin del peso. Anlisis de semilla paletizada. Emisin de certificados.

Sin embargo, para efectos del desarrollo de las prcticas del curso se incluyen tan slo las pruebas de calidad a nivel de laboratorio como son: Contenido de humedad, Pureza fsica, Germinacin y Vigor.

PRACTICA N 01 CONTENIDO DE HUMEDAD 1. INTRODUCCIN:

Durante el proceso de maduracin de las semillas, el contenido del agua en los tejidos varia desde un 80% en el ovario, disminuyendo a medida que madura la semilla hasta alcanzar un equilibrio con el medio ambiente, generalmente 14 a 20%. Si se acepta que el periodo de mxima germinacin y vigor para la mayora de las semillas coincide con la madurez fisiolgica, el contenido de humedad en ese momento es muy alto para realizar la cosecha sin causar daos fsicos es por razn que se opta por cosechar con el menor contenido de humedad permisible. 2. FUNDAMENTO TEORICO

El contenido de humedad de una muestra, es la perdida de peso cuando sta se somete al secamiento, o la cantidad de agua colectada si la muestra se ha destilado, de acuerdo a los mtodos existentes normados por el ISTA. El contenido de humedad se puede expresar sobre una base hmeda o sobre una base seca. La base hmeda especifica la cantidad de agua que existe en un slido como el porcentaje del peso hmedo total. En base seca, la humedad se expresa como porcentaje del peso seco. Los resultados siempre se expresan sobre base hmeda. 3. OBJETIVOS:

El objetivo de est anlisis es calcular el porcentaje de humedad contenido en un lote de semillas, representado por la muestra de trabajo. 4. MATERIALES Y METODOS:

El contenido de humedad puede determinarse por dos mtodos: El mtodo prctico o indirecto. El mtodo bsico o directo.

4.1.

MTODO PRCTICO O INDIRECTO

Este mtodo esta orientado al trabajo de rutina, en el que la rapidez en la obtencin de resultados, juega un papel muy importante normalmente se usa en el manejo de semillas, mediante el uso de aparatos que permiten obtener el resultado inmediatamente. Existen deferente equipos desde los ms simples hasta los ms sofisticados, que permiten determinar el contenido de humedad de las semillas tanto en el campo como en el laboratorio. Para las semillas muy pequeas cuyas muestras son reducidas se utilizan determinadores de humedad en base a desecamientos de la semilla por accin de luz infrarroja que permite realizar la operacin y obtener el resultado en contados minutos. 4.2. MTODO BSICO O DIRECTO

Este mtodo se utiliza para determinaciones exactas y para calibrar o comprobar los mtodos prcticos; sin embargo comprende un proceso largo y laborioso. Este mtodo puede realizarse mediante el uso de una estufa a alta o baja temperatura. METODO DE LA ESTUFA Materiales: Molino. Estufa de desecacin con termostato. Balanza analtica (0.001g). Tamices. Recipientes con tapa exacta. Desecador con gel.

Procedimiento: Las muestras remitidas deben conducirse en depsitos cerrados, impermeables y completamente llenos de semillas. Deben procesarse de inmediato, tan luego llegan, reduciendo al mnimo la exposicin de la muestra al medio ambiente.

A.

MOLIDO

Solo algunas semillas necesitan ser molidas fina o burdamente antes de ser sometidas al secado ESPECIES PARA LOS CUALES EL MOLIDO ES OBLIGATORIO Arachis hypogea Avena spp Cicer arietinum Citrullus lannatus Fagopyrun esculentum Fagus spp. Glycine max Gossypium spp Hordeum vulgare Lathyrus spp. Oryza sativa Phaseolus spp. Pisum sativum Quercus spp Ricinus communis Secale spp. Sorghumm spp. Ttriticum spp. Vicia spp. Zea mays Esto no necesario en el caso de semillas finas. Se necesita moler completamente en el caso de los cereales, incluyendo maz, sorgo, arroz y algodn. El ajuste de la molienda debe ser por lo menos el 50% del material molido pase atravez de una malla de 0.5mm y no mas del 10% se quede en una malla de 0.85mm. El molido grueso es necesario en el caso de semillas de leguminosas grande como Vicia, Phaseolus, Pisum, Lupinus, etc. El ajuste de la molienda debe ser tal que por lo menos el 50% del material molido pase atravez de una malla de 3.4mm.

Las semillas oleagisosas es mejor no molerlas porque se hace difcil la labor y estaran expuestas a ganar peso po oxidacin. La cantidad a moler ser tal que permita un determinacin de humedad por duplicado. PRESECADO

B.

Si las especies necesitan ser molidas y el contenido de humedad es muy alto, el pre-secado es obligatorio. Una cantidad suficiente de material por duplicado, proveer las dos muestras de trabajo despus del pre secado. Luego del presecado, se pesa para determinar la prdida de peso (los tiempos y temperaturas son variables segn la sp) y a continuacin se muele para continuar con el procedimiento. C. 1. METODOS: Mtodo del Horno a Baja Temperatura

Se usan en semillas como las siguientes epecies: Allium spp. Arachis hypogea Brassica spp. Camelina sativa Capsicum spp. Glycine max Gossypium spp Linum usitatissium Raphanus sativus Ricinus communis Sesamun indicum Sesamun orientale Sinapis spp. Solnum melongena Mezclar uniformemente la muestra remitida antes de obtener la muestra de trabajo. Pesar el recipiente donde se pondr la muestra con su tapa e identificacin (peso a).

Obtener la muestra de trabajo por duplicado, independientemente. Se pesan 4 a 5 g con 3 decimales para cada sub muestra. El peso de cada sub muestra con su envase es el peso b. (si la muestra necesita molido, hacerlo antes del pesado. Si el presecado es necesario, hacerlo antes del molido). Distribuir cada sub muestra en su envase y colocarla inmediatamente sobre su tapa, se introduce en la estufa a la temperatura de 105 + 2C durante 17 + 1 hora.(el tiempo se cuenta desde que alcanza la temperatura deseada) Despus de cumplido el perodo de secado, se retira la muestra tapando el envase y se coloca en un desecador para que se enfre durante 30 a 45 minutos. Cuando esta fra se pesa la muestra que sali de la estufa es su envase tapado (peso c); la hmeda relativa del laboratorio debe ser menor del 70%. Mtodo del Horno con Alta Temperatura

2.

Se usa en las semillas tales como las siguientes especies: Agrotiss spp Alopecurus pratensis Anethum graveolens Anthoxanthum adoratum Cynosurus cristatus Dactylis glomerata Daucus carota Deschampsia spp. Panicumm spp. Paspalum dilatatum Pastinaca sativa El procedimiento es igual el mtodo anterior, excepto que la temperatura debe ser a 130 + 3C. El tiempo de secado es de 4 horas para maz, 2 horas para otros cereales y 1 hora para otras especies (no requiere especial humedad en el laboratorio). D. CALCULO DE LOS RESULTADOS:

El contenido de humedad se calcular como porcentaje del peso, con un decimal, aplicando la siguiente formula: b - c 10

% H = --------------- x 100 b - a donde: .a = peso del envase con su tapa en gramos. .b = peso de la muestra antes del secado con su envase en gramos. .c = peso de la muestra despus del secado con su envase en gramos. Si la muestra es pre secada, el contenido de humedad se calcula con los resultados obtenidos en la primera y segunda estapas del secado, de acuerdo al procedimiento anterior. Si: S1 = % de humedad perdida en el pre secadoS2 = % de humedad perdida en la segunda etapa.

El contenido de humedad ser: s1 x s2 ------------------100

% H = S1 + S2 -

El resultado ser la media aritmtica del % de humedad de las 2 sub muestras si la diferencia entre ellas no es mayor de 0.2%. en caso contrario se repetir la prueba. 5.- RESULTADSO: 6.- CONCLUSIONES: 7.-RECOMENDACIONES: 8.- CUESTIONARIO: 9.-BIBLIOGRAFIA:

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PRACTICA N 02 PUREZA FISICA

1.

INTRODUCCION:

En el anlisis de las semillas se tienen que evaluar la calidad de las semillas a travs de varios ndices, logrando tener resultados uniformes, capaces de ser comparados y reproducidos por otros analistas y laboratorios, dentro de ciertos lmites de tolerancia. El anlisis de pureza requiere paciencia y meticulosidad por parte del analista, exigiendo de ste una serie de cualidades como buenas vista, observacin, responsabilidad y honestidad. 2. FUNDAMENTO TEORICO:

Se consideran tres componente de la muestra: semillas puras, otras semillas y material inerte. Semilla Pura: Comprende las sp. Indicadas por el expedidor o encontradas como predominantes en el anlisis, incluyendo todas las variedades botnicas de dicha sp. Se considera semilla pura, semillas normales o intactas, las maduras, las de tamao inferior al normal, arrugadas o germinadas, siempre que puedan ser identificadas como pertenecientes a la sp. Analizada Tambin se consideran los fragmentos de semillas resultantes de roturas, cuyo tamao sea superior a la mitad de su tamao inicial. No obstante, las semillas de las leguminosas con el tegumento totalmente desprendido se considera materia inerte. Los Aquenios y frutos similares, esquizocarpios y mericarpios con o sin perianto, contengan o no verdadera semilla, a menos que sea evidente que no exista verdadera semilla. Otras Semillas: Se incluir las semillas y las seudosemillas de cualquier sp. Distinta a la de la semilla pura. La separacin de las semillas de otros cultivos en el anlisis de 12

pureza, deber hacerse cuando se tiene la absoluta certeza de su identificacin; se dejar en fraccin de semilla pura. Materia Inerte: Se incluir materiales tales como: piedras, partculas se suelo, granos de arena, tallos y cualquier fragmento de plantas o de semillas e plantas silvestres oi cultivadas que estn dentro de las siguientes condiciones: Semillas de especies variedades consideradas como otras plantas, quebradas daadas, cuyos fragmentos sean iguales o inferiores a la mitad del tamao original de la semilla. Semilla que se encuentran enteramente tegumentos. desprovistas de su testa p

Aquellas semillas que han sido transformadas por los hongos en esclerocios, masa esporferas de caries agallas de nemtodos. OBJETIVOS: Determinar la composicin en peso de l muestra consiguiente la composicin del lote de semillas. que se analiza y por

3.

Identificar las distintas especies de las semillas contaminantes y de las partculas de material inerte constituyentes de la muestra. MATERIALES Y METODOS: Materiales. Muestra de la semillas remitida. Homogeneizador. Balanzas. Lupas. Pinzas. Tarjetas de registro. Metodologa.

4. 4.1. 4.2.

La muestra representativa del lote de semillas enviada al laboratorio para ser sometida al anlisis es denominada muestra remitida de laboratorio. Esta

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muestra debe de homogenizarse, y despus se le reduce al peso mnimo para constituir la muestra de trabajo, estn prescritas segn las reglas internacionales para el ensayo de semillas. Despus de pesar la muestra de trabajo, se clasificara en sus componentes: semilla pura, semillas de otros cultivos y metera inerte La separacin de la semilla pura se puede hacer visual o mecnicamente, segn sean las caractersticas de las semillas, de forma que no se modifique su capacidad de germinar; despus de la separacin se procede a la identificacin Luego se procede al pesaje de la materia inerte y de las semillas de otros cultivos, anotndose los resultados en una tarjeta de trabajo en el laboratorio. El peso de la fraccin pura, se puede determinar por deferencia de peso, esto es, peso inicial menos el peso de la materia inerte y semillas de otros cultivos, o por el pesaje directo. El nmero adecuado de cifras decimales de las pesadas para calcular los porcentajes con una cifra decimal, es el que se indica a continuacin: Peso de la muestra de Trabajo en Gramos - Menos de 1 - 1 a 9,999 - 10 a 99,99 - 100 a 999,9 - 1000 a ms Clculo y Expresin de los Resultados: El porcentaje en peso de cada constituyente se calcular con una cifra decimal. Los porcentajes se basarn en la suma de los pesos inicial de la muestra de trabajo; no obstante, la suma de los pesos de los componentes debern de compararse con el peso inicial como comprobacin de una posible prdida de material o cualquier otro error. Para el calculo de los porcentajes se utilizan las siguientes formulas: % de semillas puras: Donde: Pp X = ----------- x 100 Pt Nmero de Decimales 4 3 2 1 0

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Pp = peso de las semillas puras. Pt = peso total de la muestra. % de semillas de otros cultivos: Donde: Poc = peso de semillas de otros cultivos. Pt = peso total de la muestra. Pmi Z = -------------- x 100 Pt Poc Y = ----------- x 100 Pt

% de materia inerte: Donde:

Pmi = peso de la materia inerte. Pt = peso total de la muestra. El resultado de todos los componentes debe sumar 100%. 5. 6. 7. 8. 9. RESULTADOS: CONCLUSIONES: RECOMENDACIONES: CUESTIONARIO: BIBLIOGRAFIA:

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PRACTICA N 03 PRUEBAS DE GERMINACIN

1.

INTRODUCCION:

Las pruebas de germinacin tienen como finalidad evaluar la viabilidad de las semilla, para poder conocer su valor agronmico y determinar diferencias con otros lotes, con la finalidad de levar un control y poder programar el manejo de semillas tanto en planta como en campo; siendo necesario que dichos resultados sean comparables y para que esto sea posible todos los ensayos deben realizarse siguiendo los mismos procedimientos. Se cuenta con mtodos en las cuales casi todas las condiciones externas son controladas y se le da a la semilla las condiciones ideales para una germinacin rpida y uniforme (de acuerdo a cada sp hay normas en que los resultado se puedan reproducir dentro de los lmites permitidos). 2. 2.1. FUNDAMENTO TERICO: Germinacin de las semillas:

se define como el fenmeno por el cual bajo condiciones apropiadas, el eje embrionario reinicia su desarrollo que haba sido interrumpido al alcanzar la madurez fisiolgica. Esta definicin presupone la permanencia de la semilla en un estado de reposo previo, durante el cual la actividad metablica es muy reducida permaneciendo as hasta que las condiciones ambientales sean las adecuadas. 2.2. El Proceso de Germinacin:

se distinguen tres fases: 2.2.1. Fase I: Se caracteriza por la absorcin rpida de agua; se podra completar en una dos horas, alcanzando un contenido de humedad en la semilla entre 3040% (leguminosas) y 25-30% (poaceas).

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Fisiolgicamente se caracteriza por un acentuado aumento de la intensidad respiratoria, principalmente cuando el contenido de humedad llega a 14 o 16%. Bioqumicamente, es la degradacin de las sustancias de reserva (carbohidrato, protenas y lpidos) que deben de nutrir el eje embrionario. 2.2.2. Fase II: Se inicia cuando las semillas alcanzan valores de humedad. Aparentemente ocurre un traslado activo de las sustancias desdobladas en la fase 1, del tejido de reserva hacia el tejido meristemtico. La absorcin del agua disminuye 2.2.3. Fase III: Partiendo de una humedad entre el 50 a 60% (leguminosas) y 35 a 40% (poaceas), la semilla vuelve a absorber agua y respira intensamente. Se inicia el crecimiento del eje embrionario, debido a una intensa divisin celular. 2.3. 3. Factores que intervienen en la germinacin:

El agua. La temperatura. El oxgeno Efecto de la luz. OBJETIVOS: Determinar la capacidad que tienen las semillas de un determinado lote para producir plantas normales y vigorosas. La germinacin en s es el desarrollo del embrin para producir, bajo condiciones favorables, una planta normal. MATERIALES Y METODOS: Materiales. Sustrato: arena, papel de germinacin, papel secante, papel filtro, etc. Recipientes: caja petri, cajas de plstico, etc. Contadores de semillas. Pinzas. Lente de aumento. Germinador Tabla de mtodos de ensayo para germinar. 17

4. 4.1.

4.2.

Metodologa.

Cuando se usa papel las semillas se colocan sobre de l y se cubre con una dos hojas el papel debe de estar humedecido con anterioridad; luego se coloca en el germinador (extendido o en rollos). Por cada muestra se colocan 100 semillas en cada repeticin, para facilitar la contada y el calculo final. Cuando se utiliza arena se coloca en un recipiente una capa delgada sobre la cual se colocan las semillas y se las cubre con otra capa muy delgada de arena se las hunde ligeramente en la capa inicial. Las reglas internacionales para el ensayo de semillas, fijan las necesidades de las distintas semillas en cuanto a substratos, temperaturas, y requerimientos de luz. 5. RESULTADOS

El porcentaje de germinacin indica la proporcin de semillas que han producido plntulas normales, segn las reglas del ISTA. Durante el conteo, al finalizar el tiempo establecido, se clasifican las plntulas en normales y anormales y las semillas duras muertas. Las plntulas normales se clasifican en 2 clases: Plntulas que poseen todas las estructuras esenciales. Plntulas con ligeros defectos, siempre que muestren vigoroso desarrollo.

Las plntulas anormales, o sea las que no tienen la capacidad para desarrollarse: Plntulas daadas. Plntulas deformadas. Plntulas enfermas.

Las semillas duras, se presentan en especial en las leguminosas, y son aquellas que permanecen sin germinar al final el periodo, y que tampoco han absorbido agua por permeabilidad del tegumento, pero no estn muertas. Las semillas muertas son aquellas que no han producido plntulas al final del periodo de ensayo, pero que no estn dentro del grupo de las semillas duras, se distinguen porque son blandas al presionar. 6. CONCLUSIONES:

18

7. 8.

RECOMENDACIONES: CUESTIONARIOS: PRACTICA N 04 PRUEBA DEL VERDE RAPIDO Oxalato verde de Malaquita

9.- BIBLIOGRAFIA:

1.

INTRODUCCIN

La prueba del verde rpido se usa para revelar la extensin del dao del pericarpio en semilla de maz (Zea maiz). El dao en el pericarpio en la semilla de maz se puede detectar usando un microscopio estereoscopio sin embargo, el uso de la prueba del verde rpido es simple y rpida y no necesita el uso de un equipo de laboratorio costoso. La prueba del verde rpido tambin se puede utilizar para detectar el dao en la cutcula de la semilla de leguminosas tales como alfalfa (Medicago sativa), crimson clover (Triflorium incarnatum) y otras semillas de leguminosas de tamao similar. El verde rpido cuando se usa en bajas concentraciones no es txico para los embriones y plntulas pequeas. Por lo tanto, se puede poner a germinar semillas coloreadas y plntulas normales u anormales se pueden examinar para observar la naturaleza del dao. 2. 3. 3.1. OBJETIVOS Determinar el porcentaje de dao mecnico que tiene un lote de semillas. MATERIALES Y METODOS: MATERIALES: El verde rpido FCF se puede adquirir generalmente en cantidades de 10 25 g. En cualquier casa de productos qumicos. El verde rpido es soluble en agua comn

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Beakers de 250 ml o recipientes similares para recibir suficientemente grandes para contener 100 semillas de maz, la solucin de verde rpido y permitir espacio para revolver. Un recipiente de 1000 ml o de tamao similar para mezclar el verde rpido en agua. METODOLOGIA:

3.2.

a. Prepare una solucin al 0.1% de verde rpido aadiendo 1g de verde rpido a 1000 ml de agua. Si solamente se necesita una pequea cantidad de la solucin, mezcle 0.1g de verde rpido en 100 ml de agua. b. Cuente una o mas replicas de 100 semillas de maz ( o de cualquier otra clase de semillas) al azar. Coloque cada replica en un beaker de 250 ml en un recipiente de tamao similar. c. Vierta suficiente cantidad de solucin de verde rpido en cada recipiente hasta cubrir la semilla. Revuelva la semilla en la solucin intermitente durante los primeros 30 segundos. Deje que la semilla repose en la solucin por aproximadamente 2 minutos ms. d. Retire la solucin de verde rpido y enjuague profusamente bajo agua corriente. e. Extienda cada una de las replicas de 100 semillas en una toalla absorbente o en papel para secar. f. Cuente las semillas en cada replica de 100 que muestren rupturas teidas en el pericarpio. Promedie el nmero para todas las replicas. 4. 5. RESULTADOS: CONCLUSION.

EL dao del pericarpio en la semilla de maz en un rango del 30 al 50% debe ser preocupante para un semillerista. Cuando el dao no est sobre el 50% el semillerista debe tomar los pasos necesarios para reducir el dao en el manejo y desgrane de la semilla de maz. Un dao severo del pericarpio causar algunas prdidas en el rendimiento aunque la semilla est tratada.

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En el caso de semillas de leguminosas, cada semilla coloreadas esta generalmente muerta o se convertir en una plntula anormal cuando se coloque en un sustrato hmedo para germinar.

NOTA: Generalmente el uso de una solucin verde rpido para soya es satisfactorio. La solucin es absorbida rpidamente an por algunas de las semillas no daadas. La cantidad de dao al cotiledn de la semilla revelado por una solucin verde rpido, se ha usado para predecir la germinacin en semilla nueva de alfalfa La solucin de verde rpido se puede recoger y volver a usar. Sin embargo, si se ha retenido mucho residuo en la solucin debe descartarse. RECOMENDACIONES: CUESTIONARIO: BIBLIOGRAFIA:

6. 7. 8.

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PRACTICA N 05 PRUEBAS DE VIGOR

1.

INTRODUCCIN:

La viabilidad de la semilla es uno de los principales atributos a considerarse en cualquier evaluacin de calidad y, en este sentido la metodologa para el anlisis de germinacin ha alcanzado un grado de refinamiento tal, que en la actualidad los resultados de los anlisis son altamente confiables y comprobables, en cualquier parte donde llegue una semilla respaldada por un anlisis. La uniformidad de los resultados dentro de y entre laboratorios es esencial en las operaciones que se realizan en el comercio nacional e internacional, la mejor forma de lograrlo, es colocando las semillas bajo condiciones similares y ptimas para la germinacin. La mayora de los pases incluyendo el Per preconizan el uso de las reglas internacionales para el anlisis de ISTA, con este fin. Los resultados de la prueba de germinacin proporcionan un estimado del potencial que tiene el lote de semillas, de producir plntulas normales bajo condiciones ptimas de temperaturas, humedad luz y oxgeno (condiciones proporcionadas en la prueba de germinacin) 2. 2.1. FUNDAMENTO TEORICO Concepto de Vigor:

El vigor como indicador de calidad, es relativamente nuevo, en comparacin con la germinacin y la pureza. Se puede considerar como resultado del deseo de explicar porque algunos lotes de semillas que tienen el mismo o semejante de germinacin, difieren sustancialmente en performance cuando son sembradas en el campo. En cuanto a la definicin de vigor en semillas el ISTA, adopta la siguiente definicin: es la suma total de aquellas propiedades de la semilla que determinan 22

el nivel de actividad y la performance de la semilla o del lote de la semillas durante la germinacin y la emergencia de la plntulas. Las semillas que muestran una alta performance se consideran como e alto vigor. Otra definicin mucho ms sencilla, es la de Isely(1957) quien define el vigor como la suma total de todos los atributos de la semilla que favorecen el establecimiento rpido y uniforme de plntulas en el campo. Los resultados de una prueba de vigor proporcionan un estimado del potencial que tiene el lote de semillas para producir plntulas normales bajo un amplio rango de condiciones ambientales. 2.2. Clases de Pruebas de vigor:

2.2.1. Pruebas Directas: Incluye cuando se expone a las semillas, bajo condiciones controladas en el laboratorio, a los factores adversos (estrs) que se espera reduzca la emergencia en el campo. Como ejemplo puede mencionarse la prueba del fro, que se usa para maz, en la cual se somete a condiciones hmedas y fras en suelo con patgenos capaces de explorar cualquier tipo de dao presente o inducido en la semilla Las pruebas directas, en particular aquellas que emplean suelo, son difciles de estandarizar entre laboratorios y tienden a dar resultados ms variables que las pruebas de germinacin. 2.2.2. Pruebas Indirectas: Son las cuales en que se evala o mide una determinada caracterstica de la semilla, que posteriormente se correlaciona con su performance en el campo. Una de las primeras pruebas de este tipo es la velocidad de germinacin, en el tiempo prescrito para el primer contaje o haciendo contadas diarias. A pesar de las controversias por su dificultad para se estandarizada, proporciona un buen ndice del valor de la semilla con fines de siembra en algunos cultivos. En esta categora tambin figura la velocidad de crecimiento de plntulas, que se evalan en funcin de la longitud de plntulas (sea de la plntula entera o de las proporciones apical y radical). La prueba de la conductividad elctrica es otra prueba indirecta, que se emplea comnmente para arveja (Pisum satuvum). En ella se mide el contenido de electrolitos lixiviados en agua deionizada en la cual se han remojado las semillas por 24 horas a 20 C.

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Otras de las pruebas incluidas es esta categora, es la de envejecimiento acelerado, en la cual se somete a al semilla a condiciones de alta temperatura y humedad relativa por un tiempo que varia segn la sp. estas condiciones inducen un aumento ene el ritmo del deterioro fisiolgico de la semilla. Por ultimo, la inmersin de semillas en una solucin de cloruro de tetrazolio, revela la presencia de tejidos muertos, cuya extensin y localizacin se relaciona con el valor como material para la siembra de la semilla. 2.3. Uso de la Prueba de Vigor:

El uso de la prueba de vigor permite al productor de semillas medir o evaluar el potencial de almacenaje de los diferentes lotes de semilla. Respecto al uso de las pruebas de vigor para predecir la performance en el campo, existe concordancia de opciones en el sentido que una sola prueba de vigor no puede predecir el porcentaje de plntulas que emergern en el campo. En condiciones extremadamente adversas, emergern pocas plntulas, independientemente del nivel de vigor y por el contrario, bajo condiciones favorables, la emergencia puede guardar una excelente correlacin con el porcentaje de germinacin, haciendo poco til la prueba de vigor. Sin embargo, en un punto intermedio existen condiciones cuando la germinacin tal como se determina en el laboratorio, no guarda relacin con la emergencia y algunos lotes de semilla se comportan mejor que otros con germinacin similar. 4. OBJETIVOS El objetivo de ste anlisis es determinar el porcentaje de semilla viable en un lote. Es muy til cuando existe latencia, lo que impide germinar a todas las semillas viables. MATERIALES Y METODOS:

4.

Detalle de algunas Pruebas de Vigor: 4.1. Prueba del Fro.-

Esta prueba por su condicin fra y hmeda del suelo retarda la actividad la actividad tanto de la semilla como la de los microorganismos del suelo.

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Sin embargo como las semillas estn en desventaja relativamente mayor, sern ms susceptibles al ataque de microorganismos causantes de pudricin. Las semillas vigorosas producirn plntulas capaces de resistir el ataque de estos microorganismos en mayor grado que las semillas dbiles.

Procedimiento: La prueba del fro original se lleva a cabo en bandejas cajas de plstico que se llenaban con suelo, sin embargo, para usar menos suelo y espacio desarrollaron el mtodo del papel enrollado con suelo. La prueba se realiza sembrando las semillas en suelo no esterilizado, el cual se coloca en bandejas de plstico. Luego de la siembra, se agrega agua hasta llevar el suelo hasta el 70% de capacidad de campo segn la AOSA al 40% segn la ISTA, luego se coloca el taper con suelo en un ambiente a 10C, 95% de humedad relativa y bajo oscuridad por 7 das , luego se traslada el recipiente a un ambiente a 25C para la germinacin y emergencia de las plntulas, donde permanecen de 4 a 6 das. Registros Transcurrido el perodo de exposicin a 25C, se clasifican las plntulas en los siguientes grupos. Grupo 1 Grupo 2 Plntulas fuertes sin dao. Plntulas fuertes pero con ligero retardo en su desarrollo con daos leves tales como: presencia de races primarias o secundarias cortas, pices de hojas, rasgados, coleptilo daado pero sin dao a las hojas, mesocotilo ligeramente retorcido. plntulas pequeas o levemente retorcidas, presenta pocas races laterales. Plntulas fuertes pero de desarrollo desproporcionado . Grupo 4 Grupo 5 Plntulas anormales, segn las reglas del ISTA. Semillas muertas.

Grupo 3

Los grupos 1 y 2 se consideran como semillas vigorosas.

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4.2.

Prueba del Envejecimiento Acelerado:

Fue desarrollado originalmente para determinar el potencial de almacenamiento de lotes de semilla. Esta prueba est basada en el concepto que, cuando se colocan los lotes de semillas bajo condiciones de alta humedad relativa y alta temperatura, un tiempo corto, su longevidad relativa ser la misma que bajo condiciones normales de almacenamiento comercial. Tambin se puede usar para categorizar lotes de semilla en cuanto a habilidad potencial para el establecimiento de plntulas en el campo. Procedimiento. Se someten las semillas a condiciones de alta temperatura (40 a 45C) y alta humedad relativa (mayor de 95%) poe periodos variables de tiempo (48 a 96 horas) segn la especie. Transcurrido el tiempo fijado, se realiza una prueba de germinacin. Con esta prueba se puede evaluar el vigor de diferentes lotes de semilla de la misma especie, comparando el porcentaje de germinacin antes y despus del envejecimiento. Los lotes ms vigorosos son los que muestran menor reduccin en la germinacin despus del envejecimiento Combinaciones tiempo- temperatura de envejecimiento para diferentes cultivos: CULTIVO Algodn deslintado al cido Algodn deslintado mecnico Maz Sorgo Trigo Leguminosas forrajeras (alfalfa) Frjol Rabanito Lechuga Cebolla Sanda Festuca alta Pasto Bromo 4.3. C 42 24 42 45 45 40 42 45 40 42 45 40 45 HORAS 72 96 96 72 48 72 72 48 72 72 72 72 72

Velocidad de Germinacin y Crecimiento:

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Las pruebas de germinacin pueden ser utilizadas tambin como indicadores de vigor, cuando las contadas se orientan a determinados indicadores de energa o vigor de las plntulas. Las ms conocidas son: 4.3.1. Mtodo de la Primera Contada: Este mtodo se basa en las diferencias que muestran dos ms lotes de semillas en cuanto al nmero de plntulas normales al trmino de la primera contada, en una prueba normal de germinacin. El lote que tenga mayor nmero de plntulas normales en el trmino establecido ser ms vigoroso. Este mtodo confronta el problema de las semillas duras que retrasan algo el resultado. 4.3.2. Mtodo de la Velocidad de Germinacin: Esta prueba es una variante de la anterior ya que en ella se realizan contadas diarias y aquella muestra que de el mayor nmero de plntulas normales en el menor nmero de das, ser la de semilla ms vigorosa. 4.3.3. Velocidad de Crecimiento: En esta prueba el nmero y disposicin de las semillas en el papel sustrato vara con respecto a los anteriores. En este caso las semillas, en nmero determinado, se colocan en hileras a lo largo del eje central de la hoja de papel de germinacin, se cubre con otra hoja y se enrolla de tal forma que las semillas queden ubicadas todas a la mitad del rollo. Luego los rollos se colocan en la germinadora a 45 de inclinacin, y se le da el tiempo y condiciones normales de una prueba de germinacin. Al termino del periodo pre-escrito se extrae los rollos y se mide la dimensin alcanzada por la raz o por el coleptilo o si se requiere por los dos a la vez. 5.- RESULTADOS: 6.- CONCLUSIONES: 7.- RECOMENDACIONES: 8.-CUESTIONARIO: 9.- BIBLIOGRAFIA:

27

PRACTICA N 06 ENSAYOS DE CRECIMIENTO DE LAS PLNTULAS

1.

INTRODUCCIN

La longitud de una plntula, despus de un periodo especifico, es el producto del tiempo empleado en germinar ejemplo se inicia el crecimiento, y las subsiguiente velocidad de crecimiento y su medida es ms adecuada que la de un ndice que requiera frecuentes observaciones para establecer una relacin con el tiempo y no sea fcilmente aplicable de una poblacin de semillas. Son ms apropiadas para este mtodo de anlisis las especies que producen una plmula sencilla y estrecha como los cereales races simples como la lechuga. Germ (1949), fue el primero en sugerir la medida del crecimiento de la plmula como un ensayo de vigor en los cereales y en la remolacha azucarera, y el mtodo se desarrollo posteriormente por Perry (1977), para cebada y trigo, luego lo uso Woodstock (1969) para maz y se sugiri para soja por Burris y Fehr (1971), ha sido usado con xito por Smith81973) con la medida del crecimiento de la raz en lechuga. 2. MATERIALES Y METODOS:

El mtodo que se detalla a continuacin fue aplicado por Perry (1977) en trigo y cebada. 2.1. Materiales:

toallas de papel con gran capacidad de absorcin (30 x 35 cm). solucin adhesiva de caucho no txica. Incubador a 20 C, alta humedad sin iluminacin. Cestos de alambre cajas de polietileno para colocar los papeles enrollados. Marcadores. 28

2.2.

Mtodo:

Primeramente en el papel secante se dibuja una lnea en el centro del papel por el eje mayor y 5 lneas paralelas a intervalos de 2cm a cada lado de la lnea central. La lnea central se marca con 25 puntos a intervalos de 1cm, para colocar las semillas. Las semillas se sujetan con goma adhesiva a la lnea central orientativa, con el embrin hacia arriba y la plmula apuntando en ngulo recto hacia las lneas paralelas. Se colocarn 25 semillas por hoja y se harn 4 repeticiones. Se colocan 2 hojas adicionales, una por debajo y la otra por encima de la hoja que contiene la semilla, y se sumergen todas ellas en agua. Se espera que se drene el exceso de agua de las hojas y se dobla la parte basal 2cm hacia arriba. Entonces se enrolla y se forma un cilindro de 4cm de dimetro, sujetndolas con una goma elstica. El rollo deber ser capaz de mantenerse en pie sin soporte. Los rollos se colocan en cajas o cestas en una cmara oscura a 20 C. Se ha de mantener una alta humedad en la cmara para evitar la desecacin, para lo cual puede aadirse solo si es necesario agua con nebulizador, es esencial proporcionar adecuada y uniforme aireacin a las semillas. El ensayo dura alrededor de 7 das, aunque el perodo puede variar con el fin de asegurarse que las plntulas de semillas vigorosas alcancen 10cm de longitud. 3. RESULTADOS:

Al finalizar el ensayo se cuenta el nmero de extremidades de plmula que estn situadas entre cada dos lneas paralelas. Los pares sucesivos de lneas dan la distancia desde el centro de las mismas al centro del papel. Ejemplo 1,3,5,7,9,11 y el nmero de extremidades de plmula situadas dentro de cada par de lneas se multiplica por la distancia correspondiente al punto medio y se suma. La longitud total se divide por el nmero de semillas ejemplo 25. Formulando: (nx1 + nx3 +-----+nx11) L = ------------------------------------25 Donde: L = Longitud media de la plmula en cm. n = nmero de extremidades de plmula entre un par de lneas 29

paralelas. x = la distancia desde el punto medio de las lneas a la lnea central. Se excluyen del calculo de la longitud, las plntulas que se clasificaran como anormales en el ensayo de germinacin. No es posible la comparacin del crecimiento real entre lotes ensayados en diferentes series de ensayos, dado que pequeas diferencias en el perodo de ensayo y en las condiciones ambientales provocan variaciones del crecimiento. No obstante si se incluye un lote de alto vigor como referencia en cada serie de ensayos, el crecimiento del testigo puede ajustarse a 10 y los dems lotes se ajustarn proporcionalmente. Y L = -------- X 10 C Donde: L = longitud de la plmula. Y = valor para la muestra de ensayo. C = valor de la muestra testigo. 5. 6. 7. 8. CONCLUSIONES: RECOMENDACIONES: CUESTIONARIOS: BIBLIOGRAFIA:

30

PRACTICA N 07 ENSAYO DE EVALUACIN DE PLANTULAS

1.

INTRODUCCION

Las sencillas medidas longitudinales no son adecuadas para alguna especies cultivadas, tales como las leguminosas de semillas grandes, dad su morfologa y debido a que las semillas de vigor bajo pueden dar origen a plntulas ahiladas dbiles, pero que son ms largas que las procedentes de semillas de vigor alto. En el caso de los guisantes, una evaluacin ms critica que la que se aplica en el ensayo de germinacin ha proporcionado un ndice de su valor para la siembra. 3. 3.1. MATERIALES Y METODOS: Materiales:

Cajas de polietileno de 15 x 20 x 10 cm. Moloquita (silicato de aluminio calcinado, partculas de 1-2mm). Arena gruesa o ladrillo picado (como medio alternativo). Cabina de crecimiento de plantas a 20 C, 95-98%HR y 12 horas de fotoperodo a 12klx.. Mtodo:

3.2.

Aadir agua para limpiar la moloquita esterilizada (o el medio utilizado), hasta su mxima capacidad de retencin (c.15% en peso), y homogeneizarlo. No debe haber agua libre. Colocar una capa de dos cm. en el fondo de la caja de polietileno colocar 50 semillas equidistantemente y cubrirlas con una capa de 3 cm de moloquita. Anotar el peso total de cada caja. Situar las cajas en la cmara en las condiciones especificadas, durante 6 das.

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Puede recubrirse las cajas con bolsas de polietileno perforadas para disminuir la evaporacin, pero deben permitir la oxigenacin adecuada. Deben pesarse las cajas de vez en cuando y reponer las prdidas de agua. Despus de 6 das se renuevan las plntulas en las cajas y se lavan.

4.

RESULTADOS:

Las semillas se dividen en germinadas y no germinadas y las plntulas se clasifican como sigue: Plntulas Vigorosas.- plmula, fuerte, bien desarrollada, verde oscuro; raz primaria fuerte sino existe, numerosas races secundarias. Plntulas No Vigorosas.- cualquier plntula que muestre uno o ms de los siguientes defectos: plmula corta, ejemplo menor de la mitad de la longitud de la plntula ms larga del ensayo, ahilada, sin aparecer por el tegumento, clortica. Pocas races, dbiles ninguna CONCLUSIONES:

5.

El inconveniente de este ensayo es la divisin subjetiva de las plantas en dos categoras, vigorosas y no vigorosas. Sin embargo loa analistas de las semillas estn acostumbrados a evaluar las plantas anormales, y los conocimientos que requiere este ensayo son similares. Se han obtenido resultados similares en arena y el ensayo puede realizarse durante o al finalizar el ensayo de germinacin de rutina, aunque es esencial que los lotes de semillas y las repeticiones se expongan a condiciones similares de temperatura, humedad y luz. Por otra parte, el ensayo puede finalizarse antes de lo usual. Cuando se realiza simultneamente con el ensayo de germinacin, las categoras de plntulas podran ser: Plntula vigorosa, tal como se ha descrito anteriormente. Plntula de vigor bajo, plmula corta o ahilada, o desarrollo retrasado. Plntula anormal.

Las categoras 1 y 2 constituyen el resultado del ensayo de germinacin, mientras que la 1 es el resultado del ensayo de vigor.

6.-RECOMENDACIONES: 7.-CUESTIONARIO: 8.- BBIBLIOGRAFIA. 32

RACTICA N 08 ENSAYO DE FRO

1.

INTRODUCCIN:

En muchos pases se realizan siembras primaverales tempranas de maz cuando las temperaturas son bajas y el ensayo de germinacin se lleva a cabo de acuerdo con las reglas internacionales, bajo condiciones ptimas de temperaturas y humedad, en este caso no proporciona una prediccin fiable de la emergencia en campo. En estas circunstancias es necesario llevar a cavo un ensayo bajo condiciones desfavorables, y con esta finalidad se usa ampliamente el ensayo de fro, las semillas se siembran en tierra que contengan preferentemente patgenos conocidos de maz, situada en condiciones de fro y posteriormente se coloca en condiciones de temperaturas elevadas para la germinacin. Los resultados nos muestran los efectos combinados de bajas temperaturas y patgenos sin posibilidad de distincin de ambos. Los resultados normalmente se expresan como porcentaje de germinacin pero puede influir tambin en la velocidad de crecimiento. El requisito de calor para la germinacin de la semillas, determinado genticamente, varia en una banda relativamente estrecha. Isely (1960) puso de manifiesto que la emergencia del maz en suelos fros y hmedos no depende exclusivamente de factores hereditarios, sino de muchos factores externos que influencian la calidad de la semillas. 2. 2.1. MATERIALES Y METODOS MATERIALES:

Enrejado (como base para preparar los rollos). Plstico duro, de 6mm, de espesor, de 60 x 19 cm. con una abertura rectangular centrada de 55 x 12.5 cm. Tabla contadora de 58 x 15.5 cm. con 50 orificios de 17 mm de dimetro.

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Pinzas y esptula de plstico de 25 x 5 cm. Cajas de plstico para los rollos de 30 x 40 x 20 cm. Germinador entre 10C y 25C. Estufa capaz de mantener 105C. Cpsulas de metal para determinar el contenido en agua del suelo. Cilindro con una malla en la base para determinar la capacidad de campo del suelo. Papel filtro ribeteado cortado en tiras de 58 x 15 cm, verticalmente a los ribetes y paralelo a los bordes de 15 cm. Suelo agrcola (arcillo-arenoso con ph de 6 a 8 y con contenido de humus) Antes de usar el suelo no se permitir el secado de este porque puede causar daos en la microflora, y se deber normalizar a 40% de la capacidad de campo como sigue: Determinar el contenido de humedad secando 25g de suelo a 105C durante 3 horas. Determinar la mxima capacidad de campo, ejemplo el mximo peso de agua que el suelo retendr contra la gravedad, utilizando el mtodo de Wiessman-Nehring. La cantidad necesaria de agua que se requiere para ajustar el contenido de humedad al 40% de la capacidad de campo vendr dad por: B . (100 F) . WF . P W = -----------------------------(10) 6 Donde: W = B = F = Cantidad necesaria de agua que debe de aadirse para alcanzar un contenido e agua del 40% de la capacidad de campo. - BxF ---------100

Peso del suelo hmedo (g). Porcentaje de contenido de humedad de suelo hmedo sobre un peso hmedo base. WK = Mxima capacidad de campo expresada en porcentaje de suelo seco. P= Porcentaje requerido de la capacidad de campo. 2.2. MTODO

No deben secarse ni clasificarse las semillas artificialmente despus del muestreo y debern tratarse con un fungicida con el fin de correlacionar los resultados del ensayo con la emergencia en campo solo despus del tratamiento. Se colocan sobre el enrejado dos tiras de papel de filtro, saturadas de agua.

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Se coloca el plstico duro sobre las tiras y se recubre con 300g de suelo, se enrasa el suelo con una esptula por encima del plstico, antes de que absorba agua del papel de filtro. Se siembran 50 semillas con ayuda de la tabla contadora y las pinzas, de forma que queden los embriones en estrecho contacto con el suelo, y con los embriones apuntado hacia abajo. Las semillas se presionan ligeramente contra el suelo con la tabla contadora y se colocan encima tiras de papel de filtro adicionales. Los papeles se enrollan sin apretar mucho, aplastndolos ligeramente, si se colocan verticalmente en un recipiente de plstico cuyo fondo est acanalado. Los canales permiten el desarrollo libre de las races. Es esencial que exista suficiente espacio entre la primera fila de rollos y el lateral de la caja para que se desarrollen races laterales (hay mejor desarrollo de races con envases de plstico que con bandejas de metal). Se colocan los recipientes con los rollos en un germinador durante 7 das, a 10C y 95% de humedad relativa, sin iluminacin. Si no se puede controlar la humedad en el germinador se deber envolver el recipiente en una pelcula de plstico. Luego del tratamiento en fro, los rollos se someten a 25C, con iluminacin moderada para evitar el ahilamiento. Las plntulas se evalan a los 13 das en total, cuando hayan desarrollado 2 3 hojas y la yema y la raz midan cerca de 20cm. un conteo precipitado a los 11 das puede producir a inexactitudes como daos en el tallo que no pueden ser reconocidas an. La preparacin de 100 rollos, incluyendo el tamizado del suelo, lleva de 8 a 10 horas y la evaluacin de los mismos de 7 a 8 horas. Registros: Las plntulas se clasifican en los siguientes grupos: Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 3. 4. Plntulas fuertes sin dao. Plntulas fuertes pero ligeramente retrasadas en su desarrollo, con daos ligeros. Plntulas dbilmente ahiladas cortas, races laterales presentes. Plntulas fuertes pero desarrolladas desproporcionadamente. Plntulas anormales de acuerdo con las reglas ISTA. Semillas muertas

RESULTADOS: CONCLUCIONES: 35

5. 6. 7.

RECOMENDACIONES: CUESTIONARIO: BIBLIOGRAFIA: PRACTICA N 09 ENSAYO TOPOGRFICO AL TETRAZOLIO

1.

INTRODUCCION

En los tejidos vivos de la planta, el trifenil cloruro de tetrazolio se reduce por la accin de los sistemas terminales de la oxidasa pasando de una solucin incolora a una solucin roja, formazn, insoluble en agua y que presipita en las clulas vivas mientras que en las clulas muertas no tiene lugar la reaccin, permaneciendo incolora. Esta propiedad fue utilizada como ensayo de viabilidad de las semillas primeramente por Lakon(1942), y desde entonces se ha utilizado como ensayo rpido de germinacin en numerosas especies de semillas. El embrin de semilla no necesita estar completamente teido para ser capaz de germinar. La utilizacin de la solucin de tetrazolio para el ensayo de vigor de las semillas es una ampliacin del estudio de los mapas de tincin de los tejidos, y fue concebido originalmente por Lakon(1950), desarrollado por Lindenbein y Bulat(1955), y descrito por Ader(1965). Aunque han sido descritos los mtodos para el anlisis de viabilidad de numerosas especies y probablemente se han realizado consideraciones sobre el vigor de la mayora de ellas, este capitulo se ajustar al ensayo de semillas de trigo, y las tcnicas de preparacin y teido estarn basadas en las que se citan en las reglas para en ensayo de semillas. 2. 2.1. MATERIALES Y METODOS: Materiales:

36

- Solucin al 1% de 2,3,5-trifenil cloruro de tetrazolio (de fcil adquisicin en l a mayora de los distribuidores de productos qumicos) en solucin tampn de fosfato para asegurar que el PH final de la solucin est entre 6,5 7,0. - Recipientes adecuados para sumergir las semillas en agua y en la solucin de tetrazolio. - Lancetas agujas de diseccin afilada. - Cepillo de cerdas finas para manipular los embriones extrados. - Lentes de aumento o microscopio estereoscopio. - Condiciones adecuadas para incubar a 30C. 2.2. Mtodo:

Sumergir cuatro repeticiones de 100 semillas a la temperatura ambiente de 18 a 20 horas. Extraer los embriones del endospermo con ayuda de las agujas de diseccin y limpiar los fragmentos de endospermo almidonado y testa teniendo cuidado de no provocar ningn dao mecnico. Sumergir los embriones en la solucin de tetrazolio en la oscuridad a 30C durante 5 horas. Lavarlos brevemente en agua y observar a la lupa. Registros: Lindenbein y Bulat (1955) realizaron las ilustraciones de 8 grupos de mapas de tincin de embriones de semillas de cereales mostrando proporciones crecientes de tejido sin teir y su localizacin. Las semillas que se incluyen en los grupos 1 a 3 se consideran vigorosas. Grupo 1 Embrin completamente teido. Grupo 2 Embrin completamente teido a excepcin de la punta de la raz primaria. Grupo 3 Embrin completamente teido excepto una raz primaria inicial. Dos grupos adicionales se indican con amplias reas sin teir en la zona de races iniciales es caracterstico de las semillas viables pero de bajo vigor. 3. RESULTADOS: 37

4. 5. 6. 8.

CONCLUSIONES: RECOMENDACIONES: CUESTIONARIO: BIBLIOGRAFIA:

PRACTICA N 10 ENSAYO AL TETRAZOLIO DE ALEURONA

1.

INTRODUCCION La capa de aleurona de las semillas de Cereales juega un papel fisiolgico importante en el metabolismo de la germinacin, ya sea que produce enzimas que hidrolizan las reservas del almidn del endospermo y, adems, las reas necrticas en la aleurona pueden permitir la entrada de patgenos al endorpermo y la colonizacin de los embriones sanos, en especial si los tratamientos fungicidas se diluyen y dispersan en suelos hmedos. Germ y Kietreiber (1953, 1954) mostraron que exista una relacin entre la viabilidad de la capa de aleuronas de las semillas de maz y la emergencia de las plntulas, y desarrollaron un ensayo en el cual las clulas viables se tien con tetrazolio. El mtodo ha sido mejorado posteriormente por Kietreiber(1971, 1975). Las observaciones realizadas en el ensayo proporcionan informacin acerca de la adecuacin del lote para siembra temprana bajo condiciones de calor hmedo, capacidad de almacenamiento y daos causados por las condiciones ambientales como heladas, daos mecnicos y producidos por el calor durante la cosecha y el procesamiento.

2. 2.1.

MATERIALES Y METODOS: Materiales: Solucin al 1% de 2,3,5 trifenil cloruro de tetrazolio. Germinador capaz de mantener temperaturas de 30C. Pinzas y lancetas. Cajas de cristal con tapadera para contener las semillas durante el teido. 38

2.2.

Mtodo: Las muestras de semillas tratadas con fungicidas debern lavarse para desprenderse los productos qumicos. Sumergir la semillas de 16 a 20 horas en agua a 30C. Cortar las semillas con un escarpelo afilado desde el extremo hacia la base, a lo largo de la lnea media, paralelo al plano del embrin, pero dejando unidas las dos mitades por la base. Dar unos cortes poco profundos a atravez del pericarpio de la mitad de la semilla que no contiene el embrin, con el fin de facilitar la penetracin de la solucin de tetrazolio a las clulas de aleurona. colocar las semillas de 2 a 4 das en una solucin de tetrazolio a 30C en cajas de cristal cubiertas. Las clulas vivas de aleurona se colorean de rojo, mientras que las clulas muertas permanecen sin teir. Durante el perodo de tincin puede tener lugar la multiplicacin de microorganismos, coloreando de rojo la solucin as como tiendo completamente las semillas, lo cual se puede prevenir aadiendo 0,005 de Preventol (Bayer, Leverkusen, W. Germany).

Registros: La evaluacin de la viabilidad debe realizarse a lo largo de toda la superficie de las semillas y se hacen claramente visibles a travs del pericarpio las reas vivas teidas y las necrosis. Las semillas se clasifican en tres grupos segn la zona de superficie teida: 1. 100 75% del total de la superficie de aleurona teida. 2. 75 25% del total de la superficie de aleurona teida. 3. Menos del 25% del total de la superficie de aleurona teida. Las necrosis prximas al embrin y al escutelo son ms perjudiciales que la cercanas al pice, se consideran como vigorosas y resistentes a las condiciones desfavorables las semillas del grupo 1, son ms del 75% del rea teida, mientras que las del grupo 2 y 3 se consideran no vigorosas. 3. 4. RESULTADOS: CONCLUSIONES: Aunque el ensayo de fro proporciona una estimacin ms cerca de la emergencia en campo, el ensayo al tetrazolio de aleurona es un valioso complemento del mismo. Los tratamientos fungicidas en semillas 39

disminuyen el efecto perjudicial de una capa de aleurona daada, pero corre el riesgo de permanecer, cuando las semillas se siembran en el campo, dado que algunas condiciones ambientales, tales como una lluvia continua, temperatura muy bajas y un elevado contenido en patgenos, no se contemplan en el ensayo en fro .el ensayo de aleurona no puede sustituir a un ensayo de fro, pero puede poner de manifiesto daos causados por un inadecuado procesamiento o envejecimiento en el almacenamiento. Las reglamentaciones de semillas austriacas exigen que al menos el 50% de las semillas deben de poseer una capa de aleurona viva tal como se considera en la categora N 1 5. 6. 7. 8. RECOMENDACIONES CUESTIONARIO: BIBLIOGRAFIA: BIBLIOGRAFIA:

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BIBLIOGRAFIA Aguirre R. y Otros, 1990, Manual para el Beneficio de Semillas. CIAT, Cali Colombia. CIAT. 1990, Control y Normas de Calidad de Semillas de Arroz. Cali, Colombia. FUNDEAGRO, 1990. Manual Control de Calidad en Semillas. Lima Per. FUNDEAGRO, 1992. Tcnicas de Laboratorio para el Anlisis de Semillas, Chiclayo Per. ISTA, 1995, Internacional Rules for Seed Testing. Surich Suiza. PERRY D.A. 1995, Manual de Mtodos de Ensayos de Vigor. P.O. Box 412, 8046 Zurich, Switzerland Suiza. SENASA, 2003. Reglamento de Produccin y Certificacin de Semillas, Lima Per. Thompsun, J. R. 1993. An Introduction to Seed Technology. Leonard Hill. Londres Reino Unido.

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