Departamento de Ciencias Bsicas Laboratorio Bioqumica

ENZIMAS DIGESTIVAS: AMILISA Y LIPASA PANCREATICA

Autores: Avalos Snchez, Liz Neira Soto, Fabian Poblete Seplveda, Javiera Vlame Vasquez, Victor Docente: Soto Fuentes, Rubn Seccin: 1.2 Fecha de Inicio: 10-09-2013

Fecha de Trmino: 26-09-2013

OBJETIVOS Comprobar la influencia de la concentracin enzima sobre la actividad de la enzima amilasa salival humana. Estudiar la cintica de la enzima amilasa salival humana sobre el almidn a una determinada temperatura.

RESULTADOS

1. OBTENCIN DE LA CANTIDAD DE -AMILASA SALIVAL.

Tabla 1 Tubos Resultados A 5 B

Resultados de la obtencin de - amilasa C 4 3 D 2 E 1

*(1=mayor digestin; 6= menor digestin) REPORTE(S): Los resultados de la accin de la enzima amilasa salival sobre el substrato almidn se han numerado de 1 a 5, donde 1 representa la mayor digestin de almidn y 5 representa la nula digestin de almidn. El tubo E muestra la mayor digestin mientras que el tubo A no presenta digestin del almidn, debido que se encuentra en un estado inicial.

2. SEGUIMIENTO DE LA CINTICA DE DESAPARICIN DE ALMIDN Y LA APARICIN DE AZCARES REDUCTORES.

Tabla 2 Tubo Benedict 1 A B C D E F Benedict 2

Seguimiento de la digestin del almidn Reaccin Menor digestin 6 5 4 3 2 1 Mayor digestin

*(1=menor coloracin; 6= mayor coloracin)

REPORTE(S): En la tabla nmero 2 se presentan los resultados de la prueba de la cintica de digestin del almidn donde los tubos de A a B estn ordenados desde el tiempo 0 en adelante. Los resultados estn representados en una escala del 1 al 6, donde la valoracin 1 posee menor cantidad de almidn, y 6 representa mayor cantidad de almidn presente. En el primer tubo de Benedict se observa una poca degradacin de almidn mientras que en el Benedict 2 presenta la mayor digestin.

DISCUSIN Las enzimas son protenas que tienen la funcin de acelerar reacciones qumicas en sistemas biolgicos. Muchas reacciones necesarias para las clulas vivas no se produciran con la suficiente rapidez a la temperatura y pH del cuerpo sin las enzimas () Las enzimas son catalizadores que incrementan la velocidad de la reaccin qumica pero sin cambiar el mismo durante el proceso () Dos caractersticas importantes de la catlisis enzimtica son que la enzima no se modifica como resultado de la misma y que ste no modifica la Keq de la reaccin, si no que incrementa sencillamente la velocidad a la que la reaccin se aproxima al equilibrio. (Devlin, 2004) Es importante conocer la cintica qumica bsica y la manera de afrontar los principios cinticos a las reacciones catalizadoras, la cintica es el estudio e la velocidad de cambios de reactivo a producto. La velocidad se expresa en trminos del cambio en la concentracin de substrato o producto por unidad de tiempo, mientras que la tasa se refiere a cambios en la cantidad total (mol o gramos) en unidad de tiempo (Devlin, 2004) Los catalizadores biolgicos se reconocieron y fueron descritos por primera vez a finales del siglo XVIII en estudios sobre la digestin de la carne por secreciones de estmago, la investigacin continu examinando la conversin del almidn en azcar por saliva y diversos extract os vegetales. (Lenhinger, 2001). En la actividad se intenta demostrar el poder enzimtico de la enzima amilasa salival anteriormente obtenida por filtracin de una muestra de saliva, sobre diferentes muestras de almidn. En teora, en los animales superiores la digestin del almidn se inicia en la boca. L a saliva, principalmente aquella producida por la partida, contiene una enzima, la amilasa salival, llamada tambin ptialina. Esta es capaz de actuar sobre los almidones y sobre glucgeno, rompiendo los enlaces alfa 1-4 de tal forma que se separan de dos en dos los fragmentos de la molcula polimrica, las molculas que resultan entonces, son del disacrido maltosa (Pea, 1988). Las reacciones con otros substratos alternativos tienden a efectuarse si ellos se encuentran en altas concentraciones. Que todas las reacciones posibles ocurran en el organismo vivo dependen de la concentracin relativa de substratos alternativos en las clulas y de la afinidad relativa de las enzimas para esos substratos (Murray, 1997). La actividad 1 se relaciona con lo anteriormente expuesto que hace referencia al efecto fisiolgico de las variaciones de la Km de una enzima (concentracin de substrato). En la actividad la enzima

amilasa salival muestra su mayor poder de reaccin en los casos donde la cantidad de enzima era muy elevada de manera que el substrato, almidn, se consuma rpidamente. Contrariamente, en los casos donde la cantidad de enzima amilasa era menor, se registraba una escasa digestin del mismo. El yodo es utilizado para reconocer la presencia de almidn y muestra una coloracin azul o violeta cuando es positiva. Por esta razn es utilizado para diversos fines, como por ejemplo el siguiente: La base de la prueba de yodo del almidn consiste en que e l almidn acumulado por las frutas durante el crecimiento y maduracin se convierte en azcar a medida que la fruta madura. El proceso de degradacin del almidn o del grado relativo de hidrlisis o de la conversin del almidn en azcar puede ser evaluado visualmente coloreando secciones transversales de frutas con el yoduro de yodo-potasio (Dadzie, Orchard, 1997). De la cita anterior adems se puede concluir que la amilasa salival acta degradando al almidn por medio de una hidrlisis: Todos los polisacridos son hidrolizados en sus constituyentes monosacridos por la accin de cidos diluidos. Como el almidn es un polmero de la alfa D- Glucosa, es de esperar que por hidrlisis completa se obtenga D- Glucosa como producto final. Esta hidrlisis se puede llevar a cabo en forma enzimtica, utilizando alfa- amilasas y beta- amilasas o por la accin de la amilasa presente en la saliva. La hidrlisis del almidn sucede en varias etapas; primero se obtiene las dextrinas (polisacridos de menor masa molecular), luego la maltosa y por ltimo la glucosa. Esta hidrlisis se puede demostrar de dos maneras diferentes: Por la desaparicin del color azul caracterstico de la prueba de yodo- yoduro. Por la aparicin de D- Glucosa, un azcar reductor, el cual puede ser detectado con los reactivos de Benedict, Feling y otros (Bolaos, 2003) Entonces es posible afirmar que la enzima amilasa salival es una enzima de tipo 3- hidrolasa ya que acta por medio del rompimiento de enlaces con agua como lo dice el nombre. Adems de la utilizacin de tubos con almidn y con diferentes cantidades de enzima, se utiliz un tubo extra que no contena enzima. La razn es que este tubo se utilizaba de manera de comparar cualitativamente con los otros tubos cmo sera la reaccin del yodo con el almidn y as tener una idea del color producido por el complejo yodo- almidn.

Otro punto a destacar es la importancia de que esta reaccin se realiz bajo una temperatura de 37 C. En condiciones biolgicas, las reacciones no catalizadas tienden a ser lentas. La mayora de las molculas biolgicas son muy estables a pH neutro, la temperatura suave y el ambiente acuoso, todos presentes en el interior de las clulas (Nelson, 2001). Es por ello que se utiliz una temperatura de 37 C ya que sta es la temperatura corporal ptima a la que la enzima amilasa salival trabaja normalmente. Anteriormente, se nombra en una cita la utilizacin del reactivo Benedict para el reconocimiento de; en este caso, azcares pequeos obtenidos de la hidrlisis del almidn. Su modo de actuar es el siguiente; El test Benedict es un test bioqumico que permite detectar la presencia de azcares reductores en solucin. Fue desarrollado por el qumico norteamericano S. R. Benedict (1884- 1936). El llamado reactivo de Benedict mezcla de sulfato de cobre y una mezcla filtrada de citrato sdico hidratado- se aade a la mezcla problema y se hierve. Si en la solucin problema existe una alta concentracin de azcares reductores aparece un precipitado rojo; una concentracin menor provoca la aparicin de un precipitado amarillo (Martnez, 1999). Por las propiedades anteriormente mencionadas del reactivo de Benedict es que fue utilizado en la experiencia 2 ya que revel la presencia de azcares reductores en dos fases; una con poco tiempo de degradacin de la molcula inicial, almidn, por parte de la amilasa; y otra fase en la cual el tiempo de digestin del almidn era mayor. Por consiguiente en la fase dos es en la que se reconocen mayor cantidad de azcares reductoras y en la uno menos.

CONCLUSIN

Posterior a la finalizacin del prctico, y respaldado no slo por la realizacin de ste mismo si no con apoyo de la literatura se concluye que: El proceso digestivo necesario para que el cuerpo pueda utilizar los nutrientes de los alimentos consumidos tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal. Todas estas reacciones que ocurren ah tardaran mucho tiempo si no fuera por las enzimas, en este caso la amilasa salival presente en la saliva. Esta enzima acta por medio de hidrlisis sobre el almidn, por lo tanto es una enzima del tipo 3- Hidrolasas. En las actividades realizadas, las muestras con mayor concentracin de enzima, registran una mayor digestin del almidn por lo cual el yodo lo reconoce con una mejor coloracin. Es decir la concentracin de enzima y substrato estn estrechamente relacionadas en el destino de la reaccin. Por otra parte se tiene que la cintica de la reaccin tambin tiene gran importancia, por ejemplo, un minuto despus de mezclar enzima- substrato, mediante la utilizacin del yodo se obtiene que an el almidn no se ha degradado totalmente, contrario a esto en la mezcla que lleva 5 minutos se reconoce que la digestin es casi total. Finalmente el reactivo de Benedict reconoce la presencia de azcares pequeos, entonces en la muestra que slo llevaba un minuto el reactivo reconoce escasa cantidad de azcares, mientras que en la muestra que lleva cinco minutos se reconoce gran cantidad de azcares derivados de la degradacin del almidn.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Bolaos, N. ; Lutz, G. ; Herrera, C. ; (2003) ; Qumica de Alimentos: Manual de Laboratorio; Editorial Universidad de Costa Rica; Pagina: 93. Cox, M.,M. ; Nelson, D., L. ; (2001) ; Lenhinger Principios de Bioqumica; 3 edicin ; Barcelona, Espaa ; Editorial Omega ; Pagina: 191, 193. Dadzie, B. ; Orchard, J. ; (1997) ; Evaluacin Rutinaria de Post Cosecha de Hbridos de Pltanos y Bananos: Criterios y Mtodos; Editorial Biodiversity International. Devlin, T.; (2004); Bioqumica Libro de Texto con Aplicaciones Clnicas; 4 edicin; Barcelona, Espaa; Editorial Revert S.A.; Pgina: 414, 418. Granner, D., Mayes, P., Murray, R., Roswell, V.; (1997); Bioqumica de Harper; 14 edicin; Mxico, D.F Santa F de Bogot; Editorial El manual moderno S.A.; Pgina: 80. Inmaculada, J. ; Martnez, S. ; (1999) ; Diccionario de Qumica: Diccionarios OxfordComplutense ; Editorial Complutense; Pagina 184. Pea, A. ; Bioqumica: rea Qumica ; 2 Edicin ; Editorial Limusa ; Pagina 73.