Preparacindetejidos11a 120801210015 Phpapp01

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Introduccin a la Histologa
!Definir que es un tejido celular.
!Enumerar los diferentes tipos de tejidos y su clasificacin.
!Describir los diferentes pasos del procesamiento histolgico para
microscopa ptica y electrnica.
!Identificar el colorante y tcnica apropiados para la demostracin
de un tejido o estructura celular especficos.
!Identificar, a partir de imgenes, secciones teidas con tinciones
topogrficas, histoqumicas, inmunocitoqumicas,
inmunofluorescencia, micrografas electrnicas de transmisin y
de barrido.
Concepto de Tejido
Los tejidos son agrupaciones funcionales de clulas
Conjunto de clulas ordenadas en una formacin
regular.
Entramado, fisiolgicamente til al organismo,
constituido por clulas especializadas morfolgica y
funcionalmente.
....
Bernardo Castellano. Histologia Mdica. UAB. 2006
2
Concepto de Histologa
Trmino procedende del griego "histos" que significa tejido de
telar y "logos" que significa estudio o aprendizaje. Histologa
puede definirse como el estudio de los tejidos
Histologa: Ciencia que estudia la estructura, la organizacin,
la funcin y la capacidad de respuesta de los tejidos
Histologa: Ciencia que estudia los entramados celulares,
fisiolgicamente tiles para el organismo, que estn constitudos
por clulas especializades morfolgica y funcionalmente
Histologa general: Rama de la Histologa que comprende la Citologa y el
estudio de los tejido bicos.
Histologa especial: Rama de la Histologa que comprende el estudio
microscpico de rganos y sistemas.
Tejidos fundamentales
Clasificacin
Tejidos epiteliales
epitelios de revestimiento
epitelios glandulares
Tejidos conectivos
conjuntivo
sanguneo
adiposo
cartilaginoso
seo
Tejidos musculares
muscular liso
muscular esqueltico
muscular cardiaco
Tejido nervioso
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Clasificacin
Tejidos epiteliales
Tejidos conectivos
conjuntivo
sanguneo
adiposo
cartilaginoso
seo
Tejidos musculares
muscular liso
muscular esqueltico
muscular cardiaco
Tejido nervioso
Clasificacin
Tejidos epiteliales
Tejidos conectivos
conjuntivo
sanguneo
adiposo
cartilaginoso
seo
Tejidos musculares
muscular liso
muscular esqueltico
muscular cardiaco
Tejido nervioso
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Clasificacin
Tejidos epiteliales
Tejidos conectivos
conjuntivo
sanguneo
adiposo
cartilaginoso
seo
Tejidos musculares
muscular liso
muscular esqueltico
muscular cardiaco
Tejido nervioso
Clasificacin
Tejidos epiteliales
Tejidos conectivos
conjuntivo
sanguneo
adiposo
cartilaginoso
seo
Tejidos musculares
muscular liso
muscular esqueltico
muscular cardiaco
Tejido nervioso
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Procesamiento histolgico para
microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
Observacin al microscopio
Obtencin de microfotografas
Fijacin
Preservar el tejido de la putrefaccin, autolisis, etc...
Endurecer el tejido para permetir su manipulacin y
evitar alteraciones morfolgicas.
Mantenimiento de la citoarquitectura y ultraestructura.
Mantenimiento in situ de las molculas
(Importante para determinaciones histoenzimticas e inmunocitoqumicas)
Fijadores: aldehidos, alcohol, mercurio, cido pcrico
Formol: formaldehido +metanol
Parafolmadehido +tampn fosfato
Bouin: cido pcrico +formol +cido actico
http://www.bris.ac.uk/depts/PathAndMicro/tutorials/sam/samples.html
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Mtodos de Fijacin
Fijacin por inmersin
10 volmenes de fijador
Tiempo: 4-24 horas
Fijacin por perfusin
Perfusin: 10 minutos
Postfijacin por inmersin: 4-24 horas
microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
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Inclusin en parafina
Infiltracin
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Confeccin de bloques
microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
9
Microtomo de parafina
10
11
12
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Obtencin de secciones o cortes
histolgicos
Cortes de parafina 510 !m (Microtomo de parafina)
Cortes por congelacin: 5-30 !m (Criostato)
Cortes vibratomicos 30-50 !m (Vibratomo)
Cortes semifinos: 1-2 !m (Ultramicrotomo)
Cortes ultrafinos: 300-700 (Ultramicrotomo)
Grosor de los cortes
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Grosor de los cortes
microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
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Tinciones histolgicas
Tcnicas topogrficas
Tcnicas especficas
Tcnicas histoqumicas
Tcnicas inmunocitoqumicas
Tinciones
Tinciones topogrficas: basadas en la interaccin de
sustancias colorantes con las estructuras celulares y tisulares.
Colorantes inicos cidos: Tienen afinidad por estructuras
tisulares con carga positiva
Colorantes inicos bsics: Tienen afinidad por estructuras
tisulares con carga negativa
Ejemplo: Tincin Hematoxilina-Eosina
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Tincin de Hematoxilina-Eosina
Hematoxilina
Colorante inico bsico (carga positiva)
Tie estructuras con carga negativa
Ncleos de color azul
(basfilos)
Eosina
Colorante inico cido (carga negativa)
Tie estructuras con carga positiva
Citoplasmas de color rosado
(esosinfilos)
Tcnica de tincin
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Tinciones. Mtodo
Tinciones. Mtodo
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microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
Montaje de las preparaciones
Para observar con el microscopio ptico los cortes teidos se
procede a montar las preparaciones utilizando una sustancia
cementante (medio de montaje) y un cubreobjetos.
El medio de montaje facilita la observacin y si se trata de un
medio de montaje permanente estabiliza la coloracin
histolgica durante mucho tiempo.
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microscopa ptica
Fijacin
Inclusin
Obtencin de cortes
Tincin
Montaje permanente
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Tcnicas topogrficas
Tcnicas especficas
Tcnicas histolgicas especficas
Tcnicas para el tejido conjuntivo: tricrmico
de Masson, van Gieson
Glucgeno: carmin de Best
Mucinas: azul alcian, mucicarmn
Lpidos: oil red O, negro sudn B, OsO4
cidos nucleicos: naranja de acridina, verde
de metilo-pironina
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Tricrmico de Masson
Van Gieson
Tejido conjuntivo
Mucinas
Azul Alcin
Mucicarmin
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Oil red O
Lpidos
Oil red O
Oil red O
cidos nucleicos
Naranja de acridina
Verde de metilo - pironina
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Tcnicas topogrficas
Tcnicas especficas
PAS (cido peridico de Shiff): deteccin de carbohidratos
cido periodico que acta sobre los carbohidratos produciendo la formacin
de grupos aldehidos que son los que reaccionan con el colorante
Lectinas: deteccin de residuos glucosilados
Lectinas biotinadas. Tripsina o neuraminidasa para exponer los residuos
escondidos. Avidina peroxidasa. Revelado con DAB
Reaccin de Feulgen: deteccin de ADN
Hidrlisis de la unin purina-deoxirribosa con HCl para formar aldheidos
que reaccionan con el colorante
Tcnicas histoenzimticas: deteccin de protenas enzimticas
Implican una reaccin qumica: transformacin de un
producto en otro diferente con caractersticas
diferenciables
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PAS
Azul Alcian / PAS
Deteccin histoqumica de carbohidratos
Deteccin histoqumica de ADN
Feulgen
Feulgen
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Deteccin histoqumica de residuos
glucosilados
Lectina de tomate
Revelado de la peroxidasa
H2O2
H2O 1/2 O2
+
DAB
DAB-O
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Tcnicas histoenzimticas
Deteccin de una fosfatasa: NDPasa
ADP P + AMP
Nitrato Pb
Fosfato de Pb
Sulfuro de Pb
NDPasa
Sulfuro amonio
NDPasa
Tcnicas topogrficas
Tcnicas especficas
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Se basan en el empleo de anticuerpos dirigidos
hacia epitopos (grupos con caractersticas
antignicas) concretos de molculas
Los anticuerpos son proteinas sricas
(inmunoglobulinas) sintetizadas por las clulas
plasmticas, derivadas de los linfocitos B activados
tras reconocer un antgeno extrao (inmungeno).
Usualmente se utilizan IgG o IgM
Anticuerpos policlonales: conjunto de anticuerpos especficos para un
inmungeno (diferentes epitopos)
Anticuerpos monoclonales: especficos de un epitopo nico de un
inmungeno
Anticuerpos
Policlonales Monoclonales
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Deteccin inmunocitoqumica de GFAP
Biotina
Avidina
Peroxidasa
Ab1
Ab2
Antigeno
Golgi
Astrocitos
GFAP
GFAP: Glial fibrilar acidic protein
TNF-alfa macrfagos Melanoma, TGF-alfa
Ndulo linfoide, Ki-67 Pncreas, insulina
Tinciones inmunocitoqumicas
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BL6 nuclear PNA citoplasmatico
Dobles mardados
Inmunofluorescencia
Molcula
fluorescente
GFAP
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Microscopio de Fluorescencia
Preparacin
Filtro barrera
Espejo dicroico
Filtro excitacin
Inmunofluorescencia: dobles marcados
GFAP
HSP47
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por inmunofluorescencia
por inmunofluorescencia
Aparato de Golgi
Microtbulos
Ncleo
Cultivo de clulas renales Cultivo de clulas Hella
Tubulina
Actina
Ncleo
Cultivo clulas musculares lisas
A-SM Actina
b-NM Actina
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Microscopa Electrnica de Transmisin
Fijacin: glutaraldehido, paraformaldehido, tetrxido
de osmio
Deshidratacin
Inclusin en resinas epoxi
Ultramicrotoma: secciones
ultrafinas
Montaje sobre rejillas
Contraste de las rejillas
con metales pesados
(citrato de plomo)
Microscopa
Electrnica de
Transmisin
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Microscopa Electrnica de barrido
(Scanning)
Fijacin: glutaraldehido, paraformaldehido, tetrxido
de osmio
Deshidratacin
Desecacin por unto crtico
Sombreado con oro
http://www.mos.org/sln/sem/seminfo.html

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