VI Encontro dos Usurios das Tcnicas Termoanalticas.

IQSC/USP, So Carlos/SP, 28 a 30/07/2013

OBTENO E CARACTERIZAO TRMICA DE BIOMASSA DE LEVEDURA SINGLE CELL PROTEIN

Francielle Diana R. Halas1,Tadeu Massulo F. Baa1, Tabata Bauab1, Jefferson Guardiano1, Marco aurlio da Silva Carvalho Filho1, Egon Schnitzler2Luiz Gustavo Lacerda1* luizgustavo75@gmail.com
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Universidade Positivo Rua Professor Pedro Viriato Parigot de Souza, 5300, CEP: 81280-330 Curitiba-PR 2 Universidade Estadual de Ponta Grossa - Av. Carlos Cavalcanti, 474, 8 CEP: 84030-900 Ponta Grossa-PR

Resumo
Este trabalho foi realizado para se estudar os aspectos fsico-qumicos de culturas de leveduras, atravs do uso de equipamentos para anlise termogravimetrica (TGA) e anlise trmica diferencial (DTA). Para isso, foram utilizadas cepas de leveduras do gnero Saccharomyces e leveduras isoladas da amora. A biomassa foi analisada no equipamento Shimadzu DTG60 na faixa de 30 a 600C onde foram obtidas curvas que relacionam a concentrao de aucares do meio com o crescimento da biomassa, informao importante para o controle de qualidade.

Palavras-chave: Biomassa, Anlise Trmica, Levedura

Abstract
This work was conducted to study the physicochemical aspects of yeast cultures, through the use of equipment that support thermogravimetric analysis (TGA) and differential thermal analysis (DTA). For this, yeast strains of the genus Saccharomyces and mulberry isolated yeasts. The biomass was analyzed on the equipment Shimadzu DTG60 in the range of 30 to 600C where curves where obtained that relate the sugar concentration in the medium with biomass growth.

Keywords: Biomass, Thermal Analysis, Yeast Introduo

Leveduras so microorganismos eucariontes pertencentes ao reino Fungi. Microscopicamente so unicelulares, apesar de alguns poderem apresentar aspecto pluricelular devido ao processo de brotamento atravs de pseudohifas. Reproduzem-se assexuadamente por mitose e brotamento, o que causa uma reproduo monoclonal [1]. Por fermentao, leveduras so capazes de converter carboidratos em dixido de carbono e lcool, que h milhares de anos vem sendo usados para fabricao de produtos alimentcios assados e bebidas alcolicas respectivamente [2]. Tambm so de importncia central em pesquisas modernas sobre biologia celular, sendo usadas em estudos de engenharia gentica devido intensa proliferao em diferentes geraes. [3]. (BORZANI, 2001). Por isso, imprescindvel o uso de tcnicas termoanalticas, como DTA (Anlise Trmica Diferencial) e TGA (Anlise Termogravimtrica), para se avaliar o rendimento da produo de um meio de cultura. Com a ajuda de aparelhos modernos pode-se aplicar energia trmica gradativamente em ciclos constantes, e com os grficos plotados pelo mesmo, possvel notar a ocorrncia de mudanas fsicoqumicas na amostra, assim como as caractersticas das reaes quanto sua entalpia [4]. Uma curva de DTA pode ser usada com o propsito de identificao, agindo como uma impresso digital do material, ou seja, desde que exista reprodutibilidade no experimento, a curva de duas amostras provenientes de um mesmo analito deve ser, em teoria, idnticas [4].

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Objetivos
Este trabalho objetivou isolar, desenvolver e caracterizar, atravs de tcnicas termoanalticas, a biomassa proveniente de culturas de Saccharomyces cerevisae e levedura de amora.

Mtodos e Materiais
Para preparao do meio de cultura gar yM foram utilizados extrato de malte e de levedura, peptona bacteriolgica, glicose e gar, todos esses materiais foram pesados, dissolvidos em gua destilada e autoclavado por 15 minutos. O gar foi fundido e em fluxo laminar ele foi passado para as placas de petri, que imediatamente foram para geladeira permanecer por pelo menos 24 h em temperatura controlada de 2-8 graus. Foram preparados 225ml do caldo yM sem a adio do gar e adicionado Hcl para ajustar o pH para 4,5, em seguida o caldo foi autoclavado. O caldo foi colocado em dois Erlenmayers e dois tubos. As leveduras liofilizadas foram passadas para os tubos com o caldo yM, em fluxo laminar estril e acondicionadas em estufa a 28 graus. As leveduras foram semeadas nas placas de gar Ym em fluxo laminar, ficaram armazenadas por trs dias em estufa a 28C. A biomassa que cresceu, foi transferida para os erlenmayers com o caldo e colocada na incubadora rotativa por dois dias. Foi preparada a biomassa seca com a tcnica das duplas de tubos de Falcon (equilbrio de peso), em seguida elas foram armazenadas por 3 dias na geladeira, os tubos foram centrifugados e a biomassa ficou pelo perodo de cinco dias secando na estufa a 45-50C. A biomassa seca foi macerada em um grau para que houvesse homogeneidade de material particulado e ficou pronta para utilizao. As tcnicas termoanalticas foram realizadas em um equipamento TG-60 SHIMADZU (JAPAN), nas seguintes condies: cadinho de alumina, massa utilizada das amostras de aproximadamente 5,0 mg, atmosfera de ar sinttico com fluxo de 50 mL/min., razo de aquecimento de 10C/min e faixa de aquecimento de 30 a 600 C [5,6].

Resultados e Discusso
As curvas de TG-DTA das amostras preparadas so ilustradas nas figuras 1 e 2.

Figura 1: Curvas TG/DTA da amostra de levedura da amora.

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Figura 2: Curvas TG/DTA da amostra de S. cerevisae.

As duas anlises apresentaram uma perda de volteis de 5,25% e 6,04% para a levedura isolada de amora e a cepa de Saccharomyces cerevisae, respectivamente observadas na faixa de 30C at 150C. Em seu estudo com leveduras de panificao, [7], observou a mesma perda de 9,70% porm a observao se estendeu at 230C. Aps realizar o estudo sobre determinao dos teores de umidade e cinzas de amostras comerciais de guaran, observou a perda de gua superficial ou umidade de 9,50% entre 25 e 150C [8]. Os materiais tiveram estabilidade trmica de 172,67C para a levedura de amora e 190,4C para a cepa de Saccharomyces, observadas atravs da inflexo da curva TG. Em seu estudo sobre a diferenciao de diversos microrganismos, [9] observou a mesma a aproximadamente 220C. A segunda perda de massa foi a 422,15C e 373,14C e a terceira perda ocorreram a 533,82 C e 539,64 C respectivamente para as duas amostras. Para a levedura de amora a perda de massa na faixa de 172,67C a 422,15C foi de 53,51% e na faixa de 422,15C a 533,82C foi de 31%. Para a cepa de S. cerevisiae, a perda na faixa de 190,41C a 373,14C foi de 41,04% e a perda na faixa de 373,14C a 539,64C foi de 19,13%. A perda de massa total para a levedura isolada da amora e a cepa de S. cerevisiae foi de 98,99% e 78,07%, respectivamente. Em seu trabalho, [10], realizado sobre resina de Protium heptaphyllum relatou duas perdas de massa, a primeira foi de 5 a 8% na faixa de temperatura de 44 a 208C para as amostras de resina de almcega, resina metilada e resina acetilada, na segunda etapa ocorreu a decomposio trmica de todas as amostras, na faixa de temperatura de 205 a 420C para as resinas derivatizadas e de 210 a 364C para a rezina de almcega. Os picos DTA da amostra da levedura de amora ocorreram em 348,16C, 416,80C e 540,59C. Para a amostra de S. cerevisiae os picos foram de 331,85C, 427,84C e 551,07C. Esses picos representam processos exotrmicos, ou seja, a liberao de calor para o meio. No estudo sobre determinao dos teores de umidade e cinzas de amostras comerciais de guaran, foi observado os picos dos processos exotrmicos a partir de 250 C, esse evento esta relacionado com a decomposio trmica do material [8].

Concluses
Os resultados obtidos com as curvas TG/DTA evidenciam com clareza o comportamento trmico das leveduras analisadas. Com a utilizao desse mtodo possvel determinar a estabilidade trmica dos materiais, sendo um fator determinante no controle de qualidade industrial. As tcnicas utilizadas neste trabalho foram consideradas rpidas, eficientes, com menor consumo da amostra e capazes de avaliar com segurana a estabilidade trmica, o controle de qualidade, o perfil termoanaltico e a viabilidade industrial da levedura isolada da amora e as cepas de Saccharomyces cerevisae.

Agradecimentos Os autores agardecem ao CNPq pela concesso de bolsa de IC.

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