Prctica: Realizacin de un antibiograma

Es un mtodo que se utiliza para determinar la sensibilidad de una cepa bacteriana frente a los distintos agentes antimicrobianos (antibiticos), adems vamos a comprender el concepto de antibitico y su especificidad de accin sobre determinadas bacterias y conocer el concepto de cepa sensible y resistente. Materiales: - Jeringa con suero fisiolgico estril (solucin de ClNa al 0,9%) - Placa problema (cultivada en agar-sangre)

Discos de diferentes tipos de antibiticos (4-6 tipos distintos) - Tubos de ensayo - Placa agar-sangre - Regla milimetrada - Asa de Platino - Rotulador de vidrio - Cinta adhesiva - Pinzas finas - Contenedor con leja - Tablas para determinacin de resistencias Desarrollo de la Prctica: Antes de empezar son necesarias una serie de recomendaciones a tener en cuenta durante toda la actividad: No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biolgica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones. Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores sern llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biolgicos, donde sern incinerados. Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra. Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminacin o la nuestra. Al acabar la prctica, se deben lavar bien las manos. 1.- Siembra del microorganismo

Tomamos con una jeringa una pequea cantidad de suero fisiolgico estril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo. A partir de la placa problema, que contiene colonias del microorganismo cuya sensibilidad a los antibiticos queremos determinar, tomamos una muestra SUPERFICIAL de UNA SOLA COLONIA con un asa de siembra. Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa para

realizar una suspensin de las bacterias en el suero fisiolgico. Al acabar echamos al contenedor de residuos el asa de siembra. Introducimos una asa de henle estril en el tubo y se pasa muy suavemente por la superficie de una placa agar-sangre nueva.

En esta ocasin realizaremos una siembra en csped, es decir, por toda la superficie de la placa, para conseguir que crezca bacterias de modo masivo. Es importante que la siembra sea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de cultivo. Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con una A la tapa (antibiograma).

2.- Colocacin de los discos de antibitico Tomamos ahora con las pinzas NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de los antibiticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensin de uno o varios antibiticos a la concentracin teraputica). Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar con la superficie con las pinzas. Es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un nico sitio. Realizamos la misma operacin con los otros cinco antibiticos, colocando los nuevos discos separados de los anteriores, formando un hexgono. 3.- Incubacin y observacin

Se llevan las placas a incubar a 37C (temperatura corporal), durante 24 horas. Tras este perodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano.

4.Medicin del halo de inhibicin Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el dimetro de los halos de inhibicin que se han formado alrededor de los discos de antibitico a los que la bacteria problema es sensible. Anota los datos en la representacin de la figura 2, indicando con un nmero del 1 al 6, el antibitico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de halos y su tamao en mm. 5.- Traslada los datos a la tabla siguiente:

Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria es sensible (S) o resistente (R) a cada antibitico y antalo en la tabla, en las columnas correspondientes. 6.CONCLUSIONES Mediante un antibiograma podemos establecer qu tratamiento ser el ms adecuado para el paciente afectado por una infeccin por la bacteria que estemos estudiando. Qu son los halos de inhibicin? Alrededor de cada disco de antibitico, las bacterias sensibles a ese antibitico no habrn podido reproducirse y, por lo tanto, no forman colonias, dejando un hueco alrededor del disco. Por qu se miden los halos? No basta con ver si las bacterias han crecido o no alrededor del antibitico para saber si son o no sensibles. Hay que saber cunto no han crecido. Solo si el halo de inhibicin es suficientemente grande, usando el antibitico a la concentracin teraputica la que el antibitico puede alcanzar en el lugar de la infeccin sin que se produzcan efectos txicos o secundarios- se dice que la bacteria es sensible al antibitico. Por eso se mide el efecto y se consultan las tablas.