03. NUTRICIN MICROBIANA. 03.1 Grupos nutricionales de los microorganismos.

Fuente de energa luminosa

Fuente de Carbono

Inorgnico

Orgnico

Fuente de energa por reacciones redox Sustancias inorgnicas Sustancias orgnicas

Fuente de energa y carbono

NOMENCLATURA PRIMARIA
Tipo Ejemplo

Fototrficas

FOTOAUTOTRFICAS (autotrficas)
FOTOHETEROTRFICAS (fotoorganotrficas)

Chromatium sp.

Rhodopseudomonas sp

Quimiotrficas

QUIMIOAUTOTRFICAS (litotrficas o quimiolittrofas) QUIMIOHETERTRFICAS (organotrficas o heterotrficas)

Acidiothiobacillus sp.

scherichia coli

NOMENCLATURA SECUNDARIA SEGN FUENTE DE NITRGENO.

FIJADOR DE NITRGENO usa el N2 atmosfrico. Hay fijadores simbiticos como Rhizobioum sp NO FIJADOR DE NITRGENO ASIMILADORES Usan nitrgeno inorgnico (Amoniaco o compuestos de amonio) para incorporarlo a molculas orgnicas. TRANSAMINADORES Usan nitrgeno orgnico (aminocidos, peptonas, bases nitrogenadas, urea, cido rico) para trasferir el grupo amino de una aminocido a un -cetocido.

o libres como Azotobacter sp. NH3+ -cetocido Aminocido1 + -cetocido2

N2 Reduccin NH3 o compuestos de amoniaco: NH4Cl, (NH4)2SO4 aminocido Aminocido2 + -cetocido1

NOMENCLATURA TERCIARIA SEGN FACTORES CRECIMIENTO (vitaminas, aminocidos, bases nitrogenadas)

o prottrofo: no requiere factores de crecimiento.
Medios sin vitaminas Eo, C, N y minerales Eo, C, N y minerales Medio con vitaminas Crecimiento Crecimiento

DE

auxtrofo: requiere factores de crecimiento. Necesidades vitamnicas de algunas bacterias:

Medios sin vitaminas

Eo, C, N y minerales Eo, C, N y minerales

Medio con vitaminas
Tiamina (B1) Riboflavina Biotina Cobalamina (B12) cido pantotnico Bacillus anthracis Clostridium tetani Leuconostoc mesenteroides Lactobacillus spp. Proteus morganii Niacina Piridoxina (B6) cido flico Vitamina K

Sin crecimiento Con crecimiento

Brucella abortus Lactobacillus spp. Leuconostoc dextranicum Bacteroides melaninogenicus

Ejemplos para deducir tipo nutricional o requerimientos nutricionales:

a) Fotoauttrofo, solo es asimilador y transaminador, prottrofo: Fuente de energa luz, de carbono CO2, no es fijador de nitrgeno, pero slo crece con nitrato de amonio y puede sintetizar todos sus factores de crecimiento. b) Quimioauttrofo, asimilador transaminador, prottrofo: y a) Fuente de energa luz, de carbono acetato, no es fijador de nitrgeno por lo que necesita nitrgeno orgnico y puede sintetizar todos sus factores de crecimiento. Fotohetertrofo, slo es transaminador, prottrofo: b) (Fuente de energa reacciones qumicas de sustancias inorgnicas, fuente de carbono CO2, puede tomar el nitrgeno atomosfrico, el medio necesita contar con vitamina B8.

Fuente de energa reacciones qumicas de sustancias inorgnicas, fuente de carbono CO2, no es fijador de nitrgeno y crece con Cloruro de amonio o aminocidos, puede sintetizar todos sus factores de crecimiento.
c) Quimiohetertrofo, auxtrofo a valina: fijador,

Quimioauttrofo, biotina:

fijador,

auxtrofo

Fuente de energa y carbono de compuestos orgnicos, toma nitrgeno gaseoso y necesita el aminocido valina en el medio para crecer.

c) Fuente de energa y carbono de compuestos orgnicos, necesita nitrgeno inorgnio u orgnico, hay que tener en el medio el valina y adenina.

Quimiohetertrofo, no fijador, auxtrofo a valina y adenina:

Nutrientes. Macroelementos: son los elementos que se requieren en grandes cantidades

Elemento Carbono (C) Hidrgeno (H) Oxgeno (O) Nitrgeno (N) Funcin celular Formar parte de las biomolculas, los compuestos de carbono tambin puede servir como fuente de energa Tambin forma parte de las biomolculas y del agua, adems de otras sustancias Utilizado para liberar la energa de las molculas en los procesos respirativos. Forma parte de biomolculas, an en anaerobios Constituyente importante de aminocidos (protenas), bses pricas y primdicas (ADN y ARN), carbohidratos aminados y otros compuestos con nitrgeno (urea) Constituyente importante de cidos nuclicos, interviene en reacciones metablicas en la generacin de energa (ATP) y fosforilando sustratos para su utilizacin por la clula Forma parte de aminocidos azufrados (cistina) y otros compuestos azufrados Funcin de enzimas y sntesis de protenas. Equilibrio osmtico, en realidad no se necesita pero muchas sustancias se presentan en forma de sal sdica. Movimiento e impulsos elctricos, activacin de enzimas. Estabiliza ribosomas, las membranas celulares, los cidos nucleicos y es necesario para el funcionamiento de algunas enzimas.

Fsforo (P)

Azufre (S) Potasio (K) Sodio (Na) Calcio (Ca) Magnesio (Mg)

Los macronutrientes son los compuestos qumicos que se requieren en grandes cantidades, estn formados por los macroelementos.
Compuesto Polisacridos Monosacridos y disacridos Ejemplo Almidn, celulosa, paramiln, glucgeno Glucosa, lactosa, galactosa, fructosa

Protenas Casena, albmina, peptona de carne, peptona de soya (polipptidos) y digeridos Aminocidos cidos nuclicos Lpidos Glicina, Prolina, Arginina ADN y ARN cidos grasos, colesterol,

Micronutrientes, elementos traza, oligoelementos, usados en pequeas dosis

Elemento Cromo (Cr) Cobalto (Co) Cobre (Cu) Manganeso (Mn) Molibdeno (Mo) Nquel (Ni) Funcin celular En mamferos para metabolismo de glucosa, los microorganismos no lo requieren. Vitamina B12;transcarboxilasa (bacterias del cido propinico). Protenas para la respiracin, como citocromo oxidasa; o en la fotosntesis, la plastocianna; algunas superxido dismutasas. Activador de muchas enzimas; presente en algunas superxido dsmutasas o en la enzima que rompe el agua en el fotosistema II, en los fottrofos oxignicos. Presente en varias enzimas que contienen flavina; tambin en ntrogenasa, nitrato reductasa, sulfito oxidasa. La mayora de las hidrogenasas, coenzima F430 de los metangenos, la deshidrogenasa de monxido de carbono; ureasa.

Nquel (Ni)
Selenio (Se) Tungsteno (W)

La mayora de las hidrogenasas, coenzima F430 de los metangenos, la deshidrogenasa de monxido de carbono; ureasa.
Formato deshidrogenasa: algunas hidrogenasas; el aminocido selenocstena. Algunas formato deshidrogenasas; oxidotransferasas de los hipertermfilos.

Vanadio (V)
Zinc (Zn) Hierro (Fe)

Vanadio nitrogenasa; bromoperoxidasa.

Presente en las enzimas anhidrasa carbnica, alcohol deshidrogenasa, RNA y DNA polimerasas y muchas protenas que unen DNA. Citocromos, catalasas, peroxidasas, protenas con hierro y azufre (por ejemplo la ferredoxina), oxigenasas, todas las nitrogenasas.

TIPOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS

Dominio Microorganismo Thermoproteus sp, Thermococcus sp Archaea Archaeglobus sp, Sulfolobus sp, Acidianus sp Halobacterium sp Bacterias Rojas no del azufre Rhodobacter sp, Rhodoila sp Bacterias rojas del azufre Cromatium sp, Thiospirillum sp Bacterias verdes no del azufre Bacteria Bacterias verdes del azufre Cholorbium sp, Heliobacillus sp Cianobacterias Gloeothece sp, Anabaena sp, Fischerella sp Acidiothiobacillus sp (Thiobacillus sp) Escherichia coli, Salmonella sp, Proteus sp, Staphylococcus sp, Bacillus sp Hongos Protozoarios Eukarya Protozoario / Algas (Euglena) Qumiohetertrofos / Fotoauttrofos (oxignicos) Tipo Nutricional Quimiohetertrofa (aceptor S0) Qumioauttrofa (littrofa) Fotoauttrofo (bacteriorrodopsina) Fotoauttrofo anoxignico Fotohetertrofos Fotoauttrofos anoxignico Fotoauttrofo anoxignico Fotoauttrofo oxignico Quimioauttrofo (Litotrofo) Quimihetertrofo Quimiohetertrofos Quimiohetertrofos

Algas

Fotoauttrofos (oxignicos)

03. NUTRICIN MICROBIANA. 03.2 Obtencin de energa: reacciones red-ox, fosforilacin oxidativa, fosforilacin a nivel de sustrato y fotofosforilacin.

Nutrientes Ener ga
para el Anaboli desarr ollo

Productos de desecho

Metabolismo: Series de reacciones qumicas que realizan los seres vivos, mediadas en su mayora por las enzimas. Catabolismo: Anabolismo:

Energa
para el movimiento, transporte de nutrientes, etc.

smo

(Biosntesi s) Componentes celulares

Catab olismo Fuente de energa

Reacciones metablicas en las hay liberacin de energa, y se degradan las molculas, obtenindose metabolitos de bajo peso molecular

Reacciones metablicas donde se invierte energa y se forman metabolitos de mayor peso molecular a partir de molculas ms pequeas.

COMPONENTES Y FUNCIONALIDAD DE LAS ENZIMAS

FORMAS DE CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA CONTROL GENTICO CONTROL DIRECTO DE CATLISIS

q Activacin precursora: el sustrato activa la enzima de la ltima reaccin. q Induccin: Favorecer la sntesis de la enzima por la accin de un q Asociacin-disociacin: En metabolito. complejos multienzimticos. q Represin: Detener sntesis de la q Control de la energa de enzima por la accin de un enlace: por ATP. metabolito q Enzimas activadas: enzimas que actan sobre otras. q Inhibicin por retroalimentacin: los productos finales detienen la accin enzimtica

1.- INDUCCIN (control gentico)

no hay agente inductor

no hay ARN mensajero

no hay protena

ARN mensajero

agente inductor

protena

2.- REPRESIN (Control gentico)

ARN mensajero

protena

agente represor

no hay ARN mensajero

no hay protena

1.- ACTIVACIN PRECURSORA (Control directo de catlisis) Con A se activa Enzima 5

A A A A A

E1
B

E2 C

E3 D

E4 E

E5 F

Sin A la Enzima 5 se inactiva

E1

E2

E3

E4
E E

X
E5
E

2.- ASOCIACIN DISOCIACIN (Control directo de catlisis)

Protenas separadas

Protenas separadas

Complejo activo

3.- CONTROL DE LA ENERGA DE ENLACE (Control directo de catlisis)

SUSTRATO

+ ATP

E1

PRODUCTO

SUSTRATO

E1 NO HAY REACCIN SUSTRATO

4.- ENZIMAS ACTIVADAS (Control directo de catlisis)

activador PROTENA-1 PROTENA-2 PROTENA-3

ENZIMA-1
ENZIMA-2 ENZIMA-3

Sin activador PROTENA-1 PROTENA-2 PROTENA-3

5.- INHIBICIN POR RETROALIMENTACIN. (Control directo de catlisis) Sin acumularse F la Enzima 1 esta activa

E1

E2 C

E3

E4

E5

A
A A

F E1 X

Con acumulacin de F la Enzima 1 se inactiva

E2

E3

E4

E5

F
F

DG (1) H2 + Fumarato2(2) H2 + NO3(3) H2 + O2

succinato2- -88kJ -163kJ -237kJ

NO2- + H2O H2O

Fosforilacin en sistemas biolgicos para obtener energa. Es el proceso de generar ATP a partir de ADP y un fosfato.

ADP
Fosforilacin a nivel de sustrato, aquella en la que un fosfato presente en una molcula (sustrato fosforilado) es transferido al ADP.
P
ADP

ATP
Fotofosforilacin, funciona igual que la f. oxidativa, pero depende de la luz y las molculas aceptoras de fotones. Tambin se usa una fuerza motriz de protones. Luz

Fosforilacin oxidativa, se denomina as al proceso de generar ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico, mediante la fuerza motriz de protones creada a partir de compuestos qumicos. ATP sintetasa

Enzima
P

P ATP

+
ATP

+
ADP

ATP

ADP

FOTOSNTESIS Fase luminosa. a) Bacterias fotosintticas (rojas y verdes del azufre y no del azufre): fotosntesis anoxignica (no hay liberacin de oxgeno), bacterioclorofila, es un sistema cerrado por tener un sistema de fotosfosforilacin cclica.
Electrones Excitados (2 e-) Cadena de transporte de electrones Energa para produccin de ATP Acarreador de electrones

Luz
Bacterio clorofila Fotofosforilacin Cclica

Electrones Excitados (2 e-)

Cadena de transporte de electrones

b) Cianobacterias, algas y plantas: fotosntesis oxignica (se libera oxgeno), clorofila, es un sistema abierto donde el donador de electrones es el agua. Aqu se llama al sistema como fotofosforilacin no cclica.

Energa para produccin de ATP

Luz Clorofila

Fotofosforilacin No Cclica

Fase oscura En la fase oscura se sintetizan los compuestos de carbono para terminar de almacenar la energa luminosa en energa qumica, al usar el ATP formado en la fase luminosa, junto con el NADPH2.

FOTOSNTESIS DE ATP SIN USAR CLOROFILA Existen archaeas con la capacidad de producir ATP con la ayuda de la luz, usando molculas que absorben los fotones. No es del tipo de la clorofila. La bacteriorrodopsina, encargada de absorber la luz para crear una bomba de protones. Funcionan con la frecuencia del verde del espectro visible. Se nombran as porque se parece a la rodopsina de la retina.

Ejemplo de esto son los halfilos extremos como Halobacterium sp.

OBTENCIN DE ENERGA DE LOS QUIMIOHETERTROFOS

OBTENCIN DE ENERGA DE LOS QUIMIOHETERTROFOS Uso de Carbohidratos Va metablica Caractersticas

Va glucoltica de Embden-Meyerhof- Fosforilacin de la glucosa, Parnas formacin de una pentosa y ruptura para obtener compuestos de 3 carbonos. Piruvato. Degradacin de glucosa por la va Fosforilacin de la glucosa, apertura Entner-Doudoroff del anillo y formacin de grupo ceto, ruptura para obtener compuestos de tres carbonos. Piruvato. Va de la Hexosa monofosfato. Va de las Pentosas Obtencin de azcares de 5 carbonos por eliminacin de un C de la glucosa. Uso para otras vas.

Compuesto orgnico

Compuesto orgnico
Flujo de carbono

Flujo de electrones

Fuerza motriz de electrones

ATP

En aerobiosis O2 (aceptor final de electrones) En anaerobiosis pueden ser compuestos de carbono o inorgnicos

Biosntesis

Uso de otras molculas Estos microorganismos tambin pueden utilizar otras biomolculas como protenas, lpidos, bases nitrogenadas formando principalmente piruvato que entra a los procesos metablicos.

VA EMBDEN MEYERHOF PARNAS glucosa (6C) ATP ADP glucosa6P (6C) fructuosa6P (6C) ATP ADP

Va hexosa monofosfato

Glucgeno
fosfato de dihidroxiacetona (3C)

fructuosa1,6 P (6C)

+
gliceraldehdo3P (3C) NAD+ P NADH

fosfoenol piruvato (3C)

2-fosfoglicerato(3C)

3-fosfoglicerato(3C)

gliceraldehdo1,3 P (3C)

ATP
ADP ATP piruvato (3C)

ADP

Fermentaciones: propinica, butrica, acetona-butanol, butanodiol, homolcticas, alcohlica Ciclo de Krebs

Alanina, leucina, valina

VA ENTNER DOUDOROFF

Hexosa Monofosfato 6-fosfogluco nolactona (6C) 6-fosfoglu conato (6C)

glucosa (6C) ATP ADP

glucosa6P (6C) NADP

NADPH2 NADH 1,3-fosfo glicerato(3C)

ADP ATP

NAD+ gliceral dehdo1,3 P (3C) ADP

2-ceto-3-desoxi -6-fosfogluco nato (6C)

3-fosfoglicerato(3C)
2-fosfo glicerato (3C) Ciclo de Krebs

ATP piruvato (3C)

fosfoenol piruvato (3C)

Alanina, leucina, valina

Fermentaciones: propinica, butrica, acetona-butanol, butanodiol, homolcticas, alcohlica

VA DE LA HEXOSA MONOFOSFATO

REACCIONES NO OXIDATIVAS (REVERSIBLES)

ribulosa 5-fosfato (5C)

OBTENCIN DE ENERGA DE LOS QUIMIOAUTTROFOS Los microorganismos quimioauttrofos (littrofos) se presentan en muchas variedades. Hay los que utilizan compuestos de azufre (H2S), hidrgeno (H2) amoniaco (NH3) y otras sustancias para obtener la energa necesaria para su metabolismo. De manera general usan reacciones de xido reduccin de compuestos inorgnicos para generar el ATP, y posteriormente fijan el CO2 para producir sus compuestos de carbono. Esquema general del metabolismo de un quimioauttrofo:

Compuesto inorgnico

CO2 Flujo de carbono

Flujo de electrones

Fuerza motriz de electrones

ATP

En aerobiosis O2 (aceptor final de electrones) En anaerobiosis compuestos inorgnicos

Biosntesis

RESPIRACIN AEROBIA Y ANAEROBIA. FERMENTACIN. RESPIRACIN Proceso metablico en el cual la clula obtiene la energa de los compuestos qumicos, para generar ATP que ser utilizado en otros procesos metablicos. Respiracin aerobia: Uso del oxgeno como aceptor final de electrones, para liberar la energa de los compuestos de carbono, (u otros compuestos) Respiracin anaerobia: Uso de aceptores inorgnicos, aunque tambin orgnicos para obtener energa de los nutrientes

Fermentacin: Respiracin anaerobia en la que el aceptor final de electrones es un compuesto orgnico

Produccin de ATP en la respiracin aerbica de una clula procariote a partir de una molcula de glucosa. Fuente Gliclisis 1. Oxidacin de la glucosa a cido pirvico 2. Produccin de 2 NADH Paso preparatorio 1. La formacin de acetil coenzima A da 2NADH Ciclo de Krebs 1. Oxidacin de Succinil CoA a cido succnico 2. Produccin de 6NADH 3. Produccin de 2FADH ATP obtenido 2ATP (fosforilacin a nivel de sustrato) 6 ATP (fosforilacin oxidativa en la cadena de transporte de electrones) 6 ATP (fosforilacin oxidativa en la cadena de transporte de electrones) 2GTP (equivalente al ATP, fosforilacin a nivel de sustrato) 18 ATP (fosforilacin oxidativa en la cadena de transporte de electrones) 4 ATP (igual que el anterior)

RESPIRACIN AERBICA
gliclisis y ciclo de los ATC

glucosa

6 CO2

NAD
otros usos

NADH2

NAD FMP ATPasa

Sistema de transporte de electrones

O2 ATP

H2O

Espacio intermembranal H+ H+ H+

H+

Dentro de la membrana mitrocondrial

ATPasa sintetasa NADH deshidrogenasa Citocromo C reductasa Citocromo C oxidasa ADP MATRIZ ATP

RESPIRACIN ANAERBICA Sustrato: Aceptor inorgnico de electrones Productos finales Energa invertida Energa obtenida Energa neta Enlace a otras rutas Compuestos orgnicos (pueden ser azcares) o compuestos inorgnicos NO3-, SO42NO2-, SO32Segn ruta Segn ruta Segn ruta Productos finales a ninguna

Respiracin anaerbica con un sustrato orgnico y un aceptor inorgnico para generar ATP
GLUCOSA 12 NO3-

12 NO2-

ATP e intermediarios para otras rutas

6CO2 + 6H2O

Ejemplo de respiracin anaerbica usando sustratos inorgnicos y aceptores inorgnicos para generar ATP

5NH4+ + 3NO3-

4N2 + 9H2O + 2H+

(Este se usa en la produccin de ATP)

FERMENTACIONES

Sustrato:
Intermediarios importantes: Productos finales (El aceptor es un compuesto orgnico)

Glucosa o azcares
piruvato (otros segn ruta) cido lctico 2,3-butanodiol cido frmico cido actico acetona isopropanol cido butrico butanol Segn ruta Segn ruta Segn ruta Productos finales a ninguna

Energa invertida Energa obtenida Energa neta Enlace a otras rutas

03. NUTRICIN MICROBIANA. 03.3 Asimilacin y uso del carbono.

USO DEL NITRGENO SEGN EL TIPO DE MICROORGANISMOS

Tipo de microorganismo

Fijacin de nitrgeno

Asimilacin de amoniaco

Transaminacin

Fijador de Nitrgeno

Si

Si

Si

No fijador que usa nitrgeno inorgnico

No

Si

Si

No fijador que usa nitrgeno orgnico exclusivamente

No

No

Si

SNTESIS DE AMINOCIDOS. Asimilacin del nitrgeno inorgnico y transaminacin. COO COO

NH3

C O CH2 CH2 COO

NADH

H C NH2 CH2 + H2O

Glutamato deshidrogenasa

CH2

COO

-cetoglutarato

Glutamato

a) Asimilacin de amoniaco en glutamato, catalizado por la glutamato deshidrogenasa COO H C NH2 CH2 CH2 COO glutamato + COO C O CH2 COO oxaloacetato COO C O + CH2 CH2 COO -cetoglutarato COO H C NH2 CH2 COO aspartato

b) Transaminacin de grupo amino en glutamato, catalizado por la glutamato deshidrogenasa

SNTESIS DE AMINOCIDOS. Asimilacin del nitrgeno inorgnico y transaminacin. Continuacin.

-cetoglutarato + aspartato NH3 + -cetoglutarato transaminasa glutamato + oxaloacetato

glutamato deshidrogenasa

c) Ciclo de asimilacin de amoniaco por accin combinada de la glutamato deshidrogenasa y transaminasa

Otra ruta importante es la sntesis de cidos grasos, que pueden ser utilizados como material de reserva alimenticia o para membranas
Sntesis de cidos grasos. Metabolismo.
Acetil-CoA Biotina ADP+Pi Malonil-CoA Sntesis de Malonil-ACP Acetil-CoA ACP CoA Acetil-ACP CO2 12C + 2C 14C + 2C ACP CoA Malonil-ACP Sntesis de acetil-ACP, este grupo acetilo representa el puinto terminal de los cidos grasos Elongacin paso a paso de una cadena de cido graso (palmitato) 16C + 2C + CO2 ATP

ACP

Sntesis de acetoacetil-ACP

Acetoacetil-ACP 2 NADPH H2O 2 NADP+ Butiril-ACP 4C + 2C 6C + 2C

10C + 2C

Reduccin de butiril-ACP (tres pasos separados)

8C + 2C

INTERMEDIARIOS IMPORTANTES EN EL METABOLISMO DE LA CLULA

Hetertrofos
CO2 Glucosa 1-fosfato Glucosa 6-fosfato Ribosa 5-fosfato Eritrosa 4-fosfato Fosfoenolpiruvato Piruvato 3-fosfoglicerato a-cetoglutarato Succinil-CoA Oxalacetato Dihidroxiacetonafosfato Acertil-CoA

Compuestos orgnicos NH3, NO3-, N orgnico

Polisacridos

Carbohidratos cidos orgnicos Otros cofactores

Aminocidos

Protenas

Lpidos

Nucletidos

cidos nuclicos

Vitaminas

CO2 Auttrofos

RESUMEN GENERAL DEL METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y OTRAS BIOMOLCULAS.

METABOLITOS PRIMARIOS Y METABOLITOS SECUNDARIOS Para estudio del metabolismo de los seres vivos es posible separar los metabolitos (sustancias orgnicas intermedias o finales del metabolismo) en primarios y secundarios

Metabolito primario: es aquel que se produce desde las primeras etapas del crecimiento, y se considera que son importantes para vida del microorganismo. Si los genes que codifican las enzimas para su sntesis el microorganismo puede morir o resultar severamente daado. Un ejemplo es el cido pirvico.
Metabolito secundario: se considera a aquella sustancia que se obtiene en las etapas posteriores del desarrollo microbiano, cuando la poblacin ya tiene cierta edad y puede disponer de recursos para sintetizarlos. En caso de que pierda la informacin gentica para su sntesis la clula no muere, aunque pierde una ventaja. Un ejemplo es la produccin de antibiticos.

03. NUTRICIN MICROBIANA. 03.4 Medios de cultivo: clasificacin, diseo y aplicaciones.

MEDIOS DE CULTIVO
Mezcla de agua con sustancias orgnicas y/o inorgnicas que permiten el desarrollo de los microorganismos in vitro

El propsito de los medios de cultivo es proporcionar los nutrientes necesarios para que el microorganismo pueda crecer y reproducirse en el laboratorio, con diversos fines como investigacin, identificacin, diagnsticos o produccin
Pueden clasificarse por su composicin, estado fsico, aplicacin o uso.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO POR COMPOSICIN

Sintticos

Glucosa QP Naturales o complejos Agar Papa: Mezcla de protenas, aminocidos, carbohidratos, lpidos, sales minerales, etc. Agar Sangre: Al medio base se agrega sangre de carnero.

NH4Cl

NaCl

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO POR ESTADO FSICO Lquidos Semislidos Slidos

Agentes gelificantes Agar-agar (Carbohidrato) Grenetina (Protena) Slica Gel (SiO 2)

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO POR APLICACIN Selectivos EMB, Endo MSA, Cetrimida, Agar Verde Brillante De enriquecimiento Stuart, Agar 110 Enriquecidos Agar Sangre, Agar Chocolate, Agar Cerebro Corazn Diferenciales EMB, Cuantificacin de microorganismos Agar Papa Dextrosa, Agar Cerebro Corazn, Agar dextrosa y triptona De valoracin (base) Agar Muller Hilton, Para caracterizacin Bioqumicas (Caldo triptona, Medio SIM, Agar Almidn, Medio O/F) De mantenimiento Leche Descremada

COMPOSICIN QUMICA DE UNA CLULA PROCARITICA. (NECESIDADES NUTRICIONALES DEL MEDIO DE CULTIVO)
Molcula MACROMOLCULAS: Protenas 55 2,350,000 ~1850 % peso seco Molculas por clula Clases diferentes

Polisacridos
Lpidos ADN ARN Total de molculas MONOMEROS:

5
9.1 3.1 20.5 96

4,300
22,000,000 2.1 255,500 24,610,000

2
4 1 ~600 ~2500

Aminocidos y precursores
Azcares y precursores Nucletidos y precursores Total de monmeros Iones inorgnicos

0.5
2 0.5 3.5 1

-----------

~100
~50 ~200 ~350 18

EJEMPLO DE REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES EN MEDIOS DE CULTIVO

Bacteria

Escherichia coli

Salmonella Typhi

Proteus vulgaris

Staphylococcus aureus

Lactobacillus acidophilus

Sales Inorgnicas
Carbono orgnico Nitrgeno inorgnico un aminocido dos o ms aminocidos una vitamina dos o ms vitaminas

Si
Si Si

Si
Si Si Si

Si
Si Si Si

Si
Si Si

Si
Si Si

Si Si Si

Si

Si

SUSTANCIAS COMNMENTE EMPLEADAS EN MEDIOS DE CULTIVO

Elemento Carbono (C) Hidrgeno (H) Oxgeno (O) Nitrgeno (N) Forma habitual en que se encuentra CO2, compuestos orgnicos H2O, compuestos orgnicos H2O, O2, compuestos orgnicos NH3, NO3-, NO2-, compuestos orgnicos nitrogenados PO43H2S, S2-, SO42compuestos orgnicos azufrados K+ Mg2+ Na+ Ca2+ Fe2+ o Fe3+, o FeS Forma utilizada en medios de cultivo Glucosa, malato, acetato, piruvato, peptonas, lpidos H2O, compuestos orgnicos H2O, O2, compuestos orgnicos Inorgnicos: NH4Cl, (NH4)2SO4, KNO3, N2 Orgnicos: aminocidos bases nitrogenadas, otros compuestos orgnicos con N KH2PO4, Na2HPO4 Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, compuestos orgnicos azufrados KCl, KH2PO4 MgCl2, MgSO4 NaCl CaCl2 FeCl3, FeSO4, soluciones de Fe con EDTA

Fsforo (P) Azufre (S)

Potasio (K) Magnesio (Mg) Sodio (Na) Calcio (Ca)

Hierro (Fe)

MEDIO PARA EL CULTIVO DE LACTOBACILOS

Casena hidrolizada
Glucosa Solucin A Solucin B

5 g Uracilo
10 g Riboflavina 10 mL Tiamina 5 mL Pantotenato

10 mg
500 g 500 g 500 g

L-Asparagina
L-Triptfano L-Cistina DL-Metionina

250 mL Niacina
50 mg Piridoxamina 100 mg Piridoxal 100 mg Piridoxina

500 g
200 g 100 g 200 g

Cistena
Citrato de amonio Acetato de sodio (anhidro) Adenina

100 mg Inositol
2 g Colina 6 g c. paraaminobenzoico 10 mg Biotina

10 m
10 m 200 g 5 g

Guanina
Xentina

10 mg cido flico (sinttico)

10 mg Agua destilada

3 g
1000 mL

Solucin A. K2HP04 y KH2PO4, 25 g de cada una, en agua destilada hasta completar 250 mL. Solucin B. FeS04 7H20, 0.5g; MnS04 2H20, 2.0g; NaCI, 0.5 g; y MgSO4 7H20, 10 g. Disolver en agua destilada hasta un volumen de 250 mL

MEDIO PARA EL CULTIVO DE Escherichia coli Medio sinttico

NH4H2P04 Glucosa NaCI MgS04 7H20 K2HP04 H20 destilada 1g 5g 5g 0.2 g 1g 1000 mL

Caldo nutritivo (Permite el crecimiento de varios microorganismos incluida Escherichia coli) Medio natural o complejo
Extracto de carne
Peptona de carne H20 destilada

3g
5g 1000 mL

DISEO DE MEDIOS DE CULTIVO

Es el desarrollo de nuevos medios de cultivo para los microorganismos y se basa en las caractersticas nutricionales y bioqumicas de los microorganismos a estudiar.

En funcin de estas caractersticas se proponen las fuentes de energa, carbono, nitrgeno, oligonutrientes, factores de crecimiento, pH y otros parmetros.
Posteriormente se estandariza ya sea para utilizarse en investigacin o para su uso comercial.

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Es la elaboracin de un medio de cultivo, que ya ha sido desarrollado y simplemente se siguen las indicaciones del fabricante o del investigador. Se agrega la cantidad sealada en la formulacin y se aade la cantidad de agua indicada. Se ajusta el pH y otras caractersticas para tener el medio de cultivo listo para utilizarse.

03) METABOLISMO 03.5) CARACTERIZACION DE LA ACTIVIDAD METABLICA MICROBIANA. La actividad metablica de los microorganismos esta definida por factores genticos y ambientales. Factores genticos: La informacin presente en el material gentico permitir la produccin de diferentes enzimas que utilizar en su metabolismo. Por lo tanto las rutas metablicas estn definidas por las enzimas que produzca el microorganismo. Si el microorganismo no tiene los genes no produce las enzimas, por ejemplo: Bacillus subtilis tiene el gen que codifica para la amilasa, una enzima que degrada el almidn, por lo que B. subtilis puede usar frutas y alimentos ricos en almidn como fuente de carbono.

Si no hay almidn presente, no se sintetizar la enzima y se pondrn de manifiesto otro tipo de enzimas tiles al microorganismo. A diferencia de Escherichia coli, quien no cuenta con el gen de la amilasa y no importa las condiciones en que se coloque, nunca expresar esta enzima.

Factores ambientales: las condiciones ambientales tambin tienen importancia en el metabolismo, ya que el entorno en que se encuentran los microorganismos podr incidir en las vas metablicas que utilice.

El catabolismo y el anabolismo pueden presentar diversas vas que pueden ser tiles para caracterizar a los microorganismos.
Por ejemplo, las vas necesarias para el uso del nitrgeno

Los microorganismos fijadores de nitrgeno tienen las enzimas para convertir el N2 atmosfrico en nitrgeno inorgnico (por ejemplo NH4+)
Despus de este paso el mismo microorganismo u otros organismos que cuenten con una enzima podrn asimilar el nitrgeno inorgnico y convertirlo en nitrgeno orgnico, al tomar un radical amonio e incorporarlo a un esqueleto de -cetocido. Un ltimo proceso que pueden presentar la mayora de los seres vivos es la transaminacin, que consiste en pasar el grupo amino de un aminocido a un -cetocido.

FUNCIONALIDAD ENZIMTICA DENTRO Y FUERA DE LA CLULA

Las enzimas se encuentran en el interior de la clula y las sustancias son transportadas a travs de la membrana por enzimas de transporte. Algunos autores llaman a estas enzimas y a otras de la membrana Ectoenzimas. La sustancia es el sustrato de las vas metablicas propias de cada microorganismo. Estas enzimas se pueden denominar como Endoenzimas.

Sustancia Metabolismo (endoenzimas) Desechos

Sustancia De bajo peso molecular

Desechos

Hay enzimas que se excretan al exterior para degradar los sustratos y las molculas ms pequeas sean transportadas a travs de la membrana para que continen su proceso en una va metablica. Estas enzimas se conocen como exoenzimas.

Monmero Metabolismo (endoenzimas) Desechos Precursores

enzimticos

Monmero Desechos

Polmero + Exoenzima

Mecanismo del sistema Sec 1) La protena chaperona SecB se une a una preprotena naciente en el citosol, estabilizando su conformacin no plegada. 2) El complejo SecB-preprotena es dirigido hacia la translocasa SecYEG unida a SecA (3a). 3) El complejo SecB-preprotena se asocia a la protena SecA y se dirige a SecYEG en la MI (3b). 4) Se une la secuencia seal a SecA, lo cual estabiliza la interaccin SecB-SecA. 5) La preprotena se transfiere a SecA. La unin de ATP por SecA promueve el inicio de la translocacin y la liberacin de SecB del complejo ternario. La regin amino terminal del pptido lder se ancla a la membrana y permite el paso de la protena a travs del translocn.

PRUEBAS BIOQUMICAS Por la diversidad del metabolismo que pueden presentar los microorganismos, es posible caracterizarlos en funcin de las enzimas que pueden sintetizar. Para esto se han desarrollado las pruebas bioqumica, que son determinaciones in vitro de la presencia o ausencia de enzimas. De acuerdo a las enzimas detectadas es posible establecer que especie de microorganismo tenemos. Por ejemplo: Amilasa. En esta prueba bioqumica se pone como sustrato al almidn, y los microorganismos que tengan la capacidad de sintetizar la amilasa podrn degradarlo y utilizar la glucosa como fuente de carbono. Si el microorganismo no tiene el gen de la amilasa, no podr degradar el almidn y la prueba lo indicar.

Oxidacin fermentacin. Esta prueba se hace por duplicado, sellando un tubo con parafina o aceite mineral para crear condiciones de anaerobiosis y el otro tubo se deja sin sello para que el oxgeno pueda penetrar en el medio, por lo que se dan condiciones de aerobiosis. El carbohidrato puede ser glucosa.

El resultado se obtiene de la siguiente forma:

Tubo con sello

Tubo sin sello

aerobio estricto

Sin vire (verde)

medio cido (amarillo) medio cido (amarillo)

medio cido (amarillo)

Sin vire (verde) medio cido (amarillo)

anaerobio estricto

facultativo

Lectura de la prueba Inoculacin de la bioqumica

Aislamiento

Prueba postitiva incubar (tiempo y temperatura)

colonia pura

Prueba negativa

Prueba de pureza (Gram)

sustrato

sustrato + enzima

producto

la accin enzimtica se pone de manifiesto con un indicador, que generalmente reacciona con el producto, siendo visible a simple vista

sustrato

sustrato

sustrato

cuando el microorganismo no cuenta con la enzima, no hay cambio sobre el sustrato, por lo tanto el producto no interacciona con el indicador

Prueba de la amilasa Medio: Agar almidn Enzima: Amilasa Sustrato: Almidn Reactivo revelador o indicador: Lugol Prueba positiva: Halo incoloro o rojizo Prueba negativa: Sin halo, color azul

Prueba de Oxidacin Fermentacin Medio: O/F (Hugh y Leifson) Enzima: Varias (ruta metablica) Sustrato: Glucosa (u otro carbohidrato) Reactivo revelador o indicador: Azul de bromotimol Prueba positiva: Vire amarillo Prueba negativa: Sin cambio

Prueba del Rojo de Metilo para acidez Medio: Caldo RM/VP Enzima: Varias (ruta metablica) Sustrato: Glucosa Reactivo revelador o indicador: Rojo de Metilo Prueba positiva: Color rojo Prueba negativa: Amarillo o sin cambio

Prueba de Voges Proskauer para acetona Medio: Caldo RM/VP Enzima: Varias (ruta metablica) Sustrato: Glucosa Reactivo revelador o indicador: -naftol + KOH Prueba positiva: Color rojo Prueba negativa: Amarillo o sin cambio

Prueba del utilizacin de carbohidratos Medio: Caldo Rojo de Fenol + lactosa Enzima: Varias (ruta metablica) Sustrato: Lactosa (Se pueden variar los carbohidratos) Reactivo revelador o indicador: Rojo de Fenol Prueba positiva: Vire amarillo Prueba negativa: Sin cambio de color o rosa mexicano

Prueba del Indol Medio: Caldo Triptona Enzima: Triptofanasa Sustrato: Triptofano Reactivo revelador o indicador: Kovacs o Erlich Prueba positiva: Anillo magenta en la interfase Prueba negativa: Sin desarrollo de color, el reactivo se ve amarillo

Prueba de reduccin de nitratos Medio: Caldo nitrato Enzima: Varias (ruta metablica) Sustrato: Nitrato de sodio Reactivo revelador o indicador: Reactivos A y B de Griess Prueba positiva: Rojo sin ZInc, Amarillo con Zinc Prueba negativa: Amarillo sin Zinc, Rojo con Zinc

Prueba de la hidrlisis de lecitina Medio: Agar yema de huevo Enzima: Lecitinasa Sustrato: Lecitina Reactivo revelador o indicador: La misma lecitina Prueba positiva: Precipitado en el medio Prueba negativa: Sin cambio en el medio