FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES INGENIERIA AMBIENTAL

PRODUCCION DE ETANOL POR LEVADURAS MUTADAS

CURSO DOCENTE

: :

BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

Dr. LOPEZ LOPEZ, Cesar ALANOCA CASANI, Velasco GONZALES BAILON, Linda PAIMA TIRADO, Alan kenny RIVERA ZEBALLOS, Grecia SARCO CALDERON, Miguel ngel 2012 - I

ALUMNOS :

CICLO

TINGO MARA PER

I.

INTRODUCCIN

A excepcin de la industria de alimentos, solo unos pocos procesos comerciales de fermentacin utilizan cepas silvestres aisladas directamente de la naturaleza. En la mayora de los casos se utilizan cepas mejoradas especficamente para la produccin de antibiticos, enzimas y otros metabolitos. En general, el principal motivo para el desarrollo industrial de cepas es lo econmico, ya que las concentraciones de metabolitos producidos por las cepas silvestres son demasiado baja para desarrollar un proceso a escala industrial. Se trata de mutaciones en el material gentico; no es nada prctico, por lo que es necesario inducirlas, para que se produzcan ms mutaciones en general, de las que podamos extraer las mutaciones prcticas. Podremos aumentar la frecuencia de mutaciones mediante el uso de agentes mutgenos, que pueden ser o bien qumicos o bien fsicos, cuya presencia daa, altera o interfiere en la reparacin del DNA. El cual nos llev plantearnos la siguiente pregunta: Cunto de etanol produce la Saccharomyces cerevisiae inducida por un agente mutgeno? Por tanto en el presente informe lo explicamos que activamos a la S. cerevisiae en un medio azucarado, para despus inducirla bajo 48 horas en presencia de radiacin infrarroja (IR), para obtener el tipo de mutante fermentadora de azcar por la prdida de un enzima en una ruta metablica. Y bajo el contexto nos planteamos la siguiente hiptesis: La Saccharomyces cerevisiae inducida por un agente mutgeno son sobreproductores de etanol. Entonces para el respectivo contraste nos planteamos lo siguiente:

OBJETIVO Determinar la produccin de etanol por Saccharomyces cerevisiae mutada.

II.

REVISIN BIBLIOGRFICA

2.1. Fermentacin alcohlica De manera general, la fermentacin alcohlica es el proceso llevado a cabo por microorganismos en condiciones anaerobias, en el cual se degrada una molcula de glucosa para obtener etanol. Bioqumicamente, se puede definir como un conjunto de reacciones catablicas que

conducen a la generacin de ATP y NADH, donde los compuestos orgnicos sirven tanto de donadores primarios y aceptores finales de electrones, y la produccin de ATP se lleva a cabo mediante la fosforilacin a nivel sustrato, en la cual adicionalmente existe la acumulacin de diversos compuestos orgnicos, tales como el etanol, cido actico, cido lctico, entre otros, llamados productos de fermentacin. El metabolismo de la glucosa en la fermentacin alcohlica se lleva a cabo mediante la ruta de Embden Meyerhoff, conocida como gluclisis, la cual se divide en dos partes. La primera es una serie de reacciones que no incluyen reacciones de xido-reduccin y que inducen a la formacin del intermediario clave: el gliceraldehdo 3-fosfato. En la segunda parte, el glilceraldehdo es transformado a piruvato y se obtiene energa en forma de ATP (Lpez, 2007, citado por BERNARDINO, 2011).

2.1.1. Etanol En qumica se denomina alcohol a aquellos hidrocarburos o alcanos que contienen un grupo hidroxilo (-OH) en sustitucin de un tomo de hidrgeno. El grupo hidroxilo se encuentra enlazado de forma covalente al tomo de carbono (C). Las propiedades fsicas de un alcohol se comprenden mejor recordando que estructuralmente est compuesto por un alcano y agua por lo cual contiene una regin

hidrofbica causada por el alcano y una regin hidroflica debida al grupo hidroxilo. De estas dos unidades estructurales, el grupo OH da a

los alcoholes sus propiedades fsicas y qumicas caractersticas y el alquilo es el que las modifica, dependiendo de su tamao y forma. Existen diferentes tipos de alcoholes y entre ellos encontramos al etanol, el cual se obtiene principalmente de la fermentacin de los azcares. El etanol se clasifica como un alcohol primario

monohdrico. Es un lquido incoloro, transparente, voltil, inflamable y con cierto grado de toxicidad, de sabor quemante y olor agradable caracterstico, es soluble en agua, tiene un punto de fusin de -115C, un punto de ebullicin de 78.3C y una densidad relativa de 0.789g/l a 20C (Morrison y Boyd, 1996, citado por BERNARDINO, 2011). El alcohol etlico o etanol, no es solo el producto qumico orgnico sinttico ms antiguo empleado por el hombre, sino tambin uno de los ms

importantes. Sus usos ms comunes son industriales, domsticos, medicinales, en la produccin de bebidas alcohlicas y recientemente como alternativa para el remplazo de combustibles como la gasolina y diesel. La industria emplea mucho el alcohol etlico como disolventes de lacas, barnices, perfumes y condimentos; como medio para reacciones qumicas y para recristalizaciones (cadena agroindustrial, 2004). La utilizacin del etanol como combustible representa el 61% de la produccin mundial, ya sea para mezclar o remplazar petrleo y derivados, alrededor del 23% se destina a la industria procesadora (cosmticos, farmacutica, qumica, entre otras), y el 16% restante se destina a la industria de las bebidas. La obtencin del etanol se

puede dar por fermentacin de azcares que se encuentran en los productos vegetales (cereales como el maz, sorgo y cebada u otros vegetales como la caa de azcar, remolacha, entre otros) tales como sacarosa, almidn, hemicelulosa y celulosa (cadena agroindustrial, 2004, citado por BERNARDINO, 2011). Este proceso principalmente es llevado a cabo por

microorganismos como las levaduras. El etanol que es obtenido por un proceso de fermentacin de azcares es conocido como bioetanol. Durante la produccin del bioetanol, el lquido fermentado llega a contener en promedio de 7 a 12% de etanol (v/v),

dependiendo

de

la

concentracin

de

azcares fermentables

disponibles en el medio, posteriormente se concentra y puede llegar hasta un 95% de etanol mediante una serie de destilaciones (Lpez, 2007, citado por BERNARDINO, 2011).

2.2. Levaduras Las levaduras son organismos anaerbicos facultativos, que significa que pueden vivir sin oxgeno. Cuando hay oxgeno lo utilizan para la respiracin, es decir para oxidar la glucosa completamente y as obtener ATP. En condiciones de anaerobiosis, las cepas de Sacharomyces cerevisae (levaduras de la panificacin) y otras especies de levaduras transforman la glucosa en cido pirvico, siguiendo la secuencia de reacciones de la gliclisis. Este proceso es comn a la mayora de los seres vivientes; pero aqu radica lo especfico de estas levaduras, son capaces de proseguir la degradacin del pirvico hasta etanol, mediante el siguiente proceso:

Figura 1. Fermentacin alcohlica en S. cerevisiae.

Si

disponen

de

oxgeno

las levaduras

realizan

una

respiracin

aerbica para metabolizar los azcares hasta dixido de carbono y agua, como se presenta en la siguiente reaccin.

2.2.1. Crecimiento aerbico 1 glucosa + 6O26CO2 + 6H2O generando 686 Kcal de energa libre de Gibbs. Este tipo de crecimiento se aplica en los procesos de fermentacin para la obtencin de protenas unicelulares. En la

ausencia de oxgeno pasan al metabolismo fermentativo produciendo etanol y dixido de carbono como a continuacin se puede observar.

2.2.2. Fermentacin anaerbica 1 glucosa 2CO2 + 2 etanol generando 54 Kcal de energa libre de Gibbs (Tortora et al., 1993, citado por BERNARDINO, 2011).

2.3. Saccharomyces cerevisiae Las levaduras son hongos unicelulares que representan un puente biolgico entre bacterias y organismos superiores, manteniendo las ventajas de microorganismos en cuanto a su fcil manipulacin y crecimiento rpido. S. cerevisiae es quizs la levadura ms importante para la humanidad, ya sea por su utilizacin desde hace miles de aos en la produccin de pan y bebidas alcohlicas por fermentacin, o por ser uno en los organismos eucariticos modelo ms intensamente estudiados a nivel de su biologa celular y molecular. Debido a su relevancia y al amplio conocimiento a nivel gentico, el primer genoma eucariota completamente secuenciado fue el de esta levadura. El anlisis del mismo revelo un tamao de unas 13000kb y unos 6275 genes. El 72% de las secuencias corresponden a secuencias codificantes siendo el tamao promedio de los genes de 1.45kb y solamente el 3.8% de los ORFs contienen intrones. Estudios comparativos de las secuencias permitieron estimar que el 23% de su genoma es similar al de los humanos. La reproduccin de las levaduras, en especial las utilizadas

industrialmente, es normalmente asexual, a travs de la gemacin en la

superficie, pero la reproduccin sexual tambin se puede dar en determinadas condiciones (Goffeau et al. 1996, citado por VALDIVIESO, 2006). Como hospedador para la produccin de protenas con inters biotecnolgicos, S. cerevisiae presenta varias ventajas sobre las bacterias (Romanos et al. 1992, citado por VALDIVIESO, 2006). Al ser clulas eucariotas, permiten realizar los procesos de expresin y maduracin caractersticos de las clulas animales. Entre otras ventajas que presenta esta levadura destacan: ser capaz de realizar modificaciones post-traduccionales (Ej. Acetilaciones N-terminales, Nglicosilaciones y fosforilaciones), necesarias para la actividad biolgica total de las protenas expresadas, y ser un microorganismos seguro desde el punto de vista alimentario, ya que posee el estatus GRAS (generally recognized as safe) que otorga la FDA (Food and Drug Administration) americana. (Ostergaard et al. 2000, citado por VALDIVIESO, 2006).

Figura 2. Micrografa electrnica de barrido de S. cerevisiae.

2.3.1. Mejora de cepas para uso industrial A excepcin de la industria de alimentos, solo unos pocos procesos comerciales de fermentacin utilizan cepas silvestres aisladas

directamente de la naturaleza. En la mayora de los casos se utilizan cepas mejoradas especficamente para la produccin de antibiticos, enzimas y otros metabolitos. En general, el principal motivo para el

desarrollo

industrial

de

cepas

es

el

econmico,

ya

que

las

concentraciones de metabolitos producidos por las cepas silvestres son demasiado baja para desarrollar un proceso a escala industrial. A la vez de un extenso programa de desarrollo de cepas pueden conseguirse los incrementos de produccin necesarios para rentabilizar dichos procesos. El xito de los programas depende del tipo de metabolito o protenas a producir. El rendimiento de aquellos productos que suponen la actividad de uno o pocos genes, como en las enzimas, puede incrementarse simplemente aumentando la dosis gentica. Sin embargo, con los metabolitos secundarios, que frecuentemente son los productos finales de complejos procesos biosinttica altamente regulados, puede ser necesaria una gran cantidad de cambios en el genoma para permitir la seleccin de cepas de alta produccin (Crueger y Crueger, 1989, citado por VALDIVIESO, 2006). La manipulacin gentica de microorganismos y clulas permite modificar el genoma con el objetivo de proporcionar nuevas

caractersticas. Existen varios mtodos para la mejora de cepas: Los mtodos clsicos de mutacin al azar y seleccin. Mutagnesis dirigida hacia un gen o genes dianas del organismo. Obtencin de un nuevo genotipo a travs de la recombinacin de material gentico entre secuencias homologas de ADN de dos orgenes diferentes. Modificacin de genes y/o rutas mediante la alteracin o introduccin de genes en la cepa productora.

2.4. Mutagnesis al azar Se trata de mutaciones en el material gentico no producidas por

recombinacin. Son mutaciones que se dan de manera natural pero en una frecuencia muy baja. Se calcula que de manera natural se producira una mutacin de inters industrial cada 20.000 aos. No es nada prctico, por lo

que es necesario inducirlas, para que se produzcan ms mutaciones en general, de las que podamos extraer las mutaciones prcticas.

Figura 3. Tipos de mutaciones

Podremos aumentar la frecuencia de mutaciones mediante el uso de agentes mutgenos, que pueden ser o bien qumicos o bien fsicos, cuya presencia daa, altera o interfiere en la reparacin del DNA. Se pueden

emplear diferentes tipos de agentes mutagnicos:

Figura 4. Agentes mutagnicos

Como se ve en el cuadro 2, cada agente mutgeno tiene caractersticas y efectos diferentes, por lo que se deber elegir siempre el que ms se ajuste a las necesidades. organismos: Parentales: el mutacin. Mutantes no viables: organismos a los que la dosis del mutgeno ha causado tantas mutaciones que ya no son viables. Mutantes viables tratamiento no les ha afectado, no han sufrido Despus del tratamiento obtendremos 3 tipos de

Los ms numerosos suelen ser siempre los no viables, por lo que ser necesario ajustar la dosis de mutgeno que se aplica para que quede un porcentaje de viables adecuado. Una vez pasado el tratamiento, se han de hacer crecer las clulas en medio rico, para incrementar la viabilidad de los mutantes viables, para recuperarlos del tratamiento. Llegados a este punto podemos empezar a aplicar tcnicas de enriquecimiento de los mutantes. De todos los mutantes obtenidos se deber seleccionar el mutante que resulte ms ventajoso.

Figura 5. Tipos de mutantes.

De todos estos, los mutantes auxtrofos pueden ser de los ms interesantes, mutantes que necesitan la adicin ya que no pueden sintetizarlo. En de un metabolito al medio,

estos mutantes la va de sntesis del

metabolito se puede ver afectada, lo que puede implicar la acumulacin de productos en esa va. Si deseamos uno de esos productos tenemos una mayor produccin. Otra posibilidad es que, debido a que se forma el nutriente, no se forma otra sustancia, que nosotros deseamos. Si cortamos la posibilidad de que se forme el nutriente, la sntesis se desviar hacia el producto deseado. No obstante se ha de tener en cuenta que no todos los auxtrofos para un metablitos sern de inters, puesto que dependiendo del enzima afectado puede no formarse el producto deseado. La deteccin de mutantes auxotrficos es sencilla, puesto que las bacterias que crezcan en medio rico, pero no en medio mnimo sern

auxotrficas. Hasta aqu bien, pero se ha de tener en cuenta, que una vez tengamos estas bacterias, no sabremos para que nutriente son auxtrofas, por lo que deberemos ir haciendo diferentes pruebas hasta identificar el

nutriente en cuestin. Otro punto que se ha de tener en cuenta es que en muchos casos habr mecanismos de regulacin en la bacteria, que no permitirn la acumulacin interesar de intermediarios, por lo que lo que nos de

sern mutantes desregulados, que no tengan regulacin,

manera que la acumulacin de un producto no interfiera con la sntesis final. El mtodo para aislar mutantes resistentes a anlogos consiste en

determinar la concentracin inhibitoria del anlogo, para despus plaquear bacterias tratadas con el agente mutgeno, en medios con concentraciones manera, las bacterias que crezcan en estas desreguladas. Las causas de la

crecientes de inhibidor. De esta concentraciones mayores,

estarn

desregulaciones pueden ser: Se produce una mutacin en la regulacin de un gen, de manera que debido a una menor sntesis, es menos sensible a la incorporacin del anlogo. Puede tener una capacidad disminuida de incorporar el anlogo.

Los mutantes resistentes a anlogos suelen ser sobreproductores, pero no siempre, porque no estn sujetos a regulacin por sustrato. Si es

auxotrfico puede sobreproducir intermediarios de la va en lugar del metabolito final. Una misma ruta metablica puede tener regulacin de diferente

complejidad en diferentes cepas bacterianas, de manera que en el momento de producir una determinada sustancia, trabajaremos con el microorganismo que facilite el trabajo. Al igual que tener el tratamiento mutagnico adecuado, es necesario que tengamos un mtodo preciso para la determinacin y aislamiento del mutante. Pero en caso de que no se pueda detectar mediante ninguno de los mtodos tpicos, de podrn analizar diferentes clones en fermentaciones lquidas para ver cul de ellos sera mejor para la fermentacin deseada (Adrio y Demain, 2006, citado por VALDIVIESO, 2006).

2.4.1. Efecto de las radiaciones sobre las bacterias Se puede definir la radiacin como la propagacin de energa por el espacio. Los principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son:

Figura 6. Tipos de radiaciones que tienen efecto en los seres vivos

Hagamos un tratamiento del tema en funcin de que la radiacin provoque o no ionizaciones en el material, lo cual depende de la energa de los cuantos:

1. Si la energa es E>10 eV, hablamos de radiaciones ionizantes: son los rayos X y los rayos g. El fotn de gran energa incide sobre el tomo, provocando la expulsin de un electrn de gran energa (fotoelectrn), y quedando el tomo en forma ionizada (cargado positivamente). El electrn expulsado suele tener energa suficiente para originar una nueva ionizacin, de la cual surge otro electrn de alta energa, etc. producindose una cadena de ionizaciones, con transferencia linear de energa, hasta que sta se disipa en el material: el ltimo electrn de la cadena es captado por otro tomo o molcula, que queda cargado negativamente. El resultado final es que se forman pares de iones (uno positivo y otro negativo). A su vez, esos iones originados tienden a experimentar reorganizaciones electrnicas ulteriores, que dan pie a cambios qumicos en el sistema que se haba sometido a la irradiacin.

2. Si la energa es E<10 eV, no se producen ionizaciones: los electrones del tomo o molcula pasan transitoriamente (de 108 a 10-10 segundos) a un nivel energtico superior (entonces se habla de que el tomo o molcula estn excitados), pero enseguida dicho electrn vuelve al estado energtico inicial. En su regreso a su nivel energtico previo, el electrn puede dar origen a una variedad de fenmenos: fluorescencia:

emisin de energa a una longitud de onda mayor que la del fotn incidente; fotosensibilizacin: la energa se transfiere a otra molcula; reacciones fotoqumicas: se origina un cambio qumico; emisin de calor: la energa simplemente se disipa en colisiones entre molculas. La luz visible y UV pueden dar origen a reacciones fotoqumicas, aparte de calor. Pero la radiacin infrarroja slo conduce a disipacin de calor, si bien ciertas bacterias fotosintticas anoxignicas pueden

aprovechar el infrarrojo para la fotosntesis (Enrique, 2000)

III. 3.1. Lugar De Ejecucin La

MATERIALES Y METODOS

prctica se realiz en el laboratorio de

microbiologa de la

Universidad Nacional Agraria de la Selva.

3.2. Materiales Azcar (40gr/L) 2 gr. De levadura comercial 1 litro de agua destilada Varillas Probeta Frascos de vidrio Tubos de plsticos graduados Gasa

3.3. Equipos Balanza Cmara digital Lmpara de luz infra roja

3.4. Metodologa Se disolvi 40 gr de azcar y 2 gr de levadura comercial en 1 litro de agua destilada; se dej a temperatura ambiente por 2 horas con la finalidad de que se active la levadura.

Culminado las 2 horas, se procedi a separar 250 ml de la muestra en 2 frascos de vidrio, para posteriormente dejar uno a temperatura ambiente (testigo) y el otro a la cmara de luz infrarroja (influenciado); durante 48 horas.

Figura 7. Pesando 40 gr de azucar

Figura 8. Pesando 2gr de levadura comercial

Figura 9. Procedimiento de activacin de la levadura

Figura 10. Muestras de 250 ml cada uno

Despus de la incubacin durante 48 horas, se prepar dos muestras representativas de cada frasco (influenciado y testigo), extrayendo 120 ml de cada uno respectivamente y diluyndolo en 360 ml de agua destilada con 14.4 gr de azcar.

Figura 11. Materiales utilizados

Figura 12. Extrayendo 360 ml de agua destilada

Figura 13. Diluyendo 14.4 gr de azcar

Figura 14. Diluyendo 120 ml de la muestra en 360 ml de agua azucarada

Luego en cada uno de los frascos de fermentacin se introdujo un tubo graduado invertido, asegurndose que no exista ninguna burbuja de aire en el interior del tubo. Se cerr hermticamente el frasco y se incubo a temperatura ambiente.

Figura 15. Frasco de Fermentacin a T ambiente.

Figura 16. Frasco de Fermentacin a influenciado por la luz infrarroja

Se midi la cantidad de gas formado en el extremo superior del tubo graduado invertido, a partir del inicio de la fermentacin (desde que apareci la primera burbuja de gas). Determinamos el tiempo en el cual se acumul el volumen de gas observado que pudo ser medido en la escala del tubo invertido.

Para calcular el volumen de CO2 se emple la siguiente frmula:

Asumiendo: P1 = P2 = 1 atm. Se obtiene la siguiente frmula:

Dnde: V1: Volumen de CO2 en laboratorio, 22.4 L (condiciones normales) V2: Volumen de CO2 en la muestra T1: Temperatura inicial (K) T2: Temperatura final (K)

Para determinar el peso del etanol formado, se utiliz la siguiente frmula:

Dnde: W: Peso de etanol (gr. Et-OH/ gr. lev. / hr.)

IV.

RESULTADO

4.1. Determinacin

de

produccin

de

etanol

por

Saccharomyces

cerevisiae mutada Como resultados tenemos los siguientes datos del experimento:

DATOS DE INICIO Hora de inicio Temperatura ambiente Cantidad de Levadura experimento Volumen de agua Inicio de la presencia de gas en 8:15 pm 23C 2g 250ml 11:20 pm

Cuadro 01. Datos de inicio

DATOS FINALES Hora Final Temperatura ambiente Volumen Final de CO2 12:25 pm 23C 15ml

Cuadro 02. Datos finales

Para obtener los resultados de produccin de etanol utilizaremos los datos obtenidos en la anterior fase:

a. Hallando el volumen de CO2 terico: 1mol de CO2 = 22.4 L = V1 Presin = 1 atm. T1 = 273K P1 = P2 = Patm T2 = T Amb. = 23 C + 273 = 296K

Por frmula:

Como: P1 = P2 = Presin atmosfrica

Tenemos:

( (

) ( )

de CO2

b. Hallando el volumen de CO2 practico:

T= 23C Tiempo = 65 Vol. de CO2 = 15 ml

60 ----- 100% 65 ----- X X = 108.33% / 100 = 1.083h

Volumen de Moles de CO2 medido: 15 ml de CO2 = 0.015 L 1 mol CO2 ------X ------- 0.015 L L

X = 6.18*10-4 mol CO2

c. Hallando la produccin de etanol: ( )

4.2. Determinacin

de

produccin

de

etanol

por

Saccharomyces

cerevisiae-testigo Como resultados tenemos los siguientes datos del experimento:

DATOS DE INICIO Hora de inicio Temperatura ambiente Cantidad de Levadura experimento Volumen de agua Inicio de la presencia de gas en 8:15 pm 23C 2g 250ml 9:25 pm

Cuadro 03. Datos de inicio

DATOS FINALES Hora Final Temperatura ambiente Volumen Final de CO2 11:30 pm 23C 25ml

Cuadro 04. Datos finales

Para obtener los resultados de produccin de etanol utilizaremos los datos obtenidos en la anterior fase:

d. Hallando el volumen de CO2 terico: 1mol de CO2 = 22.4 L = V1 Presin = 1 atm. T1 = 273K P1 = P2 = Patm T2 = T Amb. = 23 C + 273 = 296K

Por frmula:

Como: P1 = P2 = Presin atmosfrica

Tenemos:

( (

) ( )

de CO2

e. Hallando el volumen de CO2 practico:

T= 23C Tiempo = 125 Vol. de CO2 = 25 ml

60 ----- 100% 125 ----- X X = 208.33% / 100 = 2.08h

Volumen de Moles de CO2 medido: 25 ml de CO2 = 0.025 L 1 mol CO2 ------X ------- 0.025 L X = 1.03*10-3 mol CO2 f. Hallando la produccin de etanol: ( ) L

V.

DISCUSIN

De acuerdo a la metodologa experimental de produccin de etanol en ambos frascos de fermentacin; el resultado de produccin de etanol en el frasco que contena la S. cerevisiae inducida (mutada) por un agente mutgeno (radiacin infrarroja), y mediante los clculos de produccin de etanol por levaduras se cuantifico: Mientras en el otro

frasco de fermentacin contena la S. cerevisiae (testigo), el cual no asido inducido por un agente mutgeno, el cua presento una produccin de ., como se observa presenta una relativa diferencia y a la vez nos indica que la produccin de etanol por S. cerevisiae mutada es mayor que la produccin etanol por la S. cerevisiae no mutada. Para corroborar la diferencia suscribimos la siguiente afirmacin del figura 3. Tipos de mutantes: fermentacin de azucares; a consecuencia del agente mutgeno prdida de un enzima en una ruta metabolica (Adrio y Demain, 2006, citado por VALDIVIESO, 2006). Lo cual nos indica en estos mutantes que la va de sntesis del metabolito se puede ver afectada, lo que puede implicar la acumulacin de productos en esa va. Y si deseamos uno de esos productos tenemos una mayor produccin. sea la fermentacin aerbica se ve comprometida por la accin del agente mutgeno y no le queda mas tomar la ora va de fermentacin anaerbica, para cual a sido introducido en un frasco cerrado. En la mayora de los casos se utilizan cepas mejoradas especficamente para la produccin de antibiticos, enzimas y otros metabolitos. En general, el principal motivo para el desarrollo industrial de cepas es lo econmico, ya que las concentraciones de metabolitos producidos por las cepas silvestres son demasiado baja para desarrollar un proceso a escala industrial (Crueger y Crueger, 1989, citado por VALDIVIESO, 2006).

Por otra parte; la metodologa experimental utilizada para determinar la produccin de etanol por levaduras mutadas, en cuanto a los agentes mutgenos: la radiacin infrarrojo (IR), es considerado como agente mutgeno de acuerdo al cuadro 4. Presenta los principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos. Asi mismo vale aclarar la variacin de la hora de inicio de la fermentacin alcohlica en los dos frascos que tienen bien marcadas los tienpos de inicio y fanal. En el caso del S. cerevisiae mutada inicia ms tarde (11:20 pm), en comparacin de S. cerevisiae no mutada, que empieza la fermentacin (9:25 pm), 115 antes. Sin embargo a la S. cerevisiae mutada le toma 65 para producir un volumen de CO2, igual a 15ml. Mientras a la S. cerevisiae mutada le toma 125 para producir un volumen de CO2, igual a 25ml. Marcando la diferencia en la taza de produccin. Esto se puede deber a que cada agente mutgeno tiene caractersticas y efectos diferentes. Segn Adrio y Demain, (2006), citado por VALDIVIESO, (2006), despus del tratamiento obtendremos 3 tipos de organismos: Parentales (el tratamiento no les ha afectado, no han sufrido mutacin), Mutantes no viables (organismos a los que la dosis del mutgeno ha causado tantas mutaciones que ya no son viables) o viables. Entonces simplemente muy poca presencia de Mutantes viables, por lo que tomo tiempo en dar inicio a la fermentacin por ser una poblacin pequea pero con una taza de produccin alto.

VI.

CONCLUSIN

Se determin la produccin de etanol por S. cerevisiae mutada, siendo , el cual es relativamente mayor que la produccin de etanol por S. cerevisiae no inducida por agente mutgeno, cuyo valor es .

VII.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA

SNCHEZ M. 2011. TESIS Fermentacin De Malta Empleando Un Sistema Semicontinuo En El Proceso De Elaboracin De Cerveza.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE LA MIXTECA. BERNARDINO, S. 2011. TESIS OBTENCIN Y EVALUCIN DEL FENOTIPO DE UNA MUTANTE EN EL GEN SSC1 PRESENTE EN Kluyveromyces marxianus. UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLS DE HIDALGO.

VALDIVIESO, M. 2006. Obtencin y caracterizacin de cepas de Saccharomyces cerevisiae superproductoras de glutatin. Editorial de la Universidad de Granada.

Enrique, I. 2000. Microbiologa General. ACCION DE LOS AGENTES FISICOS SOBRE LAS BACTERIAS (II). [ ] (Hipertextos del rea de la

biologa http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/18_micro.htm, 22 de may. 2012).