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- Citologa

Introduccin
En el siglo XVII, el ingls Robert Hooke dio a conocer la estructura del corcho y otros tejidos vegetales, y llam clulas a los pequeos huecos polidricos que lo integraban a modo de celdillas de un panal. Tuvieron que pasar dos siglos para que los bilogos dieran la importancia que se merece al contenido de esas celdillas. En el siglo XIX, el concepto de clula experimenta una considerable variacin: la clula ya no es la estructura polidrica de Hooke, sino lo que hay en su interior. Es ms, muchas clulas carecen de esa pared y no por eso dejan de ser clulas. Pero el hecho fundamental del siglo XIX es el establecimiento de la teora celular, que afirma y reconoce la clula como la unidad bsica de estructura y funcin de todos los seres vivos. Es decir, a pesar de la diferente diversidad de formas, tamaos y funciones de los seres vivos, en todos hay un fondo comn elemental: la clula. Esta idea revolucionaria constituye uno de los pilares fundamentales sobre los que se apoya la Biologa moderna, y sirvi para desplazar en gran medida el centro de gravedad de las investigaciones hacia el terreno microscpico. Pronto se descubrieron el ncleo, los cromosomas, el aparato de Golgi y otros orgnulos celulares, y la introduccin en Biologa del microscopio electrnico revel innumerables detalles de la ultra estructura celular, poniendo an en ms de manifiesto esa unidad existente entre todos los seres vivos, a pesar de la aparente diversidad. Los hallazgos conseguidos por este procedimiento, junto con los descubrimientos iniciados a finales del siglo XIX sobre la relacin existente entre la estructura y la funcin de los orgnulos celulares, resultaron en parte de la unin de tcnicas histolgicas, citolgicas y qumicas, cuyo resultado fue la aparicin de la histoqumica y de la citoqumica. Al descubrirse que la base material de la herencia son los cromosomas y que la molcula portadora de la informacin que se transmite de una generacin a otra es el ADN, se establecieron las bases de la citogentica. En la actualidad son tantos los campos de la Biologa que han enriquecido a la citologa, y han sido tan importantes y transcendentales las repercusiones de estos conocimientos a todos los niveles de organizacin, que la clula ha pasado a ser el centro de la atencin de muchos investigadores y a constituir por s sla un captulo importante entre las ciencias biolgicas, al que por mrito propio se llama "Biologa celular" o bien Citologa; La citologa o biologa celular es la rama de la biologa que estudia las clulas en lo que concierne a su estructura, sus funciones y su importancia en la complejidad de los seres vivos. Citologa viene del griego (clula), La biologa celular se centra en la comprensin del funcionamiento de los sistemas celulares, de cmo estas clulas se regulan y la comprensin de su funcionamiento.

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A) Hematica Clulas que estudia la citologa hematica: Glbulos Rojos El nombre cientfico de los glbulos rojos es eritrocitos. Se forman en la mdula sea y son creados por una clula madre. Los glbulos rojos son los ms numerosos de todas las clulas sanguneas que hay en la sangre. En el cuerpo de un adulto se producen de 4 a 5 billones de glbulos rojos por hora. Cuando un glbulo rojo madura, expulsa su ncleo antes de entrar al torrente sanguneo. Se parece a un plato o una rosquilla pero sin el agujero del centro. Los glbulos rojos slo miden de 7 a 8 micrones de dimetro, pero son las partculas ms pesadas de la sangre.

Los glbulos rojos contienen hemoglobina, una protena que transporta el oxgeno. El oxgeno tambin se conoce por O 2. Cada vez que respiramos, inhalamos oxgeno con el aire.

La funcin de los glbulos rojos es absorber oxgeno de los pequeos alvolos que se encuentran en los pulmones y llevarlo a todos los msculos, tejidos y rganos del cuerpo.

Para lograr esto, tienen que viajar por grandes arterias y pequeos capilares. A veces los capilares son tan pequeos que los glbulos rojos deben comprimirse y estirarse e incluso plegarse para poder pasar y poder liberar su cargamento de oxgeno.

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Pero eso es slo la mitad del viaje. Luego de liberar el oxgeno, los glbulos rojos recogen un producto de desecho de las clulas llamado dixido de carbono, conocido tambin como CO2. En el viaje de vuelta, pasarn por las venas hasta llegar a los pulmones donde finalmente liberarn el CO2. El cuerpo elimina dixido de carbono cada vez que exhalamos! Luego, los glbulos rojos comienzan nuevamente el mismo viaje. A las clulas sanguneas les lleva un promedio de 30 a 45 segundos recorrer el circuito completo del cuerpo. Los glbulos rojos viven alrededor de 120 das, y cuando mueren, son sacados de la circulacin por un rgano llamado bazo. Glbulos Blancos El nombre cientfico de los glbulos blancos es leucocitos. Son difciles de ver en un microscopio, por lo cual los cientficos los tien de colores fuertes para poder estudiarlos mejor. Al igual que los glbulos rojos, los glbulos blancos se forman en la mdula sea y son creados por una clula madre. Los glbulos blancos son una parte muy importante del sistema inmunolgico. Su funcin es proteger el organismo de infecciones producidas por grmenes. Hay muchos tipos de glbulos blancos y cada uno de ellos tiene tareas especficas. Hay linfocitos T y linfocitos B, monocitos y granulocitos.

Los glbulos blancos pueden atravesar las paredes de los capilares (los ms diminutos vasos sanguneos) para atacar, destruir y consumir a los grmenes invasores. Los granulocitos contienen pequeos grnulos en su citoplasma o materia celular, y pueden clasificarse como neutrfilos, basfilos y eosinfilos. Los granulocitos reconocen ciertas seales que mandan los grmenes cuando invaden el cuerpo.

Los monocitos y linfocitos no contienen grnulos, pero cuando los granulocitos detectan un germen invasor, los linfocitos y monocitos lo encuentran y se lo comen. Luego los monocitos examinan las partes de protena que formaban el germen para analizar de qu estaba formado. Despus, los monocitos llaman a los linfocitos T para que reconozcan como era el germen, y stos a su vez convocan a los linfocitos B, los cuales crean una arma especial llamada anticuerpo para atacar a esos grmenes. Los linfocitos B crean muchas copias de estas armas o anticuerpos. Cuando los anticuerpos encuentran su objetivo lo atacan, hieren y matan, para que luego los granulocitos y monocitos terminen con l. En una sola gota de sangre

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hay entre 7.000 y 25.000 glbulos blancos Plaquetas Las plaquetas son otro componente importante de tu sangre. Las plaquetas son pequeos trozos pegajosos de material celular que ayudan a evitar las hemorragias y forman un cogulo de sangre cuando se produce un corte o ruptura de un vaso sanguneo. En la fotografa de arriba se puede apreciar una ampliacin de un grupo de plaquetas, vistas a travs de un microscopio electrnico. Para producir plaquetas, la clula madre se transforma en una fbrica de clulas llamada megacariocito. sta es una enorme clula con muchos ncleos, que nunca sale de la mdula sea, pero produce muchos fragmentos pequesimos. Esos fragmentos son las plaquetas, pequeos trozos de citoplasma, o material celular.

Las plaquetas salen de la mdula sea para circular libremente en el torrente sanguneo. Normalmente tienen un aspecto redondeado y liso, pero cuando se activan para conectarse unas con otras producen unas salientes puntiagudas y sus bordes se hacen rugosos. Cuando, debido a una herida, se produce una ruptura en la pared de un vaso sanguneo, las plaquetas reaccionan adhirindose al corte y, en cuestin de minutos, producen un tapn provisorio que detiene la prdida de sangre.

Las plaquetas tambin atraen una protena presente en la sangre, la fibrina, y la usan para formar una densa red en la que atrapan glbulos rojos y rpidamente forma un cogulo.

Del lado exterior de un corte slo se ve una costra dura que se forma sobre la herida. Mientras quede parte de la herida sin sanar en la pared del vaso, el cogulo constantemente se formar, se disolver y se volver a formar con nuevas plaquetas, para evitar la prdida de sangre. Cuando crezcan nuevas clulas sobre la herida y sta finalmente sane por completo, el cogulo se eliminar y la sangre fluir otra vez normalmente por el vaso.

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Citologa hemtica Tiene como finalidad principal desde un punto de vista practico e inferir indirectamente la posibilidad de infeccin agregada SDR, ya que presencia de leucocitosis, o leucopenia, asociada a otras variables como sedimentacin globular y plaquetas es un elemento de gran ayuda. Como apoyo secundario obviamente tambin sirve para valorar la presencia de anemia o hiperglubolia MORFOLOGIA

IMPORTANCIA DEL FROTIS SANGUINEO EN LA CITOLOGIA HEMATICA La citologa hemtica se divide en formula roja y en formula blanca. Es de gran importancia el anlisis correcto de un frotis sanguneo que se incluye dentro de la formula blanca, debido a que este nos proporcionara la informacin necesaria sobre la morfologa, maduracin y caractersticas principales de las clulas sanguneas existentes . Tcnica de tincin de frotis sanguneo 1. Depositar el portaobjetos con la extensin de sangre encima y el soporte de tinciones y este sobre la cubeta. 2. Dejar caer sobre la extensin unas gotas de metanol y esperar que el alcohol se evapore, con lo que se consigue el fijado. 3. Depositar cubriendo toda la extensin, unas gotas de giemsa , evitar la desecacin y dejar actuar el colorante unos cinco minutos. 4. Lavar la preparacin hasta que arrastre todo el colorante 5. Secar el portaobjetos y los residuos de agua en el.

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Tincin de Wright La tincin de Wright es usada en histologa para facilitar la diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre. Se usa principalmente para teir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. Fundamento : La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y o eosina B. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y da color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Material: Frotis sanguneo Agua destilada Eosina B Eosina Y Azul de metileno Alcohol metlico Procedimiento: 1.- Hacer un frotis sanguneo, ni demasiado delgado, ni que llegue al extremo del portaobjetos 2.- Fijar el frotis con alcohol metlico y dejar secar 3.- Sumergir el portaobjetos en el hemoclorante 1, durante 5 o 6 segundos 4.- Lavar con Buffer 7.2 y sacudir para eliminar exceso 5.- Sumergir por 6-8 segundos en el hemoclorante 2 6.- Lavar con buffer 7.2 y dejar secar 7.- Observar al microscopio Tincin Giemsa Las tinciones hematolgicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus productos de oxidacin (azur A, azur B y azur C). De este modo, obtenemos una tincin diferencial, es decir, una tincin que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares segn se tian stas con el colorante cido, con el bsico o con la mezcla de ambos.

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Segn la proporcin de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante tendremos distintos mtodos de tincin. Fundamento Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa. Material necesario Microscopio ptico. Portas bien limpios. Cristalizador. Puentes de tincin. Pipetas Pasteur con chupeton Frascos lavadores. Tubos de ensayo. Reactivos Colorante en solucin segn Giemsa de Panreac. Solucin tampn pH 7,2 de Panreac. Metanol. Aceite de inmersin. Muestra Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de eleccin es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sdico y el oxalato potsico pueden dar preparaciones defectuosas. Tcnica Preparamos un frotis sanguneo segn la tcnica descrita con anterioridad. Colocamos el frotis sobre el puente de tincin, en el cristalizador y en posicin horizontal. Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis. Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de azureosina-azul de metileno segn Giemsa con 2 ml de solucin tampn pH 7,2. Es importante realizar esta dilucin en el momento de la tincin, ya que el colorante precipita y no es vlido para otro da. Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la dilucin de colorante, dejndolo actuar durante 25 minutos. Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con tampn pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Dejamos escurrir y secamos en posicin vertical.

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VALORES NORMALES DE LOS RESULTADOS Hombres Eritrocitos Hemoglobina Hematocrito Formula blanca 4.5 a 5.5 millones 16.0 +/- 2.0gm/100ml 47.0 +/- 7.0ml por 100ml Mujeres 4 a 5.5 millones 14.0+/- 2.0gm /100ml 42.0+/ - 5.0 ml por 100ml

Formula de porcentaje diferencial: Neutrofilos juveniles Neutrofilos segmentados Eosinofilos Basofilos Linfocitos Monocitos 1 a 3% 0 a 0.75% 25 a 33 % 3a 7% 3 a 5% 54 a 62%

SIGNIFICADO CLINICO DE LA CITOLOGIA HEMATICA Se realiza para observar, clasificar y cuantificar las clulas blancas normales maduras as como las caractersticas de los glbulos rojos y de todas las clulas sanguneas presentes en un hemograma. Sin embargo tambin es utilizado para corroborar resultado obtenido de aparatos automatizados.