CIENCIASBIOLGICAS

ALUMNO: Quiroz Ruiz Hans Ramn

CURSO:

Microbiologa acutica

TEMA:

* DBO * Microflora de aguas residuales

DOCENTE:

Olga Francia Arana

Lambayeque, diciembre del 2012

NDICE

INTRODUCCIN

. 1

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO... 2 Aspectos Tericos Generales...... 2 DBO carboncea............ 3 DBO nitrogenada........... 3 OD(Oxigeno disuelto)....... Interferencias en la DBO................................... 4 4

DEMANDA QUMICA DE OXGENO..... 4 Relacin entre DBO y DQO. 6 MTODO DE ANLISIS DE LA DBO..... 7

Reactivos... 7 Equipo y materiales..... 8 Limpieza del material... 9 PROCEDIMIENTO . Preparacin de agua para dilucin... Control del agua de dilucin..... Control de la glucosa-cido glutmico.... Inculo.. Pre-tratamiento de la muestra ...... Muestras sobresaturadas con OD Inhibicin de la nitrificacin. 9 9 10 10 11 11 12 12

Tcnica de dilucin. 12 Determinacin del OD inicial..... 13

Mtodo yodomtrico. 13 Mtodo electromtrico. 13 Determinacin del OD final.. 14

Diagrama de flujo del Procedimiento para determinar OD........ 14 Diagrama de flujo del procedimiento DBO...15

 MICROFLORA DE AGUAS RESIDUALES....17 Microorganismos patgenos vinculados al agua..17 Tipologa de los microorganismos presentes en aguas residuales...17 Concentracin de microorganismos presentes en aguas residuales..18 TRATAMIENTO BIOLGICO DE AGUAS RESIDUALES..21 PROCESOS ANAEROBIOS.. 21 PROCESOS AEROBICOS..... .22

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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INTRODUCCION La contaminacin del agua se debe principalmente a la incorporacin de materias extraas al agua, como microorganismos, productos qumicos, residuos industriales y de otros tipos, o aguas residuales. Estas materias deterioran la calidad del agua y la hacen intil para sus usos posteriores. Gracias a que gran parte de los contaminantes de las aguas residuales y superficiales son orgnicos, en el tratamiento de estas es aprovechada dicha coyuntura para removerlos a partir de procesos de biodegradacin en los que participan microorganismos que se alimentan de este material, en presencia de oxigeno. En este sentido para desarrollar este procedimiento es necesario determinar cuanta cantidad de oxigeno necesitan estos microorganismos para consumir la materia orgnica presente en el agua. A este tratamiento se le conoce como DBO.

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DEMANDABIOLGICADEOXGENO (D.B.O.)

I.

ASPECTOS TERICOS GENERALES

Es un parmetro indispensable cuando se necesita determinar el estado o la calidad del agua de ros, lagos, lagunas o efluentes. La demanda 'bioqumica' de oxgeno (DBO), es un parmetro que mide la cantidad de materia susceptible de ser consumida u oxidada por medios biolgicos que contiene una muestra lquida, disuelta o en suspensin. Se utiliza para medir el grado de contaminacin, normalmente se mide transcurridos cinco das de reaccin (DBO5), y se expresa en miligramos de oxgeno diatmico por litro (mgO2/l). El mtodo de ensayo se basa en medir el oxgeno consumido por una poblacin microbiana en condiciones en las que se ha inhibido los procesos fotosintticos de produccin de oxgeno en condiciones que favorecen el desarrollo de los microorganismos especialmente bacterias sean aerobias o anaerobias facultativas: Pseudomonas, Escherichia, Aerobacter, Bacillius, adems de hongos y plancton. La curva de consumo de oxgeno suele ser al principio dbil y despus se eleva rpidamente hasta un mximo sostenido, bajo la accin de la fase logartmica de crecimiento de los microorganismos. Es un mtodo aplicable en aguas continentales (ros, lagos o acuferos), aguas negras, aguas pluviales o agua de cualquier otra procedencia que pueda contener una cantidad apreciable de materia orgnica. Este ensayo es muy til para la apreciacin del funcionamiento de las estaciones depuradoras. No es aplicable, sin embargo, a las aguas potables, ya que al tener un contenido tan bajo de materia oxidable la precisin del mtodo no sera adecuada. En este caso se utiliza el mtodo de oxidabilidad con permanganato potsico. El mtodo pretende medir, en principio, exclusivamente la concentracin de contaminantes orgnicos. Sin embargo, la oxidacin de la materia orgnica no es la nica causa del fenmeno, sino que tambin intervienen la oxidacin de nitritos y de las sales amoniacales, susceptibles de ser tambin oxidadas por
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las bacterias en disolucin. Para evitar este hecho se aade Naliltiourea como inhibidor. Adems, influyen las necesidades de oxgeno originadas por los fenmenos de asimilacin y de formacin de nuevas clulas. Cuanto mayor cantidad de materia orgnica contiene la muestra, ms oxgeno necesitan sus microorganismos para oxidarla (degradarla). Tambin se producen variaciones significativas segn las especies de grmenes, concentracin de estos y su edad, presencia de bacterias nitrificantes y de protozoos consumidores propios de oxgeno que se nutren de las bacterias, entre otras causas. Es por todo esto que este test ha sido constantemente objeto de discusin: sus dificultades de aplicacin, interpretacin de los resultados y reproductibilidad se deben al carcter biolgico del mtodo. Segn las reglamentaciones, se fijan valores de D.B.O. mximo que pueden tener las aguas residuales, para poder verterlas a los ros y otros cursos de agua. De acuerdo a estos valores se establece, si es posible arrojarlas directamente o si deben sufrir un tratamiento previo. DBO carboncea Para el anlisis de DBO carboncea se inhiben las bacterias nitrificantes con agentes especficos como azul de metileno o por medio de pre tratamientos como pasteurizacin, cloracin o acidificacin. Es utilizada por las bacterias para degradar compuestos organicos de carbono

DBO nitrogenada o DBON Es la cantidad de oxigeno necesaria para que los microorganismos oxiden el amoniacao presente en la materia orgnica a nitrato y luego a nitrito

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II.

OD (OXIGENO DISUELTO)

El oxigeno disuelto es necesario para mantener las condiciones de vida de los seres que viven en el agua y por tanto es un parmetro importante en el anlisis de la polucin de un cuerpo de agua. El OD es consumido por los seres vivos especialmente los microorganismos descomponedores de la materia orgnica. La concentracin de OD en el agua aumenta por fotosntesis de las plantas y algas acuticas o por re-aireacin, en contacto con la atmosfera. El OD tiene una concentracin mxima para ciertas condiciones de temperatura e salinidad del agua, que es conocida como concentracin de saturacin de oxigeno disuelto en agua con salinidad cero y en condiciones de presin atmosfrica media al nivel del mar.

Tabla 1. Concentracin de OD de saturacin para diferentes temperaturas

del agua. Valores correspondientes a aguas dulces (salinidad cero presin atmosfrica al nivel del mar)

TEMPERATURA DEL AGUA C 0 5 10 15 20 25 30 40

CONCENTRACION DE OD (mg.l-1) 14.6 12.7 11.3 10.1 9.1 8.2 7.5 6.4

INTERFERENCIAS EN LA DBO El pH cido o alcalino Cloro residual Nitritos: Es la interferencia ms comn en las muestras de DBO5 incubadas. Sustancias inorgnicas y orgnicas reductoras.

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El pH expresa el grado de acidez o alcalinidad del agua, en valores de 0 a 14, siendo que valores inferiores a 7 indican aguas cidas e valores superiores a 7 indican aguas alcalinas. El pH del medio (agua) controla as reacciones qumicas de muchos otros poluentes. Valores bajos de pH aceleran a descomposicin de materiales potencialmente txicos. Valores altos de pH pueden llevar a un aumento en la concentracin de amonio, que es txico para los peces.

III.

DEMANDA QUMICA DE OXGENO

Llamada tambin demanda inmediata, es la cantidad de oxgeno que sustancias reductoras, como la materia orgnica, presentes en un agua residual necesitan para descomponerse, sin la intervencin de microorganismos. La DQO no diferencia la materia orgnica biolgicamente oxidable y la biolgicamente inerte. La glucosa y la lignina pueden ser oxidadas qumicamente en la prueba de la DQO pero slo la glucosa es oxidada en la DBO debido a que no existen bacterias capaces de asimilar la lignina. Esto ocurre en residuos provenientes de las fbricas de pulpa y papel, las cuales tienen altas DQO y relativamente bajas DBO.
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La OPS maneja como criterios para calificar la contaminacin de los ros y quebradas los siguientes parmetros: 9 9 9 9 Ro Ro Ro Ro muy limpio DQO < 2 mg/L limpio DQO: 2,5 mg/L sucio DQO: 5 mg/L en malas condiciones DQO > 7 mg/L

En el anlisis de la DQO se utiliza el dicromato de potasio como OXIDANTE, dado que es capaz de oxidar casi todos los compuestos orgnicos excepto los cidos grasos de bajo peso molecular, los cuales requieren catalizadores como Ion plata, y la piridina y los hidrocarburos aromticos que no pueden ser oxidados. El dicromato puede obtenerse como reactivo puro, permitiendo preparar soluciones exactas por peso y dilucin con agua. Es un oxidante fuerte en soluciones cidas.

RELACIN ENTRE DBO Y DQO La DBO y la DQO son los parmetros ms importantes en la caracterizacin de las aguas residuales. La DBO consiste de un proceso biolgico y como tal no est exento de los problemas que conlleva un anlisis de este tipo. Si no se tienen los cuidados y la experiencia necesaria los resultados conducen a errores y malas interpretaciones. Otra desventaja de la DBO es que se requiere de mucho tiempo para el trmino del anlisis, por lo que los resultados solo estarn disponibles hasta cinco das despus de que se inicia la prueba. La DQO es una prueba que solo toma alrededor de tres horas, por lo que los resultados se pueden tener en mucho menor tiempo que lo que requiere una prueba de Demanda Bioqumica de Oxigeno. Es posible para un agua superficial o residual correlacionar su valor de DBO y DQO, para estimar la DBO con un valor conocido de DQO. Desde luego, la muestra de agua deber provenir siempre del mismo origen, y tener dentro de un estrecho margen de variacin, las mismas cualidades entre cada muestreo y anlisis efectuado.

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IV.

MTODO DE ANLISIS DE LA DBO

El mtodo consiste en la incubacin a 20C, de las muestras en botellas hermticamente cerradas para evitar la entrada de aire, durante 5 das. Se mide el oxgeno disuelto al iniciar y al finalizar la incubacin. La DBO es la diferencia entre el OD inicial y el OD final. Se recomienda analizar inmediatamente o enfriar la muestra a 4C hasta por seis horas. Antes de analizarla se lleva a 20 C. Las muestras compuestas se mantienen a 4C y una vez se tenga la mezcla (perodos mximos de 24 horas) se analiza inmediatamente. No es posible poner grandes cantidades de muestra ya que adems del material orgnico digerible, se requiere oxigeno para el metabolismo de las bacterias y la solubilidad del oxigeno en el agua es bastante limitada (aproximadamente 8 mg/l 25C y 1 atm. de presin). Si el material orgnico est en exceso de la cantidad de oxigeno requerido, como lo indica la ecuacin (1) al trmino de la prueba no hay oxigeno disuelto que se pueda medir y no es posible evaluar la DBO. La ecuacin (2) es la deseable, ya que de esta manera si se puede determinar la cantidad de oxigeno consumido, restando el oxigeno disuelto al final de la prueba con el oxigeno inicialmente presente. Bacterias + O2 + Sustrato Bacterias + O2 + Sustrato a) REACTIVOS

Bacterias + Sustrato (1) Bacterias + O2 (2)

Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4) Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na2HPO47H2O) Cloruro de amonio (NH4Cl) Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO47H2O) Cloruro de calcio anhidro (CaCl2) Cloruro frrico hexahidratado (FeCl36H2O) cido sulfrico concentrado (H2SO4) Hidrxido de sodio (NaOH) Sulfito de sodio (Na2SO3)
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2-cloro-6 (triclorometil) piridina Glucosa grado patrn primario (C6H12O6) cido glutmico grado patrn primario(C5H9NO4) cido clorhdrico (HCl) Acido ntrico (HNO3)

9 Disolucin amortiguadora de fosfato. 8,5 g de fosfato Monobsico de potasio; 21,75 g de fosfato di-bsico de potasio; 33,4 g de fosfato di-bsico de sodio heptahidratado y 1,7 g de cloruro de amonio, disolver en 500 ml de agua y aforar a 1 l. El pH de la disolucin debe ser de 7,2. Desechar el reactivo (o cualquiera de los siguientes reactivos) si hay algn signo de crecimiento biolgico en el frasco de almacenamiento. 9 Disolucin de sulfato de magnesio. 22,5 g de sulfato de magnesio heptahidratado, disolver en agua y diluir a 1 l. 9 Disolucin de cloruro de calcio. 27,5 g de cloruro de calcio anhdro, disolver en agua y diluir a 1 l. 9 Disolucin de cloruro frrico. 0,25 g de cloruro frrico hexahidratado, disolver en agua y diluir a 1 l. 9 Disolucin de cido sulfrico (0,1N). 2,8 ml de cido sulfrico concentrado a 500 ml de agua, mezclar bien y diluir hasta 1 l. 9 Disolucin de hidrxido de sodio (0,1N). 4,0 g de hidrxido de sodio, disolver en agua y diluir a 1 l. 9 Disolucin de sulfito de sodio. 1,575 g de sulfito de sodio, disolver en agua y diluir a 1 l. Esta disolucin no es estable; por lo que debe prepararse diariamente. 9 Disolucin patrn de glucosa-cido glutmico. Secar glucosa y cido glutmico a 103C durante una hora. Pesar aproximadamente y con precisin 150,0 mg de glucosa y 150,0 mg de cido glutmico, diluir en agua y aforar a 1 l. Preparar inmediatamente antes de usarla. 9 Disolucin de cloruro de amonio. 1,15 g de cloruro de amonio y disolver en 500 ml de agua, ajustar el pH a 7,2 con disolucin de hidrxido de sodio y aforar a 1 l. La disolucin contiene 0,3 mg N ml-1 b) EQUIPO Y MATERIALES Incubador: Controlado por termostato a 20C 1C. Eliminar toda la luz para evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg Medidor de oxgeno disuelto Botellas de Winkler de 200-300 ml de capacidad.

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Medidores de oxigeno disuelto

c) Limpieza del material. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolucin de cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua. Los detergentes con base de amoniaco no deben usarse para la limpieza del material. Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente no inico, libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la noche y volver a enjuagarse con agua libre de metales. Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse remojando de 12 h a 24 h con agua regia (3 partes de HCl concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) despus debe ser enjuagado con agua libre de metales. En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o hexano. PROCEDIMIENTO i. Preparacin de agua para dilucin colocar el volumen requerido de agua en un frasco y aadir por cada litro de agua 1 ml de cada una de las siguientes disoluciones: disolucin de sulfato de Magnesio, disolucin de cloruro de calcio, disolucin de cloruro frrico y disolucin amortiguadora de fosfatos. Preparar el agua de dilucin diariamente.

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Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el agua de dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada de 20C. Saturar con oxgeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgnica durante 1h por lo menos. Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo contenido de materia orgnica, es necesario inocular la muestra. Si se requiere, sembrar el agua de dilucin como se indicara luego Control del agua de dilucin

ii.

Utilizar este procedimiento como una comprobacin aproximada de la calidad del agua de dilucin. Si la disminucin de oxgeno disuelto del agua excede de 0,2 mg l-1, obtener agua de mejor calidad mejorando la purificacin o usar agua de otra fuente. Si se requiere inhibir la nitrificacin, almacenar el agua de dilucin sembrada en una habitacin oscura a temperatura ambiente hasta que la captacin de oxgeno disuelto se haya reducido lo suficiente para cumplir los criterios de comprobacin del agua de dilucin. No se recomienda su almacenamiento cuando la DBO5 se va a determinar sin inhibir la nitrificacin ya que pueden desarrollarse microorganismos nitrificantes durante ese tiempo. Si el agua de dilucin no ha sido almacenada para mejorar su calidad, aadir suficiente inculo como para un consumo de OD de 0,05 mg l-1 a 0,1 mg l-1 en cinco das a 20C. Al Incubar en un frasco Winkler lleno de agua de dilucin durante cinco das a 20C, el consumo no debe ser mayor a 0,2 mg l-1 y preferiblemente no menor a 0,1 mg l-1. Control de la glucosa-cido glutmico

iii.

Utilizar la disolucin de glucosa cido glutmico como disolucin madre de control. La glucosa tiene una tasa excepcionalmente alta y variable de oxidacin, pero cuando se utiliza con cido glutmico, dicha tasa se estabiliza y es similar a la obtenida en muchas aguas residuales municipales. Alternativamente, si un agua residual particular contiene un componente principal identificable que contribuya a la DBO5, utilizar este compuesto en lugar de la glucosa-cido glutmico.
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Determinar la DBO5 de una disolucin al 2 % de la disolucin de control patrn de glucosa cido glutmico utilizando las tcnicas expuestas en los incisos iv. Inculo Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces de oxidar la materia orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual domstica, los efluentes no clorados o sin desinfeccin, los efluentes de las plantas de tratamiento de desechos biolgicos y las aguas superficiales que reciben las descargas de aguas residuales que contienen poblaciones microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados, residuos desinfectados, residuos de alta temperatura o con valores de pH extremos). Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema de tratamiento biolgico de aguas residuales. Cuando se usa como siembra el efluente de tratamiento biolgico de sistema de aguas residuales se recomienda la inhibicin de la nitrificacin. Cuando no se disponga de sta, utilizar el sobrenadante del agua residual domstica despus de dejarlo reposar a temperatura ambiente durante al menos 1 h, pero no ms de 36 h. Determinar si la poblacin existente es satisfactoria haciendo la prueba de la siembra en una muestra para DBO5. El incremento del valor de la DBO5 indica una siembra exitosa. Pre-tratamiento de la muestra Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico o hidrxido de sodio de concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms del 0,5 %. El pH del agua de dilucin sembrada no debe verse afectado por la dilucin de la muestra. Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomndolas antes del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuo detectable de cloro, sembrar el agua de dilucin. Si hay cloro residual, eliminar el cloro de la muestra y sembrar con inculo. No se deben analizar las muestras cloradas sin sembrar el agua de dilucin. En algunas muestras, el cloro desaparece en el lapso de 1 h a 2 h despus de su exposicin a la luz. Esto suele ocurrir durante el
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v.

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transporte o la manipulacin de la muestra. Para las muestras en las que el residuo de cloro no se disipe en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual aadiendo disolucin de sulfito de sodio. Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de sodio cuantificando el cloro residual total. Aadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la disolucin de sulfito de sodio determinada por la prueba anterior, mezclar y despus de 10 min a 20 min, comprobar el cloro residual de la muestra. Muestras sobresaturadas con OD En aguas fras o en aguas donde se produce la fotosntesis (aguas de embalses), es posible encontrar muestras que contienen ms de 9,0 mg OD l-1 a 20C. Para evitar la prdida de oxgeno durante la incubacin de tales muestras, reducir el OD por saturacin, calentando la muestra aproximadamente a 20C en frascos parcialmente llenos mientras se agitan con fuerza o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido. Ajustar la temperatura de la muestra a 20C 1C antes de hacer diluciones. Inhibicin de la nitrificacin Si se requiere inhibir la nitrificacin adicionar 3,0 mg de 2-cloro-6(triclorometil) piridina (ver inciso 6.11) a cada uno de los frascos antes de recolectar o bien adicionar la cantidad suficiente de agua para tener una concentracin de 10 mg l-1 aproximadamente. Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se incluyen, los efluentes tratados biolgicamente, las muestras sembradas con efluentes tratados biolgicamente y las aguas superficiales entre otras. Debe hacerse la observacin del uso de inhibicin del nitrgeno cuando se presente el informe de los resultados. vi. Tcnica de dilucin Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg l1 y una captacin de OD de al menos 2 mg l-1. La tcnica da mejores resultados cuando el OD est entre 1-2 mg/L (Odi Odf) despus de 5 das de incubacin, producen los resultados
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ms confiables. Hacer varias diluciones (al menos 3) por duplicado de la muestra preparada para obtener una captacin de OD en dicho intervalo. La experimentacin con una muestra concreta permite el uso de un nmero menor de diluciones. En ausencia de datos previos, utilizar las siguientes diluciones: Si no se tienen datos, se realizan diluciones as: 0 1 % para residuos industriales fuertes 1 5 % para aguas residuales depuradas 5 25 % para efluentes de plantas de tratamiento biolgico 25 100 % para aguas de corrientes y ros contaminados. El inoculo se agrega el agua de dilucin en cantidades conocidas. Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta volumtrica, aadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales de 300 ml. Aadir cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos tipo Winkler o al agua de dilucin. Llenar los frascos con suficiente agua de dilucin, sembrada si es necesario, de forma que la insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas. No realizar diluciones mayores de 1:300 (1 ml de la muestra en un frasco). Determinar el OD inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes diluciones. En los frascos de los duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar hermticamente el tapn, poner un sello hidrulico y la contratapa e incubar durante 5 das a 20C.

vii.

DETERMINACIN DEL OD INICIAL Mtodo yodomtrico La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo yodomtrico de azida modificado. Mtodo electromtrico La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo electromtrico con electrodo de membrana. Los aceites, grasas o cualquier sustancia que se adhiera a la membrana puede ser causa de baja respuesta en el electrodo. Emplear un blanco del agua de dilucin como un control aproximado de la calidad del agua de dilucin no sembrada y de la limpieza de los frascos de incubacin. Junto con cada lote de
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muestras, incubar un frasco de agua de dilucin no sembrada. Determinar el OD inicial y final. El consumo de OD no debe ser mayor de 0,2 mg l-1 y preferentemente no menor a 0,1 mg l-1. Incubar a 20C 1C las botellas de DBO5 que contengan las muestras con las diluciones deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin y el control de glucosa-cido glutmico. En caso de no contar con contratapas, diariamente se debe verificar que el sello hidrulico est intacto en cada botella incubada, agregar agua si es necesario.

viii.

DETERMINACIN DEL OD FINAL

Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la muestra, en los controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser realizada inmediatamente despus de destapar la botella de Winkler, para evitar la absorcin de oxgeno del aire por la muestra.

Diagrama de flujo del Procedimiento para determinar OD Recoger la muestra en una botella de winkler (300mL) Adicionar 1 ml de sulfato de manganeso Adicionar 1 ml de lcali-yoduro-nitruro. Tapar con cuidado, evitando formacin de burbujas. Mezclar invirtiendo la botella varias veces. Dejar reposar el precipitado y aadir 1 ml de H2SO4 Tapar y mezclar hasta desaparicin del precipitado Tomar 200 ml de solucin original Titular con tiosulfato 0,025 N, cuando aparezca el color amarillo claro. 10. Adicionar gotas de almidn, aparece color azul, Continuar titulando hasta desaparicin del color 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

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Diagrama de flujo del procedimiento DBO 1. Preparar agua de dilucin: V agua necesario + 1 ml de cada solucin por cada litro + aire filtrado. Inocular el agua de dilucin, si es necesario 2. realizar un control del agua de dilucin: Odi-Odf(5das) 0,2 mg/L, Si es mayor mejorar el agua de dilucin. 3. Tratar la muestra con H2SO4 1N o con NaOH 1N para obtener pH entre 6,4 y 8

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4. Adicionar Na SO si existe cloro residual

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5. 6. 7. 8.

9. 10. 11. 12.

Ajustar temperatura a 20C +/- 1C Adicionar inhibidores de nitrificacin si es necesario Diluir la muestra en la botella o en recipientes graduados Llenar por duplicado primero con agua de dilucin hasta la mitad + el volumen de muestra seleccionado y terminar de llenar con el agua de dilucin. Mezclar bien con varilla de vidrio y llenar dos botellas con agua de dilucin para el blanco. Medir el OD inicial de una botella con muestra y de otra con agua de dilucin. ODb i y ODm i. Tapar las botellas hermticamente con sello hidrulico y Ponerlas a incubar a 20C durante cinco das. Medir ODb f y ODm f a los cinco das.

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MICROFLORADEAGUAS RESIDUALES
1. Microorganismos patgenos vinculados al agua. 1.1 Tipologa de los microorganismos presentes en aguas residuales

La eventual presencia de microorganismos patognicos constituye una preocupacin dominante, por el riesgo del agua reutilizada pueda ser un vehculo de transmisin de enfermedades y de esta forma ser un problema de salud pblica. Las aguas como cualquier otra sustancia pueden tener grandes cantidades de microorganismos, bacterias, algas, protozoarios, fungos, virus la gran mayora de los cuales son ubicuos e inofensivos para el hombre; sin embargo algunos microorganismos son patognicos y su presencia en el agua hace de esta un medio privilegiado de distintas enfermedades, algunas muy peligrosas, y es la causa de elevadas tasas de mortalidad en los pases en vas de desarrollo, principalmente en la poblacin infantil. Los microorganismos patognicos presentes en las aguas naturales provienen de las excreciones (heces y orina) de personas infectadas. Los patgenos presentes en las aguas residuales se clasifican en los siguientes grupos: bacterias, protozoarios, helmintos y virus. De los cuales son microorganismos los que se indican a continuacin: Las bacterias son microorganismos unicelulares, de 1-2 mm de dimensin, que pueden presentar diversos formatos: cocos bacilos, vibriones, con forma helicoidal (espirilos) e filamentosas. Los protozoarios son microorganismos unicelulares, que ingieren alimentos de nutricin semejante al de los animales captan, ingieren y digieren internamente masas slidas o partculas alimentares. Son microbios relativamente grandes, con dimetros comprendidos entre 2 y 100 m. Algunos protozoarios son mviles, por tener pseudpodos o por disponer de cilios. Algunas especies de protozoarios son parasitas.

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Los virus son partculas de ADN o de ARN envueltas por una cpsula proteica, y son parsitos obligatorios. Los virus son los ms pequeos y los ms simples de todos los microorganismos con un dimetro comprendido entre 0,01 e 0,3 m. Cuando una clula parasitada por un virus muere, esta se lisa liberando gran nmero de nuevos virus. En la tabla 2 se muestra los gneros de patognicos ms comunes en las aguas residuales dentro de los grupos mencionados y con las enfermedades a las que dan origen 1.2 concentracin de microorganismos presentes en aguas residuales La cantidad y tipologa de los microorganismos presentes en las aguas residuales urbanas son muy variables de una poblacin a otra variando tambin en la misma poblacin los datos al transcurrir los meses e incluso los das. La cantidad y el tipo de los microorganismos dependen de factores relacionados con el estado de salud de la poblacin (que est relacionado con las caractersticas socioeconmicas) y de factores condicionantes de sobrevivencia de estos microorganismos en las aguas. La cantidad de microorganismos (patgenos o no patgenos) excretados por cada individuo es muy elevada, expresndose en millones por gramos de heces. Ver tabla 3.

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Tabla 2. Grupo de patgenos ms comunes vinculados al agua y sus enfermedades asociadas Microorganismo Enfermedad Grupo patognico
Campylobacter jejuni E. coli patognica S. typhi S. paratyphi Otras espcies Shigella spp. Vibrio. cholerae Otros vibrios Yersinia enterocolitica Balantidium coli PROTOZOARIOS Entamoeba histolytica Giardia lamblia Enterovrus Poliovrus VIRUS Reovrus

BACTERIAS

gastroenteritis Enteritis diarrea Fiebre tifoidea Fiebre paratifoidea salmonelosis Disentera bacilar. Clera. Gastroenteritis y septicemia. Disentera y lcera del colon. Diarrea lcera del colon, disentera amebiana absceso heptico Diarrea, mala absorcin Parlisis meningitis enfermedades respiratorias, gastroenteritis Conjuntivitis aguda, diarrea, enfermedades respiratorias Gastroenteritis infantil. hepatitis

Adenovrus

Rotavrus Virus de la hepatitis A Ancylostoma Duodenal HELMINTOS Ascaris lumbricoides Enterobius vermicularis Hymenolepsis nana Necator americanus Strongyloides stercoralis Taenia saginata Taenia solium Trichuris trichura

Distintos tipos de parasitosis

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Tabla 3. Concentracin de microorganismos patgenos en aguas residuales no tratadas Carga Concentracin excretada en tpica en aguas Microorganismo aguas residuales no residuales tratadas (n/g heces) (NMP/100 mL) Coliformes 107-109 totales Coliformes 105-108 fecales Clostridium 103-105 Bacterias perfringens enterococcus 104-105 Streptococcus 104-106 faecales Pseudomonas 103-106 aeruginosa Shigella 107 100-103 Salmonella 108 102-104 Protozoarios Cryptosporidium 101-105 parvum Entamoeba 105 100-105 histolystica Giardia lamblia 105 101-104 Helmintos Huevos de 104 100-103 Ascaris lumbricoides Virus Virus entricos 107 103-104 Colfagos 102-104

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Citaremos aqu las bacterias ms importantes dentro de las aguas residuales urbanas segn los procesos que en ellas se efectan: Bacterias nitrificantes Son las Nitrobacter y Nitrosomonas, que necesitan como fuente de energa reacciones qumicas determinadas. Son aerobias. Las primeras oxidan el cido nitroso y las segundas el amoniaco. Bacterias ferruginosas y manganosas Son las que extraen su energa de procesos de oxidacin de sales ferrosas o manganosas, y pertenecen a ella los gneros Clonothrix, Leptothrix, etc. Tiobacterias Las Thiotrix, Beggiatoas y otras oxidan el SH2, y al agotar el gas oxidan el azufre producido a cido sulfrico. Bacterias oxidantes del hidrgeno Las Hydrogenomonas oxidan el hidrgeno producido por las bacterias hetertrofas en las fermentaciones de los glcidos, produciendo agua.

TRATAMIENTO BIOLOGICO DE AGUAS RESIDUALES Especficamente el tratamiento biolgico de las aguas residuales es considerado un tratamiento secundario ya que este est ligado ntimamente a dos procesos biolgicos, los cuales pueden ser aerobios y anaerobios. PROCESOS ANAEROBIOS El proceso anaerbico depende de reacciones de transferencia de H2 inter-especies como: Digestin inicial de las sustancias macromoleculares por proteasas, polisacaridasas y lipasas extracelulares hasta sustancias solubles. Fermentacin de los materiales solubles a cidos grasos. Las bacterias celulolticas rompen las clulas en celulosa, celobiasa y glucosa libre; la glucosa es fermentada por anaerobios en varios productos de fermentacin: acetato, propionato, butirato, H2 y CO2. Fermentacin de los cidos grasos a acetato, CO2 e H2.

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PROCESOS AEROBICOS El crecimiento de los microorganismos y su actividad degradativa crecen proporcionalmente a la tasa de aireacin. Las sustancias orgnicas e inorgnicas acompaantes productoras de enturbiamiento son el punto de partida para el desarrollo de colonias mixtas de bacterias y hongos de las aguas residuales, los flculos que, con una intensidad de agitacin decreciente, pueden alcanzar un dimetro de unos mm dividindose o hundindose despus. La accin degradativa o depuradora de los microorganismos en un proceso se mide por el porcentaje de disminucin de la DBO en las aguas residuales tratadas. Dicha disminucin depende de la capacidad de aireacin del proceso, del tipo de residuos y de la carga de contaminantes de las aguas residuales y se expresa as mismo en unidades de DBO. Entre las bacterias de los flculos predominan las representantes de gneros con metabolismo aerobio-oxidativo como Zooglea, Pseudomonas, Alcaligenes, Arthrobacter, Corynebacterium, Acinetobacter, Micrococcus y Flavobacterium. Pero tambin se presentan bacterias anaerobias facultativas, que son fermentativas en ausencia de sustratos oxigenados, de los gneros Aeromonas, Enterobacter, Escherichia, Streptococcus y distintas especies de Bacillus. Todas las bacterias contribuyen con las cpsulas de muclago y con las microfibrillas al crecimiento colonial y a la formacin de los flculos. En las aguas residuales con una composicin heterognea, la microflora se reparte equitativamente entre muchos grupos bacterianos. En la seleccin de bacterias y en la circulacin y formacin de flculos juegan un importante papel los numerosos protozoos existentes, la mayora de ellos ciliados coloniales y pedunculados de los gneros Vorticela, Epystilis y Carchesium, aunque tambin puedan nadar libremente como los Colpidium que aparecen a la par de ellos, alimentndose de las bacterias de vida libre que se encuentran tanto sobre la superficie como fuera de las colonias. Su funcin es esencial en la consecucin de unas aguas claras y bien depuradas. Otros microorganismos que tambin intervienen en el tratamiento aerobio de aguas residuales son: Citrobacter, Serratia, mohos y levaduras que actan mas de componentes acompaantes que de degradantes y algunas algas como Anabaena que convierte los poliuretanos en H2; Chrorella los alginatos los convierte en glicolato y Dulaniella los alginatos en glicerol.
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Cuando se presenta aportes de agua residual, desechos industriales y contaminantes, las alteraciones deben ser neutralizadas por los microorganismos de la flora nativa, la microflora del agua residual es muy rica en bacterias sin embargo no es muy diversa, muchas de ellas son proteolticas como Pseudomona aeruginosa; P. fluorescens, Proteus vulgaris; Bacillus subtilis; B. cereus; Aerobacter cloacae y Zooglea ramigera. Suelen ser abundastes las degradadoras de almidon, azucares, grasas, urea y celulosa. Desde luego es importante la presencia de bacterias coliformes, que incluyen a E.coli; Aerobater aerogenes; Klebsiella y Citrobacter asi como la presencia de estreptococos que incluye a Streptococcus faecalis; estas bacterias son de origen fecal y saprofiticas.

Tabla 4. Comparacin de microfloras contenidas en aguas Microflora acutica Virus escasos Hongos presentes pero escasos; esporas Bacterias de las familias: Micrococcaceae Corynebacteriaceae pseudomonas vibrio y escasas levaduras Microflora de aguas residuales Virus entricos Hongos de los gneros Candida; Cryptococus; Rhodoturula y Sacharomyces Bacterias tpicas: Pseudomonas; P. fluorescens; Bacillus subtilis; B. cereus; Proteus vulgaris; Aerobacter cloacae; Zooglea ramigera; Clostridium perfringens; E.coli; Streptococcus faecalis y bacterias patgenas Fitoplancton y zooplancton no diverso, rico en ciliados y flagelados Macro y microbentos escaso o ausente

Fitoplancton y zooplancton diverso con pocos protozoarios y abundantes formas larvales Macro y microbentos abundante

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El vertimiento de agua residual a la zona costera genera un aumento de nutrientes y un crecimiento masivo de bacterias, hongos y virus, protozoarios y metazoarios que entre otros efectos ocasionan que la microflora natural sea inhibida, destruida o substituida por una microflora diferente. En ambientes eutrficos, los hongos como Sphaerotilus natans son muy abundantes, llegan a formar micelas en aguas muy contaminadas y tienen un fuerte consumo de oxigeno, lo que puede disminuir dramticamente los niveles de oxigeno disuelto en el agua. La presencia de virus es frecuente cuando el agua est contaminada. Existen virus que atacan bacterias como Pseudomonas y Cianobacterias. La presencia de virus en grandes cantidades se asocian a la posibilidad de tener un papel significativo a nivel ecolgico en el control de las bacterias y otras formas planctnicas, asi como por el intercambio gentico entre bacterias acuticas por transduccin. Las levaduras pueden encontrarse flotando en aguas de ros y son comunes en el agua residual.

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