MTODO

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ

FO-DGPDI-001-04

MTODO PARA LA DETERMINACIN DE SUSTANCIAS ACTIVAS DE AZUL DE METILENO

CDIGO: ME-IIT-370
REVISIN: 00 FECHA DE APROBACIN/REVISIN:16 DE MARZO DE 2007

Contenido
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 INTRODUCCIN ................................................................................................. PROPSITO ........................................................................................................ ALCANCE ............................................................................................................ DEFINICIONES.................................................................................................... RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD.................................................................. MTODO DE REFRENCIA.................................................................................. FUNDAMENTO DEL MTODO ........................................................................... INTERFERENCIAS .............................................................................................. MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS .................................................................. PREPARACIN DE SOLUCIONES..................................................................... RECOLECCIN DE MUESTRAS....................................................................... CONTROL DE CALIDAD...................................................................................... CALIBRACIN..................................................................................................... DESARROLLO DE ACTIVIDADES...................................................................... CLCULOS .......................................................................................................... EQUIPO DE SEGURIDAD DISPOSICIN DE RESIDUOS.............................. DIFERENCIA CON LA NORMA........................................................................... BIBLIOGRAFA .................................................................................................... LISTA DE DISTRIBUCIN...................................................................................

Pg.
2 2 2 2 5 6 6 6 6 8 9 9 9 10 12 12 12 13 13 14

13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0

Anexos
UNO: DIAGRAMA DE FLUJO PARA DETERMINACIN DE S.A.A.M..........................

Esta informacin es confidencial y para uso exclusivo de la Institucin

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1.0

INTRODUCCIN
Los detergentes son de los productos qumicos de ms amplia utilizacin en el hogar y a nivel industrial. Los detergentes estn constituidos generalmente por compuestos orgnicos, con propiedades tensoactivas surfactantes, que contienen una cadena polar aliftica (Hidroflica) y una parte aromtica (Hidrofbica). Las ramificaciones de las cadenas alifticas causan un retardo muy grande en su degradacin, que persiste an despus de un tratamiento biolgico normal. Un alto contenido de detergentes ocasiona la formacin d espuma lo que ocasiona la dificultad para realizar la transferencia de oxgeno. La toxicidad de los surfactantes, representan un peligro para la flora y fauna acutica. El contenido de fosfatos en detergentes, por ser estos nutrientes, contribuye a la sobrepoblacin de la flora acutica que al morir ocasionan una demanda de oxgeno mayor que es perjudicial para los peces (EUTROFICACIN). La importancia del anlisis radica en la legislacin de los niveles mximos de descargas de detergentes permitidos, para evitar los problemas descritos.

2.0

PROPSITO
El objetivo es el establecimiento del mtodo de anlisis, para la determinacin de sustancias activas al azul de metileno.

3.0

ALCANCE
El alcance del presente mtodo es en aguas naturales, potables, residuales y residuales Tratadas.

4.0
4.1

DEFINICIONES
Anlisis de blanco analtico. Es el someter un alcuota de agua reactivo a todo el proceso de anlisis por el cual pasa una muestra real. Los laboratorios deben realizar los anlisis de blancos para corregir la seal de fondo del sistema de medicin. El anlisis de blancos se debe realizar en forma peridica o con cada lote de muestras segn lo requiera el mtodo. Analista. Personal del laboratorio que realiza un anlisis.

4.2

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4.3 4.4

Blanco. Agua reactivo o matriz equivalente a la que no se le aplica ninguna parte del procedimiento analtico y sirve para evaluar la seal de fondo. Blanco analtico o de reactivos. Agua reactivo o matriz equivalente que no contiene, por adicin deliberada, la presencia de ningn analito o sustancia por determinar, pero que contiene los mismos disolventes, reactivos y se somete al mismo procedimiento analtico que la muestra problema. Calibracin. Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especficas, la relacin entre los valores de una magnitud indicados por un instrumento o sistema de medicin, o los valores representados por una medida materializada y los valores correspondientes de la magnitud, realizados por los patrones, efectuando una correccin del instrumento de medicin para llevarlo a las condiciones iniciales de funcionamiento. Desviacin estndar experimental. Para una serie de n mediciones del mismo mensurando, es la magnitud s que caracteriza la dispersin de los resultados, dado por la frmula:

4.5

4.6

s=

(x
i =1

x) 2

n 1

Donde:
xi Es el resultado de la i-sima medicin, y

x Es la media aritmtica de los n resultados considerados.

4.7 4.8 4.9

Disolucin estndar. Disolucin de concentracin conocida preparada a partir de un patrn primario Disolucin madre. Corresponde a la disolucin de mxima concentracin en un anlisis. Es a partir de esta disolucin que se preparan las disoluciones de trabajo. Exactitud. Mide la concordancia entre el valor medido y el valor verdadero. El valor verdadero nunca se alcanza, y por lo tanto se usa como valor verdadero el valor generado por un material de referencia. Material de referencia. Material o sustancia en el cual uno o ms valores de sus propiedades son suficientemente homogneas y bien definidas, para ser utilizadas para la calibracin de aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin, o para asignar valores a los materiales.

4.10

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4.11

Material de referencia certificado. Material de referencia, acompaado de un certificado, en el cual uno o ms valores de las propiedades estn certificados por un procedimiento que establece la trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la cual se expresan los valores de la propiedad, y en el que cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza.

4.12 Medicin. Conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor de una magnitud. 4.13 4.14 Mensurando. Magnitud particular sujeta a medicin. Lmite de cuantificacin del instrumento. Concentracin mnima del analito en una muestra y que puede ser cuantificada con precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones de operacin establecidas en el instrumento. Lmite de deteccin del mtodo (LDM). Es la mnima concentracin de un analito o sustancia en una muestra, la cual puede ser detectada pero no necesariamente cuantificada bajo las condiciones en que se lleva a cabo el mtodo.

4.15

4.16 Lmite mximo permisible. Valor o intervalo expresado en unidades de concentracin, cantidad de materia o unidades especficas, asignado a un parmetro, el cual no debe ser excedido en la descarga de aguas residuales. Estos valores estn consignados en los criterios ecolgicos para uso o aprovechamiento del agua. 4.17 4.18 Parmetro. Variable que se utiliza como referencia para determinar la calidad del agua. Patrn (de medicin). Material de referencia, instrumento de medicin, medida materializada o sistema de medicin destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o ms valores de una magnitud para utilizarse como referencia. Patrn nacional (de medicin). Patrn reconocido por una decisin nacional en un pas, que sirve de base para asignar valores a otros patrones de la magnitud concerniente. Patrn primario. Patrn que es designado o reconocido ampliamente como un patrn que tiene las ms altas cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrones de la misma magnitud.

4.19

4.20

4.21 Patrn secundario. Patrn cuyo valor es establecido por comparacin con un patrn primario de la misma magnitud.

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4.22

Patrn de referencia. Patrn, en general de la ms alta calidad metrolgica disponible en un lugar dado, o en una organizacin determinada del cual se derivan las mediciones realizadas en dicho lugar. Patrn de trabajo. Patrn que es usado rutinariamente para calibrar o controlar las medidas materializadas, instrumentos de medicin o los materiales de referencia. Precisin. Es el grado de concordancia entre resultados analticos individuales cuando el procedimiento analtico se aplica repetidamente a diferentes alcuotas o porciones de una muestra homognea. Usualmente se expresa en trminos del intervalo de confianza o incertidumbre: s x = x t /2 n Donde:
x es la media calculada a partir de un mnimo de tres mediciones independientes; t /2es el valor de la t de Student para un nivel de significancia del 95 %; ses la desviacin estndar de la muestra; nes el nmero de rplicas, y x es el resultado que incluye el intervalo de confianza.

4.23 4.24

4.25 Trazabilidad. Propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn por la cual pueda ser relacionado a referencias determinadas, generalmente patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena interrumpida de comparaciones teniendo todas las incertidumbres determinadas. 4.26 Verificacin de la calibracin. Una verificacin peridica de que no han cambiado las condiciones del instrumento en una forma significativa.

5.0

RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD
El personal siguiente tiene la responsabilidad y autoridad necesaria para:

5.1

Jefatura de funcin de laboratorio

5.1.1 Verificar que se cumpla en su totalidad este mtodo de anlisis 5.2 Analista

5.2.1 Ejecutar este mtodo de anlisis siguiendo los lineamientos de control de calidad establecidos.

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6.0

MTODO DE REFERENCIA
El presente mtodo se basa en la determinacin de sustancias activas al azul de metileno, descrito en la Norma Mexicana NMX-AA-039-SCFI-2001.

7.0

FUNDAMENTO
Se basa en la formacin de una sal, cuando el azul de metileno reacciona con surfactantes (ABS, otros sulfonatos y esteres Sulfatados). La sal es soluble cloroformo y la intensidad del color es proporcional a su concentracin. intensidad es medida espectrofotmetricamente a 652 nm, en celdas vidrio de 1 de paso de luz ptico. los en La cm

8.0
8.1 8.2 8.3

INTERFERENCIAS
Compuestos orgnicos e inorgnicos que forman complejo con el azul de metileno. Existen interferencias positivas como las provocadas por sulfonatos orgnicos, carboxilatos y fenoles, cianuros, tiocianatos y nitratos. Existen interferencias negativas, cualquier compuesto que compite efectivamente con el azul de metileno para formar un par inico, no extractable con cloroformo, como las ocasionadas por aminas. Tambin ocasiona interferencia la mezcla crmica utilizada para limpiar la cristalera y el detergente utilizado para lavar el material de cristal. Normalmente las interferencias se eliminan pasando la muestra a travs de un tapn de fibra de vidrio. Otra forma de eliminar las interferencias es lavando el material con estran o tensoactivos, que no interfieran con la prueba.

8.4 8.5 8.6

9.0
9.1 9.2 9.3

MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Todo el material de vidrio despus de ser lavado con jabn libre de fosfatos, debe ser enjuagado con HCl 1:1 caliente y agua destilada. Embudos de separacin de 500 mL Embudos de separacin de 250 mL
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9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 9.10 9.11 9.12 9.13 9.14 9.15 9.16 9.17 9.18 9.19 9.20 9.21 9.22 9.23 9.24

Matraz volumtrico de 100 mL Probetas de 50 mL Probetas de 25 mL Probetas de 10 mL Pipetas volumtricas de diferentes capacidades. Vasos de precipitado. Embudos de vidrio, para filtrar. Celdas de vidrio de 1 cm de paso de luz ptico para lecturas espectrofotomtricas. Balanza analtica (Chyo JL-18 serie 300230). Espectrofotmetro UV Perkin Elmer, lambda 2 o lambda 25. Campana de extraccin Cloroformo grado reactivo. cido sulfrico grado reactivo. Hidrxido de sodio (NaOH) grado reactivo. Fenolftalena grado reactivo. Agua destilada con 0.2 megaohm-cm de resistividad, 5.0 mhos/cm de conductividad mxima y pH de 5.0 a 8.0. Azul de metileno grado reactivo. Disolucin Sulfonato de alquilbenceno lineal (SAL), Spectrum 1ml=1mg Fosfato de sodio dihidrogenado monohidratado (NaH2PO4H2O). Alcohol etlico grado reactivo. Fibra de vidrio.

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10.0 PREPARACIN DE SOLUCIONES

10.1 Solucin indicadora de fenolftalena Disolver 5 g de sal de fenolftalena en 500 mL de alcohol etlico o isoproplico al 95 % y aforar 1000 mL de agua destilada. 10.2 Solucin de azul de metileno Disolver 100 mg de azul de metileno en 100 mL de agua destilada. De esta solucin transferir 30 mL a un matraz volumtrico de 1000 mL el cual contiene una disolucin de 50 g de fosfato de sodio dihidrogenado monohidratado en 500 mL de agua destilada. Adicionar 6.8 mL de cido sulfrico concentrado. Enfriar y aforar a 1000 mL con agua destilada. Solucin de lavado Disolver 50 g de fosfato de sodio dihidrogenado monohidratado, en 500 mL de agua destilada. Adicionar 6.8 mL de cido sulfrico concentrado enfriar y aforar a 1000 mL con agua destilada. Solucin de cido sulfrico 1N Medir 25.92 mL de cido sulfrico H2SO4 concentrado y aforar a 1000 mL, en un matraz volumtrico. Solucin de hidrxido de sodio 1N Pesar en balanza analtica, 40g de Hidrxido de Sodio y disolver con agua destilada previamente hervida y fra, aforando a 1000 ml en un matraz volumtrico. Solucin de SAL de 10 mg/L Para la preparacin de la solucin de 10 ppm, se toma como base un estndar de 1 mL =1000 g, Si se quiere preparar una solucin de SAL donde 1 Ml =10 g, se aplica la frmula: V1C1=V2C2 Donde: V1= Volumen de estndar base. C1= Concentracin de estndar base. V2= Volumen que se desea preparar. C2= Concentracin deseada.

10.3

10.4

10.5

10.6

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11.0 RECOLECCIN DE MUESTRA

Tomar mnimo 600 mL de muestra en envase de polietileno. Se pueden utilizar muestras simples o compuestas. Se debe preservar la muestra con cido sulfrico concentrado a pH<2 y mantenerse a 4C hasta su anlisis. Tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 1 semana.

12.0 CONTROL DE CALIDAD

12.1 12.2 12.3 12.4 12.5 Analizar un blanco de reactivo por cada corrida de muestras, bajo las mismas condiciones que la muestra. Analizar un estndar de control por cada lote de muestras analizado. Analizar cada una de las muestras por duplicado. Analizar una muestra fortificada cada 10 muestras. Factor de correlacin de la curva > 0.997.

12.6 Los criterios de aceptacin y rechazo para las muestras son: 12.6.1 Presicin= 10 % 12.6.2 Exactitud = + 2s 12.6.3 Recuperacin = 20 % 12.7 Los resultados de los anlisis se anotaran en la hoja de trabajo de la bitcora de anlisis fsico-qumico correspondiente.

13.0 CALIBRACIN
13.1 Preparar una serie de estndares en el intervalo de 0.01 0.20 mg SAL, por medio de la adicin de la disolucin intermedia (10 g) con pipetas volumtricas a una serie de matraces volumtricos de 100 mL, diluir los estndares a un volumen de 100 mL con agua y preparar un blanco, transferir a una serie de embudos de separacin de 500 mL Analizar igual que las muestras (ver punto 14).

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La curva se prepara en el intervalo de 10 g - a 200 g,

CONCENTRACIN DE ESTANDAR, mL 0.0 1.0 5.0 10.0 15.0 20.0 LECTURA EN MICROGRAMOS 0.0 10.0 50.0 100.0 150.0 200.0

13.2

Se debe contar con un registro de verificacin de la calibracin de los equipos y materiales siguientes: a) Material volumtrico b) Balanza analtica. c) Espectrofotmetro. Verificar el equipo con las instrucciones especficas del mtodo de verificacin del equipo.

14.0 DESARROLLO DE ACTIVIDADES 14.1 Analista

14.1.1 Selecciona un volumen de muestra en base a la concentracin de SAAM esperada. Nota: Si la concentracin esperada de SAAM es superior a 2 mg/L, tome una alcuota, afore a 100 mL con agua destilada y transfiera a embudo de separacin, si no tome 100 ml de muestra y transfiera a un embudo de separacin de 500 mL. 14.1.2 Aade 2 gotas de fenolftalena. 14.1.3 Agrega suficiente disolucin de hidrxido de sodio 1N para producir un color rosa. 14.1.4 Aade disolucin de cido sulfrico 1N, en pequeas cantidades hasta que el color rosa desaparezca completamente. 14.1.5 Adiciona 25 mL de solucin de azul de metileno. 14.1.6 Adiciona 10 mL de cloroformo y agita 30 segundos, con fuerza, liberando cuidadosamente la presin de vapor generada por la agitacin. 14.1.7 Permite la separacin de las fases.

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14.1.8 Verifica que no haya formacin de emulsin, si no hay, contina el proceso, Si se forma una emulsin dentro de la muestra, se recomienda tratar de romperla con las tcnicas conocidas: a).- Utiliza una varilla de vidrio para romper la emulsin. b).- Filtra a travs de un tapn de fibra de vidrio c).- Toma una menor cantidad de muestra. 14.1.9 Drena el cloroformo a un segundo embudo de separacin de 500 250 mL, dejando cualquier capa de emulsin en el primer embudo de separacin. 14.1.10Repite la extraccin, en forma seriada, con dos porciones adicionales de 10 mL de cloroformo, liberando la presin del embudo cuidadosamente. 14.1.11Adiciona 50 mL de disolucin de lavado, a los extractos combinados de cloroformo en el segundo embudo de separacin. 14.1.12Agita vigorosamente por 30 segundos, permitiendo que la muestra se estabilice durante 1 minuto. 14.1.13Filtra la capa de cloroformo a travs de un embudo de filtracin y tapn de fibra de vidrio a un matraz volumtrico de 100 mL. 14.1.14 Adiciona 10 mL de cloroformo al segundo embudo de separacin. 14.1.15 Agita vigorosamente durante 30 segundos y dejar salir la presin. 14.1.16 Permite la separacin de las fases. 14.1.17 Pasa la fase de cloroformo a travs del tapn de fibra de vidrio al matraz volumtrico de 100 mL 14.1.18 Afora con cloroformo, el producto de las filtraciones a 100 mL. 14.1.19 Ajusta el equipo a cero con el blanco de reactivo, usando el cloroformo como referencia, en la otra celda. Nota: Usar una celda de paso ptico de luz de 1 cm. 14.1.20 Llena una celda con el extracto de la muestra aforada. 14.1.21 Mide la absorbancia del extracto de la muestra a una longitud de onda de 652 nm. Nota: Ya que existe la tendencia de un desvanecimiento lento del extracto del complejo de azul de metileno, la absorbancia debe medirse dentro de un perodo de 30 min despus de su formacin.
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14.1.22 Verifica si el anlisis cumple con el control de calidad descrito en el punto 12, contina con el proceso de lo contrario se remite al punto 14.1.1. 14.1.23 Registra el resultado en la bitcora de emisin de resultados.

15.0 CLCULOS
mg/L (LAS)= A V Donde: A= Microgramos (g) de LAS ledos en la curva de calibracin. V= Volumen de muestra en mL.

16.0 EQUIPO DE SEGURIDAD-DISTRIBUCIN DE REACTIVOS

16.1 16.2 16.3 16.4 16.5 16.6 16.7 Bata de laboratorio. Lentes de seguridad. Guantes de ltex. Colocar los residuos en recipientes debidamente identificados para su futura disposicin, a excepcin del cloroformo el cual se recupera. Colocar el cloroformo para recuperar en recipiente de vidrio debidamente identificado para su recuperacin. Neutralizar los residuos debidamente para su disposicin. La recuperacin de cloroformo se realiza de la siguiente forma:

16.7.1 El cloroformo para recuperar se filtra a travs de una capa de carbonato de potasio anhidro K2CO3 y papel filtro # 5 (125 mm de dimetro). 16.7.2 Con el cloroformo filtrado se realiza una destilacin simple.

17.0 DIFERENCIA CON LA NORMA

Se utiliza estndar para curva de calibracin comercial de 1000 ppm.
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18.0 BIBLIOGRAFA
STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION WASTEWATER. 20 th EDITION. 1998. pp. 5-45 a 5-49. OF WATER AND

19.0 LISTA DE DISTRIBUCIN

REA AUTORIZADA 19 IIT INSTITUTO DE INGENIERA Y TECNOLOGA

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ANEXO UNO
A s is te n te P ro fe s io n a l R e s p o n s a b le d e l re a d e F is ic o q u m ic o s
IN IC IO
1 4 .1 .1 S e le ccio n a u n vo lu m e n d e m u e str a 1 4 .1 .2 A a d e 2 g o ta s d e fe n o lfta le in a 1 4 .1 .3 A g r e g a d iso lu ci n d e cid o su lf r ico 1 4 .1 .4 A a d e d iso lu ci n d e cid o su lf r ico 1 4 .1 .5 A d icio n a 2 5 m l d e so lu ci n d e a zu l d e m e tile n o 1 4 .1 .6 A d icio n a 1 0 m l d e clo r o fo r m o 1 4 .1 .7 P e r m ite la se p a r a ci n d e la s fa se s 1 4 .1 .8 Si
U t iliz a t c n ic a s c o n o c id a s

H a y fo r m a ci n d e e m u lsi n ?

1 4 .1 .9

No

D r e n a e l clo r o fo r m o a u n se g u n d o e m b u d o 1 4 .1 .1 0 R e p ite la e xtr a cci n e n fo r m a se r ia d a 1 4 .1 .1 1 A d icio n a 5 0 m l d e d iso lu ci n d e la va d o 1 4 .1 .1 2 A g ita vig o r o sa m e n te p o r 3 0 se g u n d o s

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B 14.1.13 F iltra la capa de cloroform o 14.1.14 Adiciona 10 m l de cloroform o 14.1.15 Agita vigor osam ente durante 30 segundos 14.1.16 Per m ite la separacin de las fases 14.1.17 Pasa la fase de cloroform o 14.1.18 Afora con clor ofor m o 14.1.19 Ajusta el equipo a cero con el blanco de r eactivo 14.1.20 Llena una celda con el extr acto de la m uestra afor ada 14.1.21 M ide la absorbencia del extr acto de la m uestra

14.1.22 C um ple con el control de calidad? 14.1.23 Si No A

R egistr a el r esultado en la bitcora

FIN

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