Replicacin, reparacin y recombinacin del DNA.

Captulo 5 [BIOLOGA MOLECULAR DE LA CLULA AL DICTADO]

Lo que a continuacin prosigue es la primera fase, previa a esa lectura anterior que ya se realiza sin interrupciones, y que da origen a la transcripcin que observas y suceder, en su mayor parte, a ritmo de dictado [con gran lentitud], por si t deseas realizarla, para ir familiarizndote con los contenidos a una velocidad de procesamiento que permite la intervencin del pensamiento, yo me limito a reproducir mi proceso: . EL MANTENIMIENTO DE LAS SECUENCIAS DEL ADN

Las frecuencias de mutacin son extremadamente bajas. - Para que exista la vida tal como la conocemos son necesarias bajas frecuencias de mutacin. . RESUMEN PRIMERO <<En cualquier clula, las secuencias de DNA se mantienen y se replican con una alta fidelidad. La frecuencia de mutacin, alrededor de 1 cambio de nucletido por cada nucletidos cada vez que se replica el DNA, es aproximadamente la misma para organismos tan distintos como las bacterias y los humanos. Dada esta alta fidelidad, la secuencia del genoma humano [aproximadamente 3 x pares de nucletidos] slo cambia en 3

nucletidos cada vez que la clula se divide. Este hecho permite a la mayora de los humanos transmitir de forma cuidadosa las instrucciones genticas de una generacin a la siguiente y tambin evitar los cambios en las clulas somticas que llevaran a un cncer.>> . .

MECANISMOS DE REPLICACIN DEL DNA

- El apareamiento de bases es la esencia de la replicacin y de la reparacin del DNA. - La horquilla de replicacin es asimtrica.

- El elevado grado de fidelidad del mecanismo de replicacin del DNA requiere la existencia de un mecanismo de correccin de pruebas. - Slo la replicacin del DNA en sentido 5 a 3 permite la existencia de un proceso eficiente de correccin de errores. - Una enzima especial que polimeriza nucletidos sintetiza molculas cebadoras de RNA cortas sobre la cadena retrasada. .

*Fuente de la imagen: Wikipedia [Fragmentos de Okazaki, cadena conductora ycadena retrasada] . - Unas protenas especiales ayudan a abrir la doble hlice del DNA por delante de la horquilla de replicacin. - Una abrazadera deslizante mantiene unida al DNA una molcula de DNA polimerasa mvil. - En la horquilla de replicacin, una serie de protenas cooperan entre s formando una maquinaria de replicacin . - Un sistema de correccin de errores de apareamiento elimina los errores de replicacin producidos por la maquinaria de replicacin. - Las DNA topoisomerasas evitan que el DNA se enrede durante la replicacin. - La replicacin del DNA en los eucariotas es bsicamente similar a la de los procariotas. . <<La replicacin del DNA tiene lugar en una estructura en forma de Y llamadahorquilla de replicacin. Una DNA polimerasa autoconectora cataliza la polimerizacin de nucletidos en sentido 5 a 3, copiando un patrn de DNA con una fidelidad notable. Puesto que las dos cadenas de una doble hlice de DNA son antiparalelas, esta sntesis 5 a 3 del DNA slo

puede ocurrir de forma continua en una de las dos cadenas (la cadena conductora) de la horquilla de replicacin. En la cadena retrasada se sintetizan pequeos fragmentos de DNA mediante un proceso de punto hacia atrs. Debido a que la DNA polimerasa autocorrectora no puede iniciar la sntesis de una cadena de DNA estos fragmentos de DNA sobre la cadena retrasada se inician mediante cortas molculas de cebador de RNA, las cuales sern eliminadas ms tarde y sustituidas por DNA. La replica del DNA requiere la cooperacin de muchas protenas, entre las cuales se encuentran: 1) Una DNA polimerasa y una DNA primasa que catalizan la polimerizacin de nuclesidos trifosfato. 2) DNA helicasas y protenas de unin a DNA de cadena sencilla, que colaboran en la apertura de la hlice de DNA que se va a copiar. 3) Una DNA ligasa y una enzima que degrada los cebadores de RNA, uniendo los fragmentos de DNA de la cadena retrasada sintetizados de forma discontinua. 4) DNA topoisomerasas que actan solventado problemas de enrollamiento y enmaraamiento de la hlice. Muchas de estas protenas se asocian unas con otras en la horquilla de replicacin formando una maquinaria de replicacin altamente eficiente, mediante la cual se coordinan las actividades y los movimientos especiales de los componentes individuales.>> . INICIACION Y TERMINACION DE LA REPLICACION DEL ADN EN LOS CROMOSOMAS

La sntesis de DNA empieza en los orgenes de la replicacin. - Los cromosomas bacterianos normalmente tienen un slo origen de replicacin del DNA. - Los cromosomas de las clulas eucariotas tienen varios orgenes de replicacin. - En eucariotas la replicacin de DNA slo tiene lugar durante una parte del ciclo celular. - En la fase S se replican distintas regiones de un mismo cromosoma a distintos tiempos. - La cromatina altamente condensada se replica de forma tarda, mientras que los genes presentes en la cromatina menos condensada tienden a replicarse antes.

- Unas secuencias bien definidas de DNA actan como origen de la replicacin en eucariotas sencillos como la levadura. - En los orgenes de replicacin de eucariotas se unen grandes complejos formados por muchas subunidades. - Dificultad para identificar las secuencias del DNA que especifican el inicio de la replicacin en mamferos. - Detrs de la horquilla de replicacin se ensamblan nuevos nucleosomas. - Los mecanismos de duplicacin cromosmica en eucariotas aseguran que los patrones de modificacin de histonas se pueden heredar. - La telomerasa replica a los extremos de los cromosomas. - Las clulas y los organismos regulan la longitud del telmero. . SEGUNDO RESUMEN <<Las protenas que inician la replicacin del DNA se unen a secuencias de DNA en el origen de replicacin y catalizan la formacin de una burbuja de replicacin con dos horquillas de replicacin que se desplazan en sentidos opuestos. El proceso empieza cuando se forma un complejo iniciador protena-DNA y posteriormente carga unaDNA helicasa al patrn de DNA. Despus se aaden otras protenas formando lamaquinaria de replicacin multienzimtica que en cada horquilla de replicacin cataliza la sntesis del DNA. En bacterias y en algunos organismos eucariotas sencillos, los orgenes de replicacin estn determinados por secuencias de DNA especficas que tienen una longitud de unos centenares de pares de bases. En otros organismos eucariotas, como los humanos, parece que las secuencias necesarias, para especificar el origen de replicacin del DNA no estn tan bien definidas y el origen puede abarcar varios miles de pares de bases. Por lo general, las bacterias tienen un nico origen de replicacin en un cromosoma circular. Pueden replicar su genoma en menos de una hora, con una horquilla de replicacin que se desplaza a una velocidad de 1000 nucletidos por segundo. La replicacin del DNA en clulas eucariotas slo tiene lugar durante una parte del ciclo celular, la fase S. La horquilla de

replicacin se desplaza aproximadamente 10 veces ms despacio que la horquilla de replicacin de bacterias; debido a la mayor longitud de los cromosomas es necesaria la presencia de varios orgenes de replicacin para completar la replicacin de la fase S, que suele durar unas 8 horas en las clulas humanas. En estos cromosomas eucariotas, los diferentes orgenes de replicacin se activan siguiendo una secuencia, determinada en parte por la estructura de la cromatina, replicndose en ltimo lugar las regiones de la cromatina ms condensada. Despus de pasar la horquilla de replicacin, la estructura de la cromatina vuelve a formar con la adicin de nuevas histonas a las histonas ya existentes que hereda cada molcula de DNA hija. El mecanismo de duplicacin de los cromosomas permite que el patrn de modificacin de histonas paterno se transmita a los cromosomas hijos y proporcione as un medio de transmisin de la herencia epigentica. Los eucariotas resuelven el problema de la replicacin de sus extremos de los cromosomas lineales con una estructura especializada en el extremo, el telmero, que se mantiene gracias a unaenzima polimerasa especial llamada telomerasa. La telomerasa alarga una de las cadenas de DNA del final del cromosoma mediante un patrn de RNA que es parte integral de la propia enzima; el resultado es una secuencia de DNA altamente repetidade algunas unidades de pares de nucletidos al final de cada cromosoma.>> . .

REPARACIN DEL DNA

- Si no fueran corregidas las alteraciones espontneas del DNA podran cambiar rpidamente las secuencias del DNA. - La doble hlice de DNA es reparada con rapidez. - Las alteraciones del DNA pueden ser eliminadas por ms de una va. - El acoplamiento de la reparacin del DNA a la transcripcin asegura que el DNA ms importante de la clula se repara de forma eficiente. - Las propiedades qumicas de las bases del DNA facilitan la deteccin de las alteraciones. - Se utilizan DNA polimerasas para reparar el DNA en casos de emergencia.

- Las roturas en la doble cadena son reparadas de forma eficiente. - Las alteraciones del DNA retrasan la progresin del ciclo celular. .

La informacin gentica puede ser almacenada de forma estable en las secuencias de DNA, solamente porque un gran conjunto de enzimas reparadoras rastrean de forma continua el DNA y reemplazan cualquier nucletido alterado. La mayora de los tipos de reparacin del DNA dependen de la presencia de una copia separada de la informacin gentica en cada una de las dos cadenas de la doble hlice del DNA. De este modo, una enzima reparadora elimina una lesin accidental en una de las clulas y resintetiza la cadena utilizando como referencia la informacin contenida en la cadena no alterada. La mayor parte de las alteraciones en bases del DNA son eliminadas por una de las dos principales vas de reparacin del DNA. En la reparacin por eliminacin de bases, la base alterada es eliminada por una enzima DNA glucosilasa y a continuacin se corta el azcar fosfato resultante. En la reparacin por eliminacin de nucletidos, se elimina de la doble hlice de DNA una pequea seccin de la cadena de DNA que rodea la alteracin en forma de oligonucletido. En ambos casos, el hueco dejado en la hlice del DNA se rellena mediante la accin secuencial de una DNA polimerasa y una DNA ligasa, utilizando la cadena de DNA no alterada como patrn. Algunos tipos de dao del DNA se reparan mediante una estrategia diferente: la reversin qumica directa del dao, la cual es llevada a cabo por protenas de reparacin especializadas. Otros sistemas de reparacin cruciales -basados en mecanismos de unin en extremos no homlogos o en la recombinacin homlogaa- son capaces de corregir las roturas accidentales de la doble cadena que ocurren en la hlice de DNA. En la mayora de las clulas, un nivel elevado de alteraciones en el DNA provoca un retraso en el ciclo celular mediante los puntos de control, los cuales aseguran que el DNA sea reparado antes de que la clula se divida.>> . .

RECOMBINACIN HOMLOGA

- La recombinacin homloga tiene muchas utilidades en la clula. - La recombinacin homloga tiene caractersticas comunes en todas las clulas. - El apareamiento de bases de DNA gua la recombinacin homloga. - La protena RecA y sus homlogas permiten que una molcula de una sola cadena de DNA se aparee con una regin homloga en una doble hlice. - La migracin de cadenas puede alargar las regiones de heterodplex o dejar el DNA de nueva sntesis como DNA de cadena sencilla. - La recombinacin homloga puede reparar de forma perfecta roturas en la doble cadena de DNA. - Las clulas regulan estrechamente la utilizacin de la recombinacin homloga en la reparacin del DNA. - Las uniones tipo Holliday a menudo se forman durante las recombinaciones homlogas. - La recombinacin meitica empieza con una rotura programada de la doble cadena. - La recombinacin homloga genera a menudo una conversin gnica. - La correccin de errores de apareamiento evita la recombinacin promiscua entre dos secuencias de DNA mal apareadas.

<<La recombinacin homloga [tambin llamada recombinacin general] da lugar a la transferencia de informacin gentica entre dos segmentos dplex de DNA de secuencia nucleotdica similar. Este proceso es esencial para la reparacin sin errores del dao cromosmico en todas las clulas y tambin es el responsable del entrecruzamiento de cromosomas que tiene lugar durante la meiosis. Los fenmenos de recombinacin estn dirigidos por un conjunto especializado de protenas. A pesar de que puede ocurrir en cualquier parte de la molcula de DNA, siempre requieren interacciones de apareamiento en regiones extensas entre las cadenas complementarias de los dos dplex de DNA que interaccionan. En la meiosis, la recombinacin homloga se inicia con la rotura de la doble

cadena llevada a cabo de forma intencionada en cada cromosoma. Estas roturas son transformadas en extremos 3 los cuales, mediante una reaccin catalizada por la familia de protenas RecA, invaden la cadena homloga en la pareja de dplex. La migracin de cadenas acompaada de las sntesis limitada de DNA conduce a la formacin de estructuras de cuatro cadenas conocidas con el nombre de uniones de Holliday. Cada reaccin de recombinacin termina cuando se resuelven estos intermediarios de la recombinacin. El resultado puede ser o bien dos cromosomas que se han entrecruzado (es decir, cromosomas en los que el DNA a cada lado del punto de bifurcacin procede de dos homlogos diferentes) O bien dos cromosomas que no se han entrecruzado. En el ltimo caso, los dos cromosomas resultantes son idnticos a los dos homlogos originales, excepto por la cantidad de cambios de secuencia relativamente menores en el punto de recombinacin. Con excepcin de la meiosis, las reacciones de recombinacin homloga que reparan con precisin las roturas de la doble cadena casi nunca producen productos de entrecruzamiento.>> . .

TRANSPOSICIN Y RECOMBINACIN CONSERVATIVA ESPECFICA DE LUGAR.

- Los elementos genticos mviles se pueden insertar en cualquier secuencia de DNA mediante transposicin. - Los transposones slo de DNA se desplazan mediante mecanismos de corte y unin y mecanismos replicativos. - Algunos virus utilizan mecanismos de transposicin para desplazarse a cromosomas de la clula husped. - Los retrotransposones retrovirales se parecen a los retrovirus pero no tienen protena de cubierta. - Una gran proporcin del genoma humano est compuesto de retrotransposones no retrovirales. - En distintos organismos predominan distintos elementos transponibles

- La secuenciacin del genoma permite conocer aproximadamente cundo se han desplazado los elementos transponibles. - La recombinacin conservativa especfica de lugar puede reordenar el DNA de forma reversible. - La recombinacin conservativa especfica de lugar fue descubierta en el bacterifago - La recombinacin conservativa especfica de lugar se utiliza para activar o desactivar genes. . RESUMEN SEXTO <<Los genomas de prcticamente todos los organismos contienen elementos genticos mviles que pueden desplazarse desde una posicin en el genoma a otra, mediante procesos de recombinacin transposicional o conservativa especfica de lugar. En la mayora de los casos, este desplazamiento se produce al azar y ocurre con frecuencias muy bajas. Los elementos genticos mviles incluyen los transposones, que se desplazan dentro de una misma clula (y sus descendientes), y todos aquellos virus cuyos genomas pueden integrarse en los genomas de sus clulas husped. Existen tres clases de transposones de DNA, retrotransposones retrovirales y retrotransposones no retrovirales. Excepto los de la tercera clase, todos los transposones tienen parientes muy cercanos entre los virus. A pesar de que los virus y los elementos transponibles pueden considerarse como parsitos, muchos de los nuevos ordenamientos de las secuencias del DNA que producen sus procesos de recombinacin especfica de lugar han generado una variabilidad gentica crucial para la evolucin de las clulas y los organismos.>> . .

Introduccin
Todas las clulas experimentan un ciclo de divisin durante su vida. Algunas clulas se estn dividiendo continuamente (e.g. las clulas madre), otras se dividen un nmero especfico de veces hasta que ocurre su muerte (apoptosis), y todava otras se dividen unas pocas veces antes de entrar en un estado de diferenciacin terminal o un estado de inactividad. La mayora de las clulas del cuerpo caen en

esta ltima categora. Durante el proceso de la divisin celular todo dentro de la clula se debe duplicar para asegurar la supervivencia de las dos clulas hijas resultantes. De particular importancia para la supervivencia celular es la duplicacin exacta, eficiente y rpida del genoma celular. Este proceso se denomina replicacin del ADN.

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Genomas Eucariticos
El tamao de los genomas eucariticos es sumamente grande comparado con el de los procariotas. Esto es en parte debido a la complejidad de los organismos eucariticos comparados con los procariotas. Sin embargo, el tamao de un genoma eucaritico particular no se correlaciona directamente a la complejidad de los organismos. ste es el resultado de la presencia de una gran cantidad de ADN no codificado. Las funciones de estas secuencias de cidos nucleicos no codificadas no se comprenden completamente. Algunas secuencias estn implicadas en el control de la expresin del gen mientras que otras pueden simplemente estar presentes en el genoma para actuar como un buffer evolucionario capaz de soportar la mutacin del nucleotido sin la interrupcin de la integridad del organismo. Una clase abundante de ADN es denominado ADN repetitivo. Hay 2 diferentes subclases de ADN repetitivo, los altamente repetitivos y los

moderadamente repetitivos. El ADN altamente repetitivo consiste en secuencias cortas de 6-10 bp de largo reiterado desde 100.000 1.000.000 veces. El ADN del genoma que consiste en los genes (secuencias de codificacin) se identifica como ADN no repetitivo, puesto que la mayora de los genes ocurren una vez en un organismo de genoma aploide. Sin embargo, se debe precisar que varios genes existen como grupos secuenciales de mltiples copias del mismo gen que van desde 50 a 10.000 copias tal como es el caso de los genes de rRNA y los genes de histona. Otra caracterstica que distingue los genes eucariticos de los procariticos es la presencia de intrones. Los intrones son tramos de secuencias de acidos nuclecos que separan los exones de codificacin de un gen. La existencia de intrones en los procariotas es extremadamente rara. Esencialmente todos los genes humanos contienen intrones. Una excepcin notable son los genes de histona los cuales no tienen intrones. En muchos genes la presencia de intrones separa los exones en las regiones de codificacin exhibiendo distintos dominios funcionales. Regreso al inicio

Estructura de la Cromatina
La cromatina es un trmino que designa la estructura en la cual el ADN existe dentro de las clulas. La estructura de la cromatina es determinada y estabilizada con la interaccin del ADN con las protenas ligadoras del ADN. Hay 2 clases de protenas ligadoras del ADN. Las histonas son la principal clase de protenas ligadoras involucradas en mantener la estructura compacta de la cromatina. Hay 5 diferentes protenas de histona identificadas como H1, H2A, H2B, H3 y H4. La otra clase de protenas ligadoras del ADN es un diverso grupo de protenas llamadas simplemente, protenas no histonas. Esta clase de protenas incluyen los distintos factores de transcripcin, polimerasas, receptores hormonales y otras enzimas nucleares. En cualquier clula dada hay ms de 1000 diferentes tipos de protenas no histonas unidas al ADN. La unin del ADN por las histonas genera una estructura llamada nucleosoma. La parte central del nucleosoma contiene una estructura

octamera de la protena que consiste en 2 subunidades cada una de H2A, H2B, H3 y H4. La histona H1 ocupa el ADN internucleosomal y es identificado como la histona ligadora. La parte central del nucleosoma contiene aproximadamente 150 bp de ADN. El enlace de ADN entre cada nucleosoma puede variar de 20 a ms de 200 bp. Estas estructuras de la parte central nucleosomal aparecen como "bolas en una cadena" si el ADN fuera extendido en una estructura lineal.

Representacin de diagrama de un nucleosome

Los propios nucleosome ncleos en una bobina solenoide de forma que a su vez a ms bobinas compacta el ADN. Estas bobinas final son ms compactada en la caracterstica cromatina visto en un metafase Cariotipador propagacin. La protena ADN-estructura de la cromatina est estabilizado por apego a un no-protenas histonas andamio llamado matriz nuclear.

Jerarqua de estructura de la cromatina

En una consideracin amplia de la estructura de la cromatina hay dos formas: heterocromatina y euchromatin que originalmente fueron designados sobre la base de citolgico observaciones de la forma oscura las dos regiones fueron teidos. Heterocromatina es ms densamente euchromatin y que se encuentra a menudo cerca de los centrmeros de los cromosomas. Heterocromatina es en general transcriptionally silencio. Euchromatin por otra parte, es poco ms embalados y es que activa la transcripcin de genes que se encuentran a estar tomando lugar. Existen dos mecanismos primarios que operan en una forma dinmica para modificar la cromatina. Estos mecanismos de metilacin de citidina residuos en el ADN que se encuentran en la dinucletido, CG(la mayora de las veces escrito como un dinucletido CpG) y la histona modificacin. Citidina metilacin de los residuos como un despus de la modificacin de la replicacin del ADN es que se mencionan a continuacin y se examinarn aqu. La hora de determinar que los residuos C en el ADN son objetivos de metilacin se descubri que ms de un 90% de metil-C se encuentra en el dinucletido, CpG. Esto no quiere decir que todos los CpG dinucleotides contener una metilado C de residuos. Al examinar la estructura de los genes eucariotas y la identificacin de las regiones del CpG dinucleotides es el caso de que el promotor de las regiones contienen genes 10-20 como muchas veces CpGs en comparacin con el resto del genoma. En un sentido general lo que se conoce acerca de metilacin del ADN y la transcripcin es la condicin de que cuando

regiones de un gen que puede ser metilado son, el gen se asocia transcriptionally en silencio y, cuando la regin es bajo-metilado el gen es transcriptionally activa o se puede activar. Al someterse a la diferenciacin de las clulas se ha observado que los genes que se activan transcriptionally exposicin una reduccin en la metilacin estado en relacin con el nivel previo a la activacin y en virtud de que esta metilacin-sigue siendo incluso despus de la transcripcin cesa. La metilacin del ADN es la catalizada por las diferentes ADN methyltransferases (abreviado Dnmt). La funcin crtica de la metilacin del ADN en controlar el desarrollo destinos se demostr en ratones ya sea por inactivar Dnmt3a o Dnmt3b. Prdida de genes, ya sea causado la muerte poco despus del nacimiento. Cuando las clulas dividen el ADN contiene un captulo de los padres del ADN y un captulo de el recin replicado el ADN (la hija del captulo). Si contiene el ADN metilado cytidines CPG dinucleotides en el captulo hija debe someterse a la metilacin en para mantener el patrn de los padres de la metilacin. Este "mantenimiento" metilacin es la catalizada por Dnmt1 y, por lo tanto, esta enzima se llama el methylase mantenimiento. La correlacin entre la metilacin del ADN y la estructura de la cromatina en lo que se refiere a la actividad transcripcional se demuestra por la observacin de que hay varias protenas que se unen a metilado CpGs pero no a unmethylated CpGs. Uno tales protenas se MeCP2 (metacrilato de protena de unin CP 2). Cuando se une a MeCP2 metilado CpG dinucleotides la toma de ADN en la cromatina una estructura cerrada y conduce a la represin transcripcional. La capacidad de MeCP2 de obligar a metilado CpGs a su vez es controlada por su estado de fosforilacin. Cuando se MeCP2 fosforilados que se une con menos afinidad al ADN y adquiere una mayor apertura cromatina estado. La importancia de MeCP2 la cromatina en la regulacin de la estructura y por consiguiente, la transcripcin se demuestra por el hecho de que las deficiencias en este protenas en el resultado sndrome de Rett. El sndrome de Rett es un desarrollo neurolgico trastorno que se produce casi exclusivamente en las mujeres se manifiesta como mental retraso, convulsiones, microcefalia, detenido el desarrollo, y la prdida de expresin. Protenas histonas estn sujetos a una serie de modificaciones y esas modificaciones se sabe que afectan a la estructura de la cromatina. Acetilacin de histonas es sabido que da lugar a una mayor apertura estructura de la cromatina y modificar estas histonas se encuentran en las regiones de la la cromatina que se transcriptionally

activa. Por el contrario, de underacetylation histonas se asocia con el cierre de la cromatina y la inactividad transcripcional. Un correlacin directa entre la acetilacin de histonas y la actividad transcripcional demostrada cuando se descubri que los complejos de protenas, anteriormente conocido por transcripcional ser activadores, se determin que la histona acetylase actividad. Y como era de esperar, represor transcripcional complejos eran contener la histona deacetilasa actividad. Vnculo entre la metilacin del ADN y silenciamiento transcripcional se ha demostrado que la observacin de que las protenas que se unen a metil CpG dinucleotides puede contratar a deacetylases histonas del ADN. Las protenas se sabe que interactan con acetilado histonas que juntos conducen a una ms estructura de la cromatina abierta. Protenas que se unen a acetilado lysines en histonas contienen un dominio llamado bromodomain. El bromodomain se compone de un conjunto de cuatro hlices -y es un dominio de protenas que participan en las interacciones protena-en una nmero de sistemas celulares, adems de la histona acetilado vinculante y estructura de la cromatina modificacin. Otra modificacin de las histonas sabe que afectan a la estructura es la cromatina metilacin. Sin embargo, con la metilacin de histonas no hay una correlacin directa entre la modificacin y un efecto especfico sobre la transcripcin. La metilacin de la histona H4 en R4 (arginina en la posicin 4) promueve un abierto la cromatina estructura y, por lo tanto, conduce a la activacin transcripcional. Metilacin de histona H3 en K4 y K79 (lysines 4 y 79) se ha demostrado que actuar al igual que histona H4 R4 metilacin. Sin embargo, la metilacin de las histonas H3 en K9 y K27 es que estn asociados con genes inactivos transcriptionally. La metilacin de histonas proporciona un sitio para la unin de otras protenas que a su vez conduce a alteracin de la estructura de la cromatina a un estado ms compactada. Protenas que se unen metilado a histonas contienen un dominio llamado chromodomain. El chromodomain consta de un tramo conservado de 40-50 aminocidos y se encuentra en muchos protenas implicadas en la remodelacin de la cromatina complejos. Adems, chromodomain las protenas se encuentran en el RNA-transcripcional inducidos por silenciar (RITS) complejo implica que los pequeos ARN de interferencia (siRNA) y microRNA (miRNA)-medicamentosos downregulation de transcripcin. Para ms detalles sobre los pequeos no codificante y RNAs regulacin transcripcional ver el Control de la Expresin Gnica Pgina .

Protenas histonas tambin puede ser modificado por la adicin de pequeas protenas ubiquitina. Ubiquitination se encuentra slo en las histonas H2A y H2B y slo un pequeo porcentaje de las histonas H2A se encuentra ubiquitinated. Sin embargo, cuando ubiquitinated, H2A est relacionado con la represin de la transcripcin. El lugar exacto de efecto contrario se observa cuando la histona H2B es ubiquitinated, lo que lleva a una estimulacin de la actividad de genes. La razn por la que ubiquitinated histonas H2B es relacionados con la actividad transcripcional es que esta modificacin promueve la metilacin de las histonas H3 en K4 y K79, que, como indic anteriormente se asocia con estructura de la cromatina abierta. Fosforilacin de las histonas se produce principalmente en respuesta a las seales de fuera de tales como la estimulacin del factor de crecimiento o inductores de estrs, tales como golpes de calor. Fosforilados histonas estn localizados a los genes que se convierten en transcriptionally activa como consecuencia de estas seales fuera. La importancia de la histona fosforilacin en el control de la expresin gnica puede ser demostrado en pacientes Coffin-Lowry, sndrome de. Esta enfermedad se debe a defectos en la RSK2 gen que codifica la histona phosphorylating enzima. Atad-el sndrome de Lowry es una rara forma de X-mental ligado se caracteriza por retraso malformaciones esquelticas, retraso del crecimiento, la audicin dficit, los trastornos del movimiento paroxstico, y el deterioro cognitivo en las zonas afectadas los hombres. Regreso al inicio

Replicacin del ADN

La replicacin del ADN ocurre durante el normal ciclo de divisin celular. Debido a que el complemento gentico de las clulas hijas resultantes debe ser igual que el de la clula madre, la replicacin del ADN debe poseer un muy alto grado de fidelidad. El proceso entero de la replicacin del ADN es complejo e implica mltiples actividades enzimticas. Los mecanismos de la replicacin del ADN fueron originalmente caracterizados en la bacteria E. coli, la cul contiene 3 distintas enzimas capaces de catalizar la replicacin del ADN. stas han sido identificadas como ADN polimerasa (pol) I, II, y III. La pol I tiene la

actividad de replicacin ms abundante en E. coli pero tiene como su papel primario asegurar la fidelidad de la replicacin a travs de la reparacin del dao y la incompatibilidad del ADN. La replicacin del genoma de E. coli es el trabajo de la pol III. Esta enzima es mucho menos abundante que pol I, sin embargo, su actividad es cerca de 100 veces mayor que la de pol I. Hasta hace unos aos el uso de letras griegas para designar a los seis ADN polimerasas eucariticas conocidas era suficiente. Sin embargo, la evidencia reciente indica que varios miembros de la familia ms ADN polimerasa eucaritica son presentar y funcin en distintos tipos de replicacin del ADN. Estos ADN polimerasas se dividen en cuatro familias grandes designados A, B, X e Y. Adems, existe una actividad de transcriptasa inversa asociado con la telomerasa como discuten a continuacin. Los seis diferentes polimerasas de ADN eucariota se identifican como , , , , , y . La identidad de estas enzimas individuales se refiere a su localizacin subcelular, su actividad replicativa primaria y al orden en el que se describi por primera vez. El ADN eucaritico conocido polimerasas y descripciones de sus actividades se indican en la Tabla a continuacin. ADN Polimerasas Eucariotas Familia de Nomenclatura la Comn del Polimerasa
A (gamma)

Funcin de la Enzima, Comentarios

la replicacin del ADN mitocondrial; codificada por el gen POLG en 15q26.1 cromosoma Reparacin del ADN; codificada por el gen POLQ en cromosoma 3q13.33 iniciacin de la replicacin del ADN cromosmico, el cebado Okazaki fragmento, tambin involucrados en la doble cadena de reparacin de ruptura; codificada por el gen POLA en cromosoma Xp22.1 21.3 ADN cromosmico alargamiento de replicacin, reparacin por escisin de nucletidos, de doble filamento romper la reparacin, de reparacin de genes, se compone de un complejo multisubunit que incluye el complejo de la subunidad de la

(theta)

(alpha)

(delta)

polimerasa codificada por cuatro la POLD1, POLD2, POLD3, y POLD4 genes, as como la replicacin multisubunit protena del factor C (siglas en Ingls: RFC1) y antgeno de proliferacin celular (siglas en Ingls: PCNA) ADN cromosmico alargamiento de replicacin, reparacin por escisin de nucletidos, de doble filamento romper la reparacin, de reparacin de genes, se compone de un catalizador 261kDa subunidad codificada por el gen POLE en cromosoma 12q24.33 y un accesorio de 55kDa protena codificada por el gen POLE2, protenas adicionales en el complejo psilon incluir dos histona plegada en las protenas codificadas por los genes POLE3 y POLE4 bypass (translesion) la sntesis de ADN; codificada por el gen POLZ en cromosoma 6q21, tambin conocida como REV3, enzima responsable de prcticamente todos los daos en el ADN inducidos por mutagnesis as como la mayora de mutagnesis espontnea base reparacin por escisin, necesaria para la replicacin del ADN y el mantenimiento, recombinacin, y resistencia a los medicamentos; codificada por el gen POLB en cromosoma 8p11.21 base reparacin por escisin; codificada por el gen POLL en cromosoma 10q24.32 no unirse a fin homloga (siglas en Ingls: NHEJ); codificada por el gen POLL la cohesin de cromtidas hermanas, codificada por el gen POLS en cromosoma 5p15.31; tambin conocido como funcin de las protenas relacionadas con la topoisomerasa 4 (siglas en Ingls: TRF4) y poli (A) polimerasa asociada al dominio que contienen protenas 7 (siglas en Ingls: PAPD7) bypass (translesion) la sntesis de ADN; codificada por el gen POLH en cromosoma 6p21.1, necesaria

(epsilon)

(zeta)

(beta)

(lambda)

(mu)

(sigma)

(eta)

para la replicacin a travs de pirimidina ciclobutano inducida por UV dmeros (CPD), las mutaciones en consecuencia, en POLH Xeroderma pigmentosa variante (XP-V) bypass (translesion) la sntesis de ADN; codificada por el gen POLI en cromosoma 18q21.2; tambin conocido como RAD30B bypass (translesion) la sntesis de ADN; codificada por el gen POLK en cromosoma 5q13.3 pasar por alto (translesion) la sntesis de ADN, codificada por el REV1, que interacta con POLK y es esencial para la funcin POLK

(iota)

(kappa)

Rev1L

La capacidad de las ADN polimerasas para replicar el ADN requiere de un nmero de protenas accesorias adicionales. La combinacin de las polimerasas con varios de los accesorios de las protenas produce una actividad identificada como holoenzima ADN polimerasa. Estas protenas accesorias incluyen (no ordenado con respecto a importancia): 1. Primasa 2. Protenas accesorias de procesamiento 3. Protenas ligadas de un solo filamento 4. Helicasa 5. ADN ligasa 6. Topoisomerasas 7. Uracil-ADN N- glicosilasa El proceso de replicacin del ADN comienza en los sitios especficos en los cromosomas denominados orgenes de la replicacin, requiere de un iniciador (primer) que tiene un 3'-OH libre, y procede especficamente en la direccin 5'>3' en ambos filamentos del ADN concurrentemente y resulta en el copiado del patrn de filamentos de una manera semiconservativa. La naturaleza semiconservativa de la replicacin del ADN significa que los nuevos filamentos hijos sintetizados, siguen siendo asociados con sus respectivos filamentos patrones.

El gran tamao de los cromosomas eucariticos y los lmites de la incorporacin del nucleotido durante la sntesis del ADN, hacen necesario de que existan mltiples orgenes de replicacin para completar la replicacin en un perodo de tiempo razonable. La naturaleza exacta de los orgenes de la replicacin en organismos eucariticos mayores no es clara. Sin embargo, est claro que un origen de replicacin de los filamentos del ADN deben disociarse y desenrollarse para permitir el acceso a la polimerasa del ADN. El desenrollamiento de las dos cadenas del ADN en el origen as como tambin en los filamentos mientras el proceso de replicacin procede se lleva a cabo por la accin de las helicasas. Las regiones resultantes de filamentos simples del ADN son estabilizadas por la unin de las protenas ligadoras de un solo filamento. Las regiones estabilizadas de un solo filamento son entonces accesibles a las actividades enzimticas requeridas para proceder a la replicacin. El sitio de los filamentos patrn desenrollados se denomina bifurcacin de la replicacin. Para que las polimerasas del ADN sinteticen ADN deben encontrar un 3'-OH libre que es el substrato para la anexin de los 5'-fosfato del nucletido entrante. Durante la reparacin del ADN daado el 3'-OH puede presentarse de la hidrlisis del esqueleto de uno de los dos filamentos. Durante la replicacin el 3'-OH es abastecido con el uso de un primer de RNA, sintetizado por la actividad de la primasa. La primasa utiliza los filamentos del ADN como patrones y sintetiza un corto trecho de RNA que genera un primer para la polimerasa del ADN. La sntesis del ADN procede en la direccin 5'>3' a travs de la unin del 5'-fosfato de un dNTP entrante a los 3'-OH existentes en los filamentos del ADN que se esta elongando con la liberacin concomitante de pirofosfato. La iniciacin de la sntesis, en los orgenes de la replicacin, ocurre simultneamente en ambos filamentos del ADN. La sntesis entonces procede bidireccionalmente, con un filamento en cada direccin siendo copiado continuamente y un filamento en cada direccin siendo copiado discontinuamente. Durante el proceso las ADN polimerasas que estn incorporando dNTPs al ADN en la direccin 5'>3' estas se mueven en la direccin 3'>5' en relacin al filamento original. Para que la sntesis del ADN ocurra simultneamente en ambos filamentos originales as como tambin en forma bidireccional, un filamento parece que esta siendo sintetizado en la direccin 3'>5'. En realidad un filamento de ADN sintetizado de nuevo es producido discontinuamente.

El filamento de ADN sintetizado continuamente se denomina filamento principal y el filamento discontinuo se denomina filamento rezagado. El filamento rezagado del ADN se compone de tramos cortos del primer de RNA ms ADN sintetizado de nuevo de aproximadamente 100-200 bases de largo (la distancia aproximada entre los nucleosomas adyacentes). Los filamentos rezagados del ADN tambin se llaman fragmentos Okazaki. El concepto de la sntesis continua del filamento es algo as como un nombre inapropiado puesto que las polimerasas del ADN no se mantieneb asociadas con un filamento patrn indefinidamente. La capacidad de una polimerasa particular para permanencer asociada con el filamento patrn se denomina procesividad. Mientras ms tiempo est asociada ms larga en la procesividad de la enzima. La procesividad de la polimerasa del ADN es realzada por las actividades proteicas adicionales del replisoma identificado como protenas accesorias de procesividad.

Representacin esquemtica de un lado de un tenedor de replicacin del ADN. Gran flecha representa la direccin general de replicacin con la principal lnea y lneas de retardo de la replicacin muestran separados el uno del otro. en la actualidad el proceso consiste en un bucle de una de las dos lneas parentales con el fin de permitir la reproduccin simultnea de ambos hebras de lo que parece ser la misma direccin. Este detalle se ilustra en la siguiente Figura. Cmo es que la polimerasa del ADN puede copiar ambos filamentos del ADN en la direccin 5'>3' simultneamente? Un

modelo ha sido propuesto donde las polimerasas del ADN existen como dimeros asociados con las otras protenas necesarias en la replicacin bifurcada e identificados como replisoma. El patrn para el filamento rezagado es colocado temporalmente a travs del replisoma de tal manera que las polimerasas del ADN estn moviendose a lo largo de ambos filamentos en la direccin 3'>5' simultneamente por distancias cortas, la distancia de un fragmento Okazaki. Mientras que las replicaciones bifurcadas progresan a lo largo del patrn de los filamentos los filamentos hijos recientemente sintetizados y los filamentos parentales del patrn reforman una doble hlice del ADN. Esto significa que solamente una pequea porcin del duplex de ADN tiene una sola hebra en un momento determinado.

Details of the mechanism by which both strands of DNA are replicated simultaneously in the same direction. A portion of the lagging strand is looped around through the DNA polymerase holoenzyme complex such that short stretches of 5001000 can be continuously replicated in the same direction as the leading strand. Eventually torsional stress will result in disassociation of the enzyme complex and the looping process will need to begin again. This is what results in the

average length of the Okasaki fragments generated from the lagging strand. Only DNA helicase, single-strand binding proteins (SSBPs), and the DNA polymerase complex are shown. La progresin de la bifurcacin de replicacin requiere que el ADN por delante de la bifurcacin sea continuamente desenrollado. Debido al hecho que el ADN cromosmico eucaritico est unido a una estructura proteca, el movimiento progresivo de la bifurcacin de replicacin introduce un estrs de torsin severo en el duplex que esta delante de la bifurcacin. Este estrs de torsin es disminuido por las topoisomerasas de ADN. Las topoisomerasas alivian el estrs de torsin en los duplex de ADN al introducir rupturas dobles (topoisomerasea II) o de un filamento (topoisomerasas I) en el esqueleto del ADN. Estas rupturas permiten el desenrollamiento del duplex y la remocin del estrs de torcin inducido por la replicacin. Las rupturas son entonces reparadas por las topoisomerasas. Los primers de RNA de los filamentos principales y de los fragmentos Okazaki son removidos por las ADN polimerasas de reparacin y simultneamente reemplazan los ribonucletidos con los desoxiribonucletidos. Los vacios existentes entre el 3'-OH de un filamento principal y el 5'-fosfato de otro as, como entre un fragmento Okazaki y otro son reparados por las ligasas de ADN, completando as el proceso de la replicacin. Regreso al inicio

Actividades Adicionales de la ADN Polimerasa

La actividad enzimtica principal de las ADN polimerasas es la actividad sinttica 5'>3'. Sin embargo, las ADN polimerasas poseen dos actividades adicionales de importancia tanto para replicacin y reparacin. Estas actividades adicionales incluyen una funcin de exonucleasa 5'>3' y una funcin de exonucleasa 3'>5'. La actividad de exonucleasa 5'>3' permite la remocin de los ribonucleotidos del primer de RNA, utilizados para iniciar la sntesis del ADN, junto con su reemplazo simultneo con los desoxiribonucleotidos mediante la actividad de la polimerasa 5'>3'. La actividad de la exonuleasa 5' >3' tambin es utilizada durante la reparacin del ADN daado. La funcin de la exonucleasa 3'>5' es utilizada durante la replicacin para permitir que la ADN polimerasa remueva las bases mal unidas. Es

posible (pero raro) que las ADN polimerasas incorporen una base incorrecta durante la replicacin. Estas bases mal unidas son reconocidas por la polimerasa inmediatamente debido a la carencia de la base de pareamiento de Watson-Crick. La base mal unida es entonces removida por la actividad de la exonucleasa 3'>5' y la base correcta es insertada antes de la progresin de la replicacin. Regreso al inicio

Replicacin de los Telmeros: Implicaciones para el Envejecimiento y la Enfermedad

Los telmeros son estructuras de ADN especializados en los extremos de los cromosomas que consisten en secuencias repetitivas de ADN y nucleoprotenas, la estructura general de que se conoce como una gorra de la nucleoprotena. La secuencia de los telmeros en el captulo menos est compuesto por la repeticin de 5'TTAGGG3'. La secuencia de repeticin telomrica se extiende hasta varias kilobases y est involucrado en la proteccin de la extremos de los cromosomas de la actividad exonucleolytic. Los extremos de los telmeros de la hebra retardada de cada cromosoma requiere un mtodo nico de replicacin que implica la actividad de la enzima telomerasa complejo llamado. Esto se debe al hecho de que incluso si la actividad primasa incorporado un primer secuencia de ADN polimerasa en la extremo extremo 3' de la hebra retardada, al final de ese captulo no sera del todo replicarse y por lo tanto, sera susceptible a la degradacin. La telomerasa es complejo formado por varias protenas, ARN con una secuencia de cortesa a las repeticiones telomricas, y una transcriptasa inversa actividad que se extiende al extremo 3' de las hebras de retraso con el ARN telomerasa como la plantilla. La actividad de la transcriptasa inversa de la telomerasa es codificada por el gen TERT (en Ingls: telomerase reverse t ranscriptase) y el componente ARN es codificada por el gen TERC (en Ingls:telomerase RNA component). El ARN TERC contiene una secuencia hexanucleotide repetir, 3' AAUCCC5', que se extiende entre 3 y 20 kilobases. Esta secuencia en el ARN TERC forma un dplex con la cadena de ADN retraso en la extremos de los cromosomas. El extremo 3' de la hebra retardada se sirve de la manual para la actividad de la transcriptasa inversa (TERT),

que se extiende el extremo 3' de el cromosoma con el ARN TERC como plantilla. Para una imagen de gran tamao: Haga clic aqu.

Pasos en la funcin de la elongacin de los telmeros por la telomerasa

El proceso de la telomerasa se extiende al final de la cadena retrasada que puede ser replicada por la ADN polimerasa normal, por lo tanto, la preservacin de la longitud de la cromosoma. Numerosas lneas de evidencia implican fuertemente acortamiento de los telmeros con la activacin de la muerte celular programada (apoptosis), la prdida de las clulas madre de tejido, progresin de la enfermedad, y los procesos generales del envejecimiento. La importancia de la longitud de los telmeros y la actividad de la telomerasa funcional se defini inicialmente en cultivos de fibroblastos humanos ya en la dcada de 1960. Hayflick y compaeros de trabajo demostraron que los fibroblastos fue a travs de ciclos celulares progresiva en la cultura de sus telmeros se acorta progresivamente y inducido un estado de arresto proliferativa. Los fibroblastos mostraron un nmero finito de divisiones celulares que condujeron a la detencin y la barrera a la proliferacin de este se llama el lmite de Hayflick. Divisin forzada de clulas ms all del lmite dado lugar a ms prdida de los telmeros que culmin en la inestabilidad cromosmica sin control y activacin de la de la apoptosis. En el extremo opuesto del espectro, oblig a la expresin de la telomerasa, especficamente el gen TERT, en los resultados de los cultivos de fibroblastos en la preservacin de longitud de los telmeros y las clulas adquieren la capacidad de dividirse indefinidamente sin cualquiera de las propiedades malignas. Numerosos estudios han demostrado una correlacin entre el acortamiento de los telmeros y el envejecimiento y las enfermedades humanas. Disminucin del tiempo los telmeros en leucocitos de

sangre perifrica se ha demostrado que se correlaciona con las tasas de mortalidad ms alta en mayores (ms de 60 aos de edad) los individuos. Esto contrasta con los estudios en centenarios y sus descendientes que han mostrado una relacin positiva entre los telmeros la longitud y la longevidad. Estos ltimos estudios tambin demostraron que las personas con telmeros ms largos tenan un perfil ms saludable en relacin con las personas de edad similar con los telmeros de menor longitud. Tambin hay una correlacin interesante entre la longitud del telmero y el estrs psicolgico y el riesgo para el desarrollo de la enfermedad psiquitrica. Los estudios realizados en mujeres de 2050 aos han demostrado que aquellos individuos con los niveles ms altos de violencia psicolgica la tensin haba el menor telmeros. Adems, el nivel de actividad de la telomerasa en leucocitos de sangre perifrica fue menor en aquellos individuos con mayor los niveles de estrs que tambin coincidi con los niveles ms altos de oxidacin el estrs. Esta correlacin entre el estrs y la actividad de la telomerasa y los telmeros longitud es bastante intrigante, ya que se sabe que los individuos sujetos a estrs psicolgico crnico muestran una menor esperanza de vida y la aparicin ms rpida de las enfermedades que son ms tpicas de una poblacin envejecida como las enfermedades cardiovasculares. Mantenimiento de los telmeros relacionada a una vida saludable se infiere tambin de Los estudios de varios trastornos hereditarios degenerativos. A modo de ejemplo, los individuos portadores de una mutacin en el TERT o Genes TERC desarrollar disqueratosis congnita autosmica dominante, DKS (caracterizada por una trada de uas anormales, pigmentacin de la piel reticular, y la leucoplasia oral, tambin llamado Zinsser-Cole-Engman sndrome de Down). DKS pacientes se han acortado los telmeros, una reduccin de esperanza de vida, y muestran signos de envejecimiento acelerado. No hay otra forma de DKS que se hereda como una enfermedad ligada al cromosoma X como resultado de defectos en el gen DKC1 que codifica una protena llamada disquerina. Disquerina forma un complejo con otras protenas generar el complejo de la telomerasa, as como otro complejo que es un pseudouridina sintetasa que modifica rARN. Otros trastornos que se manifiestan con signos de envejecimiento prematuro, como el sndrome de Werner y ataxia telangiectasia tambin se correlacionan con los telmeros acortados. El sndrome de Werner es una rara enfermedad autosmica recesiva resultado de una deficiencia de la WRN protena, que es una helicasa ADN implicadas en la reparacin del ADN, el ADN recombinacin y mantenimiento de los

telmeros. Estos pacientes desarrollan con normalidad hasta que la pubertad. En este momento comienzan a manifestar signos de mltiple progresiva prematuro patologas del envejecimiento, incluyendo las cataratas seniles, la osteoporosis, la piel atrofia, infarto de miocardio y el cncer. El sndrome de Werner fibroblastos muestran una prdida acelerada de los telmeros y se someten a la eyaculacin senescencia que puede ser revertido por la expresin de TERT cumplir. Adems de los trastornos hereditarios, acortamiento de los telmeros tambin se correlaciona que han heredado enfermedades degenerativas asociadas a la elevacin crnica de tejido volumen de negocio. Por ejemplo, la cirrosis heptica se asocia con una deterioro progresivo de la longitud de los telmeros. Regreso al inicio

Modificaciones de Postreplicacin del ADN, Metilacin

Una de las principales reacciones de postreplicacin que modifican el ADN es la mutilacin. Los sitios de metilacin natural (es decir, no inducida qumicamente) del ADN eucaritico siempre estn en los residuos de citosina que estn presentes en los dinucleotidos CpG. Sin embargo, debe observarse que no todos los dinucleotidos CpG estn metilados en el residuo C. La citidina es metilada en la posicin 5 del anillo de pirimidina generando 5-metilcitidina. Tambin ocurre metilacin del ADN en clulas procariticas. La funcin de esta metilacin es prevenir la degradacin del ADN del husped en presencia de las actividades enzimticas sintetizadas por las bacterias llamadas endonucleasas de restriccin. Estas enzimas reconocen secuencias especficas de nucletidos del ADN. El papel de este sistema en las clulas procariticas (llamadas sistema de restriccin de modificacin) es degradar ADNs viral extrao. Puesto que los ADNs virales no estn modificados por la metilacin son degradados por las enzimas de restriccin del husped. El genoma del husped metilado es resistente a la accin de estas enzimas. El papel de la metilacin del ADN en eucariotas tiene dos claramente definidos y la superposicin de funciones. La metilacin del CPG dinucleotides afecta a la estructura general de cromatina, que a

su vez altera la amplia disponibilidad de la cromatina a la maquinaria transcripcional. Este efecto de la metilacin es un mecanismo de epignesis. La epigentica como medio de control de genes se discute en el Control de los Genes Expresin pgina. Los efectos de la metilacin en la transcripcin de determinados genes fue elegantemente demostrado en experiemnts que llevaron a los menores de metilacin de la MyoD gen (un gen maestro de control que regulan la diferenciacin de las clulas musculares a travs del control de la expresin de los msculos especficos de genes). -En virtud de la metilacin de MyoD en fibroblastos en sus resultados de la conversin a Mioblastos. Los experimentos se llevaron a cabo, permitiendo la reproduccin de los fibroblastos de incorporar 5-azacytidine en su nueva sntesis de ADN. Esta analgico de citidina impide la metilacin. El resultado neto es que el patrn de la maternidad de la metilacin se pierde y numerosos genes en virtud de ser metilado. El patrn de metilacin es copiado postreplicacin por el sistema de metilasa de mantenimiento. Esta actividad reconoce el patrn de los residuos C metilados en el filamento materno del ADN luego de la replicacin y metila el residuo C presente en el dinucleotido CpG correspondiente del filamento hijo.

Proceso de replicacin despus de la metilacin del ADN

El fenmeno de impresin genmica se refiere al hecho que la expresin de algunos genes depende de si son o no heredados de la madre o del padre. El factor de creciimiento 2 (IGF2) similar a la insulina es un gen cuya expresin es requerida para el normal desarrollo y crecimiento fetal. La expresin de IGF2 ocurre

exclusivamente de la copia paterna del gen. Los genes impresos son "marcados" por su estado de metilacin. En el caso de IGF2 un elemento en el locus paterno, llamado elemento aislante, es metilado bloqueando su funcin. La funcin del aislante no metilado es ligar una protena que cuando esta unida bloquea la activacin de la expresin IGF2. Cuando esta metilada la protena no puede unirse al aislante permitiendo as que un elemento reforzador distante conduzca la expresin del gen IGF2. En el genoma materno, el aislante no esta metilado, as la protena se une al gen bloqueando la accin de un elemento reforzador distante. Regreso al inicio

Recombinacin del ADN

La recombinacin del ADN se refiere al fenmeno por el cual dos filamentos parentales de ADN se juntan dando como resultado un intercambio de las porciones de sus respectivos filamentos. Este proceso conduce a nuevas molculas de ADN que contienen una mezcla de la informacin gentica de cada filamento parental. Hay 3 formas principales de recombinacin gentica. Estas son: recombinacin homloga, recombinacin especfica de sitio y transposicin. La recombinacin homloga es el proceso de intercambio gentico que ocurre entre dos molculas de ADN que comparten una regin (o regiones) de las secuencias homlogas de ADN. Esta forma de recombinacin ocurre frecuentemente mientras que las cromatides hermanas se aparean durante la meiosis. De hecho, es el proceso de recombinacin homloga entre los cromosomas maternos y paternos que imparte diversidad gentica a un organismo. La recombinacin homloga generalmente implica el intercambio de regiones grandes de los cromosomas. La recombinacin especfica de sitio implica intercambio entre regiones mucho ms pequeas de la secuencia del ADN (aproximadamente 20-200 pares de base) y requiere el reconocimiento de las secuencias especficas por las protenas implicadas en el proceso de recombinacin. Los eventos de recombinacin especfica de sitio ocurren primariamente como un mecanismo para alterar el programa de expresin de los genes en las etapas especficas del

desarrollo. Los acontecimientos de recombinacin especfica de sitio ms significativos en los seres humanos son los cambios genticos de la clula somtica que ocurren en los genes de la inmunoglobulina durante la diferenciacin de la clula-B en respuesta a la presentacin del antgeno. Estos rearreglos del gen en los genes de la inmunoglobulina resultan en un potencial extremadamente diverso para la produccin de anticuerpos. Una molcula de anticuerpo tpica est compuesta de cadenas pesadas y livianas. Los genes para ambas cadenas de pptidos experimentan el cambio de la clula somtica produciendo el potencial para aproximadamente 3000 diferentes combinaciones de cadena liviana y aproximadamente 5000 combinaciones de cadenas pesadas. Entonces debido a que cualquier cadena pesada dada puede combinarse con cualquier cadena liviana dada la diversidad potencial excede a 10.000.000 de posibles molculas diferentes de anticuerpos. Regreso al inicio

Transposicin del ADN

La transposicin es una forma nica de recombinacin donde los elementos genticos mviles pueden moverse virtualmente de una regin a otra dentro de un cromosoma o a otro cromosoma. No hay requisito para la secuencia homologa para que un acontecimiento transposicional ocurra. Debido a que el potencial existe para la interrupcin de un gen de vital importancia mediante un evento de transposicin este proceso debe ser regulado firmemente. La naturaleza exacta de cmo los eventos transposicionales son controlados es confusa. La transposicin ocurre con mayor frecuencia en bacterias y levaduras que en seres humanos. La identificacin de la ocurrencia de la transposicin en el genoma humano result cuando se encontr que ciertos genes procesados estaban presentes en el genoma. Estos genes procesados son casi idnticos al mRNA codificado por el gen normal. Los genes procesados contienen la cola poly (A) que habra estado presente en el RNA y carecen de los intrones del gen normal. Estas formas particulares de los genes pueden haber aparecido por un evento de transcripcin reverso, similar al ciclo vital de los genomas retrovirales, y despus haber sido incorporados dentro del genoma por

un evento transposicional. Puesto que la mayor parte de los genes procesados que han sido identificados como no funcionales han sido denominados pseudogenes. Regreso al inicio

Reparacin del ADN Daado

El cncer, en la mayora de los casos que no son provocados por virus, es la consecuencia mdica ms severa de relevancia debido a la inhabilidad de reparar el ADN daado. Est claro que las mltiples mutaciones somticas de la clula en el ADN pueden conducir a la gnesis de un fenotipo transformado. Por lo tanto, debe ser obvio que la comprensin completa de los mecanismos de reparacin del ADN sera invaluable en el diseo de agentes teraputicos potenciales para el tratamiento de cncer. El dao del ADN puede ocurrir como resultado de la exposicin a los estmulos ambientales tales como productos qumicos de alquilacin o irradiacin ultravioleta o radioctiva y radicales libres generados espontneamente en el ambiente de oxidacin de la clula. Estos fenmenos pueden, y lo hacen, conducir a la introduccin de mutaciones en la capacidad de codificacin del ADN. Las mutaciones en el ADN tambin, pero raramente, se presentan de la tautomerizacin espontnea de las bases. Las modificacin de las bases del ADN por alquilacin (predominatemente la incorporacin de grupos -CH3) predominatemente ocurren en los residuos de purina. La metilacin de los residuos G permite que estos se unan con T en lugar de C. Una nica actividad llamada O6-alquilguanina transferasa remueve el grupo alquil de los residuos G. Esta enzima en s misma se alquila y ya no es activa, as, una nica molcula de protena puede remover solamente un grupo alquil. Las mutaciones en el ADN son de dos tipos. Las mutaciones de transicin que resultan del intercambio de una purina, o pirimidina, por otra purina, o pirimidina. Las mutaciones de transversin resultan del intercambio de una purina por una pirimidina o viceversa. El prominente subproducto de la irradiacin uv del ADN es la formacin de los dimeros de timina. stos se forman a partir de dos

residuos T adyacentes en el ADN. La reparacin de los dimeros de timina es ms entendido cuando se consideran los mecanismos utilizados en E. coli. Sin embargo, varios mecanismos son comunes a procariotas y eucariotas. Los dimeros de timina son removidos por varios mecanismos. Las glicohidrolasas especficas reconocen el dimero como anormal y rompen la unin N-glicosdica de las bases en el dimero. Esto resulta en la salida de una base y genera un sitio apirimidinico en el ADN. Esto es reparado por la polimerasa y ligasa del ADN. Las glicohidrolasas son tambin responsables de la remocin de otras bases anormales, no solo dimeros de timina. Otra, actividad proteca extensamente distribuida, es la ADN fotoliasa o enzima fotoreactivante. Esta protena liga los dimeros de timina en la obscuridad. En respuesta a la estimulacin de la luz visible la enzima rompe los anillos de pirimidina. El cromforo asociado con esta enzima que permite la activacin de la luz visible es FADH2. Los seres humanos defectuosos en la reparacin del ADN, (en particular la reparacin de UV inducida por dmeros de timina), debido a la forma autosmica recesiva sufren defectos genticos de la enfermedad Xeroderma pigmentosa (XP ). Hay por lo menos ocho distintos defectos genticos asociados con esta enfermedad identificada como XPA, XPB, XPC, XPD, XPE, XPF, XPG, y XPV. Las variantes a travs de XPA XPG son todos que participan en reparacin por escisin de nucletidos (NER), mientras que el locus XPV est implicado en replicacin de ADN daado en la primera lnea. NER implica la supresin de un amplia gama de estructuralmente no relacionadas entre ellos las lesiones del ADN cyclobutane dmeros de timina, otros dmeros de pirimidina, pirimidina-produjo pyrimidone photoproducts en la piel humana o por los rayos UV de onda corta, y espiral de distorsin inducida por productos qumicos aductos por agentes carcingenos. Muchas de las protenas de los productos estos genes se encuentran en heterodimeric complejos con otras protenas implicadas en la reparacin de ADN. Hay dos formas clnicas principales de XP, una que conduce a la progresiva cambios degenerativos en los ojos y la piel y la otra que tambin incluye a la degeneracin neurolgica progresiva. Otro desorden heredado que afecta la reparacin del ADN en el cual los pacientes sufren de sensibilidad al sol, corta estatura y degeneracin neurolgica progresiva sin una incidencia creciente de cncer de piel es el Sndrome de Cockayne.

Ataxia Telangiectasia (AT) es un trastorno autosmico recesivo como resultado de la discapacidad neurolgica y suprimido la funcin inmunolgica. Telangiectasias superficiales se dilatan los vasos sanguneos, como tambin en pacientes con la roscea o la esclerodermia. A los pacientes desarrollar una ataxia cerebelosa desactivar temprano en la vida y tienen infecciones recurrentes. Los pacientes que sufren de AT tienen una mayor sensibilidad a la radiacin-x resultantes de defectos en el gen ATM (Ataxia Telangiectasia mutado), que codifica una kinasa que es inducida en respuesta a la doble vertiente pausas en el ADN. Uno importante sustrato de la quinasa ATM es la tumor supresor de la protena, p53. Hay cuatro distintos grupos de complementacin resultante en AT identificado como ATA, ATC, ATD, y ATE. Los cuatro son el resultado de mutaciones en el gen ATM. Varias enfermedades asociadas con la reparacin defectuosa del ADN daado pueden ser encontradas en la pgina de Errores innatos. Regreso al inicio

Quimioterapias para la Replicacin del ADN

La clase de compuestos que han sido utilizados ms ampliamente como drogas anticncer son los agentes alquilantes. Los principales agentes alquilantes se derivan de las mostazas nitrogenadas que fueron originalmente desarrolladas para uso militar. Los agentes alquilantes comnmente usados incluyen ciclofosfamida (Cytoxan, Neosar), ifosfamida, decarbazina, clorambucil (Leukeran) y procarbazina (Matulane, Natulan). Los agentes alquilantes funcionan reaccionando con e interrumpiendo la estructura del ADN. Algunos agentes reaccionan con los grupos alquil en el ADN dando lugar a la fragmentacin del ADN como consecuencia de la accin de las enzimas de reparacin del ADN. Algunos agentes catalizan la unin cruzada de las bases en el ADN lo que previene la separacin de los dos filamentos durante la replicacin del ADN. Algunos agentes inducen a un mal apareamiento de nucleotidos dando como resultado mutaciones permanentes en el ADN. Los agentes alquilantes actan sobre el ADN en todas las etapas del ciclo celular, as son drogas anticncer potentes. Sin embargo,

debido a su potencia, el uso prolongado de agentes alquilantes puede conducir a cnceres secundarios, particularmente leucemias. Varias clases de drogas anticncer funcionan con interferencia con las acciones de las topoisomerasas. Dos de estas clases son antraciclinas y camptotecinas. Los antraciclinas fueron originalmente aisladas de los hongos, Streptomyces. La doxorubicina (Adriamycin, Doxil, Rubex) y la daunorubicina (Cerubidina, DaunoXome, Daunomicina, Rubidomicina) tienen modos similares de accin, aunque la doxorubicina es la ms potente de las dos y es utilizada en el tratamiento de cncer de mama, de linfomas y de sarcomas. Las antraciclinas inhiben las acciones de la topoisomerasa II cuya funcin es introducir las rupturas de doble filamento en el ADN durante el proceso de replicacin como un medio de disminuir el estrs de torsin. Las antraciclinas tambin funcionan induciendo la formacin de los radicales libres de oxgeno que causan rupturas de los filamentos del ADN dando como resultado la inhibicin de la replicacin. Otro compuesto anticncer derivado de las plantas que funciona a travs de la inhibicin de la topoisomerasa II es el etoposide (VP-16, Vepesid, Etofos, Eposin). El etoposide es aislado de la planta de mandrgora y esta en una clase de compuestos designados como epipodofilotoxinas. Las camptotecinas fueron encontradas originalmente en la corteza del rbol Camptotheca accuminata e incluye irinotecan (Campto, Camptosar) y topotecan (Hycamtin). La camptotecina inhibe la accin de la topoisomerasa I, una enzima que induce las rupturas de un solo filamento en el ADN durante la replicacin. Compuestos anticncer que son extrados de la planta bgaro, Vinca rosea, son llamados alcaloides vinca. Estos compuestos se unen a los monomeros de la tubulina conduciendo a la interrupcin de los microtubulos de las fibras mitticas del huso que son necesarias para la divisin celular durante mitosis. Hay cuatro alcaloides vinca importantes que se utilizan actualmente como quimioteraputicos, vincristina (Oncovin, Vincrex), vinblastina (Velbe, Velban, Velsar), vinorelbina (VIN, Navelbine), y vindesina (Eldisine). Los taxanes son otra clase de compuestos derivados de plantas que actan va interferencia con la funcin del microtbulo. Estos compuestos son aslados del rbol Tejo del Pcifico, Taxus rbevifolia e incluye el paclitaxel (Taxol) y el docetaxel (Taxotere). Los taxanes

funcionan por hiperestabilizacin de los microtbulos lo que previene la divisin celular (cytocinesis). Estos compuestos son usados para tratar una amplia gama de cnceres incluyendo cnceres de cabeza y cuello, pulmn, ovricos, mama, vejiga, y los cnceres de prstata. El Taxol ha probado alta efectividad en el tratamiento de ciertas formas de cncer de mama. Para que la replicacin del ADN proceda, las clulas proliferativas requieren un pool de nucletidos. La clase de drogas anticncer que ha sido desarrollada para interferir con aspectos del metabolismo del nucletido es conocida como antimetabolitos. Hay dos tipos importantes de antimetabolitos usados en el tratamiento de una amplia gama de cnceres: compuestos que inhiben la timidilato sintasa y compuestos que inhiben la dihidrofolato reductasa (DHFR). Ambas enzimas estn implicadas en la biosntesis del nucleotido de timidina (vase la figura abajo). Las drogas que inhiben la timidilato sintasa incluyen el 5-fluorouracilo (5-FU, Adrucil, Efudex) y 5fluorodeoxiuridina. Los que inhiben el DHFR son anlogos del cido flico e incluyen el metotrexato (Trexall, Rheumatrex) y el trimetoprim (Proloprim, Trimpex).

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Reparacin del ADN

Daos en el ADN, mostrados como roturas en los cromosomas.

La reparacin del ADN es un conjunto de procesos por los cuales una clula identifica y corrige daos hechos a las molculas de ADN que codifican elgenoma. En las clulas humanas, tanto las actividades metablicas como los factores ambientales, como los rayos UV o la radiactividad, pueden causar daos al ADN, provocando hasta un milln de lesiones moleculares por clula por da.1 Muchas de estas lesiones causan daos estructurales a la molcula de ADN, y pueden alterar o eliminar la capacidad de la clula de transcribir el gen que codifica el ADN afectado. Otras lesiones producen mutaciones potencialmente nocivas en el genoma de la clula, lo que afecta la supervivencia de sus clulas hijas a la hora de la mitosis. Por consiguiente, el proceso de reparacin del ADN es constantemente activo, respondiendo a daos a la estructura del ADN.2 3 La velocidad de la reparacin del ADN depende de muchos factores, como el tipo de clula, su edad, y el ambiente extracelular. Una clula que haya acumulado una gran cantidad de daos en el ADN, o que no pueda reparar eficazmente los daos producidos en su ADN, puede entrar en uno de tres estados posibles: 1. Un estado irreversible de inactividad, llamado senescencia. 2. Suicidio celular, llamado apoptosis o muerte celular programada. 3. Carcinognesis, o formacin de cncer.

La capacidad de reparacin del ADN es vital para la integridad de su genoma, y por tanto, de su funcionamiento normal y el del organismo. En el caso de muchos de los genes que se haba demostrado que influan en la longevidad, ms tarde se ha revelado que tienen un papel en la reparacin y proteccin del ADN.4 La incapacidad de corregir lesiones moleculares en las clulas que forman gametos pueden introducir mutaciones en el genoma de sus descendientes, influyendo en el ritmo de la evolucin.
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1 Dao del ADN

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1.1 Causas de los daos 1.2 Tipos de dao 1.3 Daos al ADN nuclear y al ADN mitocondrial 1.4 Envejecimiento y apoptosis 1.5 Daos en el ADN y mutaciones

2 Mecanismos de reparacin del ADN

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2.1 Daos a una nica cadena 2.2 Daos a cadena doble

3 Fuentes

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3.1 Referencias 3.2 Bibliografa

4 Enlaces externos

Dao del ADN[editar]

Los daos al ADN, que se deben a factores ambientales y a los procesos metablicos habituales dentro de la clula, tienen lugar a un ritmo de entre mil y un milln de lesiones moleculares por clula por da.1 Aunque esto slo representa un 0.000165% de las aproximadamente seis mil millones de bases (tres mil millones de pares de bases) del genoma humano, las lesiones no reparadas en genes crticos (como los genes supresores de tumores) pueden impedir que una clula lleve a cabo su funcin y aumentar de manera significativa la posibilidad de que se forme untumor. La inmensa mayora de los daos al ADN afectan a la estructura primaria de la doble hlice, es decir, la qumica de las bases mismas es modificada. Estas modificaciones pueden a su vez destruir la estructura normal helicoidal de las molculas, introduciendo nuevos enlaces qumicos o aductos voluminosos que no caben en la hlice doble estndar. A diferencia de las protenas y el ARN, el ADN suele carecer de estructura terciaria, por lo que no suele haber daos o perturbaciones a este nivel. Sin

embargo, el ADN tiene unas superhlices envueltas alrededor de protenas "empaquetadoras" llamadas histonas (en las eucariotas), y ambas estructuras son vulnerables a los efectos de los daos al ADN.

Causas de los daos[editar]

Los daos al ADN se pueden subdividir en dos tipos principales: 1. Los daos endgenos, como ataques por parte de especies reactivas del oxgeno producidas a partir de subproductos metablicos normales (mutacin espontnea), especialmente en el proceso de desaminacin oxidativa; 2. Los daos exgenos causados por agentes externos, tales como: 1. Radiacin ultravioleta del sol [UV 200-300nm] u otras frecuencias de radiacin, incluyendo los rayos X y los rayos gamma.5 2. 3. 4. 5. Radiacin ionizante.6 Hidrlisis o disrupcin trmica. Algunas toxinas vegetales. Mutgenos artificiales, especialmente compuestos aromticos que actan como agentes intercalantes del ADN. 6. 7. Quimioterapia y radioterapia como tratamiento contra el cncer. Virus que se integran en el genoma.7

La replicacin de ADN daado antes de que la clula se divida puede provocar la incorporacin de bases errneas ante las daadas. Las clulas hijas que heredan estas bases errneas llevan mutaciones en los que la secuencia de ADN original es irrecuperable (excepto en el raro caso de una reversin de la mutacin, o bien ms frecuentemente a travs de la recombinacin genticaa pesar de ser igualmente raro).

Tipos de dao[editar]
Hay cuatro tipos principales de daos al ADN debido a procesos celulares endgenos: 1. Oxidacin de las bases (por ejemplo, 8-oxo-7 0.8-dihidroguanina (8-oxoG)) y generacin de interrupciones de la cadena de ADN por parte de especies reactivas del oxgeno. 2. Alquilacin de bases (normalmente metilacin), como la formacin de 7-metilguanina, 1-metiladenina, O6-metilguanina 3. Hidrlisis de bases, como desaminacin, depurinacin y depirimidinacin.

4.

Malfuncionamiento de bases, debido a errores en la replicacin del ADN, en que se inserta una base de ADN errnea en una cadena de ADN en formacin, se inserta una base que no es necesaria insertar, o no se inserta una de necesaria.

Los daos causados por agentes exgenos son de muchos tipos.8 Algunos ejemplos son: 1. La luz UV-B debido a entrecruzamientos con bases adyacentes de citosina y timina, crean dmeros de pirimidina. Esto recibe el nombre de dao directo al ADN. 2. La luz UV-A provoca la formacin de radicales libres, especialmente si hay crema solar que ha penetrado en la piel. Esto recibe el nombre de dao indirecto al ADN. 3. La radiacin ionizante, como la que causa la desintegracin radiactiva o la de los rayos csmicos, provoca roturas en las cadenas de ADN. 4. La disrupcin trmica a temperaturas elevadas aumenta la velocidad de la despurinizacin (prdida de bases de purina del tronco del ADN) y las roturas de cadenas sencillas. Por ejemplo, se observa despurinizacin hidroltica en los bacteria termfilas, que viven en aguas termales a 85 a 250 C.9 10 En estas especies, la velocidad de despurinizacin (300 residuos de purina por genoma por generacin) es demasiado alta como para que se repare mediante los mecanismos habituales de reparacin, de manera que no se puede descartar la posibilidad de una respuesta adaptativa. 5. Productos qumicos industriales, como el cloruro de vinilo o el agua oxigenada, as como compuestos qumicos ambientales como los hidrocarburos policclicos que se encuentran en el humo, el holln y el alquitrn, provocan una gran diversidad de aductos-etenobases de ADN, bases oxidadas, fosfotristeros alquilados, y entrecruzamiento del ADN, por citar slo algunos efectos. Los daos por radiacin UV, la alquilacin/metilacin, los daos por rayos X y los daos oxidativos son ejemplos de daos inducidos. Los daos espontneos incluyen la prdida de una base, la desaminacin, plegamientos de los anillos de azcar, y los desplazamientos de tautmeros.11

Daos al ADN nuclear y al ADN mitocondrial[editar]

En las clulas humanas, y las clulas eucariotas en general, el ADN se encuentra en dos puntos de la clula: en el ncleo y en las mitocondrias. El ADN nuclear (ADNn) existe en forma decromatina durante las fases no replicadoras del ciclo celular, y es condensado en estructuras agregadas denominadas cromosomas durante la divisin celular. En ambos estados, el ADN es altamente compacto y se enrolla alrededor de protenas en forma de

perla, llamadas histonas. Cuando una clula necesita expresar la informacin gentica codificada en su ADNn, se desenrrolla la regin cromosmica correspondiente, expresan sus genes, y luego la regin vuelve a ser condensada en su forma de reposo. El ADN mitocondrial (ADNmt) se encuentra dentro de las mitocondrias (un tipo de orgnulos), existe en mltiples copias, y est estrechamente asociado con una serie de protenas para formar un complejo llamado nucleoide. Dentro de las mitocondrias, las especies reactivas del oxgeno (ERE) y los radicales libres, subproductos de la produccin constante de adenosn trifosfato (ATP) mediante la fosforilacin oxidativa, crean un medio altamente oxidativo que se sabe que daa la ADNmt. Una enzima clave a la hora de compensar la toxicidad de estas especies es la superxido dismutasa, que est presente tanto en las mitocondrias como en el citoplasma de las clulas eucariotas.

Envejecimiento y apoptosis[editar]
El envejecimiento, un estado irreversible en el que la clula ya no se divide (mitosis), es una respuesta protectora en el acortamiento de los extremos de los cromosomas (telmeros). Los telmeros son largas regiones de ADN no codificantes repetitivas, que delimitan los cromosomas y que se degradan parcialmente cada vez que una clula se divide (lmite de Hayflick).12 En cambio, la quietud es un estado reversible de latencia que no tiene relacin con los daos en el genoma (ciclo celular). El envejecimiento de las clulas puede representar una alternativa funcional a la apoptosis en que la presencia fsica de una clula es necesaria para el organismo,13 que sirve como mecanismo de ltimo recurso para evitar que una clula con el ADN daado se replique anormalmente en la ausencia de comunicacin celular pro-crecimiento. La divisin celular incontrolada puede provocar la formacin de un tumor (cncer), que es potencialmente letal para el organismo. Por tanto, la induccin del envejecimiento y la apoptosis es considerada parte de la estrategia de proteccin contra el cncer.

Daos en el ADN y mutaciones[editar]

Es importante distinguir entre los daos en el ADN y las mutaciones, los dos tipos principales de errores en el ADN.14 15 16 17 Los daos en el ADN y las mutaciones son fundamentalmente diferentes. Estos daos son en ltimo trmino anormalidades qumicas en la estructura del ADN, como roturas de cadena sencilla y cadena doble, residuos de 8hidroxideoxiguanosina, y aductos de hidrocarburos aromticos policclicos. Determinadas protenas pueden reconocer estas alteraciones en el ADN, de manera que los pueden reparar si hay disponible informacin redundante para ser copiada, a partir de la secuencia intacta de la cadena de ADN complementaria que no ha sufrido esta

alteracin. Si una clula no repara daos en su ADN, puede quedar parada la expresin de un gen.18 En contraste a los daos en el ADN, una mutacin es un cambio en la secuencia de bases del ADN, es decir que no se produce ningn cambio que pueda ser reconocido por las protenas encargadas de la correccin de estas alteraciones, ya que su composicin qumica y estructural es normal. Las mutaciones provenientes de los errores de sntesis no pueden ser reconocida por las enzimas una vez que el cambio de bases est presente en ambas cadenas del ADN, de manera que las mutaciones resultan indetectables en la correccin y no son reparadas. Las mutaciones son replicadas durante la divisin celular.19 A nivel celular, las mutaciones pueden provocar cambios en el metabolismo y la proliferacin de estas clulas.20 En el conjunto de clulas de un organismo, el nmero de clulas mutantes aumentar o disminuir segn los efectos de la mutacin en la capacidad de la clula para sobrevivir y reproducirse. Aunque son claramente diferentes los unos de los otros, los daos en el ADN y las mutaciones estn relacionados, pues los daos en el ADN provocan a menudo errores de sntesis del ADN durante la replicacin o la reparacin, y estos errores son una causa importante de mutaciones. Teniendo en cuenta las propiedades de los daos en el ADN y las mutaciones, se puede ver que los daos en el ADN son un problema especial en clulas que no se dividen o que lo hacen lentamente, pues los daos no reparados tienden a acumularse con el tiempo. Por otra parte, en las clulas que se dividen rpidamente, los daos en el ADN no reparados que no matan la clula evitando su replicacin suelen provocar errores durante la replicacin y, por tanto, mutaciones.21 La gran mayora de mutaciones que no tienen un efecto neutro son deletreas para la supervivencia de una clula. As pues, en una poblacin de clulas de un tejido con clulas que se replican, las clulas mutantes tienden a desaparecer. Sin embargo, las pocas mutaciones que ofrecen una ventaja para la proliferacin celular tienden a extenderse de manera clnica a expensas de las clulas vecinas. Esta ventaja para la clula es una desventaja para el organismo en general, pues estas clulas mutantes proliferan libremente escapando al control del ciclo celular, son las clulas cancerosas. Aquellos tipos celulares que se dividen ms frecuentemente tienden a acumular ms fcilmente las mutaciones, ya que una vez ocurridas las mutaciones tardan estas clulas poco tiempo en replicar el ADN y por tanto la mutacin incorporar poco tiempo con la copia inicial de la cadena complementaria. As pues una vez dividida una de las dos clulas resultantes de la divisin habr fijado la variante mutante, siendo ms difcil que

ocurra la correccin. As pues, los daos en el ADN en clulas que se dividen frecuentemente son una causa importante de cncer,22 pues dan pie a mutaciones. En cambio, los daos en el ADN en clulas que se dividen poco son probablemente una causa importante del envejecimiento.23

Mecanismos de reparacin del ADN[editar]

Las clulas no pueden funcionar si los daos en el ADN corrompen la integridad y accesibilidad de informacin esencial en el genoma (pero las clulas permanecen aparentemente funcionales cuando faltan o estn daados genes "no esenciales"). Segn el tipo de daos que ha sufrido la estructura de doble hlice del ADN, han evolucionado una variedad de estrategias de reparacin que restauran la informacin perdida. Si es posible, las clulas utilizan la cadena de ADN complementaria (si no ha sido modificada) o la cromtida hermana como "plantilla" para restaurar la informacin original. Si no hay ninguna plantilla disponible, las clulas utilizan como ltimo recurso un sistema de recuperacin propenso a los errores conocido como sntesis de translesin. Los daos al ADN alteran la configuracin espacial de la hlice, su topologa, y la clula es capaz de detectar estas alteraciones. Una vez que se detectan los daos, unas molculas especficas reparadoras del ADN se adhieren al punto daado o cerca de l, induciendo a otras molculas a adherirse y formar un complejo que permite que tenga lugar la reparacin. Los tipos de molculas implicados y el mecanismo de reparacin que se utiliza depende del tipo de daos que haya sufrido el ADN y de la fase del ciclo celular en que se encuentre la clula.

Daos a una nica cadena[editar]

Cuando slo una de las dos cadenas de la doble hlice tiene un defecto, la otra puede ser utilizada como plantilla para dirigir la correccin de la cadena daada. Para reparar daos a una de las molculas pareadas de ADN, existen varios mecanismos de reparacin de escisiones, que eliminan el nucletido daado y lo sustituyen con un nucletido intacto complementario al que se encuentra en la cadena de ADN no daada.

Reparacin sobre la marcha, es el principal sistema de correccin de daos. Lo realizan las propias ADN Pol I y ADN Pol III (o sus equivalentes en eucariotas) con su actividad exonucleasa 3' 5' para corregir un nucletido equivocado que hayan colocado. Esta incorreccin es detectada porque el emparejamiento incorrecto causa una distorsin de la doble hlice que las ADN Polimerasas pueden detectar. Sin embargo, la reparacin solo

puede realizarse si an no se han puesto ms nucletidos, una vez colocado aunque sea uno ms, ste acta como barrera de no retorno.

Reparacin directa, no requiere eliminacin de nucletidos o bases nitrogenadas, sino que se emplean enzimas para reparar directamente alteraciones nucleotdicas. Los principales enzimas empleados son la fotoliasa (separa los dmeros de timinas formados por radiacin UV) y la metiltransferasa (retira grupos metilo aadidos al ADN).

Reparacin por escisin de base (BER), que repara daos a un nico nucletido causados por oxidacin, alquilacin, hidrlisis o desaminacin. Una glicosidasa escinde la base nitrogenada del nucletido daado, generando un sitio apurnico o apirimidnico. El esqueleto pentosa-fosfato residual es eliminado por una AP endonucleasa y finalmente es sustituido por el nucletido adecuado por la actividad secuencial de ADN polimerasa y ADN ligasa.

Reparacin por escisin de nucletido (NER), que repara daos que afecten cadenas ms largas, de entre dos y treinta bases. Este proceso reconoce cambios grandes que distorsionan la hlice, como dmeros de timina, as como roturas de cadena nica (reparados con enzimas como la UvrABC endonucleasa. Una forma especializada de NER, conocida comoreparacin acoplada a transcripcin (TCR) desarrolla enzimas de alta prioridad en genes que se estn transcribiendo activamente.

Reparacin de malapareamiento o reparacin por mismatch (MMR). Todas las reparaciones anteriores se realizan antes de terminar la replicacin. Este sistema se realiza cuando la replicacin ya ha concluido, y corrige errores de nucletidos mal apareados (pero normales, es decir, no daados). Para ello debe reconocer qu hebra es la correcta, lo que en procariotas ocurre porque el ADN suele tener metiladas sus bases, pero tras la replicacin la hebra nueva no se metila hasta comprobar que no tenga errores, por lo que la maquinaria de reparacin supone que si hay un error tras la replicacin, se habr producido en la hebra nueva (la no metilada). Una vez metiladas, o no hay correccin posible, o sta puede causar errores. Por ejemplo, en cualquier emparejamiento errneo de GT y CT, se retira preferentemente la timina, porque es probable que sea resultado de la desaminacin de la citosina. Este sistema de reconocimiento por metilacin solo funciona en procariotas, se ignora cul es el mecanismo empleado en eucariotas para distinguir la hebra recin formada de la hebra madre. Estos mtodos mencionados hasta ahora reparar el ADN de forma fidedigna, recuperando el genotipo original. Pero cuando los daos son excesivos, se producen los siguientes tipos de reparacin, que ya son propensos a errores: no recuperan el

genotipo original, se trata de soluciones de emergencia cuando est en juego la supervivencia celular.

Respuesta SOS, que es un rellenado de emergencia que se pone en marcha cuando se acumulan daos que distorsionan la doble hlice (como regiones de ADN monocatenario, por prdidas de nucletidos en la cadena complementaria), atascando la maquinaria replicativa. En procariotas esto desencadena el sistema RecA, una proteasa que elimina protenas represoras de polimerasas de bypass, capaces de sobreponerse a la distorsin de la hlice y rellenar los huecos con nucletidos al azar. En eucariotas las polimerasas de bypass son constitutivas, estn presentes en todo momento en el citoplasma, pero solo se reclutan cuando se acumulan daos, mediante una regulacin por ubiquitinacin de la abrazadera.

Protena p53, que ms que un sistema de reparacin, induce la apoptosis celular cuando los daos no pueden ser reparados ni siquiera por la respuesta SOS, para impedir que se desarrollen tumores.

Daos a cadena doble[editar]

Las roturas de cadena doble, en el que ambas cadenas de la doble hlice quedan rotas, son especialmente peligrosos para la clula, ya que pueden provocar problemas en el genoma. Existen dos mecanismos que reparan estas roturas: la unin de extremos no homlogos (NHEJ del ingls Non-homologous DNA End Joining) y la reparacin recombinativa (tambin conocida como reparacin asistida por plantilla o reparacin de recombinacin homloga). En el NHEJ el ADN ligasa IV, un ADN ligasa especializada que forma un complejo con el cofactor XRCC4, une directamente los dos extremos.24 Para asegurarse de una reparacin precisa, el NHEJ se basa en cortas secuencias homlogas llamadas microhomologas, presentes en las colas monocatenarias de los extremos de ADN que deben ser unidos. Si estas secuencias son compatibles, la reparacin suele ser correcta.25 26 27 28 El NHEJ tambin puede causar mutaciones durante la reparacin. La prdida de bases nitrogenadas en el lugar de rotura puede provocar deleciones y la unin de translocaciones de forma terminal no correspondientes. El NHEJ es especialmente importante antes de que la clula haya replicado su ADN, pues no hay ninguna plantilla que permita la reparacin por recombinacin homloga. Hay rutas de NHEJ de seguridad en las eucariotas superiores.29 Adems de su papel como cuidador del genoma, el NHEJ es necesario para unir roturas de la cadena doble con extremos de

horquilla, causados durante la recombinacin V (D) J, el proceso que genera la diversidad de los receptores de los linfocitos By los linfocitos T en el sistema inmunitario de los vertebrados.30 La reparacin recombinante requiere la presencia de una secuencia idntica o casi idntica que sea utilizada como plantilla para reparar la rotura. La maquinaria enzimtica responsable de este proceso es casi idntica a la maquinaria responsable del cruce cromosmico durante la meiosis. Esta ruta permite que un cromosoma daado sea reparado utilizando una cromtida hermana (disponible en G2 despus de la replicacin del ADN) o un cromosoma homlogo como plantilla. Las roturas de cadena doble causados por los intentos de la maquinaria replicante de sintetizar a travs de una rotura de cadena nica o una lesin no reparada provocan un colapso de la horquilla de replicacin y son generalmente reparados por recombinacin. Las topoisomerasas provocan roturas tanto de una nica cadena como de la cadena doble cuando cambian el estado de superenrollamiento del ADN, lo que es especialmente habitual en regiones situadas cerca de una horquilla de replicacin abierta. Estos roturas no son consideradas como daos en el ADN, ya que son un intermedio natural del mecanismo bioqumico de las topoisomerasas y son inmediatamente reparados por las enzimas que los han creado. Un grupo de cientficos franceses bombardearon Deinococcus radiodurans para estudiar el mecanismo de reparacin de roturas de la cadena doble de ADN en este organismo. Al menos dos copias del genoma, con roturas aleatorias del ADN, pueden formar fragmentos de ADN por medio de apareamiento. Entonces, los fragmentos que se solapan parcialmente son utilizados para sintetizar las regiones homlogas mediante un bucle-D en movimiento que puede continuar la extensin hasta que encuentran cadenas correspondientes complementarias. En el ltimo paso se produce un cruce por medio de una recombinacin homloga de recargo dependiente

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