ESPECTROFOTOMETRA

DANIELA LASPRILLA RE STREPO, MANUEL ALEJANDRO MOSQUERA, ZAHYRA CORREA VELSQ UEZ

RESUMEN

En esta prctica se realiz la tcnica de espectrofotometra de dos sustancias, donde se busca la absorbancia utilizando una sustancia blanca como sustancia patrn para poder observar la absorbancia del permanganato de potasio que fue la otra sustancia. Al iniciar la prueba se realiz la medicin de absorbancia y transmitancia con diferentes medidas de longitud de onda para determinar cul era la mejor. La absorbancia se tom del permanganato de potasio el fin de observar la cantidad de energa incidente absorbida por una sustancia. Tambin se observa la transmitancia ya que se utiliza para medir la absorcin de luz por parte de una muestra. Dentro de los procedimientos se realiza la toma de la absorbancia de 7 tubos de ensayo con diferentes concentraciones obtenidas. Al finalizar se realizaron unas graficas con el fin de observar los resultados obtenidos. ABSTRAC In this practice is realized the technic of spectrophotometry dual substances, where is searched the absorbance using

a substance white as standard substance to observe the absorbance permanganate potassium was the other substance. To start the test is realized the measurement absorbance and transmittance with differents measures wavelength to determine how best. Absorbance was taken permanganate potassium in order to observe the amount of energy absorbed incident by a substance. Also is observed the transmittance because it is used to measure the absorption of light by a sample. Among the procedures is realized taking the absorbance of 7 test tubes with different concentrations obtained. At the end of some graphics were performed in order to observe the results.
INTRODUCCIN

La espectrofotometra comprende una serie de tcnicas analticas usadas para anlisis cualitativo y cuantitativo. Una radiacin electromagntica se puede describir como un flujo de partculas llamadas fotones, o bien como una onda propagndose en el espacio. De esta ltima descripcin se toma el concepto de longitud de onda,

definindolo como la distancia entre dos mximos consecutivos de la onda. Esta es inversamente proporcional a la energa de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnticas abarca un amplio rango de energas, las de menor energa son las ondas de radio y las de mayor energa son las llamadas radiacin gamma. Las molculas tienen un estado energtico que se puede alterar por la absorcin de radiacin electromagntica a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para realizar un estudio cualitativo o cuantitativo. Para obtener la mxima sensibilidad en una determinacin debe conocerse la longitud de onda de mayor absorcin de la sustancia analizada, que no deber coincidir con una alta absorcin de otras sustancias presentes en la reaccin. Cuando una radiacin electromagntica de intensidad I atraviesa un medio homogneo, parte de la radiacin es absorbida por la muestra y otra parte es transmitida con una intensidad i, de tal manera que se define transmitancia de una muestra como la relacin entre la radiacin transmitida i versus la intensidad luminosa incidente I, multiplicado x 100: % T = i x 100 La absorbancia es una medida de la cantidad de Energa luminosa incidente absorbida por una sustancia en solucin. Est relacionada con Transmitancia por medio de: 1

A = - Log T A = log (100 / %T)

OBJETIVOS 1. Aprender a manejar bien el espectrofotmetro. 2. Realizar una curva de absorbancia vs concentracin. 3. Obtener mediciones rpidas.

MATERIALES Y MTODOS

Para empezar a usar el espectrofotmetro se utilizaron dos sustancias, sustancia blanca que era agua y la otra sustancia que era permanganato de potasio. En el espectrofotmetro se utiliz la sustancia blanca como sustancia patrn para poder medir la absorbancia y la transmitancia del permanganato de potasio. Despus se hizo lo mismo con 7 tubos con volmenes diferentes de agua y de la sustancia permanganato para medir su absorbancia y se hicieron de igual manera se us el agua como regulador como se mencion antes. Se tom nota de todo los valores obtenidos de absorbancia del segundo procedimiento para realizar una grfica de la concentracin vs absorbancia, y del primer procedimiento se tomaron los valores de absorbancia y de transmitancia para realizar otra grfica que mostrara lo obtenido.

RESULTADOS Y DISCUSIN Tabla 1. Resultados obtenidos a diferentes longitudes de onda nm %T A 400 96,8% 0,014 450 10,39% 0,017 500 92,7% 0,033 550* 87,0% 0,061 600 109,6% 0,040 650 111,0% 0,046

Al buscar la absorbancia y la transmitancia a diferentes longitudes de onda con el espectrofotmetro podemos notar en la tabla 1 que la absorbancia ms alta fue la de 550nm, la cual esta fue la longitud que se us en los procedimientos que se realizaron con los 7 tubos. En lo investigado tericamente se dice que la absorbancia es una medida de la cantidad de Energa luminosa incidente absorbida por una sustancia en solucin. Est relacionada con Transmitancia por medio de: A = - Log T A = log (100 / %T)

Segn la ley de Lambert y Beer a travs de sus observaciones establecieron relaciones de la variacin de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o con la concentracin de la sustancia, para materiales translcidos. Esta ley expresa que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional al camino recorrido por la radiacin electromagntica y a la concentracin de la solucin. A = abc A: absorbancia; definida como la cantidad de radicacin que absorbe una solucin y es una magnitud adimensional. a: absortividad especfica de cada soluto; (Constante de proporcionalidad) b: distancia recorrida por el haz de luz en cm (Longitud interna de la celda 1cm) c: concentracin de la solucin Para poder aplicarse la ley mencionada debe tenerse en cuenta unas imposiciones La medicin del % de T es realizada con luz monocromtica La medicin del % de T es realizada a una regin de absorcin del componente a estudiar. La referencia es elegida de tal manera que C=0 cuando T= 100% o A= 0%

La naturaleza de la solucin debe ser tal que su transmisin responda a variaciones de C.

Y de la transmitancia se dice tericamente que es la fraccin de la radicacin que se transmite, la cual se mide en unidades de transmitancia o porcentaje de transmitancia como se observa en la tabla 1. Ya que l %T= Tx100% entonces; A= -Log T=2-Log %T donde 2= Log100, luego la escala de absorbancia se encuentra en un intervalo entre 0 y 2.4 En cada tubo se hizo un clculo para determinar la concentracin 2 del permanganato de potasio que fue la sustancia utilizada, de estos clculos la ecuacin usada fue C1.V1= C2.V2 los resultados obtenidos fueron: Tubo 1: = 0,01g/mlx6ml = 0,006/ 10ml

Tubo 2: = 0,01g/mlx9ml = 0,009/ 10ml

Tubo 3: = 0,01g/mlx1ml = 0,001/ 10ml

Tubo 4: = 0,01g/mlx3ml = 0,003/ 10ml

Tubo 5: = 0,01g/mlx7ml = 0,007/ 10ml

Tubo 6: = 0,01g/mlx10ml = 0,01/ 10ml

Luego en el espectrofotmetro se busc la absorbancia de cada uno de los tubos usando la sustancia blanca como sustancia patrn, que con esta sustancia se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el valor de cero mediante el ajuste del mando y as obteniendo la absorbancia de permanganato de potasio.

Tubo 1 Tubo 3 Tubo 2 Tubo 4 Tubo 3 Tubo 1 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 5 Tubo 2 Tubo 6 Tubo 6 Tabla 2. Resultados obtenidos de las concentraciones y la absorbancia

[C] 0,001 0,003 0,006 0,007 0,009 0,01

A 0,027 0,064 0,078 0,084 0,092 0,127

En la tabla 2 podemos ver los resultados que se obtuvieron de las absorbancias de los 7 tubos que contenan permanganato de potasio y las concentraciones que se obtuvieron, ya mencionadas antes. Una concentracin de la solucin se le llama a la relacin existente entre la cantidad de soluto y la cantidad de disolucin o de disolvente: Concentracin= cantidad de soluto / cantidad de disolucin (o disolvente) Grfica 1. Absorbancia vs Longitud de onda

Absorbancia vs Longitud de onda

0,07 0,06

Absorbancia

0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0

y = 0,0073x + 0,0095 R = 0,5931

Series1 Lineal (Series1)

400

450

500

550

600

650

Longitud de onda

En la grfica 1 se puede observar que de las absorbancias tomadas a diferentes longitudes de onda, de acuerdo a las absorbancias obtenidas y mostradas la longitud de onda mejor fue la de 550nm, ya que tuvo una absorbancia mayor a las otras obtenidas. De acuerdo a esto la longitud de onda que se us para el procedimiento de los 7 tubos de ensayo fue la de 550nm para as poder obtener mejores resultados. Grfica 2. Absorbancia vs Concentracin

Absorbancia VS Concentracion
0,14 0,12

y = 0,0169x + 0,0197 R = 0,9163

Absorbancia

0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0,001 0,003 0,006 0,007 0,009 0,01 Series2 Lineal (Series2)

Concentracin

La curva de calibracin absorbancia vs concentracin primero se debe permitir determinar la concentracin de una muestra incgnita; Preparar una muestra de concentracin conocida y creciente utilizando los mismos diluyentes y reactivos que se emplear en la preparacin de la muestra incgnita; medir la absorbancia de estas muestras; medir la absorbancia de la muestra problema3; graficar Absorbancia vs concentracin como se observa en la grfica 2. Si la sustancia cumple con la Ley de Lambert y Beer el grfico ser una recta y ser posible sacar un factor ya que la pendiente de la recta ser la misma en todos los puntos. As se podr calcular la concentracin de la muestra problema. Si la sustancia no cumple la Ley, el grfico ser una curva y se extrapolar dentro de un rango apropiado para calcular el valor de la muestra problema. Como se puede observar en la grfica 2, segn lo explicado anteriormente nos podemos dar cuenta de que no es una lnea recta eso significa que la sustancia no cumple la ley de Lambert y Beer porque la pendiente de la recta no es la misma para todos los puntos, entonces con esto se sabe que para poder calcular el valor de la muestra problema se tendrn que extraer conclusin de cul ser el valor adecuado para esto.

CONCLUSIN Con esta prctica se pudo concluir segn lo investigado, en lo observado y en los resultados que la espectrofotometra es un mtodo analtico indirecto porque se basa en la medicin de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la identificacin de un analito en una muestra problema. La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a que es sencillo, especfico y sensible. Adems de lo obtenido se pudo concluir que al hacer la curva de calibracin nos dimos cuenta que la sustancia no cumple la ley de Lambert y Beer, pero aunque no dio la prctica como dice tericamente se pudo observar cambios y dems cosas.

ANEXOS 1. Indique el uso bioqumico de una curva de calibracin. R/: La curva de calibrado es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometra) y la variable a determinar (concentracin). Para ello, se efectan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una funcin matemtica que relacione ambas; despus, se lee el mismo carcter en la muestra problema y, mediante la sustitucin de la variable independiente de esa funcin, se obtiene la concentracin de esta. 2 2. Grafique el porcentaje de transmitancia vs la concentracin Grfica 3. Transmitancia vs Concentracin

Transmitancia Vs Concetracin
0,012 0,01

y = 0,0018x - 0,0004 R = 0,9752

Concentracin

0,008 0,006 0,004 0,002 0 87,0 92,7 96,8 103,9 109,6 111,0 Series1 Lineal (Series1)

% Transmitancia

En la grfica 3 tambin se pudo observar que no se cumple la ley de Lambert y Beer ya que como se explic en los resultados la pendiente de la recta no es la misma para todos los puntos con esto se sabe que para poder calcular el valor de la muestra problema se tendrn que extraer conclusin de cul ser el valor adecuado para esto. 3. Halle la concentracin en mg% de cada uno de los tubos Tubo 1:
0,006 x 1000mg = 6 1g

Tubo 2: 0,009 x Tubo 3 0,001 x Tubo 4: 0,003 x Tubo 5: 0,007 x Tubo 6: 0,01 x 1000mg = 10 1g 1000mg = 7 1g 1000mg = 3 1g 1000mg = 1 1g 1000mg = 9 1g

BIBLIOGRAFIA 1.http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011TP-1-ESPECTROFOTOMETRIA.pdf 2. Harris, Daniel Charles (2003). Quantitative chemical analysis. San Francisco: W.H. Freeman. ISBN 0-7167-4464-3. 3.http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011TP-1-ESPECTROFOTOMETRIA.pdf 4.http://copernico.escuelaing.edu.co/ceciba/dep_cnaturales/upload/file/Laboratorios/QU IM/ANALISIS%20ESPECTROFOTOMETRICO.pdf 5. http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf 6. http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf