21/08/2012

Lesiones del DNA que requieren reparacin

Lesin del DNA Causa
Eliminacin de purinas por cidos y calor (en el genoma humano, hidrlisis espontnea de 10.000 enlaces glucosdicos/da ) Radiaciones ionizantes, agentes alquilantes, especies reactivas de oxgeno (ROS: O2, HO., H2O2) Desaminacin espontnea (C pasa a U y A pasa a hipoxantina), errores en la replicacin no corregidos por exo 3-5) Agentes intercalantes (naranja de acridina, proflavina) Radiacin UV Radiacin ionizante, agentes qumicos (bleomicina)

Reparacin del DNA

Dr. Carlos Fernando Prada

Prdida de una base

Base alterada Base incorrecta

Delecin/Insercin Dmeros de pirimidina Rotura de las cadenas

Mecanismos de reparacin
Reparacin directa del dao: DNA fotoliasas Escisin de la regin daada seguida de reemplazamiento preciso Escisin de base Escisin de nucletido Reparacin de errores de replicacin a) Desapareamientos (mismatch repair: MMR) b) Translesin (by-pass) Reparacin de roturas de doble cadena a) Unin de extremos no-homlogos b) Unin de extremos homlogos: recombinacin homloga

Reparacin directa del dao: DNA fotoliasas

Base daada por exposicin de UV es restaurada por accin EZ. Ej. DNA photolyase - E.coli Esta enzima falta en todos los mamferos, incluyendo los humanos, aunque todas las plantas y los dems animales la tienen.

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Sistema SOS en Bacterias

La respuesta SOS es un estado de alta actividad de Reparacin de DNA. Estimulo: Bacterias que han sido expuestas a altas dosis de agentes mutagnicos.

Gen bacteriano recA, lexA umuDC

Mecanismo o Funcin de la protena Regulacin del sistema SOS Unin/activacin de la DNA polymerase V Unin/activacin DNA polymerase IV

dinB

Reparacin por escisin

Etapas principales Reconocer la lesin Eliminar la lesin escindiendo parte de una de las hebras Nueva sntesis para llenar el hueco Sellar la mella para reestablecer la continuidad del DNA Reparacin por escisin de base BER (Base excision Repair) Una glucosilasa elimina la base, deja la cadena intacta La AP endonucleasa corta la cadena, la AP liasa elimina el azcar La DNA polimerasa rellena el hueco La DNA ligasa sella la mella Reparacin por escisin de nucletido NER (Nucleotide Excision Repair) Un corte doble elimina la lesin, se elimina un oligonucletido (12-13 nucletidos en E. Coli, 27-29 en humanos) La DNA polimerasa rellena el hueco La DNA ligasa sella la mella
Sistema de replicacin: DNA polimerasa I (en procariotas) y polimerasa beta (en eucariotas) DNA ligasa
Fig 5-50a .- Biologa Molecular de la Clula 4 ed., Alberts y col.

DNA glucosilasa: hidroliza el enlace glucosdico que une la base daada al azcar. Existen al menos 6 tipos de gluocosilasas (reconocen desaminaciones de C y A; bases oxidadas o alquiladas; bases con anillos alterados, etc) Genera un sitio sin base: apurnico o apirimidnico. Sitio AP AP endonucleasa: rompe el enlace fosfodister del sitio AP gererado por la glucosilasa

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Reparacin por escisin de nucletido

Este sistema de reparacin acta sobre una gran variedad de lesiones Dmeros de pirimidina Modificaciones qumicas con carcingenos: benzopireno, aflatoxina y con agentes quimioterpicos como cisplatino Bases desapareadas y pequeos lazos del DNA

Reparacin por escisin de nucletido

De forma general este sistema implica:

Deteccin del dao: mecanismo de escaneo

Actividad endonucleasa: ESCINUCLEASA (12 nucletidos)

DNA helicasa Es el sistema de reparacin ms genrico y flexible Sistema de replicacin: DNA polimerasa (delta y epsilon) y DNA ligasa

Reparacin por escisin de nucletido

Comparacin en E. Coli y en humanos

Reparacin por escisin de nucletido (E. Coli)

Funcin Escaneo DNA Nucleasa: ESCINUCLEASA Helicasa Sistema de replicacin

E. Coli UvrA UvrB, UvrC UvrD DNApol I/DNApol II; ligasa

Humanos XPA, XPC; RPA XPF, XPG XPB, XPD DNApol d/e; ligasa

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Reparacin por escisin de nucletido en humanos

Gen humano XPA XPB XPC XPD XPF XPG ERCC1 RPA Funcin de la protena Protena de reconocimiento del dao (interaccin con DNA lesionado) DNA helicasa, subunidad de TFIIH Reconocimiento inicial de la lesin. Interaccin con TFIIH DNA helicasa, subunidad de TFIIH Actividad nucleasa (5lesin) Actividad nucleasa (3 lesin) Unin a XPF y a protena RPA Unin al complejo XPF-ERCC1 (reconocimiento de lesin junto a XPA)

Reparacin por escisin de nucletido en humanos En eucariotas superiores este tipo de reparacin es ms activa en genes transcripcionalmente activos Reparacin asociada a transcripcin

Reparacin de desapareamientos post-replicativos o apareamiento incorrecto de base o MisMatch Repair (MMR)

Enzimas MMR en E. Coli:

Reparacin de desapareamientos post-replicativos (MMR)

Cmo se reconoce la cadena daada?
El sistema tiene que distinguir la base errnea en la cadena hija, sin afectar a la cadena molde

Funcin Escaneo DNA

Componente MutS

Reparacin de errores

MutL MutH (endonucleasa) MutU (UvrD helicasa) DNApol III; ligasa

Sistema de replicacin

La cadena hija permanece sin metilar en las secuencias GATC varios minutos despus de su sntesis

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Reparacin de desapareamientos
Comparacin de los sistemas enzimticos en E. Coli y en humanos

Reparacin por sntesis de translesin trans lesion synthesis (TLS)

Qu ocurre si la DNA pol de replicacin encuentra una lesin, dmero de T o un sitio AP (apurnico), que no ha sido reparada?
Acta un mecanismo de seguridad que permite que la maquinaria de replicacin se salte by pass estos sitios de lesin

Funcin Escaneo DNA Reparacin de errores

E. Coli MutS MutL MutH (endonucleasa) MutU (UvrD helicasa) DNApol III; ligasa

Humanos hMSH2-hMSH6 hMLH1-PMS1, PMS2 MED1 (endonucleasa)

Sntesis de translesin

Sistema de replicacin

DNApol d/e; ligasa

Este sistema es muy propenso a cometer errores, pero evita que un cromosoma se replique de manera incompleta

Reparacin por sntesis de translesin (TLS)

Reparacin de roturas de doble cadena

Las roturas de doble cadena son potencialmente letales

Polimerasas de translesin: Familia Y de DNA polimerasas

Causas de rotura de doble hebra

Sintetizan DNA a travs del sitio de la lesin

Radiaciones ionizantes (rayos g, rayos X) Especies de oxgeno reactivas Quimioterpicos (bleomicina)

Son dependientes de molde

Incorporan nucletidos de una manera independiente de apareamiento de bases, por eso cometen errores con frecuencia

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Unin de extremos no-homlogos

DNA-PK: Protena quinasa dependiente de DNA Protena KU: ATPasa dependiente de DNA con actividad helicasa

Unin de extremos homlogos: recombinacin homloga

ATM: protena quinasa activada por rotura de cadena doble

RAD51: conduce el apareamiento de DNA homlogos e invasin de cadenas

Se eliminan pb
Un filamento nucleoproteco busca la secuencia homloga de DNA doble sobre la cromtida hermana

Unin de extremos homlogos: recombinacin homloga