UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN CAMPO 1 TECNOLOGA FARMACUTICA PRODUCTOS NATURALES GRUPO 1551 Cuestionario previo prctica 3 Anlisis fitoqumico preliminar 26/Ago/13

Profesor Mario Arturo Morales Delgado

Elabor Quiroz Espinoza Francisco Abraham

Av. 1 de Mayo S/N, Col. Sta. Mara las Torres Cuautitln Izcalli, Estado de Mxico CP.54740

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1. Explicar cmo se concentran los extractos vegetales. Dar dos mtodos.

Los lquidos extractivos que se obtienen en la mayora de los casos se concentran eliminando parcial o totalmente el solvente mediante los dos mtodos siguientes: Al vaco: Utilizando un rotavapor, se trabaja a temperaturas inferiores a 40oC y en ausencia de oxgeno. Se aplica para concentrar lquidos extractivos obtenidos con solventes orgnicos y mezclas hidroalcohlicas. Liofilizacin: Consiste en eliminar el solvente mediante una congelacin a temperatura bajas, seguido de una sublimacin del solvente, que pasa directamente del estado slido a vapor. Este mtodo se aplica principalmente en el caso de lquidos extractivos acuosos.

Se puede distinguir distintos tipos de extractos segn la concentracin de principio activo respecto a la droga original y segn su consistencia. Extractos fluidos: El solvente se ha evaporado en el rotavapor hasta conseguir una concentracin de principio activo similar a la concentracin de principio activo en la droga original. Tienen consistencia liquida y se obtienen generalmente por maceracin o percolacin. El solvente suele ser agua o mezclas hidroalcohlicas. Tambin pueden obtenerse por disolucin de extractos secos. Los extractos fluidos se alteran fcilmente en contacto con la luz y el aire. Son muy utilizados para obtener formas liquidas (jarabes, pociones, gotas, entre otras) ya que se manipulan y dosifican con facilidad. Extractos blandos: poseen una concentracin de principio activo superior a la de la droga original y tienen consistencia semislida. El solvente suele ser agua o mezclas hidroalcohlicas. Los extractos blandos son poco estables y resultan difciles de manipular, por lo que prcticamente no se utilizan. Extractos secos: Se obtienen por evaporacin total del solvente y tienen una consistencia de polvo. Presentan una concentracin muy superior de principio activo que la droga original. Son preparados bastante estables (aunque en muchas ocasiones resultan higroscpicos) y de fcil manipulacin que se pueden utilizar para preparar tinturas, extractos fluidos, etc. Actualmente es posible obtener extractos secos nebulizados todava ms estables que los extractos secos tradicionales, sobretodo porque son menos higroscpicos. Crioextractos: Se obtienen de la droga fresca congelada, de la que se extraen los principios activos mediante nitrgeno lquido y luego se aade alcohol etlico. Los crioextractos resultan muy caros pero son muy tiles para la extraccin de protenas y enzimas de ciertas especies.

2. Explicar que tcnicas se emplean para llevar a cabo la separacin de extractos.

La separacin y purificacin de los componentes de un extracto se realiza principalmente mediante tcnicas cromatogrficas. No obstante, existen algunos mtodos por los que se puede lograr purificar el principio activo de modo directo: Sublimacin: son escasos los principios as obtenidos, por ejemplo cafena. Destilacin: clsicamente empicada en la extraccin de productos voltiles, por ejemplo aceites esenciales. Liberacin fraccionada: algunos compuestos se prestan por s mismos a una liberacin fraccionada a partir de una mezcla compleja, por ejemplo sales de los alcaloides de la corteza de la quina en solucin acuosa. Cristalizacin fraccionada: el mtodo se basa en la diferencias de solubilidad de los principios en un determinado disolvente.

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Respecto a las tcnicas cromatogrficas, ms frecuentemente utilizadas en el aislamiento de compuestos naturales, se basan fundamentalmente en los fenmenos fsicos de adsorcin-desorcin, reparto o particin y gel filtracin o de exclusin molecular. Otras, empleadas en la purificacin de sustancias de naturaleza polmera, se basan en la electroforesis, en el uso de resinas intercambiadoras de iones, en la cromatografa de afinidad, etc. En cualquier caso, para lograr e1 aislamiento de un principio a partir de una mezcla, aqul debe ser capaz de distribuirse entre una fase mvil o eluyente (FM) y una fase estacionaria (FE). Entre el principio y la FE hay un equilibrio que queda roto por la FM aportada de modo continuo.

3. Explicar cuntos tipos de pruebas de identificacin qumica hay.

Existen diversos tipos de pruebas de carcter fisicoqumico para la identificacin, menciono las fsicas por ser importantes tambin. 1. Reacciones de coloracin o precipitacin Se trata de reacciones simples, especficas de algn principio activo o componente caracterstico de una droga (alcaloides, antraquinonas, etc.), el cual acta como "identificador" de dicha droga. As, por ejemplo, la aparicin del color rojo que adquiere la corteza de cscara sagrada (Rhamnus Purshiana DC) debido a sus antraquinonas al ser tratada con solucin amoniacal, es indicativo de su posible identidad. 2. Fluorescencia Muchas sustancias (por ejemplo, la quinina en solucin de cido sulfrico diluido), convenientemente iluminadas, emiten luz de diferente longitud de onda o color de la que incide sobre ellas. Esta luz emitida o fluorescencia cesa cuando se elimina la luz excitante. Generalmente la sustancia suele emitir una luz con una longitud de onda mayor (luz visible) cuando est bajo la influencia de una iluminacin de longitud de onda ms corta (luz ultravioleta o luz azul-violeta). 3. Microsublimacin Este ensayo suele realizarse con drogas con principios fcilmente sublimables (antraquinonas, alcaloides). El estudio de las constantes cristalogrficas, la determinacin de punto de fusin o la produccin de determinadas reacciones coloreadas caractersticas de los cristales formados sirven para la identificacin de la droga. Para la identificacin tambin se pueden utilizar los diferentes tipos y tcnicas cromatogrficas ya que las tcnicas estas se basan en el mismo principio: la separacin de las sustancias presentes en una mezcla dada, entre dos fases: una permanece fija (fase estacionaria), que puede ser slida o lquida, mientras la otra eluye a travs de la primera (fase mvil) y que puede ser un lquido, un gas o la combinacin de ambos. Esto permite distinguir entre dos sistemas cromatogrficos: el de adsorcin y el de particin. La cromatografa se puede clasificar en cromatografa en papel, cromatografa en capa fina y cromatografa en columna, considerndose a la cromatografa de gas y a la lquida de alta resolucin como extensiones de esta ltima. Tambin se utiliza la electroforesis, la cual se basa en el transporte de su tandas cargada en un campo elctrico.Para ello se impregna un soporte (papel, gelatina, sephadex, etc.) en un electrolito que lo hace conductor; en el centro del mismo se coloca la sustancia problema y se somete a diferencia de potencial generada por dos electrodos.

4. Explicar dos pruebas de identificacin general para los siguientes metabolitos secundarios: Alcaloides
Precipitan a los alcaloides de sus soluciones:

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A. Reactivos yodados Precipitan a los alcaloides de las soluciones acuosas cidas, bajo la forma de poliiodatos complejos: de Bouchardat o de Wagner (solucin acuosa de yodo en yodato potsico), Mayer-Valser (solucin acuosa de tetrayodomercuriato de potasio), de Dragendorff (yodato de bismuto y potasio). Con estos reactivos se obtienen combinaciones amorfas, coloreadas, a veces solubles en exceso de reactivo. B. Reactivos formados por policidos minerales complejos Bertrand (cido silcico-wolfrmico), Scheiblcr (fosfowolfrmico), Sonnenschein (fosfo-molbdico). Precipitan a los alcaloides en medio cido o neutro bajo la forma de compuestos amorfos o cristalinos, los cuales se descomponen en medios alcalinos, regenerndose los alcaloides al estado de base. C. Reactivos orgnicos nitrados cido pcrico (2, 4,6- trinitro-1-fenol), etfnico (2,4,6-trinitro-1 -3 di fenol o trinitro resorcina) y otros derivados de ncleos bencnicos, naftalnicos y antracnicos. Al igual que en el caso anterior, forman precipitados cristalinos, en medio cido o neutro, que se descomponen por los lcalis. D. Otros reactivos de precipitacin Minerales (cloruro de mercurio, cobre, zinc, oro, platino, dicromato potsico, etctera) y orgnico (diversos cidos sulfnicos, cido ferro-cianhdrico, taninos, etctera). Reactivos de coloracin Se utilizan en particular para identificar y dosificar los alcaloides. Se emplean cidos minerales concentrados especialmente el sulfrico, a veces adicionado de molibdato amnico (reactivo de Frohde), paradimetilaminobenzaldehido (Wasicky), y otros. Otros mtodos Los espectros ultravioleta, infrarrojos, de masas, la resonancia magntica nuclear de protn y de carbon 13, rayos X, dicrosmo circular ptico, son de gran utilidad para la determinacin de la estructura de este tipo de compuestos. Existen otras propiedades fsicas y/o qumicas que son particulares de algunos de ellos y que pueden ser interesantes para su identificacin y dosificacin.

Saponinas
La extraccin de saponinas a partir de diversos materiales biolgicos ha sido reportada, bajo mltiples procedimientos, sin embargo dada la naturaleza en gran manera polar de estos compuestos, todos los mtodos coinciden en la extraccin en caliente o en fro, con agua o alcoholes de bajo peso molecular, sobre salen el uso de metanol, etanol, butanol y mezclas de diferentes proporciones de estos alcoholes y agua. Para la identificacin de saponinas se han desarrollado diversos ensayos, como el ndice de hemlisis, propuesto por R. Kobert en 1912. En este mtodo una suspensin de glbulos rojos, lavados con anticipacin, se mezcla con la saponina. La mezcla se deja reposar a temperatura ambiente por 20 h, el para calcular el ndice hemoltico se divide el peso de la mezcla de reaccin, entre el peso de extracto de saponina ensayado, este mtodo a pesar de ser muy utilizado, tiene la desventaja de depender de la naturaleza de la saponina y de la especie animal de donde se obtuvieron los eritrocitos. Otro ensayo de uso comn en la identificacin de saponinas, es el nmero o ndice de espuma, el cual se basa en la medicin de la altura y el tiempo que dura la espuma formada por una solucin de saponinas mediante agitacin. No obstante, estos parmetros se ven influenciados directamente por la forma y la intensidad de mezclado. En la deteccin cualitativa de saponinas, tambin se ha aplicado el mtodo denominado ndice de pescado que consiste en la observacin del grado de toxicidad de las saponinas en pescados. Por ltimo uno de los ensayos ms empleados en la determinacin de saponinas es la cromatografa en capa fina (CCF), procedimiento en el que a partir del uso de reactivos reveladores especficos que forman productos coloreados se obtiene

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informacin no slo de la presencia de saponinas, sino del tipo de stas (triterpenoides y esteroidales). De la misma manera, para la cuantificacin de saponinas, se han ideado diversos mtodos, la mayora de stos basados en reacciones colorimtricas como el propuesto por Hiai quien propone el uso de vainillina y H2SO4 para la generacin de grupos cromforos en saponinas, los cuales son visibles en longitudes de onda alrededor de 455 a 460 nm. Sin embargo, pese a que se sabe que los cromforos producidos mediante esta reaccin son caractersticos, stos no absorben a la misma longitud de onda, adems de que la interferencia es muy marcada, razn por la cual es poco repetible.

Triterpenos
La cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) es muy adecuada para el anlisis cualitativo y cuantitativo por su mayor eficacia, admitiendo variedades como la adsorcin sobre slice, o bien la particin en fase reversa. A este re pecto se puede mencionar, como un ejemplo de particular complejidad, la separacin de cuasinoides en fa e estacionaria fenilo, por elucin con mezclas ternarias de metanol (A), aguametanol-cido actico (90:9:1) con un 0,1 % de acetato amnico (B) y acetonitrilo (C). La espectroscopa de RMN (1H y 13C) proporciona datos suficientes para la identificacin estructural inequvoca, tanto para la determinacin del esqueleto bsico, como de otros caracteres tpicos, como la orientacin espacial de los carboxilos, las orientaciones o de los hidroxilos, la estereoqumica de los anillos o la posicin de los dobles enlaces.

Taninos
Para la deteccin de los taninos en drogas se pueden realizar una serie de ensayos comunes a todos los taninos y otros que permiten distinguir entre hidrolizables y condenados. Todos los taninos precipitan con solucin de gelatina o con fenazona. Los taninos hidrolizables y condensados se pueden diferenciar segn el color o precipitacin con sales frricas; los taninos hidrolizables dan coloraciones y precipitados azulnegruzcos y los taninos condensados dan precipitados pardo-verdosos. Los taninos glicos dan coloracin rosa con iodato potsico y los taninos elgicos, con cido nitroso en medio actico, dan coloracin rosa que vira a prpura y finalmente a azul. Las proantocianidinas dan color rojo con vanillina-clorhdrico y precipitan con el reactivo de Stiasny, formaldehido-clorhdrico. Los dos tipos de taninos se diferencian tambin por su comportamiento en medio cido en caliente corno ya se ha indicado. En el caso de los taninos hidrolizables el cido glico y el cido elgico obtenidos se detectan por cromatografa; igualmente, las antocianidinas se pueden extraer del medio con alcohol amlico e identificarlas por cromatografa. Para el anlisis de los taninos en los extractos de drogas se utilizan las tcnicas habituales: cromatografa en capa delgada de celulosa o slice, seguida de observacin al UV y pulverizacin con reactivo tales como cloruro frrico y cido fosfowolfrmico; los condensados se pueden revelar adems con vanillina-clorhdrico o cido ptoluensulfnico. En la cromatografa lquida de alta resolucin se emplean columnas de fase reversa, eluyendo con un alcohol (metanol o etanol) o acetonitrilo-agua y pequea cantidad de cido para reprimir la ionizacin de los grupos fenlicos.

Flavonoides
La reaccin de la cianidina (magnesio en medio clorhdrico) permite distinguir alguno tipo de lavonoides: coloracin naranja con las ftavonas, rojo cereza con los flavonoles, violeta con las ftavanonas. Las tcnicas cromatogrficas, de modo particular la cromatografa en capa fina, es muy utilizada para la caracterizacin de los compuestos ftavonoides. El revelado de los cromatogramas se realiza por observacin de la fluorescencia al UV (366 nm) y con diversos reactivos:

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E1 examen a la luz uv antes y despus de pulverizar con tricloruro de aluminio produce cambios en la fluorescencia de flavonas y flavonoles. Flavonas y ftavonoles expuestos a vapores de amoniaco se colorean de amari11o; chalconas y auronas, de naranja a rojo. Reactivo de Neu (solucin metanlica al 1 % de difenilborato de 2-aminoetilo), detecta la mayora de flavonoides. Con cido sulfrico concentrado, los flavonoides dan soluciones intensamente amarillas.

Glucsidos cianognicos
Los hetersidos cianognicos son fcilmente hidrolizables a pH vecino a la neutralidad debido a -glicosidasas endgenas, liberando un azcar y una cianohidrina inestable que genera cianuro de hidrgeno y un derivado carbonado aldehido o cetona, esta segunda reaccin es catalizada por una hidroxinitrilo liasa. En medio dbilmente cido y calor, la hidrlisis se produce de la misma manera. Las reacciones de identificacin ms usadas son: Papel impregnado con cido pcrico carbonatado (1 g de carbonato de sodio + 100 mg de cido pcrico y agua hasta 10 ml). Este papel es de color amarillo, en presencia de cianuro de hidrgeno produce una coloracin roja o rojo amarillento debido a la formacin de isopurpurato de sodio. Este mtodo es llamado el mtodo de guignard. La resina de guayacol en alcohol absoluto con solucin diluida de sulfato de cobre, cambia a color azul en el cido cianhdrico.

Azcares
Las reacciones ms usadas, son: Prueba de Molish: Es una reaccin general para carbohidratos que contienen ms de 5 tomos de carbono. Prueba de Barfoed: Es una reaccin para identificar monosacridos, aunque algunos disacridos (los reductores) dan positiva la reaccin, pero con ms tiempo de calentamiento, ya que as se hidroliza el disacrido. El fundamento radica en la reduccin del acetato cprico a oxido cuproso. Prueba de Bial o de Orcinol-HCl: Es una prueba especfica para pentosas la cual se muestra en la figura 2. La positividad se reconoce por la formacin de una coloracin verde botella brillante. Prueba de Seliwanoff: Es especfica para cetosas que contengan 5 o ms tomos de carbono, pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa. Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidn. El color azul, se debe, posiblemente a la formacin de un complejo: Ioduro de almidn. Prueba de Benedict: Es una prueba especfica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres. Prueba Fenilhidrazina: Es una prueba para distinguir asas (y oligosacridos). Los carbohidratos que solo se diferencian en sus tomos de carbono 1 y/o 2 darn la misma osazona, como es el caso de la glucosa y la fructosa, que son isomeros de funcin. La figura 5 muestra la reaccin.

Glucsidos cardiotnicos
Los cardenlidos se pueden reconocer en muestras biolgicas mediante los ensayos de coloracin con varios reactivos nitro, especficamente con los reactivos de Kedde, Legal y Raymond. Al igual que las saponinas esteroides, dan resultados positivos con el reactivo de Liebermann-Burchard, lo que permite diferenciarlos de las terpenlactonas y las cumarinas. Por

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otro lado, los carbohidratos ligados incluyen generalmente a la D-glucosa, LRhamnosa y desoxiazcares. Estos ltimos pueden reconocerse mediante el ensayo de Keller-Kiliani.

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Bibliografa
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