PROCEDIMENTO SISTMICO DA QUALIDADE

HEMATOLOGIA
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HEMOGRAMA

EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos de laboratrio 1.PRINCPIO

DATA ELABORAO: 11-04-2011 REVISO N: 00 DATA REVISO: 23/08/2013

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O hemograma corresponde a um conjunto de testes laboratoriais que estabelece os aspectos quantitativos e qualitativos dos eritrcitos (eritrograma), dos leuccitos (leucograma) e das plaquetas (plaquetograma) no sangue. I Eritrograma: inclui os testes laboratoriais que determinam o perfil hematolgico da srie vermelha no sangue perifrico. constitudo por: contagem de eritrcitos (E), dosagem de hemoglobina (Hb), hematcrito (Ht), ndices hematimtrico (VCM, HCM, CHCM, RDW, HDW etc.) e avaliao da morfologia eritrocitria. II Leucograma: engloba os testes laboratoriais que determinam o perfil hematolgico da srie branca (leuccitos) no sangue perifrico. constitudo da contagem global e da contagem diferencial de leuccitos, incluindo a anlise das respectivas alteraes morfolgicas no sangue. expresso no resultado pela frmula leucocitria (com valores relativos e absolutos) de cada subtipo leucocitrio. III Plaquetograma: envolve a contagem de plaquetas, a avaliao da sua morfologia feita por microscopia e as determinaes do volume plaquetrio mdio (VPM) e da variao entre seus valores (PDW). Tanto o eritrograma quanto o leucograma e o plaquetograma podem ser determinados por tcnicas manuais ou automatizadas. 2.AMOSTRA

1. Sangue total colhido em EDTA No h necessidade de sangue em jejum nos casos de dietas leves, contudo em casos de refeies completas, como almoo, deve-se aguardar pelo menos 3 horas
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para coleta. quantidade de gua antes da coleta no quebra o jejum para um exame. - Em caso de envio de amostras de hemogramas para outras unidades, ou outras instituies, evitar contato direto da amostra com o gelo (evita hemlise). As amostras enviadas devem estar acondicionadas entre 2 e 8 graus e devem ser entregues em at 24 horas (mas o esfregao dever ser feito no local de origem com base no sangue colhido em at 3 horas). 3.MATERIAIS E EQUIPAMENTOS 1. Sangue total em EDTA; 2. Lquido diluidor; 3. Pipeta 4. Micropipeta de 20l, 5. Tubo de hemlise 6. Tubo de ensaio 7. Leno de papel ou gaze; 8. Cmara de Neubauer com lamnula; 9. Microscpio ptico comum; 10. 11. 12. Lminas; leo de imerso; Contador diferencial;

DATA ELABORAO: 11-04-2011 Bioqumicos e Tcnicos REVISO N: 00 DATA REVISO: Vale lembrar que a ingesto de pequena 23/08/2013

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4.PASSOS OU ATIVIDADES

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EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos de laboratrio I. ERITROGRAMA

DATA ELABORAO: 11-04-2011 REVISO N: 00 DATA REVISO: 23/08/2013

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Contagem manual de eritrcitos (proporo 1:200) Diluidor: soluo de formol citrato ou soluo de formol-salina

1. Pipetar 4,0mL de soluo diluidora em um tubo de hemlise; 2. Pipetar no mesmo tubo 0,02mL (20L) da amostra de sangue homogeneizado (limpar cuidadosamente a parte externa da ponteira com papel absorvente); 3. Ao pipetar o sangue ter o cuidado de fazer a lavagem do interior da ponteira (por sucessivas aspirao e expulso da amostra) at que no fique nenhum resqucio de amostra em seu interior; 4. Agitar levemente o tubo; 5. Encher a cmara de Neubauer e proceder contagem, em aumento de 400X (ocular 10X e objetiva de 40X), com o condensador baixo; 6. Proceder com o clculo.

Dosagem de hemoglobina mtodo manual da cianometaemoglobina (espectrofotometria) Diluidor: lquido de Drabkin 1. Pipetar 5,0mL do reagente diluidor para um tubo de ensaio mdio; 2. Pipetar no mesmo tubo 0,02mL (20L) da amostra de sangue homogeneizado (limpar cuidadosamente a parte externa da ponteira com papel absorvente); 3. Lavar trs vezes o interior da ponteira, por aspirao e expulso, para s ento fazer a agitao;
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4. Aguardar obrigatoriamente absorbncia do teste em 540nm ou filtro verde, acertando o branco com a prpria soluo de Drabkin; 5. A cor estvel por 72 horas; 6. O procedimento de diluio do padro o mesmo do da amostra. Obs: extremamente importante dosar o padro em triplicata, utilizando a mdia das absorbncias para o clculo do fator de correo.

DATA POP N ELABORAO: 11 11-04-2011 Tcnicos REVISO N: Pg.: 00 1/10 DATA REVISO: pelo menos 5 minutos e determinar a 23/08/2013

Determinao do microhematcrito 1. Aspirar a amostra de sangue total por capilaridade em tubos para microhematcrito at aproximadamente 23 do tubo capilar; 2. Limpar o capilar com papel absorvente; 3. Obliterar (vedar) a parte oposto que foi utilizada para aspirao do sangue com auxlio de chama (caso seja feita com massas de vedao, a mesma parte da aspirao que deve ser vedada); 4. Colocar o tubo capilar em microcentrfuga (parte vedada para o sentido de fora); 5. Centrifugar por 11.000rpm 5 minutos; 6. Fazer a leitura em escala apropriada, ajustando-se o limite inferior da parte globular base da escala e o limite superior da camada plasmtica parte superior da escala;

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EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e de laboratrio 7. O local de separao entre o valor do hematcrito.

DATA ELABORAO: 11-04-2011 Tcnicos REVISO N: 00 DATA REVISO: a fase plasmtica e a parte 23/08/2013

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celular ser

II.

LEUCOGRAMA

Contagem global de leuccitos em cmara de Neubauer (manual, proporo 1:20) Diluidor: Lquido de Turk 1. Pipetar 0,4mL (400l) do lquido diluidor para um tubo de hemlise; 2. Aspirar 0,02mL (20 l) de sangue total, limpar a parte externa da ponteira; 3. Transferir os 20 l para o tubo de hemlise co lquido diluidor, tendo o cuidado de lavar o interior da ponteira por aspirao e expulso; 4. Agitar suavemente, aguardar 2 minutos para depois proceder ao enchimento da cmara e contagem em microscpio ptico comum, em aumento de 100X (ocular de 10X e objetiva de 10X), com condensador baixo; 5. A contagem feita nos quatro quadrados grandes laterais da cmara de Neubauer; 6. Proceder com o clculo. Obs: em caso de leucopenia, prefervel fazer diluio de 110, corrigindo o clculo para essa proporo. Em caso de leucocitoses, podero ser utilizadas diluies bem mais elevadas, 1100 ou 1200, por exemplo, conforme a necessidade, ajustando sempre o clculo de acordo com a respectiva diluio.

Estimativa da contagem global de leuccitos em esfregao

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1. No local exato destinado morfologia (eritrcitos soltos ou apenas se tocando), em aumento de 400X, conte o nmero de leuccitos e, ao final de 10 campos microscpicos, tire a mdia por campo (ou seja, divida o total de leuccitos encontrado por 10); 2. O valor mdio de leuccitos por campo (que no deve ser arredondado) deve ser multiplicado por 3.000; 3. O resultado dessa multiplicao corresponder ao nmero de leuccitosmm3 de sangue. Obs: esse tipo de conduta laboratorial deve ser feito apenas como procedimento ordinrio para verificar possveis discrepncias nas contagens diretas automatizadas. No us-la como regra para liberar resultado de rotina.

DATA ELABORAO: 11-04-2011 REVISO N: 00 DATA REVISO: dos eritrcitos 23/08/2013

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Contagem diferencial de leuccitos a contagem que estabelece a quantidade de cada tipo de leuccito, encontrado ao final da contagem de 100 clulas brancas, realizada em esfregaos sanguneos corados. Determina-se o percentual relativo de cada tipo de leuccito.

III.

Plaquetograma

Contagem manual de plaquetas (mtodo de Brecher e Cronkite) Diluidor: soluo de oxalato de amnio a 1% Protocolo para amostras no plaquetopnicas (diluio 1:20) 1. Diluir 20l de sangue total em 400l de diluente;;

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2. Ter o cuidado de limpar com papel absorvente para s ento misturar por aspirao e expulso o sangue no diluente; 3. Encher o hemocitmetro de Neubauer e coloc-lo sob repouso por 20 minutos em cmara mida (depsito fechado em que se coloca em seu interior um chumao de algodo embebido em gua); 4. Fazer leitura, preferencialmente em microscpio de contraste de fase (melhor distino das plaquetas) ou em microscpio ptico comum em aumento de 400X; 5. Determinar o nmero total de plaquetas observados nos cinco quadrados do quadrante central do retculo (mesmo local destinado contagem de hemcias); 6. Proceder com o clculo.

DATA ELABORAO: 11-04-2011 Tcnicos REVISO N: 00 DATA REVISO: a parte externa da ponteira 23/08/2013

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Estimativa da contagem global de plaquetas em esfregao Realizado obrigatoriamente em aumento de 1000X (objetiva de imerso (100X) e ocular de 10X, nos locais onde os eritrcitos esto bem soltos.

Mtodo de Rabl, modificados por Gottieb e Fnio Nesse mtodo feita a correlao de proporcionalidade entre nmero de eritrcitos e plaquetas por campo e o nmero de eritrcitos e plaquetas por mm3

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1. Conta-se em objetiva de imerso, em mdia quantas plaquetas so vistas por campo com o nmero especfico de eritrcitos; 2. Realizar o clculo por regra de trs simples, sabendo-se previamente a contagem global de eritrcitos (eritrcitosmm3).

DATA POP N ELABORAO: 11 11-04-2011 REVISO N: Pg.: 00 1/10 DATA REVISO: 10 campos e determina-se 23/08/2013

Mtodo de Nosanchuk-Abbey, Apial e Bell Esse mtodo advm de estudos com contadores automatizados que determinam o nmero de plaquetas pela multiplicao por um fator de 20.000, obtido em estudo com contadores automatizados, que transforma o nmero de plaquetas por campo em nmero de plaquetas por mm3. Nesse tipo de estimativa, no necessrio correlacionar eritrcitos com plaquetas, nem saber previamente a contagem de eritrcitos. 1. Contar o nmero de plaquetas em 10 campos, com objetiva de imerso; 2. A leitura deve ser realizada obrigatoriamente, em local da extenso onde os eritrcitos estejam bem soltos (e ainda no esticados), mas com algumas ainda se tocando, independente do nmero de eritrcitos no campo. 3. Proceder com o clculo.

importante lembrar que esse tipo de conduta laboratorial indireta para plaquetas (por qualquer um dos dois mtodos) deve ser restrita a procedimentos de triagem para verificar possveis discrepncias nas contagens diretas automatizadas. No usa-las como forma de liberar resultados, principalmente para pacientes plaquetopnicos graves (<30.000mm3).
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5.CLCULOS I. ERITROGRAMA Contagem manual de eritrcitos (proporo 1:200)

Somar o nmero total de eritrcitos obtidos aps a contagem de cada um dos cinco quadrados do quadrante central da cmara (quatro laterais e um centro)

N ERITRCITOSmm3 = N HEMCIAS ENCONTRADOS X 10.000

Dosagem de hemoglobina mtodo manual da cianometaemoglobina (espectrofotometria)

Fator de correo FC = PADRO gdl MDIA DAS ABSORBNCIAS DO PADRO

HG gdl = ABSORBNCIA DA AMOSTRA X FC

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Silvania Rosa de Souza DATA POP N ELABORAO: 11 11-04-2011 EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos REVISO N: Pg.: 00 1/10 de laboratrio DATA REVISO: Calculo da Hemoglobina e Hemcias a partir do Hematcrito 23/08/2013

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Em condies normais existe uma relao entre hemcias, hemoglobina e hematcrito 1% de Ht = 0,34g de HbdL sg 1% de Ht = 100.000 Hmmm3 de sangue

Ht = Hb (gdL) x 3

Hg = Ht% x 0,34

Hemcias (106) = Ht% 10

Volume Corpuscular Mdio VCM VCM = HEMATCRITO X 10 N HEMCIAS ENCONTRADAS

Hemoglobina Corpuscular Mdia HCM

HCM = HEMOGLOBINA X 10 N HEMCIAS ENCONTRADAS

Concentrao da Hemoglobina Corpuscular Mdia CHCM

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CHCM = Hemoglobina X 100 HEMATCRITO

II.

LEUCOGRAMA Contagem global de leuccitos (manual)

Proporo 1:10 LEUCCITOSMM3 = N LEUCCITOS EM 4 QUADRANTES X 25

Proporo de 1:20 LEUCCITOSMM3 = N LEUCCITOS EM 4 QUADRANTES X 50

Proporo de 1:100 LEUCCITOSMM3 = N LEUCCITOS EM 4 QUADRANTES X 250

Proporo de 1:200 LEUCCITOSMM3 = N LEUCCITOS EM 4 QUADRANTES X 500

Contagem global de leuccitos com correo na presena de eritroblasto

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Silvania Rosa de Souza DATA POP N ELABORAO: 11 11-04-2011 EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos REVISO N: Pg.: 00 1/10 de laboratrio DATA REVISO: CORREO GLOBAL DE LEUCCITOS = 23/08/2013 N LEUCCITOS X 100N

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ERITROBLASTO + 100

III.

Plaquetograma Contagem manual de plaquetas (mtodo de Brecher e Cronkite)

PLAQmm3 SANGUE = N PLAQUETAS X 1000

Mtodo de Rabl, modificados por Gottieb e Fnio

PLAQmm3 = N PLAQUETAS (10 CAMPOS) X N GLOBAL DE ERITRCITOS (EM MILHES) N ERITRCITOS EM 10 CAMPOS

Mtodo de Nosanchuk-Abbey, Apial e Bell

PLAQmm3 = N PLAQUETAS ENCONTRADAS EM 10 CAMPOS X 20000

6.RESULTADOS OU VALORES DE REFERNCIA Hemcias Mulher: 3.900.000 5.400.000 mm3 Homem: 4.400.000 6.000.000 mm3

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EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos de laboratrio Hemoglobina Mulher: 12,0 16,0 gdL Homem: 14,0 18,0 gdL Hematcrito Mulher: 36 49% Homem: 40 54%

DATA ELABORAO: 11-04-2011 REVISO N: 00 DATA REVISO: 23/08/2013

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ndices Hematimtricos: VCM: 80 100 fL - Anemias microcticas: VCM < 80fL - Anemias macrocticas: VCM > 100fL HCM: 27 33 pg - Anemia hipocrmica: HCM < 27pg CHCM: 32 36 gdL RDW*: 11,0 14,5% * RDW um ndice exclusivo da tecnologia. Equivale ao grau de anisocitose, outrora obtido apenas pela morfologia eritrocitria.

Plaquetas At 6 meses: 140.000 a 380.000mm3 Acima de 6 meses: 140.000 a 400.000mm3 VPM: 6,2 a 11,8fL Leuccitos: 5.000 10.000mm3 Homem % mm3 0 0 0 0 05 0 390 40 1.700 78 7.800 Mulher % mm3 0 0 0 0 05 0 410 40 1.700 78 8.200

Contagem diferencial Mielo Meta Basto Segmentad o

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EXECUTOR: Biomdicos, Bioqumicos e Tcnicos de laboratrio Neutrfilo Linfcito Moncito Eosinfilo Basfilo 40 78 20 50 2 10 15 02 1.700 7.800 1.000 4.500 100 1.000 20 500 0 200

DATA ELABORAO: 11-04-2011 REVISO N: 00 DATA REVISO: 40 - 1.700 23/08/2013

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78 20 50 2 - 10 1-5 0-2

8.200 1.000 4.500 100 1.000 20 500 0 200

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